1、实验四实验四 胶体金试纸条诊断技术胶体金试纸条诊断技术-一、简一、简 介介 胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是析技术研制而成，该技术是9090年代初在免疫年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（素（HCGHCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAgHBsAg）等检测。等检测。p胶体金胶体金（Colloidal goldColloidal gold）是氯金酸是氯金酸（HAuClHA
2、uCl4 4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的作的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。电作用成为一种稳定的胶体状态。质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球形，大小均一，无棱角。形，大小均一，无棱角。质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状各异。各异。胶体金的质量判定标准胶体金的质量判定标准p胶体金标记的原理：胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电负电荷，与蛋白
3、质分子的正电荷基团藉静电吸引而形成牢固结合。吸引而形成牢固结合。p胶体金标记技术胶体金标记技术（Immunogold labeling Immunogold labeling techniquetechnique）是以胶体金作为示踪标记物应是以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。-二、胶体金试纸条诊断技术的原理二、胶体金试纸条诊断技术的原理 以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利慢向另一
4、端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。抗体。最常用的是双抗夹心法检测抗原最常用的是双抗夹心法检测抗原-胶体金试纸条示意图胶体金试纸条示意图检测线检测线质检线质检线吸收垫吸收垫样品垫样品垫硝酸纤维素膜硝酸纤维素膜连接垫连接垫（胶体金垫）（胶体金垫）背衬背衬（底板）（底板）-p测定时将试纸条下端浸入液体测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取标本中，下端吸水材料即吸取液体向上端移动，流经液体向上端移动，流经C C处时使处时使干片上的干片上的免疫金复合物免疫金复合物复溶，复溶，并带动其向膜条渗移。并带动其向膜条渗
5、移。测测 定定-p若标本中有待测特异抗原，即若标本中有待测特异抗原，即可与免疫金复合物中的抗体结可与免疫金复合物中的抗体结合，此抗原抗体复合物流至测合，此抗原抗体复合物流至测试区即被固相抗体捕获，在膜试区即被固相抗体捕获，在膜上显出红色上显出红色反应线条反应线条（T T）。）。测测 定定-测测 定定p过剩的免疫金复合物继续前行，过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区与固相抗小鼠至参照区与固相抗小鼠IgGIgG结合结合（免疫金复合物中的单克隆抗（免疫金复合物中的单克隆抗体为小鼠体为小鼠IgGIgG），），而显出红色而显出红色质质控线条控线条（R R）。）。-测测 定定p阴性标本则无反应线条，而仅显
6、示质控线条阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。-胶体金快速诊断技术的特点胶体金快速诊断技术的特点 p简捷快速：简捷快速：操作简单，一般只要操作简单，一般只要5 5-10min-10min 就就会出结果，而其它方法如会出结果，而其它方法如ELISAELISA需要需要1 1-2h-2h，PCR PCR 需要时间更长。需要时间更长。p结果易于判定：结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。很容易判断。p特异性好：特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。记，这决定了它具有很好的特异性。-p病毒性疾病：病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。p寄生虫疾病：寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙虫病。病、恙虫病。p细菌性疾病：细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。霍乱弧菌、类鼻疽。胶体金快速诊断技术的应用胶体金快速诊断技术的应用H5亚型亚型AIV尿尿囊液阳性结果囊液阳性结果阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照H5IV细胞细胞毒阳性结果毒阳性结果
