1、齐河一中齐河一中 王英王英第1页，共15页。从动物机体中取出相关的组织，从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。生长和增殖。原理：细胞增殖第2页，共15页。动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物的组织、器官的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液10代细胞代细胞50代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液加培养液（分解弹性纤维）（分解弹性纤维）原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎细胞株细胞株细胞系细胞系动物组织细胞间隙中含有动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维
2、等蛋白一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组具有一定弹性和韧性的组织和器官。织和器官。遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变接触抑制接触抑制第3页，共15页。细胞株：细胞株：原代细胞一般传至原代细胞一般传至1010代左右细胞生代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40504050代，这种传代细胞为细胞株。代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞株传代至5050代后又出现细胞生长代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使停滞状态，只有
3、部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。易传代培养。第4页，共15页。原代培养：原代培养：将动物组织消化后的初次培养将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。称为原代培养。传代培养：传代培养：用胰蛋白酶将出现接触抑制的用胰蛋白酶将出现接触抑制的贴壁细胞从培养瓶壁上脱离下来，制成细贴壁细胞从培养瓶壁上脱离下来，制成细胞悬液，分装到多个培养瓶
4、中继续培养，胞悬液，分装到多个培养瓶中继续培养，这个过程叫传代培养。这个过程叫传代培养。上述过程中，在第一培养瓶中培养到接上述过程中，在第一培养瓶中培养到接触抑制就是原代培养，之后转移到其它培触抑制就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养养瓶中培养就是传代培养第5页，共15页。细胞接触抑制细胞接触抑制 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。分裂和生长停止，数量不再增加。第6页，共15页。1、无菌、无毒的环境、
5、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等、葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等、维生素。维生素。）3、温度和、温度和PH 36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。4、气体环境：、气体环境：O2和和CO2（95%空气和空气和5%CO2）补充合成培养基中补充合成培养基中缺乏的物质缺乏的物质第7页，共15页。（1 1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。单克隆抗体等。（2 2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。）
6、获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（3 3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研究，）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据为治疗和预防疾病提供理论依据第8页，共15页。2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色
7、植物组织培养那样最终培养成新个体？、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：独特之处有：1、液体培养基、液体培养基 2、成分中有动物血清等、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个
8、体第9页，共15页。4、细胞膜的主要成份是什么？、细胞膜的主要成份是什么？5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？分散成单个细胞要注意什么问题呢？蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂能能注意时间的控制注意时间的控制思考题思考题3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？胞间的物质是什么成份？胰蛋白酶水解蛋白质胰蛋白酶水解蛋白质细胞间的成份是蛋白质细胞间的成份是蛋白质第10页，共15页。细胞的全能性细胞的全能性细胞株、
9、细胞系细胞株、细胞系植物体或组织植物体或组织培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细胞分泌蛋白或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目第11页，共15页。动物核移植：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚
10、胎，这个新的胚胎最终发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。发育为动物个体。用核移植的方法得到的动物。用核移植的方法得到的动物。克隆动物：类型类型：胚胎细胞核移植和体细胞核移植：胚胎细胞核移植和体细胞核移植第12页，共15页。（M卵母细胞）卵母细胞）减数第二次分裂中期减数第二次分裂中期去核的卵母细胞去核的卵母细胞供体细胞注供体细胞注入去核卵母入去核卵母细胞细胞受体细胞受体细胞激活，完激活，完成减数分成减数分裂、发育裂、发育胚胎移植胚胎移植第13页，共15页。体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景畜牧业、医药卫生以及其他领域有着广泛应用前景畜牧业、医药卫生以及其他领域有
11、着广泛应用前景1加速加速家畜遗传改良家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育进程，促进优良畜群繁育2保护濒危物种，增加动物保护濒危物种，增加动物 的存活数量的存活数量3可作为生物反应器，生产医用蛋白，克隆动物细胞、可作为生物反应器，生产医用蛋白，克隆动物细胞、组织、器官可作为移植的供体，了解胚胎发育及衰老过组织、器官可作为移植的供体，了解胚胎发育及衰老过程、做疾病模型等程、做疾病模型等第14页，共15页。体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。异常肥胖，发育困难，免疫失调等。2.成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。成功率非常低及克隆动物食品的安全性问题。第15页，共15页。
