1、微生物实验室（BSL-2）生物安全赵红2011.01.182第一部分：第一部分：微生物安全的相关规定微生物安全的相关规定3微生物实验室相关规定n 实验室生物安全通用要求（GB19489-2008）n 病原微生物实验室生物安全管理条例n WHO实验室生物安全手册4实验室生物安全通用要求（GB19489-2008）n 下列术语和定义适用于本标准 气溶胶气溶胶aerosols 悬浮于气体介质中的粒径一般为0.001m100m的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。气锁气锁airlock 具备机械送排风系统、整体消毒灭菌条件、化学喷淋（适用时）和压力可监控的气密室，其门具有互锁功能，不能同时处于
2、开启状态。生物安全柜生物安全柜biologicalsafetycabinet，BSC 具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜，可有效降低实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的危害。缓冲间缓冲间bufferroom 设置在被污染概率不同的实验室区域间的密闭室，需要时，设置机械通风系统，其门具有互锁功能，不能同时处于开启状态5实验室生物安全通用要求（GB19489-2008）n 下列术语和定义适用于本标准。定向气流定向气流 特指从污染概率小区域流向污染概率大区域的受控制的气流。高效空气过滤器（高效空气过滤器（HEPA过滤器）过滤器）通常以0.3m 微粒为测试物，在规定的条件下滤除效率高于99.
3、97%的空气过滤器。实验室生物安全实验室生物安全 实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相关法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。实验室防护区实验室防护区 实验室的物理分区，该区域内生物风险相对较大，需对实验室的平面设计、围护结构的密闭性、气流，以及人员进入、个体防护等进行控制的区域。风险评估风险评估 评估风险大小以及确定是否可接受的全过程。6实验室生物安全防护水平分级实验室生物安全防护水平分级n 分级依据：对所操作生物因子采取的防护措施n 分为四级：一级防护水平最低，四级防护水平最高。生物安全防护水平为一级的实验室BSL-1
4、：适用于操作在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物；生物安全防护水平为二级的实验室BSL-2：适用于操作能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物；生物安全防护水平为三级的实验室BSL-3：适用于操作能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物；生物安全防护水平为四级的实验室BSL-4：适用于操作能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。7BSL-2实验室要求实验室要求n 适用时，应符合BS
5、L-1的要求。（见GB19489-2008 6.1）n 实验室主入口的门、放置生物安全柜实验间的门应可自动关闭；实验室主入口的门应有进入控制措施。n 实验室工作区域外应有存放备用物品的条件。n 应在实验室工作区配备洗眼装置。n 配备高压蒸汽灭菌器或其他适当的消毒灭菌设备。n 应在操作病原微生物样本的实验间内配备生物安全柜。n 应按产品的设计要求安装和使用生物安全柜。n 应有可靠的电力供应。必要时，重要设备（如：培养箱、生物安全柜、冰箱等）应配置备用电源。8病原微生物危害等级分类病原微生物实验室生物安全管理条例实验室生物安全通用要求GB19489-2008WHO实验室生物安全手册（第三版 200
6、4）四类 在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。级（低个体危害，低群体危害）不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子。级 （无或极低的个体和群体危险）不太可能引起人或动物致病的微生物。三类 能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。级 （中等个体危害，有限群体危害）能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原微生物。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。级 （个体危险中等，群体危险低）
7、病原微生物能够对人或动物致病，但对实验室工作人员、社区、牲畜或环境不易导致严重危害。实验室暴露也许会引起严重感染，但对感染有有效的预防和治疗措施，并且疾病传播的危险有限。二类 能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。级（高个体危害，低群体危害）能引起人类或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶尔接触而在个体间传播，或能使用抗生素、抗寄生虫药物治疗的病原微生物。级 （个体危险高，群体危险低）病原微生物通常能引起人或者动物的严重疾病，但一般不会发生感染个体向其他个体的传播，并且对感染由有效的预防和治疗措施。一类 能够引起人类或者动物
8、非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。级 （高个体危害，高群体危害）能引起人或动物非常严重疾病，一般不能治愈，容易直接或间接或偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物间传播的病原微生物。级 （个体和群体危险均高）病原微生物通常能引起人或动物的严重疾病，并且很容易发生个体之间的直接或间接传播，对感染一般没有有效的预防和治疗措施。9第二部分：第二部分：微生物实验室的安全及风险评估微生物实验室的安全及风险评估101.微生物实验室常见安全事故n 手套损坏、污染及衣物污染n 感染性物质溅洒污染皮肤及粘膜n 刺伤、切割伤或擦伤n 潜在危害性气溶胶的释放n 容器破碎及
9、感染性物质溢出在台面、地面和其他表面n 未装可封闭离心桶的离心机内盛有潜在感染性物质的离心管发生破裂n 在可封闭的离心桶（安全杯）内离心管发生破裂n 112.微生物实验室风险评估n 当实验室活动涉及传染或潜在传染性生物因子时，应进行危害程度评估。n 危害程度评估应至少包括下列内容：生物因子的种类（已知的、未知的、基因修饰的或未知传染性的生物材料）、来源、传染性、致病性、传播途径、在环境中的稳定性、感染剂量、浓度、动物实验数据、预防和治疗。n 微生物实验室风险评估的核心风险鉴定与识别制定降低风险的方案残余风险鉴定执行和再评估12生物实验室风险评估的意义n 确定生物安全防护水平（实验室）；n 确定
10、保藏、运输、灭活、销毁的条件；n 潜在危害分析与意外事故处理程序；n 个人防护；n 制定微生物操作程序；n 健康保障与监督程序。133.风险评估应考虑的因素n 传染或疑似传染媒介的致病性，包括疾病的发生率和严重性潜在的危害性愈大，风险越高 staphylococcus aureus：BSL-2 Viruses such as Ebola,Marburg,and Lassa fever：BSL-4其它因素的抑制作用(HIV)and hepatitis B virus：也在BSL-2，HIV因为非空气传播 Hepatitis B virus:有疫苗n 传播途径遗传、空气、食入：新分离出来的媒介很难
11、确定空气传播的：引起最大的实验室内传染；气溶性越强，风险越大n 媒介的稳定性气溶传染性，脱水，阳光/UV，化学脱水性等14风险评估应考虑的因素n 传染剂量微生物与宿主的交互作用复杂：1unit-成百上千units工作人员的免疫力直接影响其对工作中接触的传染媒介的抵抗力n 浓度单位体积内微生物的数量含有微生物的环境（固体组织、粘度等）和操作（媒介扩增，超声或离心等）高扩增倍数的媒介体积越大，风险越大n 起源地理位置（国内或国外）宿主起源性质（潜在动物源性，伴随疾病爆发）15风险评估应考虑的因素n 动物实验数据在动物中的致病性，传染性，传染途径n 有效的治疗和干预措施免疫过的工作人员在BSL-3操
12、作BSL-4 Junin virus 免疫也可能是被动的（暴露HBV时，使用血清免疫球蛋白）免疫，提供除机械工程控制，正确操作，和使用个人保护措施外的保护措施n 医疗监督风险管理的一部分：雇员健康状况，血清库，参与暴露后管理n 受风险威胁的人员的经验和技术水平实验员，维修工，清洁工，动物饲养人员16其它风险因素n 处理可能被污染的利器：针头，刀片，碎玻璃，有缺口的金属n 手、胳膊或脸上暴露的伤疤、擦伤或刮痕，胳膊或脸可能接触到、或被喷溅血，血液污染物或病原培养基。1718第三部分：第三部分：微生物实验室安全控制微生物实验室安全控制191.微生物实验室安全控制措施n 不得在实验室吃、喝、吸烟、或
13、使用化妆品n 不得使用嘴吸式移液管或需用嘴操作的吸式仪器n 穿实验服、戴手套、适当的眼/面部保护；处理传染性或污染性材料，使用一次性手套。在使用前检查所有的个人防护衣服和设备，注意更换受损的或有可能无效的。n 避免手/眼/脸接触，离开实验室前彻底洗手n 使用75%酒精来清理工作台和手，以减少交叉污染n 确定动物过敏原接触人员名单，促使他们参加健康监督20微生物实验室安全控制措施n 从事转基因工作的人员必须获得转基因安全委员会的认可，转基因项目必须得到类似批准n 工作允许的情况下，避免使用活的病原菌，尽量使用危害性最小的n 成立专门小组，以从事传染性生物媒介物工作；该小组仅在限制范围内的实验室内
14、工作n 在订购任何化学品之前，确保已经建立适当的贮存、使用和应急措施n 在适当的微生物安全橱中进行产生气溶胶的操作n 尽可能减少使用锐器；迫不得已情况下，必须使用适当的抗穿透容器21微生物实验室安全控制措施n 洁净操作台或其它表面可能被污染，在实验室准备新配的消毒液备用n 经常清理和换水浴锅里的水；尤其是在被活微生物或培养基污染的时候n 将所有的传染的或污染的微生物废弃物放入适当的容器中，以备灭菌；或者，浸入消毒溶液中。进行焚烧处理的人类或动物废弃物，必须冷冻贮存在有颜色标识的塑料袋中n 传染物或污染物，除非是在密封在有标识的容器中，否则不得从实验室运到其它区域n 免疫性或其它常规注射应当提供
15、，以提高接触病原菌人员的免疫力222.实验室应急物资储备n 急救箱：包括常用的伤口处理药品和特殊的解毒剂等n 工具：锤子、（斧子）、扳手、螺丝刀、（绳梯）等n 适合实验室使用的灭火器、（灭火毯）n 房间消毒设备，如喷雾器和甲醛熏蒸器n 划分危险区域界限的器材和警告标示n 全套防护服（*连体防护服、手套和头套用于涉及第一类和第二类病原微生物的事故）n 有效防护化学物质和颗粒的全面罩式防毒面具233.微生物实验室安全事故应急措施n 3.1 手套损坏、污染1.手套被污染时应立即用消毒剂喷洒手套2.脱下手套，放入黄色垃圾袋内（待统一灭菌）3.更换新手套继续实验n【注意】在操作高致病性病原微生物时应该佩
16、戴双层手套243.2 衣物污染n 尽快脱掉最外层防护服，并注意防止感染性物质进一步扩散n 将已污染的防护服放入黄色垃圾袋内，待高压灭菌n 脱掉手套，到污染区出口处洗手n 更换防护服和手套n 必要时对发生污染及脱防护服的地方进行消毒处理253.3 感染性物质溅洒污染皮肤及粘膜n 感染性液体（血液、尿液标本或培养物）外溢到皮肤立即停止工作，脱掉手套用75%的酒精进行皮肤消毒再用大量水冲洗n 感染性液体溅入眼睛立即停止工作，脱掉手套迅速到缓冲区用洗眼器冲洗再用生理盐水冲洗（注意动作轻柔，勿损伤眼睛）n 两种情况都应做适当的预防治疗和医学观察，并报告实验室安全员进行事故记录263.4 刺伤、切割伤或擦
17、伤应急处理n 保持镇静，立即停止实验，脱掉手套。n 用清水和肥皂水清洗伤口。n 尽量挤出伤口处的血液，取出急救箱，用碘酒或75%的酒精擦洗伤口，适当的包扎。n 及时就医，告知医生受伤原因及可能的微生物污染，必要时要进行医学处理。n 向实验室安全员报告，进行事故记录。273.5 潜在危害性气溶胶的释放 (在生物安全柜以外)n 哪些意外情况下可能发生危害性气溶胶的释放？操作中生物安全柜突然停机或转为正压大量感染性物质溢出、溅洒非封闭离心桶的离心机内带有感染性物质的离心管发生破裂283.6 潜在危害性气溶胶释放的处理 （在生物安全柜以外）n 所有人员必须立即撤离相关区域报告实验室安全员在1小时内任何
18、人不得进入事发实验室，以使气溶胶排出和重粒子沉降；无中央通风系统则应推迟进入（如24小时）贴出标识以示禁止入内过后由专业人员指导清除污染，如甲醛蒸汽熏蒸，操作时注意防护（暴露人员应进行医学观察，必要时及时就医）293.7 生物安全柜内少量溢出处理n 处理溢洒物时不要将头伸入安全柜内，也不要将脸直接面对前操作口，而应处于前视面板的后方。n 选择消毒剂时需要考虑消毒剂对生物安全柜的腐蚀性。（使用含氯制剂后再用清水擦拭）n 如果溢洒的量不足1mL时，可直接用消毒剂浸湿的纸巾（或其它材料）擦拭。n 如果溢洒物流入生物安全柜内部，则视情况，如需要可对生物安全柜进行熏蒸。303.8 生物安全柜内大量溢出处
19、理n 使生物安全柜保持开启状态。n 在溢洒物上覆盖浸有消毒剂的吸收材料，作用一定时间以发挥消毒作用。（必要时，用消毒剂浸泡工作表面以及排水沟和接液槽）n 消毒后脱下手套。如果防护服已被污染，脱掉污染的防护服后，洗手。n 穿好新的防护装备，如手套、防护服、护目镜等。n 小心将吸收了溢洒物的吸收材料和溢洒物收集到专用的收集袋或容器中，并反复用新的吸收材料将剩余物质吸净。n 破碎的玻璃或其它锐器要用镊子或钳子处理。n 用消毒剂擦拭或喷洒安全柜内壁、工作表面以及前视窗的内侧，作用一定时间后，用洁净水擦去消毒剂。n 必要时，使用甲醛熏蒸。313.9 感染性物质溢出在台面、地面n 感染性液体溢出的扩散途径
20、大量液体形成不规则水渍；部分飞溅；小部分形成空气播散的气溶胶颗粒n 处理方式，参见3.63.8323.10 溢出处理工具n 对感染性物质有效的消毒液，需要按使用要求定期配制（次氯酸钠溶液的使用浓度为0.51%）。n 消毒液盛放容器。n 镊子或钳子，耐高压的扫帚和簸箕，或其他处理锐器的机械装置。n 足量的纸巾或其他适宜的吸附材料。n 用于盛放感染性溢出物以及清理物品的生物危害袋。n 橡胶手套。n 面部防护装备，如面罩、护目镜、一次性口罩等。n 溢洒处理警示标识，如“禁止进入”、“生物危险”等。333.11 撤离事故区域n 发生生物危险物质溢洒时，立即通知房间内的无关人员迅速离开，在撤离房间的过程中注意防护气溶胶。n 关门并张贴“禁止进入”、“溢洒处理”的警告标识，至少30分钟后方可进入。n 撤离人员脱去个体防护装备，用适当的消毒剂和水清洗暴露皮肤。n 立即通知实验室安全员。343.12 人员急救n 如操作人员接触到泄漏的感染性物质，应采急救措施：脱掉污染的衣服和鞋。立即用流动的水冲洗接触部位皮肤。用对人体无害的消毒剂消毒接触部位。给卫生急救部门打电话，并告知卫生救护人员有关泄漏物质的情况，以便他们有意识地自身保护。将沾染感染性物质的人员转移至安全区域隔离。注意：接触感染性物质的人员可能是污染源。
