1、第七章第七章 动物实验的基本技术动物实验的基本技术一、动物实验的常规操作技术二、实验动物选择原则三、做好动物实验的条件第一节 动物实验的常规操作技术编号、抓取、固定、给药、采血、麻醉、处编号、抓取、固定、给药、采血、麻醉、处死等死等 The marks on the animals right ear denote units or ones:1,2,3,4,5,6,7,8,9,0.The marks on the left ear denote tens:10,20,30,40,50,60,70,80,90.The sample The sample animalanimal一、动物的编号（
2、二）染料法：此法适用于大鼠和小鼠。（二）染料法：此法适用于大鼠和小鼠。颜料颜料：3%3%5%5%苦味酸溶液（黄色），苦味酸溶液（黄色），0.5%0.5%中性品红（红色），标记中性品红（红色），标记时用毛笔沾取上述溶液，涂斑点于动物身体的不同部位，以示不同号码。时用毛笔沾取上述溶液，涂斑点于动物身体的不同部位，以示不同号码。编号原则编号原则：先左后右，先上后下。：先左后右，先上后下。（三）挂牌法：（三）挂牌法：将所用号码写在金属牌上，再将金属牌固定于将所用号码写在金属牌上，再将金属牌固定于实验动物的耳上。大动物如猫，狗可把金属牌挂在颈实验动物的耳上。大动物如猫，狗可把金属牌挂在颈部皮带圈上。部皮
3、带圈上。（四）耳号：（四）耳号：此法适用于家兔和豚鼠。烙印前剪毛，消毒。然后此法适用于家兔和豚鼠。烙印前剪毛，消毒。然后用号码烙印钳或刺数钳在动物的耳朵内面烙印号码，用号码烙印钳或刺数钳在动物的耳朵内面烙印号码，再用棉签蘸取溶于酒精的黑墨在号码上兴抹。再用棉签蘸取溶于酒精的黑墨在号码上兴抹。兔耳号钳兔耳号钳二、抓取固定：（一）小鼠的抓取固定：要求既要大胆，又要仔细，不可粗暴要求既要大胆，又要仔细，不可粗暴首先要限制动物的活动首先要限制动物的活动（二）大鼠的抓取固定：方法基本同小鼠，抓取时为避免（二）大鼠的抓取固定：方法基本同小鼠，抓取时为避免被鼠咬伤，可戴上帆布手套。右手抓住大鼠尾根，置于被鼠
4、咬伤，可戴上帆布手套。右手抓住大鼠尾根，置于鼠笼上，左手抓取。鼠笼上，左手抓取。豚鼠的保定豚鼠的豚鼠的保定保定（三）家兔的抓取固定：（三）家兔的抓取固定：抓取抓取：一般用右手抓住家兔颈部的皮肤提起，：一般用右手抓住家兔颈部的皮肤提起，然后用左手托其臀部。不可抓双耳提腹。然后用左手托其臀部。不可抓双耳提腹。固定固定：可放于兔盒内固定或置于手术台上固定。：可放于兔盒内固定或置于手术台上固定。三、被毛去除方法：（一）剪毛法：（一）剪毛法：用手术剪紧贴动物皮肤依次将所需剪用手术剪紧贴动物皮肤依次将所需剪毛部位的被毛剪去。不可用手提起被毛，以免毛部位的被毛剪去。不可用手提起被毛，以免剪破皮肤。剪破皮肤。
5、（二）拔毛法：（二）拔毛法：兔耳缘静脉注射，取血时，可在其耳内兔耳缘静脉注射，取血时，可在其耳内面局部拔毛。面局部拔毛。（三）脱毛法：用于手术前动物皮肤局部脱毛。（三）脱毛法：用于手术前动物皮肤局部脱毛。方法方法：首先剪短动物被毛。然后涂脱毛剂，首先剪短动物被毛。然后涂脱毛剂，2-32-3分钟后用分钟后用温水清洗干净，最后涂上一层油脂。温水清洗干净，最后涂上一层油脂。脱毛剂的配制脱毛剂的配制：下列下列3 3种方法适用于小鼠，小鼠和家兔。种方法适用于小鼠，小鼠和家兔。1 1、硫化纳硫化纳3 3克克+肥皂粉肥皂粉1 1克克+淀粉淀粉7 7克克+水适量，调成糊状。水适量，调成糊状。2 2、硫化纳、硫
6、化纳8 8克克+淀粉淀粉7 7克克+糖糖4 4克克+甘油甘油5 5克克+硼砂硼砂1 1克克+水水7575毫升毫升 3 3、硫化纳、硫化纳8 8克克+水水100100毫升毫升四、给药途径和方法：（一）皮下注射：（一）皮下注射：方法方法：左手拇指和食指提起皮肤，将连有：左手拇指和食指提起皮肤，将连有5 5号针头的注号针头的注射器射器 刺入皮下刺入皮下0.5-1ml/0.5-1ml/只。只。注射部位注射部位：小鼠注射部位在腹部两侧，大鼠注射部位：小鼠注射部位在腹部两侧，大鼠注射部位在下腹部两侧，家兔注射部位在背部或耳根部。在下腹部两侧，家兔注射部位在背部或耳根部。（二）肌肉注射：（二）肌肉注射：方法
7、方法：由皮肤表面垂直刺入肌肉，回抽无血，即可注：由皮肤表面垂直刺入肌肉，回抽无血，即可注射。射。注射部位注射部位：小鼠：小鼠,大鼠的注射部位在后肢大腿外侧大鼠的注射部位在后肢大腿外侧0.1ml0.1ml，家兔的注射部位在臀部。家兔的注射部位在臀部。方法：方法：左手抓住小鼠或大鼠，使其腹部向上，头处于低位，使内左手抓住小鼠或大鼠，使其腹部向上，头处于低位，使内脏移向上腹，右手持注射器从下腹两侧向头方刺入腹腔。脏移向上腹，右手持注射器从下腹两侧向头方刺入腹腔。家兔在进行腹腔注射时，首先由助手固定兔子，另一人家兔在进行腹腔注射时，首先由助手固定兔子，另一人持注射器从家兔下腹持注射器从家兔下腹1/3
8、1/3 处，腹中线稍偏向两侧，垂直刺入腹处，腹中线稍偏向两侧，垂直刺入腹腔腔0.1-0.2ML/10g0.1-0.2ML/10g。注射部位：注射部位：小鼠在腹部两侧，大鼠在下腹两则，家兔在腹部下小鼠在腹部两侧，大鼠在下腹两则，家兔在腹部下1/31/3处，中线两侧处，中线两侧1 1厘米左右。厘米左右。（三）腹腔注射（三）腹腔注射大鼠腹腔注射大鼠腹腔注射（四）静脉注射：1 1、小鼠和大鼠的静脉注射：小鼠和大鼠的静脉注射：部位部位：尾静脉下：尾静脉下1/41/4处皮肤薄，常在此处进针。处皮肤薄，常在此处进针。鼠尾静脉有三根，尾部背侧一根，尾部两侧各鼠尾静脉有三根，尾部背侧一根，尾部两侧各一根。尾部两
9、侧的静脉比较容易固定，多在此处取一根。尾部两侧的静脉比较容易固定，多在此处取血。尾部背侧的静脉位置容易移动，不采用。血。尾部背侧的静脉位置容易移动，不采用。collection in adult mice(average 20 g):Safe injectionvolume IV Total bloodvolume Safe bleedvolume Bleed-outvolume 0.21.0-2.40.2-0.40.61.4方法：方法：先用酒精擦试，或用先用酒精擦试，或用45-5045-50温水浸润鼠尾，温水浸润鼠尾，使之表皮软化，血管扩张。使之表皮软化，血管扩张。然后用左手拇指和食指捏然后
10、用左手拇指和食指捏住鼠尾两则，使尾静脉充住鼠尾两则，使尾静脉充血，同时用中指从下托起血，同时用中指从下托起鼠尾，用无名指和小指夹鼠尾，用无名指和小指夹住鼠尾的末梢，右手持注住鼠尾的末梢，右手持注射器从尾下射器从尾下1/41/4处平行角处平行角度刺入尾静脉。度刺入尾静脉。2 2、家兔的静脉注射：、家兔的静脉注射：耳缘静脉耳缘静脉 VeinArteryVein（五）胃内注入给药：（五）胃内注入给药：1 1、小鼠和大鼠：、小鼠和大鼠：方法：方法：先用左手固定小鼠或大鼠，使其成先用左手固定小鼠或大鼠，使其成垂直立位。右手将灌胃针从鼠的右口角垂直立位。右手将灌胃针从鼠的右口角插入口中，再沿咽后壁慢慢插入
11、食道，插入口中，再沿咽后壁慢慢插入食道，灌胃针插入时应灌胃针插入时应无阻力无阻力。如感到有阻力。如感到有阻力或动物挣扎，应停止进针，拔出重新插或动物挣扎，应停止进针，拔出重新插入。入。大小鼠胃内注入给药大小鼠胃内注入给药2 21 13 34 45 56 62 2、家兔：、家兔：方法：方法：首先固定家兔，再将扩口器放入口中，置于上，下门齿首先固定家兔，再将扩口器放入口中，置于上，下门齿之后，将之后，将1414号导尿管从扩口器中央的小孔通过，沿咽后壁插号导尿管从扩口器中央的小孔通过，沿咽后壁插入食道。插入后，应检查导尿管是否确实插入食道，可将导入食道。插入后，应检查导尿管是否确实插入食道，可将导尿
12、管外端的口入尿管外端的口入一只盛满水的烧杯中，如无气泡产生一只盛满水的烧杯中，如无气泡产生，表明，表明导尿管被正确插入胃中，再将导管与注射器相连，注入药液。导尿管被正确插入胃中，再将导管与注射器相连，注入药液。Oral feed（一）小鼠的采血：（一）小鼠的采血：1 1、尾静脉采血：、尾静脉采血：固定动物，用固定动物，用手揉擦鼠尾，或把鼠手揉擦鼠尾，或把鼠尾放入尾放入45-5045-50的温的温水中，使尾部血管充水中，使尾部血管充血，剪去尾尖血，剪去尾尖0.3-0.3-0.50.5厘米，让血液入厘米，让血液入盛器，或用血红蛋白盛器，或用血红蛋白吸管吸取。最后压迫吸管吸取。最后压迫止血。止血。五
13、五 采血采血collection of blood from tail veinRATRAT用乙醚吸入麻用乙醚吸入麻醉小鼠或大鼠，使醉小鼠或大鼠，使其侧卧，一只手拉其侧卧，一只手拉紧眼眶周围皮肤，紧眼眶周围皮肤，另一只手持玻璃毛另一只手持玻璃毛细管（吸管头呈斜细管（吸管头呈斜角）由眼内角刺入，角）由眼内角刺入，不断向下捻动，血不断向下捻动，血从自毛细管口流出，从自毛细管口流出，盛入试管中。盛入试管中。2 2、眼眶静脉丛采血、眼眶静脉丛采血3 3、心脏采血：用乙醚吸、心脏采血：用乙醚吸入麻醉大鼠，然后使鼠入麻醉大鼠，然后使鼠仰卧固定，手持注射器，仰卧固定，手持注射器，在鼠胸部心跳最强处垂在鼠胸部
14、心跳最强处垂直刺入采血。直刺入采血。小鼠隐静脉小鼠隐静脉（saphenous vein)saphenous vein)采血采血Blood Collection From Cardiac Puncture in MouseSmall blood samples can be collected from a lateral ear vein.（二）家兔的采血：（二）家兔的采血：1、耳缘静脉采血、耳缘静脉采血2、心脏取血、心脏取血3、颈动脉、颈动脉Slide 30.家兔采血步骤家兔采血步骤1 12 24 43 3心脏取血心脏取血1 123654 46 6六 麻醉（一）麻醉药分类：（一）麻醉药分类：
15、1 1、挥发性麻醉剂、挥发性麻醉剂：2 2、非挥发性麻醉剂、非挥发性麻醉剂：（二）麻醉方法：（二）麻醉方法：1 1、全身麻醉、全身麻醉（1 1）吸入法：（）吸入法：（2 2）腹腔和静脉给药麻醉法：）腹腔和静脉给药麻醉法：小小/大鼠常采用腹腔注射非挥发性麻醉药，家兔常采用大鼠常采用腹腔注射非挥发性麻醉药，家兔常采用静脉注射非挥发性麻醉药。静脉注射非挥发性麻醉药。2 2、局部麻醉、局部麻醉:采用盐酸普鲁卡因皮下注射麻醉。采用盐酸普鲁卡因皮下注射麻醉。七、处死（安乐死）安死术(eutanasia):指公众认可的、以人道主义的方法处死实验动物的过程，使动物达到没有惊恐或焦虑而安静地、无痛苦地死亡。安乐
16、死方法的的标准是:1、对动物：保证实验动物中枢神经系统立即达到失去痛觉的早期抑制作用,使动物不产生疼痛、惊恐、挣扎、叫喊以及不适的其他表现;2 2、对操作人员：安全、容易操作且道德能为操作人员所接受3 3、对环境：无污染或无有影响;4、其后研究工作：不引起会干涉其后研究工作的组织病理学变化。美国实验动物管理与使用指南规定:1、动物安乐死应由经过训练的人员根据有关 机构的政策和适用法律来实施。2、方法的选择取决于动物的种类与研究的课题需要。经批准的方法应遵循美国兽医协会安乐死小组的规定。安乐死的方法：（一）小鼠和大鼠（一）小鼠和大鼠1 1、断颈髓法、断颈髓法：右手抓住鼠尾，让其向前爬，左手拇指和
17、食指用力向前：右手抓住鼠尾，让其向前爬，左手拇指和食指用力向前下方按住鼠头，将颈椎拉断。下方按住鼠头，将颈椎拉断。2 2、化学致死法：、化学致死法：（1 1）吸入过量乙醚，氯仿致死。）吸入过量乙醚，氯仿致死。（2 2）皮下注射士的宁处死：小鼠为每千克体重用药）皮下注射士的宁处死：小鼠为每千克体重用药0.76-2.00.76-2.0毫克，毫克，大鼠为每千克体重用药大鼠为每千克体重用药3.0-3.53.0-3.5毫克。毫克。（3 3）静脉注射氯化钾：大鼠每只注射）静脉注射氯化钾：大鼠每只注射25%25%的氯化钾溶液的氯化钾溶液0.60.6毫升。毫升。(二二)家兔：家兔：1 1、空气栓塞法、空气栓塞
18、法：兔耳缘静脉内注射空气，每只用量为：兔耳缘静脉内注射空气，每只用量为20-4020-40毫升。毫升。2 2、化学致死法：、化学致死法：皮下注射士的宁，家兔用量为每千克体重用药皮下注射士的宁，家兔用量为每千克体重用药0.5-50.5-5毫克。毫克。3 3、过量酒精：、过量酒精：（三）（三）猴：1、戊巴比妥钠静脉注射100mg/kg动物尸体处理(一)实验动物尸体剖检实验动物处死后0.5h内必须进行尸体解剖,可先取出胸腔脏器、后取出腹腔脏器、头部器官的解剖可先、可后。(二)实验动物尸体的处置原则：保证人畜，安全、保护环境生态，即无害化处理禁止：尸体或脏器组织倒入垃圾箱中随意处理。Questions
19、?选择什么样的实验动物是医学科学研究工作选择什么样的实验动物是医学科学研究工作中一个重要环节，因为在不适当的动物进行实验，中一个重要环节，因为在不适当的动物进行实验，常可导致实验结果的不可靠，甚至使整个实验徒常可导致实验结果的不可靠，甚至使整个实验徒劳无功，直接关系到科学研究的成败和质量。劳无功，直接关系到科学研究的成败和质量。第第 二二 节节 实验动物的选择原则实验动物的选择原则一、查阅文献，加强交流：一、查阅文献，加强交流：通过充分地查阅文献，可了解本领域、本通过充分地查阅文献，可了解本领域、本项目以往使用的实验动物情况及其研究结果，项目以往使用的实验动物情况及其研究结果，有利于充分利用前
20、人的研究成果、研究思想，有利于充分利用前人的研究成果、研究思想，避免重复研究。避免重复研究。传统应用的实验动物是科技工作者长期以来传统应用的实验动物是科技工作者长期以来实践经验的积累，各个专业、各个课题都有自实践经验的积累，各个专业、各个课题都有自己常用的动物品种和品系。己常用的动物品种和品系。二、预试验：二、预试验：通过自己直接观察和了解某种动物品种品系是通过自己直接观察和了解某种动物品种品系是否适合本课题研究。否适合本课题研究。动物预试验的作用在于：动物预试验的作用在于：初步观察动物是否适宜于本项目的研究；初步观察动物是否适宜于本项目的研究；熟悉动物的生物学特性及饲养管理；熟悉动物的生物学
21、特性及饲养管理；检查与动物实验配套的实验条件、方法是否初步检查与动物实验配套的实验条件、方法是否初步到位。到位。三、相似的的原则三、相似的的原则：选用与人的机能、代谢、结构及疾病特点相选用与人的机能、代谢、结构及疾病特点相似的实验动物。似的实验动物。医学科学研究的根本目的是要解决人类疾病医学科学研究的根本目的是要解决人类疾病的预防和治疗问题，因此，在实际可能的条件的预防和治疗问题，因此，在实际可能的条件下，尽量选择那些机能、代谢、结构和人类下，尽量选择那些机能、代谢、结构和人类相相似似的实验动物作实验。的实验动物作实验。一般来说，实验动物愈高等，进化愈高，一般来说，实验动物愈高等，进化愈高，其
22、机能、代谢、结构愈复杂，反应就愈接近人其机能、代谢、结构愈复杂，反应就愈接近人类，猴、狒狒、猩猩、长臂猿等灵长类动物是类，猴、狒狒、猩猩、长臂猿等灵长类动物是最近似于人类的理想动物。最近似于人类的理想动物。如：猕猴的生殖生理和人非常接近，月经周期如：猕猴的生殖生理和人非常接近，月经周期和人一样约和人一样约2828天左右，是研究人类避孕药的理天左右，是研究人类避孕药的理想动物；想动物；猕猴也是制造和鉴定脊髓灰白质炎疫苗的唯一猕猴也是制造和鉴定脊髓灰白质炎疫苗的唯一实验动物。实验动物。但需特殊动物房和饲养，因此，在选择时不能但需特殊动物房和饲养，因此，在选择时不能盲目追求。在无法得到猴的条件下可选
23、用大小盲目追求。在无法得到猴的条件下可选用大小鼠、犬等其它动物。鼠、犬等其它动物。犬具有发达的血液循环和神经系统以及基本犬具有发达的血液循环和神经系统以及基本上和人相似的消化过程，在毒理方面的反应和人上和人相似的消化过程，在毒理方面的反应和人比较接近，适于作实验外科学，营养学、药理学、比较接近，适于作实验外科学，营养学、药理学、毒理学、生理学和行为等研究。毒理学、生理学和行为等研究。猫也具有发达的神经系统和循环系统，血猫也具有发达的神经系统和循环系统，血管坚韧，血压稳定，适宜作神经和循环方面的研管坚韧，血压稳定，适宜作神经和循环方面的研究。究。两栖类蛙的大脑很不发达，和人类相差甚远，两栖类蛙的
24、大脑很不发达，和人类相差甚远，就不能选它来作高级神经活动的实验，但是如果就不能选它来作高级神经活动的实验，但是如果要作一个简单的神经反射弧的实验，选用蛙就很要作一个简单的神经反射弧的实验，选用蛙就很合适，因为最简单的反射中枢位于脊髓，蛙的脊合适，因为最简单的反射中枢位于脊髓，蛙的脊髓已发展到合乎实验要求的程度，而且越简单的髓已发展到合乎实验要求的程度，而且越简单的分析时越明确，高等动物的反射弧复杂，反而难分析时越明确，高等动物的反射弧复杂，反而难于分析。于分析。四、选用与课题相匹配的标准化实验动物：四、选用与课题相匹配的标准化实验动物：医学科研实验中的一个关键问题，就是怎样医学科研实验中的一个
25、关键问题，就是怎样使动物实验的结果正确可靠，有规律，重复性高，使动物实验的结果正确可靠，有规律，重复性高，从而精确判定实验结果，得出正确的结论。从而精确判定实验结果，得出正确的结论。必须到具有动物生产条件及具有动物质量合格证的必须到具有动物生产条件及具有动物质量合格证的单位购买动物，并应向供应动物者索取其标有动物级别、单位购买动物，并应向供应动物者索取其标有动物级别、合格证编号等的动物质量合格证明单据。避免随意、随合格证编号等的动物质量合格证明单据。避免随意、随便购买动物。便购买动物。遗传类别选择遗传类别选择：根据课题的需要选用近交系动物、突变模型根据课题的需要选用近交系动物、突变模型动物、封
26、闭群动物或杂交动物、封闭群动物或杂交F F1 1动物。动物。1 1）、）、不同品种的动物对同一种刺激反应差异很大不同品种的动物对同一种刺激反应差异很大 如猪瘟细胞毒的效力检查中，白兔比灰兔敏感，而如猪瘟细胞毒的效力检查中，白兔比灰兔敏感，而长毛兔反应最敏感，发热反应最典型。长毛兔反应最敏感，发热反应最典型。2 2）、）、不同品系的动物，对同一种刺激反应差异很大不同品系的动物，对同一种刺激反应差异很大 DBA MiceDBA Mice对音响敏感，而对音响敏感，而C57C57没有。没有。如如C57BLC57BL小鼠各种肿瘤发生率低，但小鼠各种肿瘤发生率低，但A A系系80%80%的繁的繁殖母鼠均患
27、乳腺癌。殖母鼠均患乳腺癌。微生物学级别选择微生物学级别选择：应根据其各级动物的特点、应用范围及课题的应根据其各级动物的特点、应用范围及课题的水平的高低，选用相匹配的微生物学级别的实验动水平的高低，选用相匹配的微生物学级别的实验动物。物。急性毒性试验、教学实习对动物要求不高；急性毒性试验、教学实习对动物要求不高；致癌性，致畸性，慢性毒性试验，生化试验，免致癌性，致畸性，慢性毒性试验，生化试验，免疫学试验等，对精度要求较高，必须排除体内外疫学试验等，对精度要求较高，必须排除体内外微生物、寄生虫及遗传上个体差异所带来的不利微生物、寄生虫及遗传上个体差异所带来的不利影响。影响。SPFSPF动物则是国际
28、标准的实验动物，对于一些动物则是国际标准的实验动物，对于一些具有国际交流意义的重大课题，最好选用具有国际交流意义的重大课题，最好选用SPFSPF动物。动物。无菌及悉生动物为非常规动物仅在特殊课题无菌及悉生动物为非常规动物仅在特殊课题需要时才选用。需要时才选用。为了使自己的实验结果精确可靠，易重复性为了使自己的实验结果精确可靠，易重复性和可比性，最好选标准化的实验动物在标准和可比性，最好选标准化的实验动物在标准条件下进行实验条件下进行实验五、选用解剖、生理特点符合实验目的要求的动物：五、选用解剖、生理特点符合实验目的要求的动物：很多实验动物具有某些解剖生理特点，为实验所很多实验动物具有某些解剖生
29、理特点，为实验所要观察的器官或组织等提供了很多便利条件要观察的器官或组织等提供了很多便利条件动物的生理状态:如怀孕哺乳等对实验结果影响很大，因此，实验不宜采用处于特殊生理状态的动物进行，如在实验过程中发现动物怀孕，则体重及某些生理生化指标均可受到严重影响。动物的健康状况对实验结果有直接的影响六、选择不同种系实验动物（存在的某些特殊反六、选择不同种系实验动物（存在的某些特殊反应）应）实验研究中常要选用对实验因素最敏感的动实验研究中常要选用对实验因素最敏感的动物作为实验对象，因此必须了解不同实验动物存物作为实验对象，因此必须了解不同实验动物存在的某些特殊反应性。在的某些特殊反应性。家兔对体温变化十
30、分灵敏，适于发热、解热家兔对体温变化十分灵敏，适于发热、解热和检查致热源等实验研究。小鼠和大鼠体温调节和检查致热源等实验研究。小鼠和大鼠体温调节不稳定，就不宜选用。不稳定，就不宜选用。鸽子、家犬、猴和猫呕吐反应敏感，适作呕鸽子、家犬、猴和猫呕吐反应敏感，适作呕吐实验，家兔、豚鼠等草食动物呕吐反应不敏感，吐实验，家兔、豚鼠等草食动物呕吐反应不敏感，小鼠和大鼠无呕吐反应，就不宜适用。小鼠和大鼠无呕吐反应，就不宜适用。七、选用人畜共患疾病的实验动物和传统应用的实验动物 有些疾病的病因不仅对人而且对动物也造成相有些疾病的病因不仅对人而且对动物也造成相似的疾病。由此似的疾病。由此提供提供研究病因学、流行
31、病学、发病研究病因学、流行病学、发病机理、预防和治疗的良好动物模型。机理、预防和治疗的良好动物模型。如：猴子对痢疾杆菌敏感，其临床过程、病如：猴子对痢疾杆菌敏感，其临床过程、病理变化与人类似。用猴子研究痢疾是最好的实验动理变化与人类似。用猴子研究痢疾是最好的实验动物。物。八、选用与实验要求相适应的实验动物八、选用与实验要求相适应的实验动物在对实验动物种类和品系作出选择之前，有时在对实验动物种类和品系作出选择之前，有时需要考虑到动物年龄、体重、性别等因素。需要考虑到动物年龄、体重、性别等因素。不同性别和不同发育阶段的动物对许多实验处理不同性别和不同发育阶段的动物对许多实验处理的反应均有差异。而且
32、即使同一性别的动物在不同的反应均有差异。而且即使同一性别的动物在不同实验季节和昼夜不同时间，动物机体的反应性也有实验季节和昼夜不同时间，动物机体的反应性也有一定改变。一定改变。因此，对动物年龄、性别、体重的选择是实验因此，对动物年龄、性别、体重的选择是实验动物选择的一项重要环节。动物选择的一项重要环节。在实验动物年龄或体重方面：由于未成年动物各系统的机能发育不完善，而老龄动物各系统功能、代谢水平又都呈下降趋势，所以除实验本身特殊要求外，常规应选择性成熟后的青壮年动物为宜。体重方面：动物一般可按体重推算年龄：例：昆明小鼠6 6周龄时雄性约32g32g，雌性约28g28g；WisterWister
33、大鼠6 6周龄时雄性约180g180g，雌性约160g160g；豚鼠2 2月龄时体重约400g400g；日本大耳白兔8 8月龄时体重约4500g4500g。应该注意的是：动物体重除与年龄密切相关外，还与其品系（种）、营养状态、饲养管理等因素有关。年龄方面：实验动物的寿命各不相同，所反映的生命过程是完全不同的，即使同样是狗，不同年龄段所反映的生命过程也是不同的。在选择动物年龄时，应注意到各种实验动物之间、实验动物与人之间的年龄对应，对便进行分析和比较。注意实验动物之间、实验动物与人类之间的年龄对应 不同种属实验动物的寿命与人类有很大差异，在发育上有的以日月计龄，有的以年计龄犬与人的年龄对应关系
34、1岁的犬 15岁的人；2岁的犬 24岁的人；5岁的犬 36岁的人；8岁的犬 48岁的人；10岁的犬 56岁的人；12岁的犬 64岁的人；14岁的犬 72岁的人；16岁的犬 80岁的人。第三节、做好动物实验的条件 动物实验是根据研究目的，恰当地选用标准的实验动物品种、品系，进行各种科学实验，观察和记录动物的反应过程或反应结果，以探讨或检验生命科学中未知因素的一种活动。它是生物研究中的重要方法之一，也是从动物身上获得有关情报资料的唯一手段。1 1、弄清动物实验的目的及必要性 在进行任何一个实验之前，首先要弄清实验目的是什么，动物实验也不例外。其次，还要搞清有没有必要进行动物实验，坚持“3R”原则，
35、即是保护动物福利不可或缺的原则，也是人类“文明科研”应当坚持的做法。2 2、作好实验设计 在进行具体实验之前，对所要研究问题的各个重要方面作全面了解和调查，掌握该问题在国内外的研究进展情况，从而制定出周密的、切实可行的实验方案，这个过程就是实验设计，这也是任何实验所不可缺少的重要环节。实验方案的意义：以较为经济的人力、物力和时间，使诸多实验因素包括在尽可能少的实验中，最大限度地获得丰富而翔实的资料；以科学、规范的数据收集和处理方法，精确地控制和估计误差的大小，得出准确而可靠的实验结果，从而得出科学的结论。在实验设计中，应明确以下内容：A、重点要考察哪些实验因素及各实验因素目前的水平？B、用什么
36、方法来控制非实验因素对实验结果的影响？C、实验单位，即受试对象接受处理的基本单位（如动物个体、动物的某一部位等）是什么？D、通过观测动物的哪些指标来考察实验效应？如何根据指标性质来合理收集实验数据？F、用什么统计方法处理实验数据？其中“实验因素、实验单位和实验效应”是实验设计的三要素，具体设计时，应有实验动物学和统计学的知识，以确保实验设计的科学、节俭和高效。进行实验设计时，要遵从以下四个基本原则：2.1 对照原则 设立对照的目的:使非实验因素在实验组和对照组中处于相同状态。不仅能够鉴别出实验因素和非实验因素对实验效应的影响大小，还能排除动物生理和病理的自然变化，从而有效克服各种非实验因素对实
37、验效应的影响。一般的对照形式:空白对照、标准对照、自身对照、相互对照、实验对照等。2.2 2.2 随机化原则 在实验研究中，不可能将目标对象全部纳入研究中，只能从中抽取一定的样本。抽样：只能采取随机抽样法，即在抽样或分组时，使总体中任何一个个体都有同等机会被抽取进入样本。样本处理：任何一个个体都有同等机会被分配到任何一个组中去，从而避免因实验操作者的主观因素或实验动物本身的个体差异所带来的误差。使样本研究的结果及其结论具有对总体的代表性。2.3 重复原则 由于个体差异、仪器设备及实验操作的不稳定性等因素的存在，同一处理对不同的实验单位所产生的实验效应有可能不尽相同，只有经过一定的重复实验，该处
38、理的真实效应才会比较确定地显露出来。重复实验：把一份样品分成若干份而求其平均值、同样条件下的多次重复实验、部分或全部条件有规律地变动状态下的多次重复实验等形式。2.4 均衡性原则 使非实验因素在实验组和对照组中尽可能达到均衡一致，保证各组间具有很好的可比性。均衡性越好，越能显示实验因素的作用。如一般实验都要求各组动物的性别、体重、日龄等应保持一致。3 3、选择适宜的实验动物4 、做好实验操作和实验条件保障工作 尽力做好实验环境条件控制和坚持认真、规范的实验操作是保证实验结果可靠性的主要方面。动物实验操作包括实验前准备、实验处理和实验后处理。实验前准备包括：购买和运输动物、编号、称重、分组等前期
39、工作。购买和运输动物时，确保动物质量和包装运输符合相应等级要求。进行编号、称重和分组时，则应严格遵循实验设计的要求。实验处理包括：保定、试验或实施其它处置、饲养观察等环节。这些环节因实验的不同而有很大的差别，但每一项工作又都有其相应的国家、地区或行业的执行标准或法规，实际操作时应严格遵照执行。实验后处理包括：实验动物、废弃物、用具和环境等的处理。对实验后的动物应安死术，然后将其连同废弃物一起送焚尸炉烧毁，不得随处乱放；实验所用的仪器设备、器械等用具，应用高压灭菌或以过氧乙酸等杀菌剂进行擦抹或浸泡消毒；实验场所，尤其是存在微生物污染的可能时，必须用福尔马林等熏蒸剂进行熏蒸消毒。总之，实验后的处理
40、做到无害化，确保生物安全。5 5、搞好实验结果的统计、分析和资料的整理、归档工作 动物实验结束后，研究人员要利用各种统计学原理，采用正确的统计方法，结合各种相关因素，对实验结果进行科学的描述和统计处理，对统计结果进行合理地分析和解释，揭示实验数据之间所蕴涵的内在规律，为使其结论运用于社会生产实践或进行进一步的科学研究提供理论依据。最后，还应注意做好各种资料的整理、归档工作，将实验方案、标本、记录等原始资料和总结报告等有关文字材料按照有关要求一并整理完好，归档保存。为了保证动物实验更科学、准确和重复性好，用各种方法把一些需要研究的生理或病理活动相对稳定地显现在标准化的实验动物身上，供实验研究之用
41、。称之为动物实验中的动物模型。四、动物模型 一、按产生原因分类（一）自发性动物模型（Spontaneous Animal Models）是指实验动物未经任何有意识的人工处置，在自然情况下所发生的疾病。（二）诱发性或实验性动物模型（Experimental Animal Models）指研究者通过使用物理的、化学的和生物的致病因素作用于动物，造成动物组织、器官或全身一定的损害，出现某些类似人类疾病。二、设计原则 一）相似性一）相似性 在动物身上复制人类疾病模型，目的在于从中找出可以推在动物身上复制人类疾病模型，目的在于从中找出可以推广（外推）应用于病人的有关规律。广（外推）应用于病人的有关规律。
42、外推法（外推法（ExtrapolationExtrapolation）要冒风险，因为动物与人）要冒风险，因为动物与人到底不是一种生物。到底不是一种生物。设计动物疾病模型的一个重要原则是，所复制的模型应设计动物疾病模型的一个重要原则是，所复制的模型应尽可能近似于人类疾病的情况。找到与人类疾病相同的动物自尽可能近似于人类疾病的情况。找到与人类疾病相同的动物自发性疾病当然最好发性疾病当然最好 （二）重复性 理想的动物模型应该是可重复的，甚至是可以标准化的。例如用一次定量放血法可百分之百造成出血性休克，百分之百死亡，这就符合可重复性和达到了标准化要求。又如用狗做心肌梗死模型照理很合适，因为它的冠状动脉
43、循环与人相似，而且在实验动物中它最适宜做暴露心脏的剖胸手术，但狗结扎冠状动脉的后果差异太大，不同狗同一动脉同一部位的结扎，其后果很不一致，无法预测，无法标准化。相反，大小鼠、地鼠和豚鼠结扎冠脉的后果就比较稳定一致，可以预测，因而可以标准化。（三）可靠性 复制的动物模型应该力求可靠地反映人类疾病，即可特异地、可靠地反映某种疾病或某种机能、代谢、结构变化，应具备该种疾病的主要症状和体征，经化验或X光照片、心电图、病理切片等证实。（四）适用性和可控性 应尽量考虑到今后临床应用和便于控制其疾病的发展，以利于研究的开展。（五）易行性和经济性 所采用的方法应尽量做到容易执行和合乎经济原则。灵长类动物与人最
44、近似，复制的疾病模型相似性好，但稀少昂贵，即使猕猴也不可多得，更不用说猩猩、长臂猿。五、实验动物设施紧急事件及应对措施1、实验动物设施可能发生的紧急事件1.1 意外事件：包括化学品漏出、停电、漏电、断水、通风不良、高压灭菌设备故障，以及人员意外伤害如触电、蒸汽、清洁剂、化学药品的烫伤，或被动物咬伤等。1.2 天然灾害事件：有火灾、水灾与地震等。1.3 人为灾害事件：实验动物中心可能因为工作人员的疏忽而造成人为的灾害事件。动物设施生产管理人员不论何时、何地，不论在饲养窒、实验室或洗涤室内，如遇到紧急事件，可以处理的应立即当场处理，无法处理者，立刻与主管、主要研究人员联络，并迅速向有关单位通报求援
45、。2、紧急状况通知联络系统2.1 建立各级负责人、项目主管人员的联络系统，包括办公室、家庭电话，手机号码等，建立上班和下班后的联络方式，尤其是在国家法定假日、例假日的轮值人员身边都应有这个紧急事件联络电话号码簿。2.2 联络系统还包括119消防队，110报警中心，水、电管理物业公司，空调、通风维修中心，高压灭菌设备特约维修站和120医院等。3、意外事件危机处理3.1 化学品漏出与污染 各动物设施都准备一套处理化学污染的物品与工具，如用于吸水的纸、大块棉花、抹布、海绵、肥皂、洗涤剂，处理废物、化学品的桶和各种包装袋等。3.2 动物咬伤（1）向上级报告。（2）接受适当治疗与防治，严重者速送往医院。
46、（3）必备急救卫生箱，箱内装有紧急救护所需要的基本物品，如棉花、纱布、胶布、消毒 水和清洁剂，75酒精、碘酒、双氧水和抗生素等。（4）向有关医师与兽医师报告，并采取相应的治疗措施。3.3 高温高压灭菌锅 当预感有危险时，及时切断电源、水源总闸，让人员、动物、贵重设备尽可能远离危险。3.4 意外断电 直接影响到实验动物生产、使用单位的正常工作。配有紧急备用发电系统，断电时，一方面通知单位内的电工或请电力公司紧急抢修，另一方面应始终保持备用发电机处于良好的工作状态当紧急备用发电系统无法立即启动，应帮助实验和饲养管理人员迅速离开动物实验区或饲养区。屏障环境长时间停电可造成温度、湿度和空气异常，动物因缺氧、高温、高湿而死亡。3.5 漏电 3.6 火灾3.7 断水3.8 空调故障 通风不良主要是空气滤网堵塞、空调系统故障或运转异常平常要按时更换空气过滤网饲养及管理人员应注意空气压差表是否保持在2050Pa。中央控制室的工作人员实行24h值班、监控3.9 其他 4、人为灾害为避免人为侵入偷盗，夜间必须登记人员出入情况，并设监视系统，以便24h监 控管制。ENDEND
