1、免疫学应用免疫学应用1本课要解决的一些问题本课要解决的一些问题o 体外体外Ag-AbAg-Ab反应原理是什么？反应原理是什么？o Ag-AbAg-Ab反应有什么特点？反应有什么特点？o 现代医学免疫学检验应用有哪些？现代医学免疫学检验应用有哪些？o 人工主动免疫与被动免疫的意义人工主动免疫与被动免疫的意义o 现代医学免疫治疗方法现代医学免疫治疗方法2免疫学应用免疫学应用o 免疫诊断免疫诊断n 抗原、抗体诊断技术抗原、抗体诊断技术n 细胞诊断技术细胞诊断技术o 免疫预防免疫预防n 人工主动免疫人工主动免疫n 人工被动免疫人工被动免疫o 免疫治疗免疫治疗n 免疫调节增强、抑制免疫调节增强、抑制n
2、免疫治疗免疫治疗3免疫诊断免疫诊断o 抗原、抗体诊断技术抗原、抗体诊断技术n 抗原和相应的抗体之间可以发生特异性结合，这种抗原和相应的抗体之间可以发生特异性结合，这种反应还能在反应还能在体外进行体外进行（试管内或玻片上）。呈现出（试管内或玻片上）。呈现出凝集、沉淀等可见的凝集、沉淀等可见的反应现象反应现象。n 抗原抗体的结合具有特异性，可以用已知抗体检测抗原抗体的结合具有特异性，可以用已知抗体检测未知抗原，也可以用已知抗原检测未知抗体，来达未知抗原，也可以用已知抗原检测未知抗体，来达到实验诊断或研究的目的。到实验诊断或研究的目的。n 抗体主要存在于血清中，试验时一般都需要血清做抗体主要存在于血
3、清中，试验时一般都需要血清做试验材料，所以传统上将体外的抗原抗体反应又称试验材料，所以传统上将体外的抗原抗体反应又称为为血清学反应血清学反应。4抗原、抗体诊断技术抗原、抗体诊断技术体外抗原抗体诊断技体外抗原抗体诊断技术术血清学试验血清学试验凝集反应：直接、间接（正向、反向、抑制）、协同凝集反应：直接、间接（正向、反向、抑制）、协同沉淀反应：液相（比浊技术）、凝胶（扩散、电泳）沉淀反应：液相（比浊技术）、凝胶（扩散、电泳）补体参与的反应：溶血试验、补体结合试验补体参与的反应：溶血试验、补体结合试验中和反应：病毒中和反应：病毒NTNT、毒素、毒素NTNT标记技术标记技术酶免疫分析：酶免疫分析：EL
4、ISAELISA荧光免疫分析：荧光免疫分析：荧光抗体染色技术、荧光免疫测定荧光抗体染色技术、荧光免疫测定放射免疫分析：放射免疫、免疫放射放射免疫分析：放射免疫、免疫放射金免疫分析：斑点金免疫层析试验、斑点金免疫渗滤试验金免疫分析：斑点金免疫层析试验、斑点金免疫渗滤试验其他：免疫印迹技术等其他：免疫印迹技术等5酶免疫分析酶免疫分析6免疫比浊免疫比浊7化学发光免疫分析化学发光免疫分析8流式细胞术流式细胞术9抗原抗体反应原理抗原抗体反应原理oAgAg决定簇和决定簇和AbAb分子超变区相互作用分子超变区相互作用(相互吻合相互吻合,具有互补性具有互补性)，分子，分子表面特异的可逆的弱结合力在极短距离内才
5、能发生。表面特异的可逆的弱结合力在极短距离内才能发生。o两个阶段：两个阶段：n特异性结合阶段，这种结合是基于两种分子间的结构互补性和亲特异性结合阶段，这种结合是基于两种分子间的结构互补性和亲和性；快、几秒到几分。和性；快、几秒到几分。n可见反应阶段：抗原抗体复合物在环境因素（电解质、温度、可见反应阶段：抗原抗体复合物在环境因素（电解质、温度、PHPH等）影响下，进一步交联和聚集，表现为凝集、沉淀等肉眼可见等）影响下，进一步交联和聚集，表现为凝集、沉淀等肉眼可见反应；慢、数分钟到数小时。反应；慢、数分钟到数小时。o物质基础：物质基础：n抗原表位与抗体高变区间的互补结合抗原表位与抗体高变区间的互补
6、结合n抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合n抗原抗体之间的结合力抗原抗体之间的结合力n亲水胶体转化为疏水胶体亲水胶体转化为疏水胶体10抗原抗体反应特点抗原抗体反应特点p 特异性：特异性：n 抗原与抗体抗原与抗体结合反应的结合反应的专一性专一性n 分子基础是分子基础是抗原表位与抗原表位与抗体分子高抗体分子高变区之间空变区之间空间构型的互间构型的互补性补性11抗原抗体反应特点抗原抗体反应特点两种不同的抗原两种不同的抗原分子具有部分相分子具有部分相同或类似结构的同或类似结构的抗原表位，可与抗原表位，可与彼此相应的抗血彼此相应的抗血清发生反应清发生反应抗原抗
7、体交叉反应示意图抗原抗体交叉反应示意图交叉反应（交叉反应（cross reactionscross reactions）12抗原抗体反应特点抗原抗体反应特点前带前带(prezone(prezone)：抗体过量：抗体过量后带后带(postzone(postzone)：抗原过量：抗原过量等价带等价带(equivalence zone)(equivalence zone)：抗原抗体比例合适抗原抗体比例合适 抗原抗体反应比例性示意图抗原抗体反应比例性示意图p比例性（可见性）：抗比例性（可见性）：抗原与抗体发生可见反应需原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系遵循一定的量比关系13抗原抗体反应特点抗原抗
8、体反应特点o 阶段性阶段性n 第一阶段：特异性结合阶段，反应快，第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见不可见 n 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、现凝集、沉淀和细胞溶解等现象沉淀和细胞溶解等现象 14抗原抗体反应特点抗原抗体反应特点o 可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性与抗体的特性 o 影响因素：影响因素：n 抗体对相应抗原的亲合力亲合力越高，抗体对相应抗原的亲合力亲合力越高，结合越牢固，越不易解离结合越牢固，越不易解离 n 环境因素对
9、复合物的影响环境因素对复合物的影响pHpH、离子强、离子强度度15抗体抗体混有混有SPAgSPAg抗体抗体-SPAg-SPAg抗体抗体-SPAg-SPAg分离剂分离剂一、抗原抗体结合一、抗原抗体结合二、分离抗体二、分离抗体可逆性示意图可逆性示意图抗体抗体16抗原抗体反应类型抗原抗体反应类型反应类型反应类型实验技术实验技术结果判断结果判断凝集反应凝集反应直接凝集试验直接凝集试验观察凝集现象观察凝集现象间接凝集试验间接凝集试验同上同上抗球蛋白试验抗球蛋白试验同上同上沉淀反应沉淀反应液相沉淀试验液相沉淀试验观察沉淀，检测浊度观察沉淀，检测浊度免疫电泳技术免疫电泳技术观察扫描沉淀峰、沉淀弧观察扫描沉淀
10、峰、沉淀弧补体参与补体参与的反应的反应补体溶血试验补体溶血试验观察测定溶血现象观察测定溶血现象补体结合试验补体结合试验同上同上17抗原抗体反应类型抗原抗体反应类型反应类型反应类型实验技术实验技术结果判断结果判断中和反应中和反应病毒中和试验病毒中和试验检测病毒感染性检测病毒感染性毒素中和试验毒素中和试验检测外毒素毒性检测外毒素毒性标记免疫反应标记免疫反应荧光免疫技术荧光免疫技术检测荧光现象检测荧光现象放射免疫技术放射免疫技术检测放射性强度检测放射性强度酶免疫技术酶免疫技术检测酶底物显色检测酶底物显色发光免疫技术发光免疫技术检测发光强度检测发光强度金免疫技术金免疫技术检测金颗粒沉淀检测金颗粒沉淀1
11、8抗原抗体反应类型抗原抗体反应类型按实际用途分为按实际用途分为:免疫组织化学技术免疫组织化学技术(immunohistochemistry(immunohistochemistry technique,IHCT)technique,IHCT)免疫测定免疫测定(immunoassay)(immunoassay)按检测现象分为按检测现象分为:放射免疫技术放射免疫技术 荧光免疫技术荧光免疫技术酶免疫技术酶免疫技术 化学发光免疫技术化学发光免疫技术金免疫技术金免疫技术按测定反应体系的物理状态分为按测定反应体系的物理状态分为:均相免疫测定均相免疫测定(homogenous immunoassay(hom
12、ogenous immunoassay）非均相免疫测定非均相免疫测定(heterogenous(heterogenous immunoassay)immunoassay)标记免疫技术：标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析19凝集反应凝集反应间接凝集反应间接凝集反应载体颗粒：人载体颗粒：人O型红细胞、绵羊红细胞、乳胶颗粒等型红细胞、绵羊红细胞、乳胶颗粒等20凝集反应
13、凝集反应反向间接凝集反应反向间接凝集反应21凝集反应凝集反应间接凝集抑制反应间接凝集抑制反应如：临床上乳胶凝集抑制试验如：临床上乳胶凝集抑制试验妊娠早期诊断妊娠早期诊断22沉淀反应沉淀反应单向琼脂扩散单向琼脂扩散(1)(1)抗体混于凝胶中抗体混于凝胶中(2)(2)抗原加入孔内抗原加入孔内(3)(3)抗原自由扩散抗原自由扩散标准品抗原浓度测定标准品抗原浓度测定沉淀环直径沉淀环直径抗原浓度抗原浓度(4)测定沉淀环直径测定沉淀环直径(5)在标准曲线上查找相应在标准曲线上查找相应抗原浓度抗原浓度23沉淀反应沉淀反应双向琼脂扩散双向琼脂扩散(1)(1)抗原抗体双向自由扩散抗原抗体双向自由扩散(2)24(
14、2)24小时出结果小时出结果(3)(3)呈现沉淀线或弧呈现沉淀线或弧24免疫酶技术免疫酶技术25免疫荧光技术免疫荧光技术26金免疫标记技术金免疫标记技术 兔抗鼠兔抗鼠IgG鼠抗鼠抗HCG单抗单抗金标鼠抗金标鼠抗HCG单抗单抗尿液浸湿标志线尿液浸湿标志线 手持端手持端斑点金免疫层析试验检测斑点金免疫层析试验检测HCG27金免疫标记技术金免疫标记技术阳性阳性弱阳性弱阳性阴性阴性无效无效质控线质控线测试线测试线尿样尿样斑点金免疫层析试验检测斑点金免疫层析试验检测HCG28免疫细胞检测免疫细胞检测o 非特异性免疫细胞检测非特异性免疫细胞检测n 中性粒细胞运动、吞噬和杀菌功能检测中性粒细胞运动、吞噬和杀
15、菌功能检测n 巨噬细胞检测巨噬细胞检测n NKNK细胞检测细胞检测o 特异性免疫细胞检测特异性免疫细胞检测n T T细胞亚群、数量、功能检测细胞亚群、数量、功能检测n B B细胞功能检测细胞功能检测 PHA刺激刺激4872小时小时29免疫预防免疫预防o 人工主动免疫人工主动免疫n 是给机体输入疫苗或类毒素等抗原物质，刺激机体产生是给机体输入疫苗或类毒素等抗原物质，刺激机体产生特异性免疫力。特异性免疫力。n 经人工主动免疫产生的免疫力出现较慢，但免疫力较持经人工主动免疫产生的免疫力出现较慢，但免疫力较持久，临床上多用于预防。久，临床上多用于预防。死疫苗：伤寒、乙脑、百日咳、狂犬病及钩体病等疫苗死
16、疫苗：伤寒、乙脑、百日咳、狂犬病及钩体病等疫苗 活疫苗：活疫苗有卡介苗、麻疹、风疹、脊髓灰质炎等活疫苗：活疫苗有卡介苗、麻疹、风疹、脊髓灰质炎等疫苗疫苗 类毒素：白百破三联疫苗类毒素：白百破三联疫苗 新型疫苗：亚单位疫苗新型疫苗：亚单位疫苗:HBsAg:HBsAg、合成疫苗、基因工程、合成疫苗、基因工程疫苗。疫苗。30免疫预防免疫预防o 人工被动免疫人工被动免疫n 给机体输入抗体等效应物质，直接产生给机体输入抗体等效应物质，直接产生免疫作用免疫作用n 人工被动免疫产生的免疫力出现较快，人工被动免疫产生的免疫力出现较快，但免疫力不持久，临床上多用于临时治但免疫力不持久，临床上多用于临时治疗。疗。
17、抗血清抗血清 免疫球蛋白免疫球蛋白 细胞因子细胞因子31免疫预防免疫预防32免疫预防免疫预防33免疫治疗免疫治疗o 利用免疫学原理，针对疾病发病机制，应用制剂人为调利用免疫学原理，针对疾病发病机制，应用制剂人为调整免疫状态，达到到治疗或缓解疾病的目的。整免疫状态，达到到治疗或缓解疾病的目的。o 免疫调节免疫调节n 免疫增强：用与肿瘤辅助治疗，抗病毒治疗免疫增强：用与肿瘤辅助治疗，抗病毒治疗n 免疫抑制：用于自身免疫病、器官移植抗排异反应治疗免疫抑制：用于自身免疫病、器官移植抗排异反应治疗o 免疫治疗免疫治疗n 治疗性疫苗治疗性疫苗n 细胞因子细胞因子n 过继免疫治疗过继免疫治疗n 干细胞移植干细胞移植34复习题复习题o Ag-AbAg-Ab反应有什么特点反应有什么特点o 人工主动免疫与被动免疫的区别人工主动免疫与被动免疫的区别o 常用的免疫制剂有哪些，分别属于什么类型？常用的免疫制剂有哪些，分别属于什么类型？35THANK YOU.36
