1、质谱技术与方法质谱技术与方法质谱分析法质谱分析法（mass spectrometry，MS）是将化合物形成离子和碎片离子，按质荷比是将化合物形成离子和碎片离子，按质荷比（m/z）的不同进行分离，来进行成分和结）的不同进行分离，来进行成分和结构分析的构分析的方法。方法。所得结果用质谱图（亦称质谱，所得结果用质谱图（亦称质谱，MassSpectrum）表示。）表示。根据质谱图提供的信息可以进行有机物及无根据质谱图提供的信息可以进行有机物及无机物的定性和定量分析、生物大分子的结构机物的定性和定量分析、生物大分子的结构分析、样品中各种同位素比的测定及固体表分析、样品中各种同位素比的测定及固体表面的结构
2、和组成分析等。面的结构和组成分析等。生物质谱生物质谱（Bio-mass spectrometry，Bio-MS）是用于生物分子分析的质谱技术。是用于生物分子分析的质谱技术。生物质谱要求测定上万甚至是几十万的生物质谱要求测定上万甚至是几十万的相对分子质量相对分子质量 。随着电喷雾电离（随着电喷雾电离（ESI）和基质辅助激光）和基质辅助激光解吸电离（解吸电离（MALDI）技术的完善和成熟，）技术的完善和成熟，生物大生物大分子的质谱分析才得以实现。分子的质谱分析才得以实现。The Nobel Prize in Chemistry 2002for the development of methods
3、for identification andstructure analyses of biological macromoleculesfor their development of softdesorption ionisation methods formass spectrometric analyses ofbiological macromoleculesfor hisdevelopment ofnuclear magneticresonancespectroscopy fordetermining thethree-dimensionalstructure ofbiologic
4、almacromolecules insolution约翰约翰芬芬田中耕一田中耕一库尔特库尔特伍斯里伍斯里奇奇质谱法的基本原理质谱法的基本原理质谱分析的基本过程是使样品在离子源中质谱分析的基本过程是使样品在离子源中发生电离，生成不同质荷比的带电离子，发生电离，生成不同质荷比的带电离子，经加速电场的作用形成离子束，进入质量经加速电场的作用形成离子束，进入质量分析器，在其中再利用电场和磁场使其发分析器，在其中再利用电场和磁场使其发生色散、聚焦，获得质谱图。生色散、聚焦，获得质谱图。质谱分析中，多种离子化技术均可使物质质谱分析中，多种离子化技术均可使物质分子失去外层价电子形成分子离子分子失去外层价电
5、子形成分子离子（molecular ion，M+），分子离子中的化），分子离子中的化学键还可以继学键还可以继续发生某些有规律的断裂而续发生某些有规律的断裂而形成不同质量的碎片离子（形成不同质量的碎片离子（fragment ion）：）：M M+碎片离子碎片离子 +中性分子中性分子被分析样品离子电离后经加速进入磁场时，其动被分析样品离子电离后经加速进入磁场时，其动能与加速电压及电荷能与加速电压及电荷z有关，即：有关，即：zeU=1/2mv2其中：其中：z为电荷数，为电荷数，e为元电荷（为元电荷（e=16010-19C），），U为加速电压，为加速电压，m为离子的质量，为离子的质量，v为离子初为离子
6、初加速后的运动速度。加速后的运动速度。具有速度具有速度v的带电粒的带电粒子进入质谱仪的质量分析器中，子进入质谱仪的质量分析器中，根据所选择的分离方式，最终各种离子按质荷比根据所选择的分离方式，最终各种离子按质荷比（mz）的不同实现分离。）的不同实现分离。质谱仪质谱仪质谱仪包括进样系统、电离系统、质量分析器质谱仪包括进样系统、电离系统、质量分析器和检测系统。为了获得离子的良好分析，必须和检测系统。为了获得离子的良好分析，必须避免离子损失，因此凡有样品分子及离子存在避免离子损失，因此凡有样品分子及离子存在和通过的地方，必须处于真空状态。和通过的地方，必须处于真空状态。在进行质谱分析时，一般过程是：
7、通过合适的在进行质谱分析时，一般过程是：通过合适的进样装置将样品引入并进行气化。气化后的样进样装置将样品引入并进行气化。气化后的样品引入到离子源进行电离。电离后的离子经过品引入到离子源进行电离。电离后的离子经过适当的加速后进入质量分析器，按不同的适当的加速后进入质量分析器，按不同的mz进行分离。然后到达检测器，产生不同的信号进行分离。然后到达检测器，产生不同的信号而进行分析。而进行分析。质量分析器质量分析器检测器检测器样品导样品导入系统入系统离子源离子源真空泵真空泵m/z计算机控制与计算机控制与数据处理数据处理相相对对丰丰度度质谱仪的构成质谱仪的构成DataSystemMassspectrum
8、outInletSystemMassAnalyzerIonSourceDetectorSampleinInlet systems:Ion sources:Mass analyzers:Simple vacuum lockHPLCGCElectrospray(ESI)MALDIFAB/LSIMSElectron ionization(EI)QuadrupoleTime-of-flightIon trapMagnetic sectorFTMSMass Spectrometer SchematicVacuum envelope离子源离子源(ion source)质谱仪中将分子转化为离子的装置称为离子
9、质谱仪中将分子转化为离子的装置称为离子源源(ion source)。由于离子化所需要的能量。由于离子化所需要的能量随分子不同差异很随分子不同差异很大，因此，对于不同的分大，因此，对于不同的分子应选择不同的离解方法。子应选择不同的离解方法。通常将能给样品较大能量、生成较多碎片离通常将能给样品较大能量、生成较多碎片离子的电离方法称为子的电离方法称为硬电离方法硬电离方法（如电子轰击（如电子轰击离子化，离子化，EI），而给样品较小能量、），而给样品较小能量、碎片离碎片离子较少或不生成碎片离子的电离方法称为子较少或不生成碎片离子的电离方法称为软软电离方法电离方法。生物质谱中有代表性的离子源生物质谱中有代
10、表性的离子源1电喷雾电离电喷雾电离(Electrospray Ionization，ESI)2离子喷雾电离（离子喷雾电离（Ion spray Ionization，ISI）3大气压化学电离大气压化学电离(Atmospheric PressureChemical Ionization，APCI)4基质辅助激光解吸电离基质辅助激光解吸电离(Matrix AssistedLaser Desorption Ionization，MALDI)5快原子轰击电离快原子轰击电离(Fast Atom BonbardmentIonization，FAB)离子源是质谱仪的心脏，可以将离子源离子源是质谱仪的心脏，可以
11、将离子源看作是离子化反应器，样品在其中发生看作是离子化反应器，样品在其中发生一系列的特征裂解反应，反应在很短时一系列的特征裂解反应，反应在很短时间（间（10-11s）内发生，所以可以快速地获）内发生，所以可以快速地获得质谱图。得质谱图。质量分析器质量分析器质量分析器是质谱仪的核心，它将离子质量分析器是质谱仪的核心，它将离子源产生的离子按其质量和电荷比（质荷源产生的离子按其质量和电荷比（质荷比比m/z，m离子的质量数，离子的质量数，z离子携离子携带的电荷数）的不同带的电荷数）的不同在空间的位置在空间的位置时间的先后或轨道的稳定与否进行分离时间的先后或轨道的稳定与否进行分离,以便得到按质荷比（以便
12、得到按质荷比（m/z）大小顺序排列）大小顺序排列而成的而成的质谱图。质谱图。质量分析器质量分析器(mass analyzer)的种类的种类1.磁质量分析器磁质量分析器(单聚焦质量分析器单聚焦质量分析器,双聚双聚焦质量分析器焦质量分析器)2.四极质量分析器四极质量分析器(四极杆滤质器四极杆滤质器)3.飞行时间质量分析器飞行时间质量分析器(TOF)4.离子阱离子阱(Ion Trap)质量分析器质量分析器5.离子回旋共振离子回旋共振质量分析器质量分析器其中其中,234是目前生物质谱是目前生物质谱分析中常分析中常用的质量分析器用的质量分析器检测器检测器1.直接电检测器直接电检测器2.电子倍增器电子倍增
13、器3.闪烁检测器闪烁检测器4.微通道板微通道板计算机控制与数据处理系统计算机控制与数据处理系统1.监控各单元的工作状态监控各单元的工作状态,实现质谱仪的实现质谱仪的全自动操作全自动操作.2.数据的采集和简化数据的采集和简化.3.质量数的转换质量数的转换.4.扣除本底或相邻组分的干扰扣除本底或相邻组分的干扰.5.谱峰强度归一化谱峰强度归一化.6.标出高分辨质谱的元素组成标出高分辨质谱的元素组成.7.用总离子流对质谱峰强度进行修正用总离子流对质谱峰强度进行修正.8.谱图的累加谱图的累加平均平均.9.输出质量色谱图输出质量色谱图.10.单离子检测和多离子检测单离子检测和多离子检测.11.谱图检索谱图
14、检索.质谱图质谱图质谱分析中，按各离子质谱分析中，按各离子m/z的顺序及相对的顺序及相对强度大强度大小记录分析结果的图谱即为质谱小记录分析结果的图谱即为质谱图。由于图谱中离子的质量及相对强度图。由于图谱中离子的质量及相对强度是各物质所特有的，即反映了物质的性是各物质所特有的，即反映了物质的性质和结构特点，因此通过质谱解析可以质和结构特点，因此通过质谱解析可以进行物质的成分和结构分析。进行物质的成分和结构分析。常见的质谱图是经过计算机处理后得到常见的质谱图是经过计算机处理后得到的棒图（的棒图（bar graph）。）。常见的质谱图是经计算机常见的质谱图是经计算机处理的棒图处理的棒图.图中图中,纵
15、坐纵坐标表示离子的标表示离子的相对丰度相对丰度(以质谱中最强以质谱中最强峰的高度为峰的高度为100%,并将此并将此峰称位基峰峰称位基峰,其余峰按与其余峰按与基峰的比例加以表示基峰的比例加以表示,又又称为相对强度称为相对强度);横坐标表横坐标表示离子的质荷比示离子的质荷比.根据峰位根据峰位(棒位棒位)可进行定可进行定性鉴别性鉴别;根据相根据相对丰度可对丰度可进行定量测定进行定量测定.15282931(基峰基峰)32(分子离子峰分子离子峰)33100806040201020304050m/z相相对对峰峰强强棒图棒图(bar graph)CH3OH%Intensity1239.41679.82120
16、.22560.6Mass(m/z)03001.00799.01020301001480.601567.46908070605040804.682044.211738.351570.451439.651894.26 2047.21927.77843.872470.782210.101923.271724.381000.701209.841391.671574.122661.87 2807.672066.13牛血清蛋白（牛血清蛋白（BSP）酶解产物的质谱图）酶解产物的质谱图Voyager Spec#1BP=1480.6,812710030%Int.1009080706050403494349534
17、9634973498349935003501350235033497.64223496.65413498.62563495.65453499.6528203500.65953501.6502Resolution 20,000m/z胰岛素的高分辨质谱图胰岛素的高分辨质谱图质谱仪的主要性能指标质谱仪的主要性能指标衡量质谱仪整体性能的主要指标有：衡量质谱仪整体性能的主要指标有：质量范围质量范围分辨率分辨率质量准确度质量准确度灵敏度灵敏度扫描速度等扫描速度等质量分析器质量上限(m/z)质量准确度（u）分辨率（R）扫描速度（u/s）适用范围四极杆质谱40000.1500300040006000小分子、多
18、电荷离子大分子离子阱质谱100000.110001000040006000小分子、多电荷离子大分子飞行时间质谱5000000.001(高分辨飞行时间质谱)5001000（低），200020000（高）1000000小分子、大分子不同类型质量分析器的性能指标不同类型质量分析器的性能指标质量范围质量范围(mass range)是指质谱仪能够测量的离子质量范围，通常用最小和最大离是指质谱仪能够测量的离子质量范围，通常用最小和最大离子的离子质量表示。子的离子质量表示。质谱分析中，是以核素质谱分析中，是以核素12C质量（质量（12C=12.000u）的）的1/12为一为一个质量单位（个质量单位（u）。）
19、。1u=（12.00000 gmol-1/6.022141023 mol-1）/12=1.6605410-24 g在生物大分子的质谱分析中，还常用道尔顿（在生物大分子的质谱分析中，还常用道尔顿（dalton，Da）作为度量单位。作为度量单位。1Da=1.660310-24 g。Da与与u两者相差两者相差万分之三左右，在生物质谱分析中，可以视为万分之三左右，在生物质谱分析中，可以视为1Da=1u。质量准确度（质量准确度（mass accuracy）质量准确度又称质量精度，即离子质量实测质量准确度又称质量精度，即离子质量实测值值M 与理论值与理论值M0 的相对误差：的相对误差：质量精度质量精度 =
20、MM0/m106 (ppm)（m为为离子质量数的整数）离子质量数的整数）仪器的质量精度一般应小于仪器的质量精度一般应小于10 ppm。分辨率分辨率(resolution，R)分辨率是指仪器能分离相邻两质谱峰的能力。若分辨率是指仪器能分离相邻两质谱峰的能力。若将强度近似相等、质量分别为将强度近似相等、质量分别为M和和M+M M 的两个的两个相邻峰恰好分开，则质谱仪的分辨率定义为：相邻峰恰好分开，则质谱仪的分辨率定义为：Rm1/(m2-m1)m1/M其中其中m1、m2：为质量数，且：为质量数，且m1m2：，故在两：，故在两峰质量相差越小时，要求仪器分辨率越大。峰质量相差越小时，要求仪器分辨率越大。
21、重点介绍两种生物质谱分析方法重点介绍两种生物质谱分析方法基质辅助激光解吸电离基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱飞行时间质谱（Matrix Assisted Laser DesorptionIonization/Time of Flight Mass Spectra，MALDI-TOF MS）电喷雾电离电喷雾电离(Electrospray Ionization，ESI)质谱质谱电喷雾离子化（电喷雾离子化（ESI）原理）原理内衬弹性石英管的不锈钢毛细管（内径内衬弹性石英管的不锈钢毛细管（内径0.10.15mm）被）被加以加以25kV的正电压，与相距约的正电压，与相距约12cm接地的反电极形接地的反
22、电极形成强静电场。成强静电场。被分析的样品溶液从毛细管流出时，在电场作用下形成高被分析的样品溶液从毛细管流出时，在电场作用下形成高度荷电的雾状小液滴；在向质量分析器移动的过程中，液度荷电的雾状小液滴；在向质量分析器移动的过程中，液滴因溶剂的挥发逐渐缩小，其表面上的电荷不断增大。滴因溶剂的挥发逐渐缩小，其表面上的电荷不断增大。当电荷之间的排斥异力足以克服表面张力时（瑞利极限），当电荷之间的排斥异力足以克服表面张力时（瑞利极限），液滴发生裂分；经过这样反复的溶剂挥发液滴发生裂分；经过这样反复的溶剂挥发-液滴裂分过程，液滴裂分过程，最后产生单个的气态离子。最后产生单个的气态离子。由于没有外界能量直接
23、作用于分子，因此对分子结构破坏由于没有外界能量直接作用于分子，因此对分子结构破坏较少，是一种典型的较少，是一种典型的“软电离软电离”方式。方式。ESIMALDI1、离子化形式：产生多电荷离子，常与与HPLC联用，才适用于混合物中蛋白质成分的鉴定1、离子化形式：通常产生单电荷离子，因此，适用于混合物中蛋白质成分的-182、灵敏度：10 M-15-182、灵敏度：10 M3、分辨率：5,0003、分辨率：5,0004、联用形式：可与HPLC、CE在线联用4、联用形式：只能与HPLC、CE离线联用5、与质量分析器的兼容性：可与各种质量分析器（QQQ,QTOF，Ion Trap，FTMS）兼容5、与质
24、量分析器的兼容性：主要与TOF配合使用6、源内裂解能力：具有低能量（1keV）的诱导碰撞解离能力7、适用性：精确分子质量测定、MS/MS 分析（使用Trap质量分析器可做nMS 分析）7、适用性：精确分子质量测定、PMF分析8、操作的难易程度：需经培训8、操作的难易程度：容易ESI与与MALDI的比较的比较质量分析器质量分析器(mass analyzer)在生物质谱中，与在生物质谱中，与ESI离子化源配合使用离子化源配合使用的质量分析器主要有：、四极滤质器、的质量分析器主要有：、四极滤质器、离子阱分析器和离子回旋共振分析器等。离子阱分析器和离子回旋共振分析器等。随着技术的发展，也可以采用这些分
25、析随着技术的发展，也可以采用这些分析器的变型。器的变型。四极滤质器四极滤质器（Quadrupole Mass Filter）四极滤质器也称四极质量分析器，它由四极滤质器也称四极质量分析器，它由四根截面呈双曲面的平行金属杆电极组四根截面呈双曲面的平行金属杆电极组成，离子束穿过对准四根杆之间空间的成，离子束穿过对准四根杆之间空间的准直小孔。准直小孔。相对的一对电极是等电位的，两对电极相对的一对电极是等电位的，两对电极之间的电位是相反的。之间的电位是相反的。离子源的电位比四极滤质器的电位略高离子源的电位比四极滤质器的电位略高几个伏特，以提供离子沿传播中心轴飞几个伏特，以提供离子沿传播中心轴飞行所需的
26、动能。行所需的动能。离子阱离子阱 (ion trap)质量分析质量分析器器离子阱质量分析器亦称四极离子阱（离子阱质量分析器亦称四极离子阱（quadropoleion trp）或）或Paul阱，简称离子阱，是一种通过电阱，简称离子阱，是一种通过电场或磁场将气相离子控制并贮存一段时间的装置。场或磁场将气相离子控制并贮存一段时间的装置。这种分析器是由双曲线表面的中心环形电极这种分析器是由双曲线表面的中心环形电极（ring electrode）和和 上上 下下 各各 一一 个个 端端 盖盖 电电 极极（endcap electrode）组成，中间形成一个空腔）组成，中间形成一个空腔（阱），因此而成为离
27、子阱。端盖电极接地，环（阱），因此而成为离子阱。端盖电极接地，环形电极施以射频电压。形电极施以射频电压。离子阱内充有一定量的氦气（约离子阱内充有一定量的氦气（约10-3（Torr），这），这有利于离子朝中心聚集，而离子聚有利于离子朝中心聚集，而离子聚集得越紧凑，集得越紧凑，离子能量和位置分散越小，有利于提高分辨率和离子能量和位置分散越小，有利于提高分辨率和灵敏度。灵敏度。液相色谱液相色谱-质谱联用质谱联用技术技术（liquid chromatography/massspectrometry，LC-MS）LC-MS把液相色谱技术强有力的分离能力与质把液相色谱技术强有力的分离能力与质谱技术有效的定
28、性分析能力相结合，特别适合谱技术有效的定性分析能力相结合，特别适合于复杂体系的分离分析，目前已成为蛋白质组于复杂体系的分离分析，目前已成为蛋白质组学研究中最重要的技术平台之一。学研究中最重要的技术平台之一。LC-MS的开发在技术上十分困难，直到电喷雾的开发在技术上十分困难，直到电喷雾电离（电离（ESI）接口和大气压化学电离（）接口和大气压化学电离（APCI）接口出现，在接口出现，在20世纪世纪90年代才有了成熟的商品年代才有了成熟的商品化的液相色谱化的液相色谱-质谱联用仪。质谱联用仪。HPLC*含有缓冲剂的含有缓冲剂的水相水相/有机溶剂有机溶剂*非挥发性分非挥发性分析样品析样品Interfac
29、e*脱溶剂脱溶剂*使分析样品使分析样品发生离子化发生离子化MS*高真空度高真空度*按按m/z分析分析产生的离子产生的离子LC-MS的基本构成的基本构成接口的作用就是将接口的作用就是将HPLC与与MS两者实现在线的对接。两者实现在线的对接。它的主要作用是脱去来自它的主要作用是脱去来自HPLC的大量溶剂，使分析样品由的大量溶剂，使分析样品由液相转变为气相并发生离子化。液相转变为气相并发生离子化。接口性能的好坏在很大程度上决定着色谱接口性能的好坏在很大程度上决定着色谱-质谱联用仪器性能质谱联用仪器性能的优劣。的优劣。好的好的HPLC条件可能是条件可能是“坏的坏的”MS条件，条件，二者难以匹配二者难以
30、匹配要实现要实现HPLC与与MS的有效的联用，必的有效的联用，必须须解决以下困难问题：解决以下困难问题：色谱仪与质谱仪的压力匹配问题色谱仪与质谱仪的压力匹配问题色谱仪与质谱仪的流量匹配问题色谱仪与质谱仪的流量匹配问题气化问题气化问题谱图类型谱图类型色谱色谱-质谱质谱提供的信息提供的信息MS的谱图有的谱图有:1.质谱图质谱图2.色谱图色谱图3.全扫描色谱全扫描色谱-质谱三维谱质谱三维谱谱谱 图图 类类 型型色谱色谱-质谱提供的信息质谱提供的信息MS的谱图有的谱图有:1.质谱图质谱图质谱图是一次扫描时间内得到的峰强质谱图是一次扫描时间内得到的峰强质荷比图。扫描方式又有连续扫描和跳质荷比图。扫描方式
31、又有连续扫描和跳变扫描之分。变扫描之分。2.色谱图色谱图3.全扫描色谱全扫描色谱-质谱三维谱质谱三维谱色色 谱谱 图图通常有三种类型通常有三种类型:1.总离子流色谱图总离子流色谱图(TIC)2.质量色谱图质量色谱图(MC)3.选择离子监测图选择离子监测图(SIM)一个例子一个例子:反相高效液相色谱反相高效液相色谱-电喷雾电离质谱法测定电喷雾电离质谱法测定人血浆、尿样中人血浆、尿样中D,L-异亮氨酸和异亮氨酸和D,L-别异别异亮氨酸异构体亮氨酸异构体H 2NCOOHCHC H 2CHH 3CC H 3H 2NCOOHCHCHH 2CC H 3C H 3LeucineIsoleucine图图.17
32、对氨基酸和甘氨酸标准溶液衍生物的对氨基酸和甘氨酸标准溶液衍生物的RP-HPLC荧光检测色谱图荧光检测色谱图Fig.Chromatograms of OPTA-AcCys-derivatives of 17 pairs of standard amino acidsand Gly.A:L-Ile,B:L-allo-Ile,C:D-Ile,D:D-allo-IleConditions:mobile phase A,50 mmol/L NH4AC;mobile phase B:methanol;0-10 min,mobile phase B 10%;10-30 min,mobile phase B
33、10-40%(linear gradient);30-70 min,mobile phase B 40%;flow rate:0.2 ml/min;column temperature:35.Detector：ex 345 nm,em 445nm图图.异亮氨酸衍生物负离子检测的质谱图异亮氨酸衍生物负离子检测的质谱图图图.17对氨基酸和甘氨酸标准溶液衍生物的对氨基酸和甘氨酸标准溶液衍生物的质谱检测质谱检测SIM色谱图色谱图Fifg.3 SIM LC/MS chromatograms of OPTA-AcCys-derivatives of 17 pairs ofstandard amino ac
34、ids and Gly tandard amino acidsmobile phase:40%50 mmol/L NH4AC,60%methanol;M-H-m/z 391在在LC-MS分析中，分析中，MC的用途很广，例如：的用途很广，例如：利用利用MC搜寻目标化合物，快速鉴别化搜寻目标化合物，快速鉴别化合物合物类型；类型；可以检查色谱峰的纯度，即利用化合物特征可以检查色谱峰的纯度，即利用化合物特征离子质量色谱保留时间的差异，分辨共流出的离子质量色谱保留时间的差异，分辨共流出的色谱峰。如果色谱峰是单一的化合物，则该化色谱峰。如果色谱峰是单一的化合物，则该化合物的几个主要特征离子的质量色谱峰应该
35、是合物的几个主要特征离子的质量色谱峰应该是重叠的，保留时间是一致的；重叠的，保留时间是一致的；MS比比TIC简洁，消简洁，消除了背景干扰，信噪比更除了背景干扰，信噪比更好，因此，多采用好，因此，多采用MC的色谱峰面积进行定量。的色谱峰面积进行定量。生物质谱技术生物质谱技术进行蛋白质鉴定分析的流程进行蛋白质鉴定分析的流程肽质量指纹谱肽质量指纹谱peptide mass fingerprinting,PMF-当前鉴定蛋白质的质谱技术当前鉴定蛋白质的质谱技术肽质量指纹谱肽质量指纹谱(PMF)PMF是指蛋白质被酶切位点专一的蛋白酶水解是指蛋白质被酶切位点专一的蛋白酶水解后得到的肽片段质量图谱，由于其具有特征性后得到的肽片段质量图谱，由于其具有特征性,所以称为指纹谱。所以称为指纹谱。PMF可用于蛋白质的鉴定，即用实验测得的蛋可用于蛋白质的鉴定，即用实验测得的蛋白质酶解肽段质量数在蛋白质数据库中检索，白质酶解肽段质量数在蛋白质数据库中检索，寻找具有相似肽指纹谱的蛋白质。寻找具有相似肽指纹谱的蛋白质。如果在数据库中找不到，有可能是发现了新蛋如果在数据库中找不到，有可能是发现了新蛋白质，要进行序列分析，合成白质，要进行序列分析，合成DNA探针来表达探针来表达分离和鉴定这一蛋白质。，分离和鉴定这一蛋白质。，
