1、上海仁度生物科技有限公司上海仁度生物科技有限公司Shanghai RenDu Biotechnology Co.,Ltd.RNA检测在生殖道病原体实检测在生殖道病原体实验室诊断中的应用验室诊断中的应用 常见生殖道病原体及危害常见生殖道病原体及危害生殖支原体(MG)沙眼衣原体(CT)解脲脲原体(UU)淋病奈瑟菌（NG）不孕不育泌尿生殖道炎症 眼科炎症类风湿关节炎不良妊娠/母婴感染 沙眼衣原体沙眼衣原体(CT)80%的女性和50%男性感染人群无临床症状感染人群中无临床症状 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌(NG)50%的女性和10%的男性无临床症状 解脲脲原体解脲脲原体(UU)75%的成人无临床症状，在孕妇中
2、无症状比例达到80%生殖支原体（生殖支原体（MG）50%以上感染人群无明显临床症状 Clinical Effectiveness Guideline for the Management of Chlamydia trachomatis Genital Tract Infection.2001叶顺章.性传播疾病的实验室诊断.第二版.102 沉默的杀手沉默的杀手European(IUSTI/WHO)Guideline on the Diagnosis and Treatment of Gonorrhoea in Adults.2009欧美国家指南中建议筛查欧美国家指南中建议筛查CT/NG所有妊娠
3、女性在第一次产检时都要进行CT/NG检查，并需在孕晚期进行复查。CDC Grand Rounds:The Growing Threat of Multidrug-Resistant Gonorrhea。USA CDC 2013Guidelines for the Laboratory Diagnosis of Mycoplasma genitalium Infections in East European Countries,2010Screening for Chlamydia and Gonorrhea:U.S.Preventive Services Task Force Recomme
4、ndation Statement.2014 美国2014年预防服务工作组(USPSTF)美国疾控(US CDC)2010版性病诊疗指南建议所有育龄人群中进行CT/NG检查。英国2013版国家临床最优化研究所(NICE)指南建议所有育龄人群中进行CT检查。Prevention of infection after induced abortion.Release date October 2010.SFP Guideline 20102 美国计划生育学会（SFP）人工流产后预防感染指南 人工流产手术患者应在术前接受预防性抗生素治疗，从而降低其术后生殖道感染的风险。对拟行人工流产手术患者，推荐术
5、前进行沙术前进行沙眼衣原体和淋病奈瑟菌的筛查眼衣原体和淋病奈瑟菌的筛查，对于检测阳性患者依照规范治疗后再施行手术。欧美国家指南中建议筛查欧美国家指南中建议筛查CT/NG孕前和孕期保健指南2011.中华医学会妇产科分会产科学组 孕前和孕期保健指南 -孕前3个月：CT/NG为备查项目 -怀孕6-13周：高危孕妇、有症状者CT/NG为备查项目 国家免费孕前优生健康检查项目试点技术服务规范 -阴道分泌物进行CT/NG检测 黏液脓性宫颈炎的诊断和治疗 -对疑似患者，在确定临床体征后，应进一步做衣原体及淋病奈瑟菌的检测黏液脓性宫颈炎的诊断和治疗.2012.中华医学会妇产科分会感染协作组我国指南关于我国指南
6、关于CT/NG的检查建议的检查建议生殖道病原体实验室检测方法生殖道病原体实验室检测方法细菌法细菌法免疫法免疫法分子生物学法分子生物学法培养法培养法镜检法镜检法抗原抗体检测抗原抗体检测DNA检测检测RNA检测检测方法学方法学检测方法检测方法检测样本检测样本检测复杂程检测复杂程度度特点特点检测项目检测项目细菌法培养法细菌培养分泌物较复杂，检测过程长准确率低，易漏检及误检用于NG/UU/CT/MG检测形态学法涂片镜检分泌物全手工操作，较复杂准确率较高，但有漏检用于NG检测免疫法免疫法胶体金/酶联免疫法分泌物耗时短，操作简单准确率低，假阴性问题突出用于CT检测分子生物学法DNA检测PCR分泌物操作较复
7、杂，需有一定经验才能做好检测准确率相对较高，但存在污染和死亡病原体导致的假阳性问题用于CT/NG/UU检测RNA检测检测TMA/SAT尿液尿液和分泌物耗时耗时短，仪器自动化操作，较简单检测活体检测活体RNA，灵敏度和特，灵敏度和特异性均很高异性均很高欧美国家用于欧美国家用于CT/NG/MG检测检测常用常用CT/NG/UU/MG检测方法比较检测方法比较国外诊疗指南推荐国外诊疗指南推荐使用分子检测法诊断生殖道病原体使用分子检测法诊断生殖道病原体 美国疾控2014版CT/NG实验室诊断指南Recommendations for the Laboratory-Based Detection of Ch
8、lamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae.USA CDC.March 2014.Unemo et al.Laboratory diagnosis of sexually transmitted infections,including human immunodeficiency virus,WHO,2013WHO 2013版性传播疾病实验室诊断方法 WHO性传播疾病实验室诊断指南性传播疾病实验室诊断指南利用16S rRNA为靶标的RNA检测技检测技术术（TMA），在灵敏度上比在灵敏度上比PCR要要高高，它是目前一种灵敏度、特异度均非常高的MG
9、检测技术。Unemo et al.Laboratory diagnosis of sexually transmitted。a.infections,including human immunodeficiency virus,WHO,2013 WHO明确指出核酸检测法（明确指出核酸检测法（NAAT）是诊断）是诊断MG的唯一可行方法的唯一可行方法;通过通过RNA检测技术检测生殖支原体比检测技术检测生殖支原体比PCR方法要更准确。方法要更准确。核酸检测法（核酸检测法（NAAT）是诊断MG的唯一可行方法WHO推荐用推荐用RNA技术检测技术检测MGRNA用于临床检验的优势用于临床检验的优势 灵敏度高
10、，不易漏检灵敏度高，不易漏检：RNA 拷贝数 DNA拷贝数（e.g，16s rRNA 104copy/cell）与临床相关性好，可以区分与临床相关性好，可以区分“死菌死菌”“”“活菌活菌”：病原体死亡，RNA很快降解，可进行疗效评估和辅助判愈可进行疗效评估和辅助判愈，减少无效治疗，比如抗生素滥用。无创取样：尿液检测无创取样：尿液检测，显著降低病人的采样痛苦和检测依从性。不易误检不易误检：靶标和扩增产物都是RNA，不易污染，不易出现假阳性。RNA检测技术检测技术NASBA（Biomerieux）(NA sequence based amplification)TMA（Gen-probe）(Tra
11、nscription Mediated Amplification)SAT（上海仁度（上海仁度)（Simultaneous Amplification and Testing)SAT技术技术SAT与与PCR技术原理比较技术原理比较RTRNAcDNART1000 copiesT7SATDNATaqTaq PCR30分钟内分钟内扩增扩增1010倍倍中国诊疗指南推荐中国诊疗指南推荐用用SAT诊断生殖道病原体诊断生殖道病原体梅毒、淋病、生殖器疱疹、生殖道沙眼衣原体感染诊疗指南。中国疾控中心、中华医学会皮肤性病学分会性病学组。2014。l 中国 2014版 梅毒、淋病、生殖器疱疹、生殖道沙眼衣原体感染诊
12、疗指南CT/NG/UU/MG-SAT是国内是国内唯一唯一获得获得CFDA认证的认证的RNA检测试剂检测试剂SAT扩增曲线图扩增曲线图（ABI 7500）阴性结果阳性结果以以CT-SAT为例为例SAT技术可实现尿液检测技术可实现尿液检测 样本类型：宫颈拭子、尿液金华中心医院浙大医学院附属妇产科医院临床结果显示拭子和尿液标本检测阳性率基本一致。临床结果显示拭子和尿液标本检测阳性率基本一致。郑雅萍 袁青 陈伟,实时核酸恒温扩增技术在奈瑟菌感染检测中的应用,浙江实用医学,2015年01期 沙眼衣原体 淋病奈瑟菌编号编号作者作者发表发表时间时间研究中心研究中心病例病例数数项目项目灵敏度灵敏度特异性特异性
13、诊断标准诊断标准1王千秋 等2010中科院北京协和医学院皮肤病研究所205NG100%94.5%PCR2顾伟鸣 等2010上海市皮肤病性病医院229CT97.1%100%培养+PCR3高志华 等2012东莞市南方医科大学广济医院218NG100%97.08%培养+PCR4陈敏 等2014湖南省妇幼保健院,解放军163医院200CT88.12%100%培养+PCR5郑雅萍 等2015金华市中心医院153NG95.9%88.8%分离培养SAT技术具有高灵敏度，高特异性技术具有高灵敏度，高特异性男科多种样本类型检测（课题）男科多种样本类型检测（课题）仁度仁度CT/NG/UU/MG RNA检测试剂用于
14、精液检测检测试剂用于精液检测 采用SAT技术对438例男性精液标本精液标本进行CT/NG/UU/MG检测 结论：1、SAT技术可对精浆标本进行技术可对精浆标本进行CT/NG/UU/MG检测。检测。2、与医院传统检测方法相比，传统检测方法阳性标本，传统检测方法阳性标本，SAT检测均为检测均为阳性阳性；同时SAT还比传统方法多检出阳性标本。仁度仁度UU/MG RNA检测试剂用于尿液和前列腺液检检测试剂用于尿液和前列腺液检测（同一患者同时采集尿液和前列腺液）测（同一患者同时采集尿液和前列腺液）前列腺液标本前列腺液标本合计合计阳性阳性阴性阴性尿液标本尿液标本阳性阳性35351 13636阴性阴性0 0
15、63636363合计合计353564649999表表1 99例患者两种样本类型例患者两种样本类型UU检测结果检测结果前列腺液标本前列腺液标本合计合计阳性阳性阴性阴性尿液标本尿液标本阳性阳性3 30 03 3阴性阴性0 096969696合计合计3 396969999表表2 99例患者两种样本类型例患者两种样本类型MG检测结果检测结果结论：前列腺液检测阳性样本，尿液检测均为阳性！结论：前列腺液检测阳性样本，尿液检测均为阳性！SAT可应用于前列腺液和尿液的检测！可应用于前列腺液和尿液的检测！操作简单操作简单-小批量样本检测小批量样本检测样本磁珠法提取核酸恒温扩增检测结果报告操作简单操作简单-大批量
16、样本检测大批量样本检测 全自动 高通量 样本适用范围广全自动样本制备工作站的开发全自动样本制备工作站的开发阴性结果阳性结果全自动核酸提取仪适用范围广适用范围广-多种检测机型多种检测机型ABI 系列荧光定量系列荧光定量PCR仪器仪器罗氏实时荧光罗氏实时荧光PCR仪器仪器STRATAGENE 荧光定量荧光定量PCR仪器仪器西安天隆实时荧光西安天隆实时荧光PCR仪器仪器CT/NG/UU/MG-SAT产品特点产品特点SAT产品特点产品特点SAT的优势的优势带给检验科的益处带给检验科的益处检测靶标：RNA灵敏度高活菌检测可尿液检测可尿液检测结果准确度高，可靠尿液检测，减少医务人员工作量，减轻病人痛苦扩增
17、产物：RNA产物易降解，减少实验室污染风险维护实验室质控水平实验室质控、污染非常少核酸提取：超声波处理15min操作简单，快速操作简单、易掌握扩增方式：42恒温降低实验室设备要求缩短检测时间减少工作量提高工作效率检测方法：实时荧光检测实时反映扩增反应的动态过程结果是否容易判读CT/NG/UU/MG-SAT项目开展相关参数项目开展相关参数CT/NG/UU/MG-SAT项目开展相关参数项目开展相关参数样本样本 样本类型宫颈拭子、尿道拭子、阴道拭子（MG项目）、尿液 样本保存尿液样本230条件下24小时内加入样本保存液加入样本保存液的标本，-20保存3个月，-70可长期保存。注意：不立即进行检测的样
18、本，最好放入-20 冻存，防止样本RNA降解。试剂试剂 主要试剂CT/NG/UU/MG-SAT试剂盒 试剂保存 A盒（提取盒）：4 冰箱冷藏 B盒（扩增检测盒）：-20冰箱冻存主要设备主要设备 提取磁珠分离器、电动吸引器 扩增检测 荧光定量PCR仪（ABI系列PCR仪、Roche 480等）、连续加样枪操作操作 操作步骤样本处理核酸提取扩增检测 操作时间 样本处理时间90min，上机和检测时间60min，共计2.5h（手工48个）结果结果 影响因素 样本来源、样本性状、操作技术（尤其重要）一般分子实验室需增加的配套设备一般分子实验室需增加的配套设备小批量样本操作磁珠分离器电动吸引器连续加样枪大
19、批量样本操作全自动核酸提取仪0.2mL金属浴（96孔）SAT生殖道检测生殖道检测产品已在多家医院使用产品已在多家医院使用新疆佳音医院新疆佳音医院毓璜顶医院毓璜顶医院北京协和北京协和北京大学第三医院北京大学第三医院舟山医院舟山医院浙江普陀医院浙江普陀医院浙江省中医院浙江省中医院杭州市第三人民医院杭州市第三人民医院慈溪市人民医院慈溪市人民医院宁波市第二人民医院宁波市第二人民医院广州市妇女儿童医院广州市妇女儿童医院同济大学附属同济大学附属杨浦医院杨浦医院上海长征医院上海长征医院南通妇幼医院南通妇幼医院南通六院南通六院无锡二院无锡二院嘉兴市第二医院嘉兴市第二医院南医大二附院南医大二附院中大第二附属医院中大第二附属医院小结小结 取样方便、自动化操作、准确性高是病原体分子诊断的发展趋势 RNA诊断技术解决了DNA诊断技术在CT/NG/UU/MG检测中的一些局限，除了拭子还可进行尿液检测，是目前所有商品化试剂中灵敏度、准确度最高的产品之一。仁度的MG-SAT是国内唯一可检测MG的核酸检测产品。仁人爱物，为和度，和而不同SAT检测为您提供最优的临床分子诊断方案THANK YOU!
