1、第三章 中药制剂的检查制剂通则检查一般杂质检查特殊杂质检查微生物限度检查1 中药制剂杂质检查杂质杂质：指能危害人体健康或影响药物质量的物质。杂质的分类杂质的分类一般杂质（如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐）特殊杂质杂质来源杂质来源n中药材原料中带入n生产制备过程中引入n贮存过程中引起的中药制剂自身理化性质的改变1 中药制剂杂质检查杂质的限量检查杂质的限量检查杂质限量杂质限量：指药物中所含杂质的最大允许量，通常用指药物中所含杂质的最大允许量，通常用%或或ppm来表示。来表示。杂质限量检查及计算方法杂质限量检查及计算方法 取一定量与被检杂质相同的纯物质或其它对照品配制成标准溶取一定
2、量与被检杂质相同的纯物质或其它对照品配制成标准溶液，与一定量供试药物的溶液，在相同处理条件下，比较反应液，与一定量供试药物的溶液，在相同处理条件下，比较反应结果，从而确定杂质限量是否超过规定。结果，从而确定杂质限量是否超过规定。%100样品量杂质最大允许量杂质限量%100%100SCVLSCVL）样品量（）标准溶液的浓度（）标准溶液的体积（）杂质限量（注射用双黄连（冻干）中砷盐限量检查注射用双黄连（冻干）中砷盐限量检查 取本品取本品0.4g，加，加2%硝酸镁乙醇溶液硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在小火炽灼使炭化，再在500600炽灼使完全灰化，放
3、冷，加炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸盐酸5ml与水与水21ml使溶解，依法检查（中国药典使溶解，依法检查（中国药典2000版附录版附录 F）。）。如果标准砷溶液（如果标准砷溶液（1gAs/ml）取用量为）取用量为2ml，杂质限量的计算如下：，杂质限量的计算如下：百万分之五%0005.0%1004.0100.12%100)()/()(6gSmlgCmlVL1 中药制剂杂质检查杂质的限量检查杂质的限量检查 不用标准溶液，直接在供试品溶液中加入试剂进行检查。肉桂油中重金属检查肉桂油中重金属检查取肉桂油取肉桂油10ml10ml，加水，加水10ml10ml与盐酸与盐酸1 1滴，振摇后，通硫化氢气使滴，振摇
4、后，通硫化氢气使饱和，水层与油层均不得变色。饱和，水层与油层均不得变色。2 一般杂质检查方法重金属检查法重金属检查法n重金属重金属：在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。n重金属检查法基本原理重金属检查法基本原理 CH3CSNH2+H2O CH3CONH2+H2S Pb2+H2SPbS+2H+pH3.5 2 一般杂质检查方法重金属检查法重金属检查法n检查方法方方 法法适用范围适用范围检检 查查 方方 法法第一法第一法适用于供试品不经有适用于供试品不经有机破坏，在酸性溶液机破坏，在酸性溶液中显色的重金属限量中显色的重金属限量检查。检查。甲管：标准铅溶液（甲管：标准铅溶液（1g/m
5、l）+醋酸盐缓冲液（醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml+水或各药品项下规定的溶剂稀释成水或各药品项下规定的溶剂稀释成25ml；乙管：供试品溶液乙管：供试品溶液25ml；甲管甲管 硫代乙酰胺试液各硫代乙酰胺试液各2ml摇匀摇匀放置放置2分钟分钟同置白纸同置白纸 上上,自上向下透视自上向下透视乙管中显出的颜色不得比甲管更深。乙管中显出的颜色不得比甲管更深。乙管乙管 第二法第二法适用于供试品需灼烧适用于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣项破坏，取炽灼残渣项下遗留的残渣，经处下遗留的残渣，经处理后在酸性溶液中显理后在酸性溶液中显色的重金属限量检查。色的重金属限量检查。取炽灼残渣项下遗留的残渣取炽灼残渣项下遗留
6、的残渣加硝酸加硝酸0.5ml0.5ml蒸干至氧化氮蒸蒸干至氧化氮蒸气除尽气除尽放冷放冷加盐酸加盐酸2ml2ml置水浴上蒸干置水浴上蒸干加水加水15ml15ml滴加滴加氨试液至对酚酞指示液显中性氨试液至对酚酞指示液显中性加醋酸盐缓冲液（加醋酸盐缓冲液（pH3.5pH3.5）2ml2ml微热溶解微热溶解移置纳氏比色管中移置纳氏比色管中加水稀释成加水稀释成25ml25ml；另取配制供试品溶液的试剂另取配制供试品溶液的试剂置瓷皿中蒸干置瓷皿中蒸干加醋酸盐缓冲加醋酸盐缓冲液（液（pH3.5pH3.5）2ml2ml水水15ml15ml微热溶解微热溶解移置纳氏比色管中移置纳氏比色管中加标准铅溶液一定量加标准
7、铅溶液一定量用水稀释成用水稀释成25ml25ml；以上两管溶液，照上述第一法检查。以上两管溶液，照上述第一法检查。2 一般杂质检查方法重金属检查法重金属检查法n检查方法方方 法法适用范围适用范围检检 查查 方方 法法第三法第三法适用于检查能溶适用于检查能溶于碱而不溶于稀于碱而不溶于稀酸（或在稀酸中酸（或在稀酸中即生成沉淀）的即生成沉淀）的药品中的重金属。药品中的重金属。甲管：标准铅溶液适量甲管：标准铅溶液适量 +氢氧化钠试液氢氧化钠试液5ml+5ml+水水 20ml+20ml+硫化钠试液硫化钠试液5 5滴，摇匀；滴，摇匀；乙管：供试品适量乙管：供试品适量 +加氢氧化钠试液加氢氧化钠试液5ml+
8、5ml+水水20ml20ml 溶解溶解置纳氏比色管中置纳氏比色管中 +加硫化钠试液加硫化钠试液5 5滴，滴，摇匀；摇匀；两管比较，乙管颜色不得比甲管深。两管比较，乙管颜色不得比甲管深。第四法第四法适用于有色溶液适用于有色溶液或重金属限量低或重金属限量低的品种。的品种。用微孔滤膜过滤，使重金属硫化物沉淀富集成色斑后用微孔滤膜过滤，使重金属硫化物沉淀富集成色斑后与一定量标准铅溶液获得的色斑进行比较检查。与一定量标准铅溶液获得的色斑进行比较检查。2 一般杂质检查方法重金属检查法重金属检查法n注意事项注意事项w方法灵敏度方法灵敏度 适用于含铅量在10g-30g之间。标准铅液的用量以20g（相当于标准铅
9、溶液2ml）为宜。w反应条件反应条件 硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳pH值是3.5，硫代乙酰胺试液加入量以2ml时呈色最深，最佳显色时间为2分钟。w有色供试液的处理有色供试液的处理 供试品在加硫代乙酰胺试液以前如带色，可用稀焦糖液或加常用的指示剂调整标准溶液，使两者颜色一致。w其他离子的干扰nFe3+-加抗坏血酸。n当使用盐酸超过1.0ml、氨试液超过2 ml，以及用硫酸或硝酸进行有机破坏，或加入其他试剂进行处理者，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。n铁盐供试品，可利用Fe3+在比重为1.103-1.105的盐酸（盐酸9ml与蒸馏水6ml的混合液）中成为HFeC162-，可用乙醚提取而
10、除去，再将酸性溶液加氨试液使呈碱性后，用氰化钾作为微量铁盐的掩蔽剂，再加硫化钠试液测定。2 一般杂质检查方法重金属检查法重金属检查法n注意事项注意事项w前处理前处理 需将药品灼烧破坏，使有机物分子中的重金属游离。灼烧时炽灼温度必须控制在500600。w其他其他n标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制n硫化钠试液应采用分析纯的硫化钠配制，贮存在棕色瓶中可保存12个月。n含有Pb2+的中性或弱酸性溶液，如需过滤，可加入对酚酞呈微碱性的饱和醋酸铵溶液，温热后用直径较小的定量滤纸滤过，或者选用玻砂漏斗过滤。n如供试品本身能生成不溶性硫化物时，影响重金属的检查，可加入适当的掩蔽剂。2 一般
11、杂质检查方法砷盐检查砷盐检查：药品中微量砷（以As计算）的限量检查n古蔡氏法古蔡氏法w基本原理 AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2O AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2 (黄色)（溴化汞试纸）AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3 (棕色)As(V)反应慢，须将As(V)还原成As(III)初生初生态的态的氢氢2 一般杂质检查方法砷盐检查砷盐检查：n古蔡氏法古蔡氏法 AsO43-+2I-+2H+AsO33-+I2+H2O AsO43-+Sn2+2H+AsO33-+Sn4+H2O I2+Sn2+2I-+Sn4+4I-+Zn2+ZnI42-Sn2+
12、Zn Sn+Zn2+促进反应向促进反应向右进行右进行形成锌锡齐，有利形成锌锡齐，有利于反应平稳的进行于反应平稳的进行2 一般杂质检查方法砷盐检查砷盐检查：n古蔡氏法古蔡氏法 古蔡氏法检查砷装置古蔡氏法检查砷装置A:100ml标准磨口锥形瓶B:中空的标准磨口塞C:导气管(外径8.0mm，内径 6.0mm)，全长约180mmD/E:具孔（孔径6.0mm）的有机玻璃旋塞HgBr2试纸试纸醋酸铅棉醋酸铅棉60mg(装管高度装管高度6-8cm)2 一般杂质检查方法砷盐检查砷盐检查：n古蔡氏法古蔡氏法 标准砷斑的制备标准砷斑的制备 A瓶：标准砷溶液(1g/ml)2ml+盐酸5ml+水21ml+KI试液5m
13、l+酸性SnCl2试液5滴，室温10min A瓶锌粒2g，接导气管C 25-40水浴45min检查法检查法2 一般杂质检查方法砷盐检查砷盐检查n古蔡氏法古蔡氏法w注意事项注意事项n方法灵敏度方法灵敏度 约为约为0.75g(以以As计计)。2ml标准砷溶液（相当标准砷溶液（相当于于2 gAs）所形成的砷斑色度适中，清晰，便于辨认。）所形成的砷斑色度适中，清晰，便于辨认。n酸度及各种试液用量酸度及各种试液用量 反应液的酸度相当于反应液的酸度相当于2mol/L的盐酸液。的盐酸液。含含KI浓度为浓度为2.5%，SnC12浓度为浓度为0.3%，加入锌粒以，加入锌粒以2g为为宜。宜。n反应温度和时间反应温
14、度和时间:2540，时间为，时间为45分钟。分钟。n锌粒锌粒选选用用2 mm左右粒径左右粒径(能通过一号筛能通过一号筛)的为宜。的为宜。n汞试纸的选择汞试纸的选择 选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸；选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸；溴化汞试纸一般宜新鲜制备。溴化汞试纸一般宜新鲜制备。n采用采用醋酸铅棉花醋酸铅棉花吸收除去吸收除去H2S。2000版药典规定称取版药典规定称取60mg醋酸铅棉花，装管高度约醋酸铅棉花，装管高度约80mm。2 一般杂质检查方法砷盐检查砷盐检查：n古蔡氏法古蔡氏法w注意事项注意事项n中药制剂的前处理中药制剂的前处理：常用酸破坏法、碱破坏法及直接炭化法等：常用酸破
15、坏法、碱破坏法及直接炭化法等使有机砷游离出来，以氢氧化钙破坏法较为常用。使有机砷游离出来，以氢氧化钙破坏法较为常用。n干扰物质：干扰物质：如硝酸、磷、锑化合物或硫化物、亚硫酸盐、硫代如硝酸、磷、锑化合物或硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐、碘、氯、汞、银、镍、钴、铜、铁、铋等的干扰。硫酸盐、碘、氯、汞、银、镍、钴、铜、铁、铋等的干扰。n其他其他A 所用仪器、试液等的影响所用仪器、试液等的影响B 同一套仪器应能辨别出标准砷溶液同一套仪器应能辨别出标准砷溶液1.5ml与与2.0ml所呈砷所呈砷斑的深浅。斑的深浅。C 标准砷溶液应于实验当天配制，标准砷贮备液存放时间一标准砷溶液应于实验当天配制，标准砷贮备
16、液存放时间一般不宜超过一年。般不宜超过一年。D 砷斑不稳定，反应应保持干燥及避光，并立即比较。砷斑不稳定，反应应保持干燥及避光，并立即比较。E 配制成的酸性氯化亚锡试液配制成的酸性氯化亚锡试液3个月后不宜使用。个月后不宜使用。2 一般杂质检查方法砷盐检查砷盐检查：n二乙基二硫代氨基甲酸银法（二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）法）w基本原理基本原理 既可做限量检查，又可做含量测定。AsH3 C2H5NSSHC2H5CSSAgAg63+AsC2H5NC2H5CSS+NCSSC2H5NC2H5C3+6红色胶态银红色胶态银2 一般杂质检查方法砷盐检查砷盐检查：n二乙基二硫代氨基甲酸银法（二乙基
17、二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）法）w检查方法检查方法Ag-DDC5ml目视检测分光光度计,=5102 一般杂质检查方法砷盐检查砷盐检查：n二乙基二硫代氨基甲酸银法（二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）法）w注意事项注意事项 吡啶(DL=0.5 gAs/30ml)n有机碱液的选择 三乙胺 (0.75-7.5 g范围内,AC)n 温度和时间：2540水浴，45min 2 一般杂质检查方法铁盐检查法铁盐检查法n硫氰酸盐法硫氰酸盐法(CP)w原理原理 Fe3+6SCN-Fe(SCN)63-w检查方法检查方法供试品标准铁溶液w方法灵敏度方法灵敏度 20-50 g Fe3+/50ml H+H2
18、0至25ml,+稀HCl4ml,+(NH4)2S2O850mg,+H20至35ml,+30%NH4SCN3ml,+H20至50ml2 一般杂质检查方法铁盐检查法铁盐检查法n巯基醋酸法（巯基醋酸法（EP）2Fe3+2HSCH2COOH 2Fe2+HOOCCH2-S-S-CH2COOH+2H+Fe2+2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2+2H+Fe(SCH2COOH)2+2OH-Fe(SCH2COO)22-+2H2O 2 一般杂质检查方法硫酸盐检查法硫酸盐检查法SO42-+Ba2+BaSO4(白色混悬液)（pH 1，25-30，+25%BaCl2)适宜的浓度范围：100-500 g S
19、O42-/50ml 氯化物检查法氯化物检查法Cl-+Ag+AgCl(白色混悬液)（5ml HNO3/50ml，30-40，置暗处反应)适宜的浓度范围：50-80 g Cl-/50ml2 一般杂质检查方法干燥失重干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失 的重量，包括水分及其他挥发性成分。检查方法检查方法n常压恒温干燥常压恒温干燥（烘干法）-受热较稳定的中药制剂恒重：连续2次干燥后的重量差异不超过0.3mgn干燥剂干燥干燥剂干燥 受热易分解或挥发的供试品w硅胶，五氧化二磷，硫酸等干燥剂n减压干燥减压干燥熔点低、受热不稳定及较难赶除水分的供试品2 一般杂质检查方法水分测定法水分测定法n烘干法烘干
20、法不含或含少量挥发性成分的供试品n甲苯法甲苯法-含挥发性成分的供试品n减压干燥减压干燥-含挥发性成分的贵重药品 干燥剂：P2O5 n气相色谱法气相色谱法-散剂、颗粒剂、丸剂、片剂等各类型中药制剂中微量水分的测定 n费休法费休法甲苯法装置甲苯法装置2 一般杂质检查方法炽灼残渣检查法炽灼残渣检查法(硫酸灰分,EP)700800 +硫酸 取样量由炽灼残渣限量决定,一般12 g 缓慢灼烧 将残渣留作重金属检查时,500600灰分测定灰分测定n总灰分总灰分 500600 灰烬灰烬 +盐酸溶解盐酸溶解 过滤过滤 滤渣滤渣 灼烧灼烧 (+10%NH(+10%NH4 4NONO3 3)n酸不溶性灰分酸不溶性灰
21、分有机物有机物炭化，分解炭化，分解非挥发性无机杂质非挥发性无机杂质硫酸盐硫酸盐3 特殊杂质检查方法特殊杂质：指在该药品的生产和贮存过程中，根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质。大黄流浸膏中土大黄苷的检查大黄流浸膏中土大黄苷的检查 取本品适量，加甲醇取本品适量，加甲醇2 ml，温浸，温浸10分钟，放冷，取上清液分钟，放冷，取上清液10l，点于滤纸上，以，点于滤纸上，以45%乙醇展开，取出，晾干，放置乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外灯（分钟，置紫外灯（365nm）下检视，不得显持久的亮紫）下检视，不得显持久的亮紫色荧光。色荧光。C HC HO HO C H3OH OgluOH
22、OOHOHO大黄素大黄素土大黄苷土大黄苷4 农药残留量的检查常用农药常用农药 n有机氯类有机氯类：艾氏剂、六六六、氯丹、DDT、狄氏剂等n有机磷类有机磷类：三硫磷、氯硫磷、蝇毒磷、内吸磷、敌敌畏、乐果等n苯氧羧酸类除草剂苯氧羧酸类除草剂：2，4-D；2，4，5-Tn氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类：西维因（甲萘威）n二硫代氨基甲酸酯类二硫代氨基甲酸酯类：福美铁、代森锰、代森钠、福美双等n无机农药：无机农药：磷化铝、砷酸钙、砷酸铅n植物性农药：植物性农药：烟叶和尼古丁；除虫菊花提取物和除虫菊酯（合成除虫菊酯）；毒鱼藤根和鱼藤根n其他：其他：溴螨酯、氯化苦、二溴乙烷、环氧乙烷、溴甲烷。4 农药残留量的检查
23、农药残留量的测定农药残留量的测定 n供试品的制备供试品的制备w残留农药的提取残留农药的提取 n提取溶剂：乙腈、丙酮n提取方法：索氏提取法和振荡提取法 w样品纯化样品纯化液-液分配+柱层析分离n检测方法检测方法色谱分离法 4 农药残留量的检查农药残留量的测定农药残留量的测定 n检测方法检测方法w薄层色谱法w气相色谱法和液相色谱法 吸附剂吸附剂展开剂展开剂显色剂显色剂有机氯农药有机氯农药 硅胶G、氧化铝、硅胶GF254 己烷、庚烷等 硝酸银显色剂、芳胺类显色剂、荧光显色剂 有机磷农药有机磷农药 硅胶G、氧化铝、硅藻土、纤维素粉、聚酰胺 丙酮、氯仿、乙腈、环己烷等 刚果红、4-（对硝基苄基）吡啶（N
24、BP）、四溴苯酚磺酞乙酯-硝酸银-柠檬酸、硝酸银-溴酚蓝以及薄层-酶抑制法 4 农药残留量的检查农药残留量的测定农药残留量的测定 n有机氯农药残留量检查有机氯农药残留量检查w色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱SE-54(或DB-1701)、电子捕获检测器，进样口温度：230，检测器温度：300，不分流进样，程序升温w对照品储备液对照品储备液 六六六（BHC）-，-，-，-BHC，滴滴涕（DDT）PP-DDE，-DDD，-DDT，OP-DDT及五氯硝基苯（PCNB）+石油醚（60-90）分别制成每1ml约含4-5g的溶液w混合对照品储备液的制备混合对照品储备液的制备
25、对照品储备液0.5ml 10mlw混合对照品溶液的制备混合对照品溶液的制备取混合对照品储备液制成每1L含0g、1g、5g、10g、50g、100g、500g浓度系列。4 农药残留量的检查农药残留量的测定农药残留量的测定 n有机氯农药残留量检查有机氯农药残留量检查w供试品溶液制备供试品溶液制备供试品研细，称取适量（相当于药材2g），置100ml具塞锥形瓶中，+水20ml浸泡过夜，+丙酮40ml，称定，超声处理30min，放冷，用丙酮补足减失的重量，+氯化钠约6g及二氯甲烷30ml，称定，超声处理15min，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥
26、形瓶中，放置4小时。精密量取35ml，于40水浴减压浓缩至近干，加少量石油醚（6090）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚（60-90）溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚（6090）至5ml。+硫酸1ml，振摇1分钟，离心（3000转/分）10分钟。精密量取上清液2ml置具刻度的浓缩瓶（见图3-5）中，连接旋转蒸发器，40下（或用氮气）将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml，即得。w测定测定4 农药残留量的检查农药残留量的测定农药残留量的测定 n有机磷农药残留量检查有机磷农药残留量检查w色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱DB-17MS(或HP-5)
27、、氮磷检测器，进样口温度：230，检测器温度：300，不分流进样，程序升温w对照品储备液对照品储备液 对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷，+用乙酸乙酯，制成每1ml约含100g的溶液w混合对照品储备液的制备混合对照品储备液的制备对照品储备液1ml 20mlw混合对照品溶液的制备混合对照品溶液的制备取混合对照品储备液制成每1ml含0.1g、0.5g、1g、2g、5g浓度系列。4 农药残留量的检查农药残留量的测定农药残留量的测定 n有机磷农药残留量检查有机磷农药残留量检查w供试品溶液制备供试品溶液制备供试品研细，称取适量（相当于
28、药材5g），+无水硫酸钠5g，+乙酸乙酯50-100ml，冰浴超声处理3min，放置，取上层液滤过，药渣加乙酸乙酯30-50ml，冰浴超声处理3min，放置，滤过，合并滤液，40减压浓缩至干，+乙酸乙酯5ml，使溶解。精密量取1ml，加到活性炭小柱（120-400目，0.25g），置多功能真空样品处理器上，用正己烷-乙酸乙酯（1:1）5ml洗脱。洗脱液置氮吹仪上浓缩至近干。+乙酸乙酯1ml，溶解。w测定测定4 农药残留量的检查农药残留量的测定农药残留量的测定 n有机磷农药残留量检查有机磷农药残留量检查1-敌敌畏 2-速灭磷3-久效磷 4-甲拌磷5-巴胺磷 6-二嗪农7-乙嘧硫磷8-甲基嘧啶硫磷
29、9-甲基对硫磷10-稻瘟净 11-水胺硫磷12-氧化喹硫磷13-稻丰散 14-甲喹硫磷15-克线磷 16-乙硫磷十六种有机磷农药的气相色谱图十六种有机磷农药的气相色谱图6 黄曲霉毒素的检查黄曲霉毒素黄曲霉毒素（aflatoxinaflatoxin）n极强的毒性和致癌性n在紫外线照射下，能发出荧光n耐热，在280时发生裂解n低浓度时易受紫外线破坏，被氧化或遇碱被破坏n在水中溶解度低，易溶于油及氯仿、丙酮、甲醇等有机溶剂测定方法测定方法微柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、荧光分析法、免疫化学分析法等6 黄曲霉毒素的检查测定方法测定方法n微柱色谱法微柱色谱法（测定黄曲霉毒素的总量）w原理及分析方
30、法原理及分析方法杂质杂质 氧化铝吸附氧化铝吸附aflatoxin 硅镁型吸附剂吸附硅镁型吸附剂吸附对照品溶液对照品溶液：每1ml含0.005g、0.01g、0.025g、0.05g、黄曲霉毒素B1氯仿溶液供试品溶液供试品溶液：氯仿提取微柱色谱微柱色谱：上样1ml，+1ml 丙酮-氯仿（10:90）展开，365nm 波长紫外光下观察荧光 本法测定的是黄曲霉毒素的总量，灵敏度为10g/kg。使用的试剂和棉花中不得含有荧光物质。无水硫酸钠、中性氧化铝、硅镁型吸附剂应为60-120目，使用前应灼烧脱水或活化。实验完毕后，应及时消毒（安替福民溶液或5%次氯酸钠溶液）中性氧化铝中性氧化铝硅镁型硅镁型吸附剂
31、吸附剂6 黄曲霉毒素的检查测定方法测定方法n薄层色谱法薄层色谱法w原理原理：黄曲霉毒素B1在365nm紫外光照射下产生蓝紫色荧光w分析方法分析方法n黄曲霉毒素标准液的制备黄曲霉毒素标准液的制备每1ml含0.04g、0.2 g、0.5 g、1g，溶剂为苯-乙腈(98:2)n样品处理样品处理n薄层层析薄层层析（两次展开）首先：无水乙醚,展开12 cm然后：氯仿-丙酮(92:8)，展开10 cm 本法最低检出量为0.0004g，灵敏度为5g/kg。如样品中杂质干扰严重，可采用双向展开。层析硅胶可加入热盐酸(1:4)处理，使得斑点集中，且黄曲霉毒素B1荧光不易消失。6 黄曲霉毒素的检查测定方法测定方法
32、n高效液相色谱法高效液相色谱法w原理原理：黄曲霉毒素经衍生后得到能产生强荧光的物质，可用 荧光检测器进行检测。n衍生的方法：柱前三氟乙酸（TFA）衍生，柱后碘衍生和柱后过溴化溴化吡啶（PBPB）衍生w分析方法分析方法n标准溶液的配制n黄曲霉毒素衍生标样的配制n样品提取、净化n衍生物的制备n色谱条件（甲醇-水的磷酸缓冲体系）本法灵敏度为0.2g/kg5 黄曲霉毒素的检查测定方法测定方法n荧光分析法荧光分析法 黄曲霉毒素B1 -香豆素钠盐 （荧光）（无荧光）w激发波长360nm，发射波长450nmn免疫化学分析法免疫化学分析法w放射免疫法放射免疫法w亲和层析法亲和层析法w酶连免疫法（酶连免疫法（ELISA）NaOHHCl
