1、1n 2一一.固定固定都都必必须须先先进进行行固固定定。如如果果固固定定不不佳佳，制制片片的的其其它它程程序序将将非非常常困困难难，可可以以说说没没有有很很好好的的固固定定就就没没有有很很好好的的H HE E染染色色，就就会会造造成成诊诊断断困困难难，甚甚至至误误诊诊，这这足足以以证证明明固固定定的的重重要要性性34方yice，即即固固态态无无水水碳碳酸）酸）冰冰冻冻真真空空脱脱水，水，石石蜡蜡渗渗入入法。法。n2.化化学学方方法：法：采采用用各各种种化化学学溶溶液液作作固固定定液，液，使使组组织织细细胞胞进进入入固固定定状状态。态。这这是是国国内内最最常常用用的的方方法。法。56n微小破碎组
2、织，在包埋操作时易于识别操微小破碎组织，在包埋操作时易于识别操n作，组织处理前可浸泡在作，组织处理前可浸泡在1%1%伊红液中伊红液中5-105-10分钟。伊红的粉红色在组织处理时可以保分钟。伊红的粉红色在组织处理时可以保留，但是在随后的切片染色中可以洗去不留，但是在随后的切片染色中可以洗去不影响正常的染色。影响正常的染色。78甲甲醛醛（浓）浓）10ml，冰冰醋醋酸酸5ml。n特特点：点：此此液液除除有有固固定定作作用用外，外，兼兼有有脱脱水水作作用，用，因因此，此，固固定定后后可可直直接接入入95乙乙醇醇脱脱水。水。n其其他他还还有有很很多多固固定定液，液，不不一一一一介介绍，绍，有有些些液液
3、体体混混合合后后使使用用比比单单独独使使用用效效果果更更佳，佳，作作用用互互补，补，真真正正达达到到固固定定的的目目的。的。9二.n),流流水水冲冲洗洗最最佳，佳，特特别别是是固固定定时时间间长长的的组组织。织。n2.水水洗洗不不彻彻底底后后果：果：福福尔尔马马林林色色素素沉沉着、着、脱脱片、片、染染色色不不鲜鲜艳、艳、免免疫疫组组化化标标记记中中抗抗原原抗抗体体结结合合力力减减弱弱等等现现象象1011酮、酮、甲甲醇、醇、异异丙丙基基醇醇等。等。n丙丙酮酮是是透透明明无无色色易易燃燃液液体，体，易易与与水、水、乙乙醇醇和和大大多多数数有有机机溶溶液液相相混混合。合。其其脱脱水水快，快，但但渗渗
4、透透差，差，脱脱水水时时间间长长易易引引起起组组织织扭扭曲曲和和变变形。形。丙丙酮酮用用于于脱脱水水可可以以去去除除组组织织中中的的脂脂肪。肪。另另外，外，坚坚硬硬的的组组织织也也可可以以置置入入甘甘油油乙乙醇醇混混合合液液中中浸浸泡泡处处理。理。12组织脱水不足的补救组织脱水不足的补救n 明明与与浸浸蜡蜡,表表现现为为含含蜡蜡组组织织块块发发软软，制制成成蜡蜡块块后后组组织织块块与与周周边边石石蜡蜡容容易易发发生生脱脱离离，此此种种蜡蜡块块往往往往难难以以切切出出组组织织薄薄片片或或即即使使强强行行切切出出也也会会出出现现组组织织挤挤压压、破破碎碎，影影响响病病理理诊诊断断。13图1组织脱水
5、不足所制蜡块,切片镜下观察,组织挤压、破碎清晰1415原理：原理：。16四四.石石蜡蜡混混合合的的试试剂，剂，将将脱脱水水剂剂置置换换出出来，来，使使石石蜡蜡均均匀匀渗渗透透进进去，去，有有的的透透明明剂剂可可使使组组织织呈呈透透明明状状态，态，故故称称得。得。n常常用用的的透透明明剂剂为为二二甲甲苯，苯，但但它它易易使使组组织织收收缩、缩、变变脆，脆，故故透透明明时时间间不不宜宜长长n二二甲甲苯苯还还能能溶溶解解脂脂肪，肪，因因此此我我们们看看到到切切片片中中的的脂脂肪肪细细胞胞胞胞浆浆是是空空泡泡状，状，是是二二甲甲苯苯脱脱脂脂所所致。致。17五五.18，有有条条件件的的话话（第第一一道道
6、石石蜡蜡可可用用48-50度度熔熔点点的的石石蜡蜡），第第二二、三三道道石石蜡蜡用用56-58度度熔熔点点的的石石蜡蜡，温温箱箱温温度度不不宜宜高高于于62度度。尽尽量量不不要要在在蜡蜡里里带带入入二二甲甲苯苯。低低熔熔点点石石蜡蜡通通常常较较柔柔软软，高高熔熔点点石石蜡蜡通通常常比比较较坚坚硬硬，耐耐受受切切片片。19六六.包埋包埋动动流流蜡蜡器器、冷冷台台以以及及储储备备底底座座和和组组织织包包埋埋盒盒的的热热槽槽。n石石蜡蜡经经过过喷喷嘴嘴自自动动流流入入大大小小合合适适的的包包埋埋底底座座。组组织织在在包包埋埋底底座座中中排排列列方方向向和和位位置置，加加盖盖塑塑料料包包埋埋盒盒，形形
7、成成一一个个带带有有组组织织的的平平行行的的蜡蜡块块。20注意：注意：21过夜标本处理实施过夜标本处理实施相相对对常常用用的的一一种种处处理理模模式式。组组织织固固定定浸浸泡泡于于10%福福尔尔马马林林或或AF液液，梯梯度度乙乙醇醇、二二甲甲苯苯或或二二甲甲苯苯的的替替代代物物，以以及及石石蜡蜡浸浸透透。使使用用自自动动组组织织处处理理机机制制定定程程序序时时应应考考虑虑影影响响处处理理程程序序的的以以下下诸诸多多因因素素：即即实实验验室室所所需需要要的的结结束束时时间间；使使用用的的液液体体是是否否需需要要加加热热；是是否否启启用用加加压压，真真空空功功能能；组组织织标标本本数数量量的的多多
8、少少及及体体积积的的大大小小等等2223组织干燥处理：组织干燥处理：，导导致致组组织织在在浸浸蜡蜡之之前前发发生生干干燥燥（干干涸涸），组组织织可可能能会会失失去去正正常常的的形形态态，以以下下纠纠正正处处理理的的方方法法有有助助于于帮帮助助组组织织得得到到可可以以满满足足诊诊断断需需要要的的切切片片。组组织织干干燥燥的的修修复复方方法法：7 70 0%乙乙醇醇7 70 0m ml l，甘甘油油3 30 0m ml l，二二硫硫水水杨杨酸酸钠钠1 1g g，组组织织在在该该溶溶液液停停留留数数小小时时或或过过夜夜。组组织织处处理理重重新新从从脱脱水水液液开开始始直直至至完完成成。组组织织切切片
9、片时时可可能能有有些些困困难难，为为防防止止组组织织脱脱片片可可使使用用涂涂胶胶载载玻玻片片。24常见问题及处理方法讨论：常见问题及处理方法讨论：n出出现现跳跳刀刀有有波波浪浪样样或或搓搓衣衣板板样样改改变变的的现现象象一一般般都都是是由由于于组组织织太太硬硬或或切切片片刀刀不不够够锋锋利利造造成成的的;也也可可能能是是由由于于切切片片机机的的零零件件松松动动造造成成的的。因因此此,切切片片前前要要把把切切片片机机的的有有关关螺螺旋旋拧拧紧紧,没没有有拧拧紧紧或或包包埋埋的的蜡蜡块块过过硬硬时时就就会会出出现现跳跳刀刀,形形成成波波浪浪样样或或搓搓衣衣板板样样改改变变的的现现象象。同同时时,调
10、调整整刀刀锋锋与与蜡蜡块块的的适适宜宜角角度度,也也可可以以防防止止跳跳刀刀的的现现象象出出现现252.切片不全部部暴暴露露于于切切面面;切切片片的的刮刮划划痕痕迹迹是是由由于于切切片片刀刀有有缺缺口口或或者者是是包包埋埋的的组组织织有有异异物物（线线结结）、钙钙化化组组织织、骨骨组组织织及及包包埋埋石石蜡蜡有有沙沙粒粒造造成成的的。因因此此,修修片片时时保保证证组组织织块块全全部部暴暴露露于于切切面面;保保证证切切片片刀刀的的锋锋利利没没刀刀口口;同同时时在在组组织织取取材材时时去去除除手手术术异异物物和和钙钙化化组组织织;骨骨组组织织要要完完全全脱脱钙钙。这这样样可可以以保保证证切切片片的
11、的完完整整和和平平整整美美观观263.组织龟裂或有异物：组织龟裂或有异物：,切切片片急急速速受受热热切切片片过过度度伸伸张张引引起起的的;由由于于展展片片用用的的水水有有异异物物而而污污染染切切片片。因因此此,摊摊片片池池的的水水要要勤勤换换,防防止止异异物物污污染染;同同时时,切切片片在在空空气气中中略略干干燥燥后后烤烤片片,烤烤箱箱温温度度为为6 65 5度度为为宜宜,烤烤片片时时间间1 15 5-3 30 0m mi in n为为宜宜。对对于于脑脑组组织织切切片片必必须须待待切切片片完完全全晾晾干干后后才才能能烤烤片片。（本本科科室室因因为为蜡蜡块块数数多多，时时间间紧紧，故故有有不不规
12、规范范的的地地方方）274.脱蜡不干净脱蜡不干净,可见片状或点状发白可见片状或点状发白脱脱蜡蜡的的好好坏坏取取决决切切片片的的温温度度和和二二甲甲苯苯的的温温度度,烤烤片片时时必必须须将将切切片片放放置置温温箱箱加加热热到到切切片片的的石石蜡蜡融融化化后后立立即即入入二二甲甲苯苯中中脱脱蜡蜡,或或者者将将二二甲甲苯苯稍稍加加热热脱脱蜡蜡,这这样样可可以以脱脱蜡蜡更更加加完完全全,更更加加彻彻底底,然然后后经经过过梯梯度度的的泡泡洗洗,把把二二甲甲苯苯洗洗干干净净才才能能染染色色,否否则则,由由于于切切片片中中石石蜡蜡或或二二甲甲苯苯的的残残留留,染染色色剂剂与与细细胞胞不不能能有有效效接接触触
13、而而不不着着色色,导导致致切切片片出出现现片片状状或或点点状状发发白白285.切片过厚切片过厚,细胞核模糊不清细胞核模糊不清;想想、组组织织块块冰冰冻冻不不够够以以及及切切片片机机准准确确度度不不高高都都会会导导致致组组织织切切片片过过厚厚,切切片片经经染染色色后后细细胞胞重重叠叠,细细胞胞核核模模糊糊不不清清,影影响响镜镜下下观观察察,容容易易造造成成误误诊诊或或漏漏诊诊,直直接接影影响响病病理理诊诊断断的的准准确确性性。因因此此,技技术术员员必必须须加加强强责责任任心心,切切片片前前选选择择锋锋利利的的切切片片刀刀,保保持持切切片片刀刀的的锋锋利利;勤勤换换组组织织脱脱水水的的溶溶液液,保保持持溶溶液液的的有有效效浓浓度度和和成成分分;切切片片机机要要勤勤保保养养,保保持持切切片片机机的的最最佳佳状状态态;争争取取切切出出厚厚薄薄均均匀匀的的切切片片。296.组织切片裂隙组织切片裂隙n“龟壳状”裂纹：n用脱脂棉球蘸取n足量的纯氨水，n覆盖在细切后n的组织面上约10s。n退刀细切，取前1-3张30n经氨水处理再行切片，n组织结构完好，n“龟壳状”裂纹明显缩小，n切片染色艳丽31对比：对比：32
