1、抗药性监测医学知识抗药性监测医学知识 抗药性是影响全球公共卫生、农业、林业、抗药性是影响全球公共卫生、农业、林业、畜牧业等领域中有害生物控制的重要问题，是畜牧业等领域中有害生物控制的重要问题，是影响媒介生物性传染病疾病预防控制的关键因影响媒介生物性传染病疾病预防控制的关键因素。抗药性的产生和发展与药剂的使用有非常素。抗药性的产生和发展与药剂的使用有非常密切的关系。开展和加强重要病媒生物抗药性密切的关系。开展和加强重要病媒生物抗药性监测，可以指导化学药剂的合理使用，提高控监测，可以指导化学药剂的合理使用，提高控制效果，延缓抗药性发展速度，减少人畜中毒制效果，延缓抗药性发展速度，减少人畜中毒事件的
2、发生，保护有益生物，维持生态平衡。事件的发生，保护有益生物，维持生态平衡。抗药性监测医学知识2主主 要要 内内 容容第一部分第一部分：抗药性概况及基本知识抗药性概况及基本知识 一、背景一、背景 二、抗药性的基本概念二、抗药性的基本概念 三、害虫对杀虫剂产生抗药性的机制三、害虫对杀虫剂产生抗药性的机制 四、影响抗性发展的因素四、影响抗性发展的因素第二部分：第二部分：抗药性监测方法抗药性监测方法第三部分：第三部分：抗性治理抗性治理 第四部分：第四部分：全国重要病媒生物抗药性监测（试行）方案全国重要病媒生物抗药性监测（试行）方案抗药性监测医学知识3第一部分第一部分 抗药性的基本知识抗药性的基本知识一
3、、背景一、背景v 抗药性监测在疾病预防控制中的重要性抗药性监测在疾病预防控制中的重要性v 抗药性概况抗药性概况v 抗药性监测的基础条件抗药性监测的基础条件 疫情控制的需要疫情控制的需要 人民生活和社会与经济的需要人民生活和社会与经济的需要抗药性监测医学知识4v 当前抗药性监测中存在的问题当前抗药性监测中存在的问题 专业技术人员缺乏专业技术人员缺乏 测定方法不统一测定方法不统一 抗药性监测结果的利用率低抗药性监测结果的利用率低抗药性监测医学知识5抗药性：抗药性：某一昆虫的一个品系中，形成了对某一剂量某一昆虫的一个品系中，形成了对某一剂量毒物的耐受能力，而这一剂量对同种正常种群的大多毒物的耐受能力
4、，而这一剂量对同种正常种群的大多数仍然是敏感的为抗药性。数仍然是敏感的为抗药性。交互抗性：交互抗性：是指一种害虫对某种药剂产生抗药性后，是指一种害虫对某种药剂产生抗药性后，对其它化学结构类似或具有相同作用机制的农药品种，对其它化学结构类似或具有相同作用机制的农药品种，虽然不曾使用过也产生抗性。虽然不曾使用过也产生抗性。二、抗药性的基本概念和特点二、抗药性的基本概念和特点 抗药性监测医学知识6负交互抗性：负交互抗性：一种昆虫对某一药剂产生抗性后，对另一一种昆虫对某一药剂产生抗性后，对另一种药剂的敏感性增强。种药剂的敏感性增强。多抗性：多抗性：一种害虫体内存在一种或多种不同的抗性基因一种害虫体内存
5、在一种或多种不同的抗性基因或抗性等位基因，能对几种不同作用机制的农药同时产或抗性等位基因，能对几种不同作用机制的农药同时产生抗性。生抗性。耐药性：耐药性：有些昆虫对某些杀虫药剂表现出先天性的抗有些昆虫对某些杀虫药剂表现出先天性的抗药能力，或昆虫的某些发育时期或某些生理状态下对药药能力，或昆虫的某些发育时期或某些生理状态下对药剂的敏感性降低，称为耐药性。剂的敏感性降低，称为耐药性。抗药性监测医学知识7抗药性的特点抗药性的特点抗药性是一个抗药性是一个种群特征种群特征：普遍普遍性：杀虫剂普遍有抗性产生杀虫剂普遍有抗性产生 广泛性：广泛性：全球现象，分布很广全球现象，分布很广 区域性：区域性：抗性发展
6、程度的高低与当地的药剂选择压力抗性发展程度的高低与当地的药剂选择压力 是正相关。抗药性的发展过程是月点是正相关。抗药性的发展过程是月点面面片。片。遗传性遗传性 卫生害虫更易卫生害虫更易产生抗药性产生抗药性 害虫对新的杀虫剂抗性的产生有害虫对新的杀虫剂抗性的产生有加快加快的趋势的趋势 抗药性监测医学知识8三、昆虫对杀虫剂产生抗药性的机制三、昆虫对杀虫剂产生抗药性的机制 杀虫剂经昆虫表皮、跗节、口器等途径进入体内杀虫剂经昆虫表皮、跗节、口器等途径进入体内直至引起死亡的过程直至引起死亡的过程:抗药性监测医学知识9昆虫对杀虫剂产生抗性的原因昆虫对杀虫剂产生抗性的原因老鼠嘴巴越来越刁老鼠嘴巴越来越刁蟑螂
7、、蚊子练就蟑螂、蚊子练就“不坏金身不坏金身”抗药性监测医学知识10v 行为机制行为机制 昆虫通过改变自身行为习性而避免或昆虫通过改变自身行为习性而避免或减少与药剂接触，使其不被杀死。减少与药剂接触，使其不被杀死。v 表皮穿透性降低表皮穿透性降低 由于表皮穿透性的降低而造成由于表皮穿透性的降低而造成的抗性倍数很低，然而如果和其他抗性机制结合，将会的抗性倍数很低，然而如果和其他抗性机制结合，将会产生极高水平的抗药性。产生极高水平的抗药性。v 代谢作用增强代谢作用增强 与害虫对有机氯、有机磷、氨基与害虫对有机氯、有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯类等重要药剂的抗性有关。甲酸酯和拟除虫菊酯类等重要药剂的抗
8、性有关。v 靶标敏感性降低靶标敏感性降低 靶标是各类杀虫剂重要的毒杀靶标是各类杀虫剂重要的毒杀作用场所。作用场所。抗药性监测医学知识11杀虫剂杀虫剂与抗药性有关的作用靶标或代谢酶与抗药性有关的作用靶标或代谢酶DDTDDTNaNa+通道，多功能氧化酶，通道，多功能氧化酶，DDT-DDT-脱氢酶脱氢酶六六六六六六氯离子通道，多功能氧化酶氯离子通道，多功能氧化酶有机磷有机磷乙酰胆碱酯酶、多功能氧化酶、酯酶、谷胱甘肽乙酰胆碱酯酶、多功能氧化酶、酯酶、谷胱甘肽-s-s-转移酶系转移酶系氨基甲酸酯氨基甲酸酯多功能氧化酶、酯酶多功能氧化酶、酯酶拟除虫菊酯拟除虫菊酯神经不敏感、多功能氧化酶、酯酶、表皮穿透性神
9、经不敏感、多功能氧化酶、酯酶、表皮穿透性烟碱、吡虫啉烟碱、吡虫啉乙酰胆碱酯酶受体乙酰胆碱酯酶受体环戊二烯类、劲锐特环戊二烯类、劲锐特-氨基丁酸（氨基丁酸（GABA)GABA)受体受体苏云金杆菌苏云金杆菌中肠受体中肠受体常见杀虫剂的作用靶标或代谢酶常见杀虫剂的作用靶标或代谢酶抗药性监测医学知识12 四、影响抗性发展的因素四、影响抗性发展的因素u 遗传因子遗传因子 抗性的发展是基因突变、基因流动及随机遗抗性的发展是基因突变、基因流动及随机遗传漂移等因素间复杂的相互作用，而引起基因频率的改变。传漂移等因素间复杂的相互作用，而引起基因频率的改变。抗性等位基因的起始频率抗性等位基因的起始频率 抗性等位基
10、因数量抗性等位基因数量 显性等位基因显性等位基因 抗性基因的外显率抗性基因的外显率 农药的使用历史农药的使用历史 抗性个体的适合度抗性个体的适合度 抗药性监测医学知识13u 生物学因子生物学因子 世代周期和繁殖力世代周期和繁殖力 单配偶、多配偶和孤雌生殖单配偶、多配偶和孤雌生殖 种群流动性种群流动性 昆虫的食性昆虫的食性 抗性个体的生存竞争力和庇护抗性个体的生存竞争力和庇护 抗药性监测医学知识14 其中主要涉及农药的使用次数和使用量。其中主要涉及农药的使用次数和使用量。农药的使用次数越多、剂量越大，其持效期越长，农药的使用次数越多、剂量越大，其持效期越长，对害虫的选择时间越长。昆虫对药剂产生抗
11、性的速度对害虫的选择时间越长。昆虫对药剂产生抗性的速度越快，反之则慢。越快，反之则慢。u 操作因子操作因子 药剂对昆虫的选择压力对害虫抗性产生有十分重要药剂对昆虫的选择压力对害虫抗性产生有十分重要的作用，它是受人类活动直接影响的。这类影响因素的作用，它是受人类活动直接影响的。这类影响因素属于人为抗性因子。属于人为抗性因子。抗药性监测医学知识15第二部分第二部分 抗药性的监测方法抗药性的监测方法 抗性监测方法有生测法、生理生化测定方法抗性监测方法有生测法、生理生化测定方法和分子生物测定方法。和分子生物测定方法。一、生测法一、生测法 该类方法测定出抗药性的表现型，不能发现早该类方法测定出抗药性的表
12、现型，不能发现早期抗性基因频率的变化。期抗性基因频率的变化。抗药性监测医学知识16 区分剂量法区分剂量法 毒力回归线测定方法毒力回归线测定方法 生测的注意事项生测的注意事项试验方法的标准化、试虫标准化、药剂标准化试验方法的标准化、试虫标准化、药剂标准化;根据药剂的作用方式选择生测方法，触杀作用：根据药剂的作用方式选择生测方法，触杀作用：a)点滴法点滴法;b)喷雾法喷雾法;c)药膜法药膜法;d)浸渍法。胃毒作用浸渍法。胃毒作用多用饲料喂食法；内吸作用多用寄主局部施药法多用饲料喂食法；内吸作用多用寄主局部施药法或寄主喂食法等。或寄主喂食法等。抗药性监测医学知识17二、生物化学监测二、生物化学监测
13、生化监测方法可以使用酶标仪监测到每个个体靶标生化监测方法可以使用酶标仪监测到每个个体靶标酶或代谢酶的变化，一般用酶或代谢酶的变化，一般用I50(药剂对酶的抑制中浓度药剂对酶的抑制中浓度)表示药剂对离体酶的抑制能力；表示药剂对离体酶的抑制能力；Ki表示酶与底物的结合表示酶与底物的结合能力的大小。乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的测定方法见附能力的大小。乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的测定方法见附录录2，谷胱甘肽，谷胱甘肽-s-转移酶的测定方法见附录转移酶的测定方法见附录3。生物化学测定的缺陷只能测定一种酶的变化，抗药生物化学测定的缺陷只能测定一种酶的变化，抗药性的产生常常是多种酶共同参与的结果。性的产生常常是多种
14、酶共同参与的结果。抗药性监测医学知识18 乙酰胆碱酯酶基因乙酰胆碱酯酶基因 钠离子通道基因钠离子通道基因 -氨基丁酸受体突变与抗性的关系氨基丁酸受体突变与抗性的关系 酯酶扩增与抗药性的关系酯酶扩增与抗药性的关系 多功能氧化酶多功能氧化酶-P450与抗药性的关系与抗药性的关系 三、分子监测方法三、分子监测方法抗药性监测医学知识19杀虫药剂对靶标生物毒力的表示方法杀虫药剂对靶标生物毒力的表示方法半数致死量半数致死量LD50:受试生物死亡一半需要的剂量值受试生物死亡一半需要的剂量值 单位：单位：mg/kg，ug/g等，有时用等，有时用ug/头头LC50:受试生物死亡一半需要的浓度值受试生物死亡一半需
15、要的浓度值 单位：单位：mg/L,g/m2等等LT50:在固定浓度下，受试生物死亡一半需要的时间在固定浓度下，受试生物死亡一半需要的时间 单位：分钟（单位：分钟（min）或小时（）或小时（hr）抗药性监测医学知识20击倒中时或中量击倒中时或中量KT50：击倒受试生物一半需要的时间，单位击倒受试生物一半需要的时间，单位:min或或hrKD50：击倒受试生物一半需要的剂量，单位击倒受试生物一半需要的剂量，单位:mg/kg，ug/g等，有时用等，有时用ug/头头奔出效应奔出效应FT50：使蜚蠊跑出一半需要的时间，单位使蜚蠊跑出一半需要的时间，单位:min或或hrFD50或或FC50：使蜚蠊跑出一半需
16、要的剂量，单位使蜚蠊跑出一半需要的剂量，单位:mg/L,g/m2等等抗药性监测医学知识21时间浓度积时间浓度积CT50：受试生物死亡一半需要的时间浓度积，即药剂浓受试生物死亡一半需要的时间浓度积，即药剂浓 度和接触时间的乘积，单位是度和接触时间的乘积，单位是ming/L半数有效量半数有效量ED50：受试生物一半产生所希望的反应，需要的剂量值。受试生物一半产生所希望的反应，需要的剂量值。单位：单位：mg/kg，ug/g，有时用，有时用ug/头头EC50：受试生物一半产生所希望的反应，需要的浓度值。受试生物一半产生所希望的反应，需要的浓度值。单位：单位：mg/L，g/m2等等抗药性监测医学知识22
17、第三部分第三部分 抗性治理抗性治理 抗药性问题中面临的最主要的难题抗药性问题中面临的最主要的难题 克服或延缓抗性的产生和发展，以及延长杀虫克服或延缓抗性的产生和发展，以及延长杀虫剂的有效使用寿命。剂的有效使用寿命。依赖于害虫的抗性遗传及种群生态学，通过选依赖于害虫的抗性遗传及种群生态学，通过选择相应的防治策略，来达到这一目的抗性治理便择相应的防治策略，来达到这一目的抗性治理便应运而生。应运而生。抗药性监测医学知识23一、抗性治理的一般概念一、抗性治理的一般概念 在抗性产生的选择过程中，目标虫种的敏感性及在抗性产生的选择过程中，目标虫种的敏感性及施加于改虫种的选择压力（即杀虫剂等），是抗性施加于
18、改虫种的选择压力（即杀虫剂等），是抗性形成的主要因素。形成的主要因素。抗性治理最基本的出发点抗性治理最基本的出发点:v 降低杀虫剂的选择压；降低杀虫剂的选择压；v 利用抗性个体在停止用药后的繁殖劣势；利用抗性个体在停止用药后的繁殖劣势；v 敏感个体的稀释作用。敏感个体的稀释作用。抗药性监测医学知识24 抗性治理的实质抗性治理的实质 根据群体遗传学的原理，综合影响目标虫种，根据群体遗传学的原理，综合影响目标虫种，抗性变化的遗传学和生物学因子，使用不同的杀抗性变化的遗传学和生物学因子，使用不同的杀虫剂选择压，以达到阻止或延缓抗性的发展，同虫剂选择压，以达到阻止或延缓抗性的发展，同时又将目标种群的为
19、害控制在经济阈值之下。也时又将目标种群的为害控制在经济阈值之下。也就是说，在控制目标种群的为害在经济阈值之下就是说，在控制目标种群的为害在经济阈值之下的前提下，保持该种群的敏感性。的前提下，保持该种群的敏感性。抗药性监测医学知识25v 尽可能将目标害虫的抗性等位基因频率控制在最低水尽可能将目标害虫的抗性等位基因频率控制在最低水平，以防止或延缓抗性发展平，以防止或延缓抗性发展 v 根据各类杀虫剂的作用机制，制定科学合理的用药防根据各类杀虫剂的作用机制，制定科学合理的用药防治方案治方案 v 根据杀虫剂的特点和为害习性施药，尽可能在低的选根据杀虫剂的特点和为害习性施药，尽可能在低的选择压力下，得到较
20、好的防治效果择压力下，得到较好的防治效果 v 害虫抗性治理与害虫综合治理相结合害虫抗性治理与害虫综合治理相结合抗性治理的基本原抗性治理的基本原则则抗药性监测医学知识26敏感性资源的意义敏感性资源的意义 杀虫剂的使用杀虫剂的使用v 减少害虫数量的同时，增加了抗性基因频率。减少害虫数量的同时，增加了抗性基因频率。v 消耗了一部分害虫的敏感性。害虫对杀虫剂的敏感消耗了一部分害虫的敏感性。害虫对杀虫剂的敏感 性，在多次重复的使用一种药剂的过程中逐步丧失。性，在多次重复的使用一种药剂的过程中逐步丧失。敏感性消失后，再想恢复基本不可能。敏感性消失后，再想恢复基本不可能。抗药性监测医学知识27v 抗性的发展
21、通常是在它开始出现后的很短时间内抗性的发展通常是在它开始出现后的很短时间内遍及整个地区遍及整个地区v 敏感性资源的再分配问题敏感性资源的再分配问题 使用敏感性资源，必须考虑两点使用敏感性资源，必须考虑两点 代别间和年度间的敏感性分配，取决于一代别间和年度间的敏感性分配，取决于一定时间内害虫为害和杀虫剂的费用以及抗性定时间内害虫为害和杀虫剂的费用以及抗性发生的代价。发生的代价。抗药性监测医学知识28二、抗性治理策略二、抗性治理策略 有害生物综合治理有害生物综合治理（IPM）的防治策略，通过以的防治策略，通过以下措施下措施降低药剂的选择压降低药剂的选择压：只有把只有把IPM和化学防治有机的相结合才
22、能真和化学防治有机的相结合才能真正控制抗性的发展。正控制抗性的发展。v 天敌的引入和培育天敌的引入和培育v 昆虫疾病的利用昆虫疾病的利用v 杀虫植物的栽培杀虫植物的栽培v 其它非化学防治其它非化学防治 抗药性监测医学知识29v 保护性治理保护性治理 即在昆虫对药剂产生抗性以前就实施抗性治理策略。即在昆虫对药剂产生抗性以前就实施抗性治理策略。v 治疗性治理治疗性治理 即监测到害虫已经对某些药剂产生抗药性或防治即监测到害虫已经对某些药剂产生抗药性或防治 效果下降时实施抗性治理。效果下降时实施抗性治理。抗药性治理分为抗药性治理分为抗药性监测医学知识30抗性治理的三个基本策略抗性治理的三个基本策略从化
23、学防治的角度从化学防治的角度【Georghiou(1983)】“复合作用”这个术语用来表示长期或短期的多种作用的化学选择压。“适度”和“饱和”主要是指防治时所用药剂的剂量而言。抗性治理抗性治理适度治理适度治理饱和治理饱和治理复合作用复合作用治理治理抗药性监测医学知识31适度治理适度治理饱和治理饱和治理复合作用治理复合作用治理限制药剂使用次数、用药时间限制药剂使用次数、用药时间及用药量，降低药剂总的选择压及用药量，降低药剂总的选择压力；应用残效期短的药剂；避免力；应用残效期短的药剂；避免使用缓释剂；定向选择成虫；在使用缓释剂；定向选择成虫；在不用药阶段，利用种群中抗性个不用药阶段，利用种群中抗性
24、个体适合度低的特点，使敏感个体体适合度低的特点，使敏感个体的繁殖快于抗性个体，以降低整的繁殖快于抗性个体，以降低整个种群的抗性基因频率。阻止或个种群的抗性基因频率。阻止或延缓抗性的发展。延缓抗性的发展。某一代或留下一部分种群不处某一代或留下一部分种群不处理；保持理；保持“庇护所庇护所”；提高防治；提高防治限阈。限阈。当抗性基因为隐当抗性基因为隐性时，使用高剂量的性时，使用高剂量的杀虫剂施于靶标害虫，杀虫剂施于靶标害虫，杀死抗性杂合子和敏杀死抗性杂合子和敏感纯合子个体，并有感纯合子个体，并有敏感个体迁入，以稀敏感个体迁入，以稀释存活的少数抗性纯释存活的少数抗性纯合子。降低抗性等位合子。降低抗性等
25、位基因频率，延缓抗性基因频率，延缓抗性发展。发展。用增效剂抑制解用增效剂抑制解毒机制。毒机制。药剂混用；药药剂混用；药剂轮用；药剂镶剂轮用；药剂镶嵌式交替防治。嵌式交替防治。这些药剂因作这些药剂因作用于不同的靶标用于不同的靶标、无交互抗性，、无交互抗性，使各种药剂在低使各种药剂在低的选择压力下，的选择压力下，取得较好的杀虫取得较好的杀虫效果，从而延缓效果，从而延缓抗性的发展。抗性的发展。换用改变靶标的新药剂；杀虫剂的剂型工艺。换用改变靶标的新药剂；杀虫剂的剂型工艺。抗药性监测医学知识32v 设计抗性治理方案的依据设计抗性治理方案的依据 通过抗性监测可以及时准确地知道抗性水平及其分通过抗性监测可
26、以及时准确地知道抗性水平及其分布，尤其是早期抗性监测，对及时实施抗性治理可争布，尤其是早期抗性监测，对及时实施抗性治理可争得时间上的主动。得时间上的主动。一般抗性恢复所用的时间比抗性产生要慢的多。一般抗性恢复所用的时间比抗性产生要慢的多。v 明确重点应治理保护的药剂类别及品种明确重点应治理保护的药剂类别及品种抗性监测在抗性治理中的作用抗性监测在抗性治理中的作用抗药性监测医学知识34v 评估抗性治理的实际效果评估抗性治理的实际效果 通过监测害虫抗性水平的变化，对整个治理方案通过监测害虫抗性水平的变化，对整个治理方案或不同阶段抗性治理效果提供评估，也为抗性治理方或不同阶段抗性治理效果提供评估，也为
27、抗性治理方案的修订补充提供依据。案的修订补充提供依据。为了达到将昆虫控制在危害的阀值以下，保护害虫对药剂为了达到将昆虫控制在危害的阀值以下，保护害虫对药剂的敏感性和延缓药剂的有效使用寿命的目的，抗性治理在综的敏感性和延缓药剂的有效使用寿命的目的，抗性治理在综合治理策略原则的指导下，强调采取非化学方法，化学农药合治理策略原则的指导下，强调采取非化学方法，化学农药使用应科学合理，尽可能降低农药对昆虫的选择压力，延缓使用应科学合理，尽可能降低农药对昆虫的选择压力，延缓抗性发展，减少环境污染及破坏生态平衡等问题抗性发展，减少环境污染及破坏生态平衡等问题。抗药性监测医学知识35第四第四部分部分 全国重要
28、病媒生物全国重要病媒生物 抗药性监测（试行）方抗药性监测（试行）方案案1.方案方案背景背景 2.监测目的监测目的2.1 掌握抗药性水平，指导防制掌握抗药性水平，指导防制 2.2 制定控制预案，提高疾控能力制定控制预案，提高疾控能力 3.监测的组织、分工和职责监测的组织、分工和职责 抗药性监测医学知识363.1 监测网络监测网络 以中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生以中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室为依托，物控制室为依托，以各省以各省(自治区，直辖市自治区，直辖市)为监测试为监测试点单位，监测点由监测试点单位设立。点单位，监测点由监测试点单位设立。3.2 分工和职责分工
29、和职责 3.2.1 中国疾病预防控制中心传染病所中国疾病预防控制中心传染病所 3.2.1 省省(自治区，直辖市自治区，直辖市)疾病预防控制部门疾病预防控制部门 抗药性监测医学知识374.监测内容和方法监测内容和方法 4.1 靶标昆虫（监测对象）靶标昆虫（监测对象）v 淡色库蚊淡色库蚊/致倦库蚊的幼虫和成虫致倦库蚊的幼虫和成虫v 家蝇成虫家蝇成虫4.2 监测点的选择监测点的选择 监测点要考虑地理分布（经纬度、生境），每省选监测点要考虑地理分布（经纬度、生境），每省选两个有代表性的监测点进行。两个有代表性的监测点进行。监测点要相对固定。监测点要相对固定。抗药性监测医学知识38监测点的选择必须考虑以
30、下几点：监测点的选择必须考虑以下几点：v 当地媒介生物性传染病的发生情况当地媒介生物性传染病的发生情况v 相关疾病媒介生物的种类和发生强度相关疾病媒介生物的种类和发生强度v 病媒生物对人的骚扰程度等选择病媒生物对人的骚扰程度等选择4.3 监测时间监测时间 在当地的发生高峰期，每在当地的发生高峰期，每两两年进行一次，不同监年进行一次，不同监测年份测定时间相对固定。测年份测定时间相对固定。抗药性监测医学知识394.4 试虫采集试虫采集 试虫的采集以居民区（城市或农村）及人活动频繁试虫的采集以居民区（城市或农村）及人活动频繁的区域（公园、绿化带、村庄周围的区域（公园、绿化带、村庄周围500米内等）为
31、主。米内等）为主。在其东、西、南、北、中在其东、西、南、北、中5个方位采集样本，按接个方位采集样本，按接近近等比例混合等比例混合后进行抗药性测定。后进行抗药性测定。抗药性监测，在采集试虫的当代或室内饲养的抗药性监测，在采集试虫的当代或室内饲养的12代代进行。进行。抗药性监测医学知识404.5 监测药剂监测药剂4.5.1 淡色库蚊淡色库蚊/致倦库蚊的监测药剂致倦库蚊的监测药剂 高效氯氰菊酯、溴氰菊酯、双硫磷、仲丁威高效氯氰菊酯、溴氰菊酯、双硫磷、仲丁威4.5.2 家蝇的监测药剂家蝇的监测药剂 溴氰菊酯、高效氯氰菊酯、敌敌畏、残杀威。溴氰菊酯、高效氯氰菊酯、敌敌畏、残杀威。其它药剂根据当地用药情况
32、进行选择监测。其它药剂根据当地用药情况进行选择监测。抗药性监测医学知识414.6 设施和器材设施和器材 养虫室养虫室吸蚊磁吸蚊磁通风橱通风橱光照培养箱光照培养箱 点滴器点滴器 诱蚊灯诱蚊灯 抗药性监测医学知识42吸虫器吸虫器 捕虫网捕虫网 防蚊帽防蚊帽 移液器移液器 电子天平电子天平 磁力搅拌器磁力搅拌器 抗药性监测医学知识434.7 监测方法监测方法 4.7.1 蚊虫幼虫浸渍法蚊虫幼虫浸渍法 以以4龄初幼虫为测试对象，以丙酮将原药稀释，将待测龄初幼虫为测试对象，以丙酮将原药稀释，将待测药剂配置药剂配置57个系列浓度，即在个系列浓度，即在250毫升的烧杯（或白瓷毫升的烧杯（或白瓷碗等）中加入碗
33、等）中加入200毫升脱氯水和毫升脱氯水和0.5毫升相应的药液，加入毫升相应的药液，加入2030头试虫，以头试虫，以200mL脱氯水为对照。脱氯水为对照。试虫在试虫在251、相对湿度为、相对湿度为7010、光照、光照 黑暗黑暗16 8的条件下，的条件下，24小时调查并记录各处理的死亡数。死小时调查并记录各处理的死亡数。死亡判断标准，用锐器触动不能动的幼虫为死亡，只是震亡判断标准，用锐器触动不能动的幼虫为死亡，只是震颤也视为死亡。试验重复颤也视为死亡。试验重复3次。对照死亡率超过次。对照死亡率超过20，试，试验视为无效。验视为无效。抗药性监测医学知识444.7.2 成蚊接触桶法成蚊接触桶法 药纸的
34、制备药纸的制备 将白油和乙醚将白油和乙醚(AR)按按 1 2 比例混合作为溶比例混合作为溶剂。剂。杀虫剂按需要量溶解其中，配成一定浓度杀虫剂按需要量溶解其中，配成一定浓度附录附录 2，吸取，吸取 2.14 毫升均匀滴于毫升均匀滴于 16 厘米厘米12.5 厘米的新华厘米的新华1号滤纸或其号滤纸或其他质量相近的滤纸上。他质量相近的滤纸上。2小时后待乙醚完全挥发即可应用。小时后待乙醚完全挥发即可应用。药纸制备后应在药纸制备后应在 6 小时内使用，如需要可以把小时内使用，如需要可以把 l020 张张药纸用大小相同的玻璃板夹紧，用橡皮膏把间缝封实，再药纸用大小相同的玻璃板夹紧，用橡皮膏把间缝封实，再装
35、入黑纸袋中，在较低温下大约可以存放一个月，但一经装入黑纸袋中，在较低温下大约可以存放一个月，但一经开启即不能储存，必须在开启即不能储存，必须在 23 天内用完，如果已经装入接天内用完，如果已经装入接触筒，就只能用一次。触筒，就只能用一次。抗药性监测医学知识45 先把恢复筒安装在放隔板的一面，先把恢复筒安装在放隔板的一面，用吸蚊器吸取用吸蚊器吸取 2025 只雌蚊（羽化后只雌蚊（羽化后 2448 小时，未吸血）吹入筒内，然小时，未吸血）吹入筒内，然后关闭隔板，在隔板另一面装上已衬贴药纸的接触筒，后关闭隔板，在隔板另一面装上已衬贴药纸的接触筒，把隔板抽开，将恢复筒内蚊虫轻吹入接触筒，迅速关上把隔板
36、抽开，将恢复筒内蚊虫轻吹入接触筒，迅速关上隔板，将筒平放，即开始计算接触时间，接触隔板，将筒平放，即开始计算接触时间，接触 60 分钟，分钟，完毕后再抽开隔板将蚊虫再吹入恢复筒，关上隔板，完毕后再抽开隔板将蚊虫再吹入恢复筒，关上隔板，将将筒直放，筒直放，用浸有用浸有 5葡萄糖水的棉花团置于尼龙网上。葡萄糖水的棉花团置于尼龙网上。室温室温 252，从接触完毕后，从接触完毕后 24 小时计算死亡率。为了小时计算死亡率。为了便于蚊虫在恢复筒内停留，可用白纸衬贴在筒内上端便于蚊虫在恢复筒内停留，可用白纸衬贴在筒内上端 l2 或或 23，空出下端，以便于观察死亡掉下的蚊虫。在，空出下端，以便于观察死亡掉
37、下的蚊虫。在 45次重复中，每剂量应至少测次重复中，每剂量应至少测 100 只蚊。只蚊。抗药性监测医学知识464.7.3 家蝇的监测方法家蝇的监测方法 用丙酮（分析纯）将原药配成用丙酮（分析纯）将原药配成 57 个系列浓度。取个系列浓度。取37日龄，体重为日龄，体重为1820mg的家蝇成虫。的家蝇成虫。把含有乙醚（分析纯）的棉球将指形管口堵塞、轻度麻把含有乙醚（分析纯）的棉球将指形管口堵塞、轻度麻醉后，选健康雌虫，每处理醉后，选健康雌虫，每处理 30 30 只置于平皿中，用点滴器只置于平皿中，用点滴器（类型）将药液按浓度由低到高的顺序，点滴于中胸背板（类型）将药液按浓度由低到高的顺序，点滴于中
38、胸背板上，放入加有少量奶粉的上，放入加有少量奶粉的500 mL500 mL洁净的烧杯中，以海绵洁净的烧杯中，以海绵或脱脂棉供水，在温度为或脱脂棉供水，在温度为252511，相对湿度，相对湿度60%60%70%70%的条件下用的条件下用 1:1 1:1 白糖和奶粉混合物饲养白糖和奶粉混合物饲养 24 h24 h。记录各处。记录各处理的死亡虫数。对照以丙酮处理，死亡率超过理的死亡虫数。对照以丙酮处理，死亡率超过 2020时需时需要重新进行。试验重复要重新进行。试验重复 3 3 次。死亡判断标准：凡腹部上翻，次。死亡判断标准：凡腹部上翻，六足抽搐，用探针触之不能翻身爬行者判为死亡。六足抽搐，用探针触
39、之不能翻身爬行者判为死亡。抗药性监测医学知识47附录附录2 成蚊测定用药纸的计算成蚊测定用药纸的计算 WHO 对纸上的剂量标准系以对纸上的剂量标准系以杀虫剂在白油中的浓度杀虫剂在白油中的浓度计算。计算。如混合液的如混合液的 l%实际为实际为 0.33%。按照这种方法，。按照这种方法，每平方米滤纸滴混合液应为每平方米滤纸滴混合液应为 107.1 毫升，乙醚全部挥发毫升，乙醚全部挥发后仅残留白油后仅残留白油 35.7 毫升，如含药量毫升，如含药量 1，即为，即为 0.357 克。克。滤纸的面积定为滤纸的面积定为1612.5=200 平方厘米，为平方厘米，为1平方米平方米1/50。WHO多年来皆以杀
40、虫剂在溶剂中的百分率为剂量标多年来皆以杀虫剂在溶剂中的百分率为剂量标准，如溴氰菊酯的标准剂量为准，如溴氰菊酯的标准剂量为 0.025，实际每平方米药，实际每平方米药量量0.0089 克。克。WHO专家委员会认为百分率与墙面药量无专家委员会认为百分率与墙面药量无直接联系，建议今后使用直接联系，建议今后使用“克平方米克平方米 的计量单位。的计量单位。抗药性监测医学知识484.8 统计与计算统计与计算 用用POLO软件或软件或DPS软件进行数据统计，记录处理虫软件进行数据统计，记录处理虫数、自由度。通过分析获得致死中浓度（数、自由度。通过分析获得致死中浓度（LC50）或致死）或致死剂量（剂量（LD50）值及其）值及其95置信限，置信限，LC90(或或LD90）及其）及其95置信限，毒力回归线的斜率置信限，毒力回归线的斜率b值及其标准差，卡方值。值及其标准差，卡方值。方法：用统计学生物测定中的机率分析。方法：用统计学生物测定中的机率分析。机率分析的经验模型及其参数拟合方法由机率分析的经验模型及其参数拟合方法由Finney(1947)提出，且长期以来是杀虫剂毒力测定的通用方法。提出，且长期以来是杀虫剂毒力测定的通用方法。抗药性监测医学知识49谢谢！抗药性监测医学知识50
