1、实验二 细胞化学 细胞工程 目的要求目的要求1 掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及实验技巧2 了解几种化学成分的显示方法及原理3 观察各种化学成分在细胞中的分布4 了解PCC原理5了解细胞融合及其应用内容(一)录像:克隆羊(二)光镜下细胞器形态学观察细胞化学染色的目的还原细胞中真实的一幕还原细胞中真实的一幕细胞化学技术保持组织细胞原有结构状态的基础上,利用染色剂与细胞的某种成分发生反应而使其着色,并对该成分及其变化规律进行定性、定位或半定量研究的科学。l制片l固定l染色1 糖原 (动物肝切片,反应)2酸性蛋白(蟾蜍血涂片,酸性固绿染色)酸性磷酸酶(鼠腹腔液涂片,金属沉淀法显色)-甘油磷酸钠 甘油+
2、PO43-PO43-+Pb(NO3)2 Pb3(PO4)2 Pb3(PO4)2+(NH4)2S PbS (棕黑)(小鼠睾丸切片,Fenlgen反应显色)示教人口腔粘膜上皮细胞涂片,示教人口腔粘膜上皮细胞涂片,丫啶橙染色,荧光显微镜观察)丫啶橙染色,荧光显微镜观察)细胞融合(鸡血细胞)细胞融合(鸡血细胞)()(二)操作 制作蟾蜍血涂片(显示、)原理:甲基绿-派洛咛是两种碱性染料,与带负电荷的磷酸根形成盐键。甲基绿分子有两个正电荷,易与双链DNA分子结合,使DNA显示绿色,派洛咛分子有一个正电荷,易与单链RNA结合使RNA显示红色。步骤蟾蜍取血血涂片酒精固定分钟滴甲基绿派洛咛分钟冲洗观察 结果(三)实验报告 甲基绿派洛咛染色原理、步骤、结果