1、小专题五小专题五微生物的生长与发酵工程简介微生物的生长与发酵工程简介考点整合一：微生物的生长考点整合一：微生物的生长1 1生长曲线的形成条件生长曲线的形成条件(1)(1)菌种：数量上是少量，但不能是一个，若加大接种量能菌种：数量上是少量，但不能是一个，若加大接种量能缩短调整期；种类上是一种，可避免不同种细菌之间的竞争。缩短调整期；种类上是一种，可避免不同种细菌之间的竞争。(2)(2)培养基：恒定容积的液体培养基。恒定容积提供一定的培养基：恒定容积的液体培养基。恒定容积提供一定的生存环境，但营养和空间是有限的；液体培养基便于测定群生存环境，但营养和空间是有限的；液体培养基便于测定群体生长，如通过
2、样品推测细菌总数。体生长，如通过样品推测细菌总数。(3)(3)培养条件：适宜条件。培养条件：适宜条件。(4)(4)菌体数量的测定方法：定期取样。测细菌的细胞数目：菌体数量的测定方法：定期取样。测细菌的细胞数目：将等量的待测样品与已知含量的红细胞混匀，固定染色，求将等量的待测样品与已知含量的红细胞混匀，固定染色，求出细菌与红细胞的比例，计算出单位体积内的细菌数目；出细菌与红细胞的比例，计算出单位体积内的细菌数目；分离出单位体积培养液中的细菌，称重，计算出其中的细胞分离出单位体积培养液中的细菌，称重，计算出其中的细胞总重量。总重量。2 2解读生长曲线解读生长曲线(1)(1)生长曲线如图：生长曲线如
3、图：(2)(2)生长曲线四个时期主要内容的比较：生长曲线四个时期主要内容的比较：时期时期项目项目调整期调整期对数期对数期稳定期稳定期衰亡期衰亡期生长生长量量一般不分一般不分裂裂繁殖率繁殖率死亡率死亡率繁殖率繁殖率死亡率死亡率繁殖率繁殖率死亡率死亡率活菌活菌体数体数量量基本不变基本不变呈呈2n增长增长活菌数量最多，活菌数量最多，接近接近K值值活菌数量活菌数量急降急降成因成因对新环境对新环境的适应的适应条件适宜条件适宜生存条件恶生存条件恶(营营养大量消化耗、养大量消化耗、有害代谢产物有害代谢产物积累、积累、pH改变改变)生存条件生存条件急剧恶化急剧恶化菌体及代菌体及代谢特点谢特点代谢活跃、体积代谢
4、活跃、体积增长较快，大量增长较快，大量合成细胞分裂所合成细胞分裂所需的酶类、需的酶类、ATP以及其他细胞成以及其他细胞成分分个体形个体形态和生态和生理特性理特性稳定稳定出现芽孢，出现芽孢，大量积累代大量积累代谢产物，特谢产物，特别是次级代别是次级代谢产物谢产物细胞出细胞出现多种现多种形态，形态，有些细有些细胞开始胞开始解体，解体，释放代释放代谢产物谢产物应用与其应用与其他他调整期的长短与调整期的长短与菌种、培养条件菌种、培养条件等有关等有关生产用生产用菌种、菌种、科研材科研材料料连续培养法，连续培养法，延长稳定期延长稳定期3.3.研究微生物生长曲线的实践意义研究微生物生长曲线的实践意义(1)(
5、1)在工业发酵和科研中通常采取一定的措施缩短调整期：在工业发酵和科研中通常采取一定的措施缩短调整期：通过遗传学方法改变微生物的遗传特性使之缩短；通过遗传学方法改变微生物的遗传特性使之缩短；利用对数期的细胞作为利用对数期的细胞作为“种子种子”；尽量使接种前后所使用的培养基组成不要相差太大；尽量使接种前后所使用的培养基组成不要相差太大；以适当扩大接种量等方式缩短调整期。以适当扩大接种量等方式缩短调整期。(2)(2)发酵中延长稳定期、提高代谢产物产量的方法发酵中延长稳定期、提高代谢产物产量的方法连续连续培养：培养：基本原则：微生物培养过程中不断地补充营养物质和以同基本原则：微生物培养过程中不断地补充
6、营养物质和以同样的速率移出培养物。样的速率移出培养物。优点：缩短发酵周期，提高设备利用率；便于自动控制；优点：缩短发酵周期，提高设备利用率；便于自动控制；产品质量较稳定。产品质量较稳定。缺点：杂菌污染和菌种退化。缺点：杂菌污染和菌种退化。4 4影响微生物生长的环境因素影响微生物生长的环境因素因素因素 影响的原因影响的原因最适条件最适条件不适宜因素的结果不适宜因素的结果温度温度影响蛋白影响蛋白质和核酸质和核酸的结构的结构多数多数温度低时生长速率减温度低时生长速率减慢，温度过高时蛋白质慢，温度过高时蛋白质和核酸的结构发生不和核酸的结构发生不可逆的破坏可逆的破坏影响酶的影响酶的活性和膜活性和膜的稳定
7、性的稳定性细菌细菌真菌真菌放线菌放线菌酶或膜的稳定性被破酶或膜的稳定性被破坏，新陈代谢受阻坏，新陈代谢受阻氧气氧气影响微生影响微生物的细胞物的细胞呼吸或生呼吸或生命活性命活性好氧型微生物：好氧型微生物：需氧需氧厌氧型微生物：厌氧型微生物：不需氧不需氧兼性厌氧型：有兼性厌氧型：有氧、无氧均可氧、无氧均可严格厌氧型：短时间严格厌氧型：短时间的有氧也会造成生长的有氧也会造成生长停滞或死亡厌氧型微停滞或死亡厌氧型微生物：有氧时发酵受生物：有氧时发酵受抑制好氧型微生物：抑制好氧型微生物：只能生活在有氧条件只能生活在有氧条件下下特别提醒：特别提醒：1微生物生长速率曲线微生物生长速率曲线2细菌的生长曲线与种
8、群的增长曲线比较细菌的生长曲线与种群的增长曲线比较(1)细菌的生长曲线与种群的增长曲线均以时间为横坐标，但细菌的生长曲线与种群的增长曲线均以时间为横坐标，但生长曲线纵坐标是细菌数目的对数，增长曲线纵坐标是种群生长曲线纵坐标是细菌数目的对数，增长曲线纵坐标是种群数量。生长曲线可分为四个时期。数量。生长曲线可分为四个时期。(2)(2)生长曲线的生长曲线的“调整期调整期对数期对数期”与种群数量变化的与种群数量变化的“J”“J”型曲线相似：型曲线相似：“调整期调整期对数期对数期稳定期稳定期”与种群数量变化与种群数量变化的的“S”“S”型曲线相似。型曲线相似。(3)(3)生长曲线中，种内斗争最激烈的阶段
9、是隐定期；与无机生长曲线中，种内斗争最激烈的阶段是隐定期；与无机环境斗争最激烈的阶段是衰亡期；调整期和对数期种内斗争环境斗争最激烈的阶段是衰亡期；调整期和对数期种内斗争很小；产生初级代谢产物的最佳时期是调整期；产生次级代很小；产生初级代谢产物的最佳时期是调整期；产生次级代谢产物的最佳时期是稳定期。谢产物的最佳时期是稳定期。【典例【典例1 1】用某种培养基培养谷氨酸棒状杆菌，测得其生】用某种培养基培养谷氨酸棒状杆菌，测得其生长曲线如图甲所示。谷氨酸是谷氨酸棒状杆菌的代谢产物之长曲线如图甲所示。谷氨酸是谷氨酸棒状杆菌的代谢产物之一，其合成途径如图乙所示。下列有关叙述，不正确的是一，其合成途径如图乙
10、所示。下列有关叙述，不正确的是()A A该培养基是恒定容积的液体培养基，含有五大类营养要该培养基是恒定容积的液体培养基，含有五大类营养要素物质素物质B B谷氨酸脱氢酶是组成酶，谷氨酸在图甲中的各个时期都谷氨酸脱氢酶是组成酶，谷氨酸在图甲中的各个时期都有合成有合成C C在图甲中的时期，谷氨酸棒状杆菌代谢旺盛，种内斗在图甲中的时期，谷氨酸棒状杆菌代谢旺盛，种内斗争最激烈争最激烈D D在图乙中，谷氨酸脱氢酶被抑制的直接原因是其结构发在图乙中，谷氨酸脱氢酶被抑制的直接原因是其结构发生改变生改变 解析解析 从生长曲线看，是微生物群体在恒定容积的条件从生长曲线看，是微生物群体在恒定容积的条件下的生长情况；
11、组成酶在各个时期都可以产生，诱导酶是在下的生长情况；组成酶在各个时期都可以产生，诱导酶是在一定外界条件下产生的；在稳定期种内斗争最激烈；谷氨酸一定外界条件下产生的；在稳定期种内斗争最激烈；谷氨酸脱氢酶被抑制的直接原因是其结构发生改变，催化效率降低。脱氢酶被抑制的直接原因是其结构发生改变，催化效率降低。答案答案 C C【互动探究【互动探究1 1】(2009(2009上海卷上海卷)在光照下，将等细胞数量在光照下，将等细胞数量的衣藻和大肠杆菌分别接种到只含无机盐的培养液中培养，的衣藻和大肠杆菌分别接种到只含无机盐的培养液中培养，结果是结果是(虚线和实线分别表示大肠杆菌和衣藻的生长曲线虚线和实线分别表
12、示大肠杆菌和衣藻的生长曲线)()()解析解析 本题考查自养型生物和异养型生物的生长曲线。本题考查自养型生物和异养型生物的生长曲线。在没有有机物供应的情况下，明确大肠杆菌的生长状况是解在没有有机物供应的情况下，明确大肠杆菌的生长状况是解答本题的突破口。大肠杆菌是异养型生物，不能利用无机物答本题的突破口。大肠杆菌是异养型生物，不能利用无机物制造有机物，只能摄取现成的有机物进行生长繁殖，因此在制造有机物，只能摄取现成的有机物进行生长繁殖，因此在只含无机盐的培养基上几乎不能生长繁殖，而四个图中只有只含无机盐的培养基上几乎不能生长繁殖，而四个图中只有C C符合该结论。衣藻是含有叶绿体的低等植物，能进行光
13、合符合该结论。衣藻是含有叶绿体的低等植物，能进行光合作用合成有机物，因此能生长繁殖，其生长曲线应近似于作用合成有机物，因此能生长繁殖，其生长曲线应近似于“S”“S”型曲线。型曲线。答案答案 C C考点整合二：发酵工程考点整合二：发酵工程一、发酵工程生产产品的流程简图一、发酵工程生产产品的流程简图归纳总结：归纳总结：1 1菌种选育的常用方法比较菌种选育的常用方法比较育种类育种类型型原理原理方法方法优点优点(缺点缺点)诱变育诱变育种种基因突变基因突变物理、化学、生物物理、化学、生物因素诱变因素诱变能大幅度改变某些性状、能大幅度改变某些性状、操作简便，但具有很大操作简便，但具有很大的盲目性的盲目性基
14、因工基因工程程DNA重组重组将目的基因导入受将目的基因导入受体细胞，构建工程体细胞，构建工程细胞或工程细菌细胞或工程细菌能定向改变微生物的遗能定向改变微生物的遗传性状，但操作过程复传性状，但操作过程复杂，要求高杂，要求高细胞工细胞工程程原生质体融合原生质体融合等等体细胞杂交等体细胞杂交等能克服远源杂交不亲和能克服远源杂交不亲和的障碍，定向改变遗传的障碍，定向改变遗传性状性状2.2.发酵工程与其他生物工程的比较发酵工程与其他生物工程的比较生物工程主要技术主要操作对象目的或应用联系基因工程DNA重组技术基因及动植物细胞、微生物细胞为了获得工程菌、转基因动物、转基因植物各种生物工程之间是相互联系的，
15、基因工程和细胞工程可以为发酵工程提供菌种，发酵工程可以使某些基因工程、细胞工程的产物实现规模化生产细胞工程细胞培养；细胞融合；胚胎移植；单克隆抗体制备；核移植动植物细胞、微生物细胞为了获得人工种子、试管动物、单克隆抗体、克隆动植物发酵工程菌种选育；大规模培育细胞微生物为了获得生产药品、传统发酵产品、食品添加剂、单细胞蛋白二、发酵的影响因素及控制二、发酵的影响因素及控制1温度温度(1)造成的影响：造成的影响：温度影响酶活性，进而影响代谢速率；温度影响酶活性，进而影响代谢速率；影响生物合成的途径，如金色链霉菌在影响生物合成的途径，如金色链霉菌在30C以下时合成金以下时合成金霉素能力较强，在霉素能力
16、较强，在35C以上时则只合成四环素；以上时则只合成四环素；影响发影响发酵液的物理性质以及菌种对营养物质的分解和吸收。酵液的物理性质以及菌种对营养物质的分解和吸收。(2)(2)采取的措施：要根据生产实际合理控制温度，如最适采取的措施：要根据生产实际合理控制温度，如最适生长温度不一定是该菌体内生成代谢产物的最适温度。发生长温度不一定是该菌体内生成代谢产物的最适温度。发酵罐中热量来源于有机物的氧化分解、机械摩擦等，需要通酵罐中热量来源于有机物的氧化分解、机械摩擦等，需要通过发酵罐壁、水分蒸发、冷却水等将热量散发出去，最终使过发酵罐壁、水分蒸发、冷却水等将热量散发出去，最终使发酵罐中的温度保持动态平衡
17、。发酵罐中的温度保持动态平衡。2pH(1)造成的影响：造成的影响：pH的改变可以影响酶活性，造成细胞膜的改变可以影响酶活性，造成细胞膜通透性改变，影响营养物质的吸收和代谢产物的排出；通透性改变，影响营养物质的吸收和代谢产物的排出；影影响产物种类，如谷氨酸棒状杆菌在响产物种类，如谷氨酸棒状杆菌在pH为酸性时生成乙酰谷为酸性时生成乙酰谷氨酰胺而不是谷氨酸。氨酰胺而不是谷氨酸。(2)采取的措施：在微生物的代谢过程中，产生的二氧化碳、采取的措施：在微生物的代谢过程中，产生的二氧化碳、有机酸等会引起培养基中有机酸等会引起培养基中pH的降低，某些无机盐的选择性的降低，某些无机盐的选择性吸收可能会引起吸收可
18、能会引起pH的上升，的上升，pH的改变不利于生产，因此要的改变不利于生产，因此要及时调整。过酸时加及时调整。过酸时加Na2CO3等中和，过碱时加稀盐酸等中等中和，过碱时加稀盐酸等中和。和。3溶解氧溶解氧(1)造成的影响：造成的影响：不同代谢类型的微生物对溶氧的要求不同，不同代谢类型的微生物对溶氧的要求不同，氧可以促进需氧型微生物的代谢，抑制厌氧型微生物的代谢；氧可以促进需氧型微生物的代谢，抑制厌氧型微生物的代谢；溶氧还可以影响产物的合成，如当氧气不足时，谷氨酸棒溶氧还可以影响产物的合成，如当氧气不足时，谷氨酸棒状杆菌生成的是乳酸或琥珀酸，而不是谷氨酸。状杆菌生成的是乳酸或琥珀酸，而不是谷氨酸。
19、(2)(2)采取的措施：对需氧型生物进行发酵，发酵过程中要不采取的措施：对需氧型生物进行发酵，发酵过程中要不断地通入无菌空气，并进行搅拌断地通入无菌空气，并进行搅拌(要合理控制转速要合理控制转速)；对厌氧；对厌氧型生物进行发酵，要隔绝空气。型生物进行发酵，要隔绝空气。4营养物质的浓度营养物质的浓度C/N、无机盐、维生素等均能影响微生物的生长和代谢产物、无机盐、维生素等均能影响微生物的生长和代谢产物的积累。如当的积累。如当C/N3时，谷氨酸棒状杆菌大量合成谷氨酸；时，谷氨酸棒状杆菌大量合成谷氨酸；当当C/N4时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生的谷氨酸很少。时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生的谷氨酸很
20、少。【典例【典例2 2】如图所示为发酵工程生产产品的流程图，据图】如图所示为发酵工程生产产品的流程图，据图回答：回答：(1)能生产人生长激素的工程菌是通过能生产人生长激素的工程菌是通过_培育的；培育的；高产青霉素菌种是通过高产青霉素菌种是通过培育的，培育的，是是_，是是_。(2)整个过程的中心阶段是发酵，要随时取样检测培养基中的整个过程的中心阶段是发酵，要随时取样检测培养基中的细菌数目、产物浓度等。同时，要严格控制细菌数目、产物浓度等。同时，要严格控制_和转速等发酵条件。和转速等发酵条件。(3)若若是单细胞蛋白的话，是单细胞蛋白的话，是是_，氨基酸、，氨基酸、维生素属维生素属中的中的_产物。产
21、物。基因工程基因工程诱变育种诱变育种细胞工程细胞工程溶解氧、温度、溶解氧、温度、pH微生物菌体微生物菌体初级代谢初级代谢 解析解析 一般情况下，从自然界中分离得到的野生菌种不一般情况下，从自然界中分离得到的野生菌种不能满足人们的需求，因此需进行改造，常用的措施有基因工能满足人们的需求，因此需进行改造，常用的措施有基因工程、诱变育种、细胞工程。影响发酵的主要条件有溶解氧、程、诱变育种、细胞工程。影响发酵的主要条件有溶解氧、温度、温度、pHpH等。发酵工程的产品有两类，一是菌体本身，二是等。发酵工程的产品有两类，一是菌体本身，二是代谢产物。代谢产物。【互动探究【互动探究2 2】(2009(2009
22、全国全国理综理综)下列关于通过发酵工下列关于通过发酵工程生产谷氨酸的叙述，错误的是程生产谷氨酸的叙述，错误的是()A A发酵时需不断通入无菌空气，否则会积累乳酸发酵时需不断通入无菌空气，否则会积累乳酸B B发酵时常采用的培养基为液体天然培养基发酵时常采用的培养基为液体天然培养基C C从自然界分离的野生型菌株可直接用于生产从自然界分离的野生型菌株可直接用于生产D D当菌体生长进入稳定期时，补充营养物可提高谷氨酸产当菌体生长进入稳定期时，补充营养物可提高谷氨酸产量量 解析解析 本题以谷氨酸发酵过程为切入点，主要考查与发本题以谷氨酸发酵过程为切入点，主要考查与发酵工程相关的知识，熟知发酵工程的基本步
23、骤及每步中需要酵工程相关的知识，熟知发酵工程的基本步骤及每步中需要注意的事项，是解题的关键。发酵工程生产谷氨酸，溶液不注意的事项，是解题的关键。发酵工程生产谷氨酸，溶液不足时，会产生乳酸或琥珀酸；培养基中含豆饼的水解液、玉足时，会产生乳酸或琥珀酸；培养基中含豆饼的水解液、玉米浆等成分复杂的物质，工业生产常用液体培养基，因此该米浆等成分复杂的物质，工业生产常用液体培养基，因此该培养基属于液体天然培养基；从自然界分离的野生型菌株，培养基属于液体天然培养基；从自然界分离的野生型菌株，产量一般都比较低，不能满足工业生产的需要，通常要用人产量一般都比较低，不能满足工业生产的需要，通常要用人工诱变的方法处
24、理，使菌种产生突变，再从中筛选出符合要工诱变的方法处理，使菌种产生突变，再从中筛选出符合要求的优良菌种，才能用于生产；求的优良菌种，才能用于生产；当菌体生长进入稳定期时，要及时补充营养物质，以满足菌当菌体生长进入稳定期时，要及时补充营养物质，以满足菌体的营养需求，提高谷氨酸的产量。体的营养需求，提高谷氨酸的产量。答案答案 C C(2010全国全国)下列是与微生物培养有关的问题，请回答：下列是与微生物培养有关的问题，请回答：(1)某细菌固体培养基的组成成分是某细菌固体培养基的组成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，
25、其中凝固剂是_，碳源是，碳源是_，氮源是，氮源是_。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于养基属于_培养基。按照化学成分分类，该培养基属培养基。按照化学成分分类，该培养基属于于_培养基。从同化作用类型看，用该培养基培养的培养基。从同化作用类型看，用该培养基培养的细菌属于细菌属于_。琼脂琼脂葡萄糖葡萄糖尿素尿素选择选择合成合成异养型异养型(2)将少量细菌接种到一定体积的液体培养基中，适宜条件将少量细菌接种到一定体积的液体培养基中，适宜条件下培养，定时取样测定菌体数目，以时间为横坐标，以菌体下培养，定时取样测定菌体数目，以时
26、间为横坐标，以菌体数目的对数为纵坐标，可以得到细菌的数目的对数为纵坐标，可以得到细菌的_曲线。该曲曲线。该曲线中以菌体数目的对数作为纵坐标的原因是线中以菌体数目的对数作为纵坐标的原因是_。实验室中，为了获得形态和。实验室中，为了获得形态和生理特征一致的菌体，一般应在生理特征一致的菌体，一般应在_期取材；在生产中，期取材；在生产中，常收集培养至常收集培养至_期的细菌用于次生代谢产物的提取。期的细菌用于次生代谢产物的提取。生长生长培养中的细菌以指数形式增殖，取对数便于反映细菌群体培养中的细菌以指数形式增殖，取对数便于反映细菌群体的生长规律的生长规律(其他合理答案也可其他合理答案也可)对数对数稳定稳
27、定解析：解析：(1)(1)在细菌固体培养基组成成分中，凝固剂是琼脂，在细菌固体培养基组成成分中，凝固剂是琼脂，碳源是葡萄糖，氮源是尿素；由于只有能合成脲酶的细菌才碳源是葡萄糖，氮源是尿素；由于只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，从培养基用途上看，该培养基应属于能在该培养基上生长，从培养基用途上看，该培养基应属于选择培养基；按照培养基的化学成分划分，该培养基应属于选择培养基；按照培养基的化学成分划分，该培养基应属于合成培养基；由于该细菌利用有机物合成培养基；由于该细菌利用有机物(葡萄糖葡萄糖)作碳源，故从作碳源，故从同化作用类型看，该细菌属于异养型。同化作用类型看，该细菌属于异养型。(2)
28、(2)细菌的生长曲线，细菌的生长曲线，反映了细菌群体从开始生长到死亡的动态变化过程，可以分反映了细菌群体从开始生长到死亡的动态变化过程，可以分为四个主要时期。为四个主要时期。其中对数期个体形态和生理特征比较稳定，常作为生产菌种；其中对数期个体形态和生理特征比较稳定，常作为生产菌种；稳定期菌体内大量积累代谢产物，特别是次级代谢产物稳定期菌体内大量积累代谢产物，特别是次级代谢产物(产产品品)，常作为产品收集，常作为产品收集提取阶段提取阶段。在绘制细菌生长曲线时在绘制细菌生长曲线时，采用菌体数目的对数而未采用菌采用菌体数目的对数而未采用菌体实际数作为纵坐标的原因体实际数作为纵坐标的原因，是因为前者更
29、方便于用数学是因为前者更方便于用数学方式绘制生长曲线方式绘制生长曲线，反映细菌群体的生长规律反映细菌群体的生长规律。随着年岁的叠加，我们会渐渐发现：越是有智慧的人，越是谦虚，因为昂头的只是稗子，低头的才是稻子；越是富有的人，越是高贵，因为真正的富裕是灵魂上的高贵以及精神世界的富足；越是优秀的人，越是努力，因为优秀从来不是与生俱来，从来不是一蹴而就。随着沧桑的累积，我们也会慢慢懂得：成功的路，其实并不拥挤，因为能够坚持到底的人实在太少；所有优秀的人，其实就是活得很努力的人，所谓的胜利，其实最后就是自身价值观的胜利。人到中年，突然间醒悟许多，总算明白：人生，只有将世间的路一一走遍，才能到尽头；生活
30、，只有将尘世况味种种尝遍，才能熬出头。这世间，从来没有最好，只有更好。每天，总想要努力醒得比太阳还早，因为总觉得世间万物，太阳是最能赐人力量和能量的。每当面对喷薄的日出，心中的太阳随之冉冉腾起，生命之火熊熊燃烧，生活的热情就会光芒四射。我真的难以想象，那些从来不早起的人，一生到底能够看到几回日升？那些从来没有良好习惯的人，活到最后到底该是多么的遗憾与愧疚？曾国藩说：早晨不起，误一天的事；幼时不学，误一生的事。尼采也说：每一个不曾起舞的日子，都是对生命的辜负。光阴易逝，岂容我待？越是努力的人，越是没有时间抱怨，越是没有工夫颓丧。每当走在黎明的曙光里，看到那些兢兢业业清洁城市的“美容师”，我就会由
31、衷地欣赏并在心底赞叹他们，因为他们活得很努力很认真。每当看见那些奔跑在朝霞绚烂里的晨练者，我就会从心里为他们竖起大拇指，因为他们给自己力量的同时，也赠予他人能量。我总觉得：你可以不优秀，但你必须有认真的态度；你可以不成功，但你必须努力。这个世界上，从来没有谁比谁更优秀，只有谁比谁更努力。我也始终认为：一个活得很努力的人，自带光芒万丈；一个人认真的样子，比任何时候都要美好；一个能够自律自控的人，他的人生也就成功了大半。世间每一种的好，从来都只为懂得努力的人盛装而来。有时候，我真的感觉，人生的另一个名字应该叫做努力，努力了就会无悔，努力了就会无愧；生活的另一种说法应该叫做煎熬，熬过了漫漫黑夜，天就
32、亮了，熬过了萧萧冬日，春天就来了。人生不易，越努力越幸运；余生不长，越珍惜越精彩。人生，是一本太仓促的书，越认真越深刻；生命，是一条无名的河，越往前越深邃。愿你不要为已逝的年华叹息，不要为前路的茫茫而裹足不前愿你相信所有的坚持总能奏响黎明的号角，所有的努力总能孕育硕果的盛驾光临。愿你坚信越是成功的人越是不允许自己颓废散漫，越是优秀的人越是努力生活中很多时候，我们遇到一些复杂的情况，会很容易被眼前的障碍所蒙蔽，找不到解决问题的方法。这时候，如果能从当前的环境脱离出来，从一个新角度去解决问题，也许就会柳暗花明。一个土豪，每次出门都担心家中被盗，想买只狼狗栓门前护院，但又不想雇人喂狗浪费银两。苦思良
33、久后终得一法：每次出门前把WiFi修改成无密码，然后放心出门每次回来都能看到十几个人捧着手机蹲在自家门口，从此无忧。护院，未必一定要养狗换个角度想问题，结果大不同。一位大爷到菜市场买菜，挑了3个西红柿到到秤盘，摊主秤了下：“一斤半3块7。”大爷：“做汤不用那么多。”去掉了最大的西红柿。摊主:“一斤二两，3块。”正当身边人想提醒大爷注意秤时，大爷从容的掏出了七毛钱，拿起刚刚去掉的那个大的西红柿，潇洒地换种算法，独辟蹊径，你会发现解决问题的另一个方法。生活中，我们特别容易陷入非A即B的思维死角，但其实，遭遇两难困境时换个角度思考，也许就会明白：路的旁边还有路。一个鱼塘新开张，钓费100块。钓了一整
34、天没钓到鱼，老板说凡是没钓到的就送一只鸡。很多人都去了，回来的时候每人拎着一只鸡，大家都很高兴！觉得老板很够意思。后来，钓鱼场看门大爷告诉大家，老板本来就是个养鸡专业户，这鱼塘本来就没鱼。巧妙的去库存，还让顾客心甘情愿买单。新时代，做营销，必须打破传统思维。孩子不愿意做爸爸留的课外作业，于是爸爸灵机一动说：儿子，我来做作业，你来检查如何？孩子高兴的答应了，并且把爸爸的“作业”认真的检查了一遍，还列出算式给爸爸讲解了一遍不过他可能怎么也不明白为什么爸爸所有作业都做错了。巧妙转换角色，后退一步，有时候是另一种前进。一个博士群里有人提问：一滴水从很高很高的地方自由落体下来，砸到人会不会砸伤？或砸死？
35、群里一下就热闹起来，各种公式，各种假设，各种阻力，重力，加速度的计算，足足讨论了近一个小时 后来，一个不小心进错群的人默默问了一句：你们没有淋过雨吗 人们常常容易被日常思维所禁锢，而忘却了最简单也是最直接的路有两个年轻人，大学毕业后一起到广州闯天下。只要我们坚持了，就没有克服不了的困难。或许，为了将来，为了自己的发展，我们会把一件事情想得非常透彻，对自己越来越严，要求越来越高，对任何机会都不曾错过，其目的也只不过是不让自己随时陷入逆境与失去那种面对困难不曾屈服的精神。但有时，“千里之行，始于足下。”我们更需要用时间持久的用心去做一件事情，让自己其中那小小的浅浅的进步，来击破打破突破自己那本以为
36、可以高枕无忧十分舒适的区域，强迫逼迫自己一刻不停的马不停蹄的一直向前走，向前看，向前进。所有的未来，都是靠脚步去丈量。没有走，怎么知道，不可能；没有去努力，又怎么知道不能实现？幸福都是奋斗出来的。那不如，生活中、工作中，就让这“幸福都是奋斗出来的”完完全全彻彻底底的渗入我们的心灵，着心、心平气和的去体验、去察觉这一种灵魂深处的安详，侧耳聆听这仅属于我们自己生命最原始最动人的节奏。但，这种聆听，它绝不是仅限于、执着于“我”，而是观察一种生命状态能够扩展和超脱到什么程度，也就是那“幸福都是奋斗出来的”深处又会是如何？生命不止，奋斗不息！又或者，对于很多优秀的人来说，我们奋斗了一辈子，拼搏了一辈子，
37、也只是人家的起点。可是，这微不足道的进步，对于我们来说，却是幸福的，也是知足的，因为我们清清楚楚的知道自己需要的是什么，隐隐约约的感觉到自己的人生正把握在自己手中，并且这一切还是通过我们自己勤勤恳恳努力，去积极争取的!“宝剑锋从磨砺出，梅花香自苦寒来。”当我们坦然接受这人生的终局，或许，这无所皈依的心灵就有了归宿，这生命中觅寻处那真正的幸福、真正的清香也就从此真正的灿烂了我们的人生。一生有多少属于我们的时光？陌上的花，落了又开了，开了又落了。无数个岁月就这样在悄无声息的时光里静静的流逝。童年的玩伴，曾经的天真，只能在梦里回味，每回梦醒时分，总是多了很多伤感。不知不觉中，走过了青春年少，走过了人
38、世间风风雨雨。爱过了，恨过了，哭过了，笑过了，才渐渐明白，酸甜苦辣咸才是人生的真味！生老病死是自然规律。所以，面对生活中经历的一切顺境和逆境都学会了坦然承受，面对突然而至的灾难多了一份从容和冷静。这世上没有什么不能承受的，只要你有足够的坚强！这世上没有什么不能放下的，只要你有足够的胸襟！一生有多少属于我们的时光？当你为今天的落日而感伤流泪的时候，你也将错过了明日的旭日东升；当你为过去的遗憾郁郁寡欢，患得患失的时候，你也将忽略了沿途美丽的风景，淡漠了对未来美好生活的憧憬。没有十全十美的生活，没有一帆风顺的旅途。波平浪静的人生太乏味，抑郁忧伤的人生少欢乐，风雨过后的彩虹最绚丽，历经磨砺的生命才丰盈
39、而深刻。见过了各样的人生：有的轻浮，有的踏实；有的喧哗，有的落寞；有的激扬，有的低回。肉体凡胎的我们之所以苦恼或喜悦，大都是缘于生活里的际遇沉浮，走不出个人心里的藩篱。也许我们能挺得过物质生活的匮乏，却不能抵挡住内心的种种纠结。其实幸福和欢乐大多时候是对人对事对生活的一种态度，一花一世界，一树一菩提，就是一粒小小的沙子，也有自己精彩的乾坤。如果想到我们终有一天会灰飞烟灭，一切象风一样无影亦无踪，还去争个什么？还去抱怨什么？还要烦恼什么？未曾生我谁是我？生我之时我是谁？长大成人方是我，合眼朦胧又是谁？一生真的没有多少时光，何必要和生活过不去，和自己过不去呢。你在与不在，太阳每天都会照常升起；你愁
40、与不愁，生活都将要继续。时光不会因你而停留，你却会随着光阴而老去。有些事情注定会发生，有的结局早已就预见，那么就改变你可以改变的，适应你必须去适应的。面对幸与不幸，换一个角度，改变一种思维，也许心空就不再布满阴霾，头上就是一片蔚蓝的天。一生能有多少属于我们的时光，很多事情，很多人已经渐渐模糊。而能随着岁月积淀下来，在心中无法忘却的，一定是触动心灵，甚至是刻骨铭心的，无论是伤痛是欢愉。人生无论是得意还是失意，都不要错过了清早的晨曦，正午的骄阳，夕阳的绚烂，暮色中的朦胧。经历过很多世态炎凉之后，你终于能懂得：谁会在乎你？你又何必要别人去在乎？生于斯世，赤条条的来，也将身无长物的离开，你在世上得到的
41、，失去的，最终都会化作尘埃。原本就不曾带来什么，所以也谈不到失去什么，因此，对自己经历的幸与不幸都应怀有一颗平常心有一颗平常心，面对人生小小的不如意或是飞来横祸就能坦然接受，知道人有旦夕祸福，这和命运没什么关系；有一颗平常心，面对台下的鲜花掌声和头上的光环，身上的浮名都能清醒看待。花不常开，人不常在。再热闹华美的舞台也有谢幕的时候；再奢华的宴席，悠扬的乐曲，总有曲终人散的时刻。春去秋来，我们无法让季节停留；同样如同季节一样无法挽留的还有我们匆匆的人生。谁会在乎你？生养我们的父母。纵使我们有千般不是，纵使我们变成了穷光蛋，唯有父母会依然在乎！为你愁，为你笑，为你牵挂，为你满足。这风云变幻的世界，
42、除了父母，不敢在断言还会有谁会永远的在乎你！看惯太多海誓山盟的感情最后星流云散；看过太多翻云覆雨的友情灰飞烟灭。你春风得意时前呼后拥的都来锦上添花；你落寞孤寂时，曾见几人焦急赶来为你雪中送炭。其实，谁会在乎你？除了父母，只有你自己。父母待你再好，总要有离开的时日；再恩爱夫妻，有时也会劳燕分飞，孩子之于你，就如同你和父母；管鲍贫交，俞伯牙和钟子期，这样的肝胆相照，从古至今有几人？不是把世界想的太悲观，世事白云苍狗，要在纷纷扰扰的生活中，懂得爱惜自己。不羡慕如昙花一现的的流星，虽然灿烂，却是惊鸿一瞥；宁愿做一颗小小的暗淡的星子，即使不能同日月争辉，也有自己无可取代的位置其实，也不该让每个人都来在乎
43、自己，每个人的人生都是单行道，世上绝没有两片完全相同的树叶。大家生活得都不容易，都有自己方向。相识就是缘分吧，在一起的时候，要多想着能为身边的人做点什么，而不是想着去得到和索取。与人为善，以直报怨，我们就会内心多一份宁静，生活多一份和谐没有谁会在乎你的时候，要学会每时每刻的在乎自己。在不知不觉间，已经走到了人生的分水岭，回望过去生活的点滴，路也茫茫，心也茫茫。少不更事的年龄，做出了一件件现在想来啼笑皆非的事情：斜阳芳草里，故作深沉地独对晚风夕照；风萧萧兮，渴望成为一代侠客；一遍遍地唱着罗大佑的童年，期待着做那个高年级的师兄；一天天地幻想，生活能轰轰烈烈。没有刀光剑影，没有死去活来，青春就在浑浑
44、噩噩、懵懵懂懂中悄然滑过。等到发觉逝去的美好，年华的可贵，已经被无可奈何地推到了滚滚红尘。从此，青春就一去不回头。没有了幻想和冲动，日子就像白开水一样平淡，寂寞地走过一天天，一年年。涉世之初，还有几分棱角，有几许豪情。在碰了壁，折了腰之后，终于明白，生活不是童话，世上本没有白雪公主和青蛙王子，原本是一张白纸似的人生，开始被染上了光怪陆离的色彩。你情愿也罢，被情愿也罢，生存，就要适应身不由己，言不由衷的生活。人到中年，突然明白了许多：人生路漫漫，那是说给还不知道什么叫人生的人说的，人生其实很短暂，百年一瞬间；世事难预料，是至理名言，这一辈子，你遇见了谁，擦肩而过了谁，谁会是你真心的良朋益友，谁会和你牵手相伴一生，
