1、HPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu Corporation石油石油醚醚碳酸碳酸钙颗钙颗粒粒色素色素色色谱谱组组分分HPLC Business DeptShimadzu Corporation HPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC的分离类型的分离类型l正相色谱正相色谱(NP-HPLC)l反相色谱反相色谱(RP-HPLC)l反相离子对色谱反相离子对色谱(RPIC)l离子交换色谱离子交换色谱(IEC)l空间排阻色谱空间排阻色谱(SEC)l手性化合物分离模式手性
2、化合物分离模式(Chiral separation mode)HPLC Business DeptShimadzu Corporation:正相色谱反相色谱化合物保留时间随流动相配比的变化不同极性的化合物出峰顺序HPLC Business DeptShimadzu Corporation正相正相HPLC色谱柱色谱柱 硅胶型硅胶型 氰基型氰基型 氨基型氨基型 糖类分析糖类分析 二醇基型二醇基型 蛋白质分析蛋白质分析Silica gelSiSi-Si-CH2CH2CH2CN-Si-CH2CH2CH2NH2-Si-CH2CH2CH2OCH(OH)-CH2(OH)Modified SiHPLC Bus
3、iness DeptShimadzu Corporation反相反相HPLC色谱柱色谱柱C18(ODS)type C8(octyl)typeC4(butyl)typePhenyl type TMS typeCyano type-Si-C18H37SiHPLC Business DeptShimadzu Corporation 色谱柱色谱柱:非极性非极性溶剂溶剂:极性极性水水/甲醇甲醇/乙腈乙腈HPLC Business DeptShimadzu Corporation液相色谱流程图液相色谱流程图输输液液泵泵进样进样器器色色谱谱柱柱柱温箱柱温箱检测检测器器溶溶剂剂数据数据处处理理HPLC Bus
4、iness DeptShimadzu Corporation流动相流动相HPLC”级级溶溶剂剂避避免免使使用用会会引引起起柱柱效效损损失失或或保保留留特特性性变变化化的的溶溶剂剂对对试试样样有有适适宜宜的的溶溶解解度度溶溶剂剂粘粘度度要要小小与与检检测测器器相相匹匹配配流流动动相相配配制制时时的的顺顺序序HPLC Business DeptShimadzu Corporation溶溶 剂剂 等等 级级水的等级水的等级纯化水纯化水蒸馏水蒸馏水去离子水去离子水波长波长(nm)纯化水纯化水去离子水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机
5、的污染物纯化水中去除了无机和有机的污染物HPLC Business DeptShimadzu Corporation水水/MeOH梯度梯度ODS 柱柱鬼峰鬼峰Gradient Curve1 ml/min,0-100%MeOHover 10 mins and hold for15 mins.溶溶 剂剂 等等 级级HPLC Business DeptShimadzu Corporation溶溶 剂剂 等等 级级溶剂的等级溶剂的等级HPLC级级优级纯优级纯分析纯分析纯都经过蒸馏和都经过蒸馏和0.45um的过滤的过滤(除纤维毛除纤维毛,未溶解的机械颗粒未溶解的机械颗粒)优级纯的纯度比分析纯大优级纯的纯
6、度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过级经过0.22um的过滤的过滤,且除去有紫外吸收的杂质且除去有紫外吸收的杂质HPLC Business DeptShimadzu Corporation甲醇甲醇 乙睛乙睛 正己烷正己烷分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图溶溶 剂剂 等等 级级HPLC Business DeptShimadzu Corporation溶剂前处理溶剂前处理HPLC Business DeptShimadzu Corporation30mm内径：适用于大进样量的过滤，由0.22m和0.45m两种规格,材料有纤维素,醋酸纤维,聚四氟
7、乙烯。处理样品体积少于50l。13mm内径：适用于范围广的过滤，由0.22m和0.45m两种规格,材料为纤维素。3mm内径：适用于小进样量的过滤，由0.22m和0.45m两种规格。处理样品体积为7l。样品过滤头的类型：样品过滤头的类型：HPLC Business DeptShimadzu Corporation滤膜类型滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶液，推荐用于蛋白质和其相关样品。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸,70%乙醇、二氯甲烷、不适用于二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：具有蛋白吸收低，
8、同样适用水溶性样品和有机溶剂。HPLC Business DeptShimadzu Corporation溶剂前处理溶剂前处理返回HPLC Business DeptShimadzu Corporation流路中形成气泡引起的问题改变保留时间和峰面积改变保留时间和峰面积流动相中形成气泡对液流的不良影响流动相中形成气泡对液流的不良影响泵中形成气泡使液流波动泵中形成气泡使液流波动峰变形峰变形柱中气泡形成和累积使流动相绕流柱中气泡形成和累积使流动相绕流尖峰或锯齿状噪声尖峰或锯齿状噪声检测池中气泡形成和累积产生基线噪声检测池中气泡形成和累积产生基线噪声HPLC Business DeptShimadz
9、u Corporation输液泵输液泵输液泵类型：输液泵类型：注射泵注射泵 柱塞往复泵柱塞往复泵 隔膜泵隔膜泵HPLC Business DeptShimadzu Corporation柱塞往复泵单单向向阀阀马马达和凸达和凸轮轮柱塞杆柱塞杆柱塞杆密封圈柱塞杆密封圈泵头泵头10-100uLHPLC Business DeptShimadzu Corporation柱塞往复泵优点优点压力脉动小压力脉动小易于更换溶剂易于更换溶剂缺点缺点需要更换柱塞杆密封圈需要更换柱塞杆密封圈HPLC Business DeptShimadzu Corporation岛津岛津VP系列输液泵系列输液泵目的目的 单元单元
10、 流速范围流速范围特性和应用特性和应用 分析分析 LC-10ADLC-10ADVPVP0.001-9.9990.001-9.999无脉动，适于无脉动，适于半微量半微量LC LC 和和 LC-MSLC-MS LC-10ATLC-10ATVPVP0.001-9.9990.001-9.999非凡的耐用性，非凡的耐用性，适于常量分析适于常量分析*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度HPLC Business DeptShimadzu Corporation等度洗脱输输液液泵泵进样进样器器色色谱谱柱柱柱温箱柱温箱检测检测器器HPLC Business DeptSh
11、imadzu Corporation梯度洗脱 A 泵泵进样进样器器色色谱谱柱柱柱温箱柱温箱检测检测器器 B泵泵AB时间时间B 浓浓度度HPLC Business DeptShimadzu CorporationMeOH/H2O=6/4MeOH/H2O=8/2(column:ODS type)等度洗脱HPLC Business DeptShimadzu Corporation95%30%MeOH 浓浓度度梯度洗脱HPLC Business DeptShimadzu Corporation优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精
12、度提高分离精度v溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差v梯度混合的溶剂互溶性要好梯度混合的溶剂互溶性要好v梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）HPLC Business DeptShimadzu Corporation混合器混合器低低压压梯度比例梯度比例阀阀 高高压压梯度梯度低低压压梯度梯度脱气机脱气
13、机高压/低压梯度系统HPLC Business DeptShimadzu Corporation返回高压梯度系统高压梯度系统梯度准确度好梯度准确度好系统复杂系统复杂(需两台或三台泵需两台或三台泵)低压梯度系统低压梯度系统系统简单系统简单需在线脱气机需在线脱气机存在时间滞后效应存在时间滞后效应高压/低压梯度系统HPLC Business DeptShimadzu Corporation进样器进样器返回HPLC Business DeptShimadzu Corporation手动进样器的原理图手动进样器的原理图 装填状态装填状态进样状态进样状态返回HPLC Business DeptShimad
14、zu Corporation进样体积进样体积 检检测测器器响响应应值值定量管体积的一半定量管体积的一半3倍定量管体积倍定量管体积全量注入全量注入部分注入部分注入进样体积与响应值关系进样体积与响应值关系返回HPLC Business DeptShimadzu Corporation柱温箱柱温箱柱温控制的优点：柱温控制的优点：HPLC Business DeptShimadzu Corporation色谱柱色谱柱返回ODS柱的使用注意点：柱的使用注意点：HPLC Business DeptShimadzu Corporation流动相注意点流动相注意点动动相相的的使使用用分分析析结结束束及及开开始
15、始流流动动相相平平衡衡加加快快平平衡衡时时间间异异丙丙醇醇的的使使用用HPLC Business DeptShimadzu CorporationLC检测器检测器HPLC Business DeptShimadzu Corporation紫外可见检测器紫外可见检测器紫外可见检测器紫外可见检测器HPLC Business DeptShimadzu Corporation样样品池品池参比池参比池光光电电管管光光电电管管EinEinEin光栅光栅D2/W 灯灯l lEout紫外可见检测器HPLC Business DeptShimadzu Corporation岛津岛津VP系列紫外检测器功能系列紫外
16、检测器功能NEXTHPLC Business DeptShimadzu Corporation波长切换波长切换返回HPLC Business DeptShimadzu Corporation双波长检测双波长检测返回HPLC Business DeptShimadzu Corporation比例色谱比例色谱280nm220 nmratio280/220返回HPLC Business DeptShimadzu Corporation波长扫描波长扫描返回HPLC Business DeptShimadzu Corporation二极管阵列检测器（二极管阵列检测器（SPDM10AVP）HPLC Bus
17、iness DeptShimadzu Corporation样样品池品池二极管二极管阵阵列（列（512个个单单元）元）光栅光栅D2/W灯灯每一每一单单元可元可检测检测一个一个波波长长下的吸光度下的吸光度二极管阵列检测器二极管阵列检测器HPLC Business DeptShimadzu Corporation三维谱图三维谱图时间波长吸光度色色谱谱光光谱谱HPLC Business DeptShimadzu Corporation二极管阵列检测器的优点二极管阵列检测器的优点NEXTHPLC Business DeptShimadzu Corporation峰纯度检验（3点光谱图比较）Initia
18、l detection Initial detection pointpointFinal Final detection detection pointpointT1T3T2peak toppeak topup slopeup slopedown slopedown slope1/2 1/3HPLC Business DeptShimadzu Corporation乙酰水杨酸乙酰水杨酸下降点下降点上升点上升点,顶点顶点峰纯度检验（峰纯度检验（3点光谱图比较）点光谱图比较）返回HPLC Business DeptShimadzu Corporation光谱库检索光谱库检索返回HPLC Busi
19、ness DeptShimadzu Corporation检测器检测器示差折光检测器示差折光检测器返回HPLC Business DeptShimadzu Corporation糖的色谱图Analytical ConditionsColumn:Shim-pack CLC-NH2Mobile phase:Acetonitrile/water =7/3Flow rate:1.0 mL/minTemperature:AmbientPeaks 1.甘油甘油 2.木糖木糖 3.果糖果糖 4.葡萄糖葡萄糖 5.蔗糖蔗糖 6.甘露糖甘露糖 7.乳糖乳糖NoImageHPLC Business DeptShimadzu Corporation荧光检测器荧光检测器HPLC Business DeptShimadzu Corporation数据处理数据处理：LC-Solution色色谱谱工工作作站站CLASS-VP色色谱谱工工作作站站CR7A色色谱谱数数据据处处理理机机CR8A色色谱谱数数据据处处理理机机返回
