1、药物分析方法学验证中各项指标的深度剖析药物分析方法学验证中各项指标的深度剖析1一、线性试验一、线性试验 主成分含量测定 以测定浓度为100%，50%120%之间选取5个点即可。溶出（释放）度测定 以释放量的10%120%间选取5个点即可。杂质含量用杂质对照品准确测定 以杂质限度为100%，50%120%之间选取5个点即可。2测定结果：1）阐述如何看待截距和斜率、如何应用。2）误差在哪里，应用时的注意事项。3）为什么没有不成线性的？通常C、H、O、N结构，紫外监测器决定。个别化学键所致。梯度洗脱时，有时会出现不成线性。4）都成线性、为何还要做？最小二乘法的原理知晓。3唑 来 磷 酸 结 构 式4
2、引申使用：1）有关物质测定 归一化法和自身对照法的相互妙用。2）缓释制剂溶出度测定，对照品浓度设定为中间浓度。举例说明。3）回收率试验为何做80%120%即可？亦及样品浓度与对照品浓度接近到何等程度的理解。4）国内只注重相关系数，不注重截距。5二、精密度试验二、精密度试验 重复性试验：连续进样6次。中间精密度试验和重现性试验通过“耐用性试验中的溶液稳定性试验”来体现。浓度极低时才会不理想，加大进样量。色谱峰形极为重要，对称性、柱效等参数。加大柱温、增加流动相中有机相比例，使被测物质峰尽快出峰。6三、准确度试验三、准确度试验 用回收率来衡量用回收率来衡量 作法：在80%120%间选择3点或5点，
3、原因是由外标一点法决定的。已知杂质、且有杂质对照品的，可采用加入法，即加样回收率来评价。一般情况下，只要空白辅料无干扰，回收率均是良好的！7四、专属性四、专属性 有关物质为主，其他检测项目（含量）基本上均参照有关物质。有关物质的验证，采用中间体和降解产物（确认结构后人工合成）来验证与主成分的分离。8系统适用性试验的配制方法：在100浓度的主成分溶液中加入1%浓度的杂质对照品，以模拟样品中有可能存在的状态。介绍配制方法 先配制杂质贮备液，再用供试品溶液（或浓的对照品溶液）来稀释，简便、易行！9专属性试验验证图谱专属性试验验证图谱10 存在问题 配制相同浓度，测定样品时，主成分峰骤然加大，将杂质峰
4、覆盖。强破坏试验的目的：验证药品在遭遇了极端的气候环境条件下产生的杂质，在所建立的色谱条件下是否能够分离、测定。11 检测波长的确定检测波长的确定 涉及到各被检测物质在该波长下的响应因子是否相同，即所谓重量校正因子的问题。（f=A杂质/A被测成分）选取主成分与各杂质具有相同紫外吸收的波长（f=1.0）。选取各杂质紫外吸收大于主成分紫外吸收的波长（f1.0），这样可更加严格控制杂质的限度。如选取各杂质紫外吸收小于主成分紫外吸收的波长，应必须加入重量校正因子（f99.5%）考察方法精密度，平行试验5个样本的RSD0.2%；准确度：以测定原料精制品的回收率计算，应在99.7%100.3%之间（n5,
5、RSD0.1%）；滴定终点确定的依据：包括滴定曲线的绘制，如用指示剂法确定终点，应用电位法校准终点颜色，提供指示剂颜色与电位变化情况的对比结果；29 耐用性：考察测定条件（供试液稳定性、样品提取次数、时间等）有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度，如测试条件要求苛刻时则应在方法中注明。HPLC法的验证：精密度：RSD2%（n5）；准确度：用于制剂时，要考察辅料的影响，将一定量药物加到按处方比例配制的辅料中（为标示量的80%120%）制成高、中、低三个剂量，混合均匀后，每个剂量取三份样品，按拟定方法测定回收率，应在98%102%之间（n9,RSD2%）。30 线性范围：用已知含量的精制品配制一
6、系列浓度的溶液（n57），用浓度C对峰面积A或峰高h或被测物的响应值之比进行回归处理，线性方程的相关系数r0.9990，截距越小越好，并提供线性关系图；专属性：辅料、有关物质或降解产物峰对主药峰应无干扰；耐用性：考察测定条件（供试液稳定性、流动相组成和pH值、不同品牌或批号的同类色谱柱、柱温、流速、样品提取次数、时间等）有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度，如测试条件要求苛刻时则应在方法中注明；灵敏度：作为常量分析法，此项可不作主要要求。31 UV法的验证：精密度：RSD1%（n5）；准确度：方法同HPLC法，回收率应在98%102%之间（n9,RSD2%），同时要求辅料、有关物质或降解产物在测定波长处无吸收。线性范围：用已知含量的精制品配制一系列浓度的溶液（n57，吸收度A在0.30.7间），用浓度C对A进行回归处理，线性方程的相关系数r应0.9990，截距应趋于零，并提供线性关系图；耐用性：考察测定条件（供试液稳定性、样品提取次数、时间、比色法中显色剂用量、反应温度、时间、pH值等）有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度，如测试条件要求苛刻时则应在方法中注明。32
