1、病原生物学实验课件病原生物教研室制作实实 验验 一一1 1、实验目的和要求、实验目的和要求2 2、实验室规则、实验室规则3 3、消毒与灭菌、消毒与灭菌4 4、介绍常用灭菌器材、介绍常用灭菌器材5 5、常用仪器的使用、常用仪器的使用6 6、油浸镜的原理、使用、保护、油浸镜的原理、使用、保护7 7、紫外线杀菌试验、紫外线杀菌试验8 8、自然界细菌的分布、自然界细菌的分布9 9、细菌的培养、细菌的培养1010、细菌的生化反应、细菌的生化反应实验目的和要求实验目的和要求 一、实验目的一、实验目的 (1)(1)掌握病原生物学的基本实验方法和操作技术。掌握病原生物学的基本实验方法和操作技术。(2)(2)通
2、过实验设计的讨论和结果分析，培养学生的科学思通过实验设计的讨论和结果分析，培养学生的科学思 维方法，提高其独立工作的能力。维方法，提高其独立工作的能力。二、实验要求二、实验要求 (1)(1)每次实验前，必须做好预习，明确实验目的、原理、方每次实验前，必须做好预习，明确实验目的、原理、方 法及操作中的注意事项等，避免和减少错误操作。法及操作中的注意事项等，避免和减少错误操作。(2)(2)实验过程中，必须持严肃认真的态度。实验过程中，必须持严肃认真的态度。(3)(3)对实验现象和结果必须进行仔细的观察和认真的记录，对实验现象和结果必须进行仔细的观察和认真的记录，然后进行科学分析，得出恰当的结论。然
3、后进行科学分析，得出恰当的结论。(4)(4)实验报告要独立认真地完成，书写实验报告要字迹清楚、实验报告要独立认真地完成，书写实验报告要字迹清楚、语言简练、表格清晰，画图应力求反映实际标本的原状。语言简练、表格清晰，画图应力求反映实际标本的原状。(5)(5)切实遵守实验室规则。切实遵守实验室规则。实验室规则实验室规则(1)(1)上实验课时，先到更衣室把个人的书包和衣物放到衣柜上实验课时，先到更衣室把个人的书包和衣物放到衣柜内，穿好实验服。随身只许携带必须的教材、笔记本、文具内，穿好实验服。随身只许携带必须的教材、笔记本、文具等，但要置于远离操作部位的位置。等，但要置于远离操作部位的位置。(2)(
4、2)实验室要保持正常的工作秩序，不得高声谈笑和走动。实验室要保持正常的工作秩序，不得高声谈笑和走动。(3)(3)实验室内禁止饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔或标签等。实验室内禁止饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔或标签等。(4)(4)实验用过的带有传染性物质的吸管、玻片等应放在指定实验用过的带有传染性物质的吸管、玻片等应放在指定的消毒筒内，待消毒或废弃的物品必须放在指定地点。的消毒筒内，待消毒或废弃的物品必须放在指定地点。(5)(5)如发现有传染性的材料污染地面、桌面、书和衣物等时，如发现有传染性的材料污染地面、桌面、书和衣物等时，应立即报告老师，以便及时处置。应立即报告老师，以便及时处置。(6)(6)
5、如将活菌碰到手上，应将手浸入来苏水中如将活菌碰到手上，应将手浸入来苏水中5-10min5-10min，然后用，然后用自来水冲洗；如将痰液吸人口内，应立即吐出，再用质量分数自来水冲洗；如将痰液吸人口内，应立即吐出，再用质量分数为为0 01 1的高锰酸钾漱口，必要时服用有关药物。的高锰酸钾漱口，必要时服用有关药物。(7)(7)注意节约实验试剂，爱护实验器材。器材损坏时，应立即注意节约实验试剂，爱护实验器材。器材损坏时，应立即报告老师，听候处理。报告老师，听候处理。(8)(8)易燃物品易燃物品(酒精、二甲苯等酒精、二甲苯等)不准接近火源。一旦起火，应不准接近火源。一旦起火，应立即用沾水的布或沙土覆盖
6、扑火。立即用沾水的布或沙土覆盖扑火。(9)(9)实验结束后，将实验台整理好，值日同学打扫室内卫生，并实验结束后，将实验台整理好，值日同学打扫室内卫生，并检查水、电等开关是否关好，防止发生事故。检查水、电等开关是否关好，防止发生事故。(10)(10)实验结束后，到更衣室脱下实验服，将实验服放人衣柜内，实验结束后，到更衣室脱下实验服，将实验服放人衣柜内，洗手消毒后离去。洗手消毒后离去。消毒与灭菌消毒与灭菌 原理原理：微生物由蛋白质、核酸、脂类等构：微生物由蛋白质、核酸、脂类等构成，极易受外界条件的影响，对多种物理、成，极易受外界条件的影响，对多种物理、化学因素都敏感。化学因素都敏感。消毒与灭菌就是
7、消毒与灭菌就是根据这根据这一原理抑制或杀死外环境中的病原微生物。一原理抑制或杀死外环境中的病原微生物。消毒消毒(disinfetion(disinfetion)杀死物体上病原微生物的方法，杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌和非病原微生物。用并不一定能杀死含芽胞的细菌和非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant)(disinfectant)。一般消。一般消毒剂在常用的浓度下，只对细菌的繁殖体有效，对毒剂在常用的浓度下，只对细菌的繁殖体有效，对其芽胞则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。其芽胞则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。
8、灭菌灭菌(sterilization)(sterilization)杀灭物体上所有微生物的方法。杀灭物体上所有微生物的方法。因此，灭菌比消毒要求高，包括杀灭病原微生物和因此，灭菌比消毒要求高，包括杀灭病原微生物和非病原微生物、细菌的繁殖体和芽胞。非病原微生物、细菌的繁殖体和芽胞。防腐防腐(antisepsis)(antisepsis)防止或抑制细菌生长繁殖的方法，防止或抑制细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时为防腐剂。毒剂，低浓度时为防腐剂。无菌无菌(asepsis)(asepsis)不含活菌的意思。防止细菌
9、进入人不含活菌的意思。防止细菌进入人体或其它物品的操作技术，称为无菌操作。体或其它物品的操作技术，称为无菌操作。一、物理消毒灭菌法一、物理消毒灭菌法（一）热力灭菌法（一）热力灭菌法1.1.干热灭菌法干热灭菌法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。原理：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。原理 加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细 胞含水量越大，凝固越快。胞含水量越大，凝固越快。（1 1）焚烧：被污染的纸张、实验）焚烧：被污染的纸张、实验 室有传染性的动物室有传染性的动物 尸体、无经济价值的物品可以烧掉。尸体、无经济价值的物品可以烧掉。（2 2）烧灼：火焰灼烧适用
10、于接种环、）烧灼：火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属接种针和金属 用具如镊子等，试管口和瓶口，涂用具如镊子等，试管口和瓶口，涂 布用玻璃棒。布用玻璃棒。（3 3）干烤：干烤灭菌法需在干烤箱进行，靠热空气进行灭菌。）干烤：干烤灭菌法需在干烤箱进行，靠热空气进行灭菌。这种方法适用于玻璃器皿、金属器械以及不能遇水的油脂、这种方法适用于玻璃器皿、金属器械以及不能遇水的油脂、凡士林等灭菌。灭菌时一般加热至凡士林等灭菌。灭菌时一般加热至16016017021702小时可达到灭小时可达到灭菌的目的。在装满物品的干烤箱内，不同部位的温度差可达菌的目的。在装满物品的干烤箱内，不同部位的温度差可达30304040
11、，故温箱内最好装有鼓风机使温度均匀。，故温箱内最好装有鼓风机使温度均匀。箱内物品不宜装得太多，以免影箱内物品不宜装得太多，以免影 响空气的流通。响空气的流通。（4 4）红外线：红外线烤箱，供小）红外线：红外线烤箱，供小 件器械件器械(镊子、剪刀等镊子、剪刀等)以及玻璃以及玻璃 注射器等迅速灭菌用。注射器等迅速灭菌用。注意事项：注意事项：1 1）培养基、橡胶制品、塑料制品）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；不能用此法；2 2）温度控制在）温度控制在180180；3 3）物品不能太挤；）物品不能太挤；4 4）温度降至）温度降至7070时才开箱门。时才开箱门。2.2.湿热灭菌法湿热灭菌法:原理原
12、理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固。蛋白：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固。蛋白质凝固时所需温度与其含水量成反比关系，即蛋白质含质凝固时所需温度与其含水量成反比关系，即蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。湿热的穿透力比干热大。试验证明将湿热的穿透力比干热大。试验证明将100100层的布卷，如层的布卷，如用用130130140140干热，加热干热，加热4 4小时，布卷第小时，布卷第2020层的温度只层的温度只有有8686，第，第100100层的温度不到层的温度不到7070，而用，而用105105的湿热，的湿热，加热加热
13、3 3小时布卷第小时布卷第2020层到层到100100层的温度都是层的温度都是101101。所以。所以效果比同温度下干热好。效果比同温度下干热好。（1 1）巴氏消毒法）巴氏消毒法(pasteurization)(pasteurization)：常用于牛奶和酒：常用于牛奶和酒类等物品的消毒。具体的消毒方法有两种：一是以类等物品的消毒。具体的消毒方法有两种：一是以61.161.162.862.8消毒消毒3030分钟；另一方法是以分钟；另一方法是以71.771.7，消毒，消毒15153030秒钟。秒钟。(2)(2)煮沸消毒法：煮沸煮沸消毒法：煮沸5 5分钟，可杀灭所有的细菌繁殖体。分钟，可杀灭所有的
14、细菌繁殖体。但杀死芽胞则需一至数小时。如在水中加入但杀死芽胞则需一至数小时。如在水中加入1%1%碳酸钠即碳酸钠即可提高沸点，增强杀灭芽胞作用，同时又可防止金属器可提高沸点，增强杀灭芽胞作用，同时又可防止金属器械生锈。如水中加械生锈。如水中加2 25%5%石炭酸，则石炭酸，则10101515分钟后可破分钟后可破坏芽胞，所以许多医疗器械如手术刀、剪、镊子、胶管、坏芽胞，所以许多医疗器械如手术刀、剪、镊子、胶管、注射器等，常用煮沸消毒。注射器等，常用煮沸消毒。(3)(3)流通蒸气消毒法：用阿诺氏灭菌器或普通蒸气笼进行。流通蒸气消毒法：用阿诺氏灭菌器或普通蒸气笼进行。因此在正常大气压下，故温度不会超过
15、因此在正常大气压下，故温度不会超过100100。普通细菌的。普通细菌的繁殖体繁殖体15153030分钟可杀死。但芽胞不易消灭。分钟可杀死。但芽胞不易消灭。(4)(4)间歇灭菌法：有些物质不能加热至间歇灭菌法：有些物质不能加热至100100以上，例如含血以上，例如含血清的培养基等，为了消灭其中的细菌芽胞，须用间歇灭菌法。清的培养基等，为了消灭其中的细菌芽胞，须用间歇灭菌法。方法是用阿诺灭菌器或用蒸笼加热方法是用阿诺灭菌器或用蒸笼加热100100维持维持3030分钟，每天分钟，每天进行一次，连续三天。第一次加热后，细菌的繁殖体即被杀进行一次，连续三天。第一次加热后，细菌的繁殖体即被杀灭，而芽胞还能
16、存活，为了使芽胞发芽成繁殖体，将被灭菌灭，而芽胞还能存活，为了使芽胞发芽成繁殖体，将被灭菌的物品取出放在室温的物品取出放在室温3737温箱内过夜，第二天再加热一次，温箱内过夜，第二天再加热一次，则可杀死由芽胞生成的繁殖体。为了达到彻底灭菌，照上法则可杀死由芽胞生成的繁殖体。为了达到彻底灭菌，照上法再进行第三次加热，这样所有的芽胞将被杀灭。应用间歇灭再进行第三次加热，这样所有的芽胞将被杀灭。应用间歇灭菌法，在间歇期必须提供芽胞发芽所需条件。菌法，在间歇期必须提供芽胞发芽所需条件。(5)(5)高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法 设备：高压灭菌锅设备：高压灭菌锅 时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变
17、化。时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。适用于培养基等的灭菌，在适用于培养基等的灭菌，在1.05kg/cm1.05kg/cm2 2蒸气压下，温蒸气压下，温度达度达121.3121.3，维持，维持15152020分钟，可杀灭包括细菌芽分钟，可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。高压蒸气灭菌器就是根据这一胞在内的所有微生物。高压蒸气灭菌器就是根据这一原理制成的，常用于一般培养基、生理盐水、手术敷原理制成的，常用于一般培养基、生理盐水、手术敷料、工作服、橡胶物品等耐高温、耐湿热等物品的灭料、工作服、橡胶物品等耐高温、耐湿热等物品的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。杀灭
18、几类主要微生物的湿热条件杀灭几类主要微生物的湿热条件微生物微生物营养细胞营养细胞孢子或芽孢孢子或芽孢酵母菌酵母菌50-60，5分钟分钟70-80，5分钟分钟霉菌霉菌62，30分钟分钟80，30分钟分钟细菌细菌 （中温（中温细菌）细菌）50-70，10分钟分钟2-800分钟，分钟，100；或；或 120，05-12分分病毒病毒60，30分钟分钟(二二)电磁波辐射杀菌法电磁波辐射杀菌法 1.1.紫外线紫外线：原理原理：紫外线波长在：紫外线波长在200200300nm300nm，具有杀菌作用，以，具有杀菌作用，以265-265-266266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；这与杀菌力强。此段波长
19、易被细胞中核酸吸收；这与DNADNA的吸收的吸收光谱范围一致。紫外线主要作用于光谱范围一致。紫外线主要作用于DNADNA，使一条，使一条DNADNA链上相邻的链上相邻的二个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体，因而改变二个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体，因而改变DNADNA的分子构的分子构型，干扰型，干扰DNADNA的复制与转录，导致细菌的的复制与转录，导致细菌的 死亡或变异。可产生臭氧和过氧化氢。杀死亡或变异。可产生臭氧和过氧化氢。杀 菌效力与强度和时间的乘积成正比。菌效力与强度和时间的乘积成正比。缺点：穿透力不大。距照射物缺点：穿透力不大。距照射物1.2m1.2m为宜。为宜。紫外线释放的能量较低，故
20、穿透力较弱，紫外线释放的能量较低，故穿透力较弱，普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线。普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线。应用应用：只能用于手术室、传染病房、细菌实验室的：只能用于手术室、传染病房、细菌实验室的空气消毒，或用于不耐热物品的表面消毒。空气消毒，或用于不耐热物品的表面消毒。注意事项注意事项：杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼睛：杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用，使用时应注意防护。有损伤作用，使用时应注意防护。2.2.电离辐射电离辐射：包括高速电子、：包括高速电子、X X射线和射线和射线等。射线等。在足够剂量时，对各种细菌均有致死作用。其机制在足够剂量时，对各
21、种细菌均有致死作用。其机制在于产生游离基，破坏在于产生游离基，破坏DNADNA。电离辐射常用于大量。电离辐射常用于大量一次性医用塑料制品的消毒，亦可用于食品的消毒，一次性医用塑料制品的消毒，亦可用于食品的消毒，而不破坏其营养成分。而不破坏其营养成分。(三三)滤过除菌法滤过除菌法：是用物理阻留的方法将液体或空气中的：是用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去。所用的器具是滤菌器细菌除去。所用的器具是滤菌器(filter)(filter)。滤菌器含有微细。滤菌器含有微细小孔，只允许液体或气体通过，而大于其孔经的细菌等颗粒小孔，只允许液体或气体通过，而大于其孔经的细菌等颗粒不能通过。不能通过。滤过除
22、菌主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素，滤过除菌主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素，以及空气等的除菌。以及空气等的除菌。目前过滤除菌采用两类器具，一类叫深层滤器，例如用烧结目前过滤除菌采用两类器具，一类叫深层滤器，例如用烧结玻璃、不上釉的陶瓷颗粒或石棉压成的滤板等：另一类是滤玻璃、不上釉的陶瓷颗粒或石棉压成的滤板等：另一类是滤膜。深层滤器已经使用了膜。深层滤器已经使用了100100年以上，现在有逐渐被滤膜取年以上，现在有逐渐被滤膜取代的趋势，但因为大量沉淀物容易堵塞滤膜，所以一般先用代的趋势，但因为大量沉淀物容易堵塞滤膜，所以一般先用深层滤器除去大的颗粒。深层滤器除去大的颗粒
23、。滤膜一般由醋酸纤维素、硝酸纤维素、多聚碳酸酯、聚偏氟滤膜一般由醋酸纤维素、硝酸纤维素、多聚碳酸酯、聚偏氟乙烯等合成纤维材料制成。滤膜的孔径一般为乙烯等合成纤维材料制成。滤膜的孔径一般为0.20.2微米，它微米，它可以滤除绝大多数微生物的营养细胞。过滤法的最大缺点是可以滤除绝大多数微生物的营养细胞。过滤法的最大缺点是不能滤除病毒。不能滤除病毒。注意事项：注意事项：1 1、压力适当；、压力适当；2 2、无菌条件下进行；、无菌条件下进行；3 3、防止渗透现象。、防止渗透现象。我们来看一下滤膜灭菌是如何工作的。如左图所示，我们来看一下滤膜灭菌是如何工作的。如左图所示，在一个漏斗形容器上部放置数片滤膜
24、。右图是整个过在一个漏斗形容器上部放置数片滤膜。右图是整个过滤系统。待除菌的液体装在三角瓶中（滤系统。待除菌的液体装在三角瓶中（1 1），用蠕动），用蠕动泵（泵（2 2）将液体抽到过滤器（）将液体抽到过滤器（3 3）内，滤过的液体进入）内，滤过的液体进入事先灭菌的瓶子中。事先灭菌的瓶子中。如果是灭菌少量液体，可以采用一如果是灭菌少量液体，可以采用一种简单的的滤器。种简单的的滤器。过滤法用途广泛，除在饮料、药物过滤法用途广泛，除在饮料、药物生产中使用外，空气也常常用过滤生产中使用外，空气也常常用过滤法除菌。我们通常做微生物学实验法除菌。我们通常做微生物学实验时灭过菌的容器一般用棉花塞堵在时灭过菌
25、的容器一般用棉花塞堵在出口处，实际上就是过滤除去空气出口处，实际上就是过滤除去空气中的微生物，使进入容器的空气中中的微生物，使进入容器的空气中没有微生物污染。微生物学实验室没有微生物污染。微生物学实验室使用的超净台也是用过滤法除菌。使用的超净台也是用过滤法除菌。(四四)超声波杀菌超声波杀菌(五五)干燥与低温：干燥能引起细菌蛋白质的变性和盐类的浓缩，干燥与低温：干燥能引起细菌蛋白质的变性和盐类的浓缩，妨碍细菌的生长或导致死亡。细菌的种类对干燥的抵抗力差异妨碍细菌的生长或导致死亡。细菌的种类对干燥的抵抗力差异很大。浓缩的盐溶液或糖溶液可使细菌脱水而停止生命活动，很大。浓缩的盐溶液或糖溶液可使细菌脱
26、水而停止生命活动，根据这些原理，干燥方法可保存食品。根据这些原理，干燥方法可保存食品。低温可以杀死细菌，特别是反复冻融时更易破坏细菌细胞的生低温可以杀死细菌，特别是反复冻融时更易破坏细菌细胞的生命。这是由于冰冻过程中细菌胞内水分被胞外冰冻结晶吸收造命。这是由于冰冻过程中细菌胞内水分被胞外冰冻结晶吸收造成电解质浓缩和菌体蛋白变性，胞壁受损使胞内有机物成电解质浓缩和菌体蛋白变性，胞壁受损使胞内有机物(包括包括核酸、肽类等核酸、肽类等)随之漏出，致使细菌死亡。随之漏出，致使细菌死亡。实际工作中低温（实际工作中低温（4 488）应用于保存菌种或标本。目前保存）应用于保存菌种或标本。目前保存菌种较好的方
27、法是真空冷冻干燥法。将细菌迅速冷冻干燥可维菌种较好的方法是真空冷冻干燥法。将细菌迅速冷冻干燥可维持生命数年之久，而不致改变其毒力及抗原性。此方法可保存持生命数年之久，而不致改变其毒力及抗原性。此方法可保存菌种、毒种和生物制品菌种、毒种和生物制品 。原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。杀菌剂原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。杀菌剂如重金属离子；抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。如重金属离子；抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以及微生物所处的环境有关。及微生物所处的环境有关。常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸常用化学
28、杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸 、福尔马、福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等二、化学消毒灭菌法常用消毒剂种类常用消毒剂种类类别类别作用机制作用机制常用种类常用种类酚类酚类蛋白变性，细胞膜损蛋白变性，细胞膜损伤伤石炭酸石炭酸醇类醇类蛋白变性蛋白变性乙醇乙醇氧化剂氧化剂氧化、蛋白沉淀氧化、蛋白沉淀高锰酸甲高锰酸甲重金属盐重金属盐氧化、蛋白酶变性氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞红汞、硫柳汞氧化剂氧化剂氧化、蛋白沉淀氧化、蛋白沉淀过氧乙酸、碘酒过氧乙酸、碘酒表面活性表面活性剂剂蛋白变性，细胞膜损蛋白变性，细胞膜损伤伤新洁而灭新洁而灭染料染料干扰氧化、抑制繁殖干扰氧化、抑制繁殖
29、 龙胆紫龙胆紫1.1.酚类酚类（1 1）石炭酸：）石炭酸：2%2%5%5%，用于器械、排泄物消毒。，用于器械、排泄物消毒。（2 2）来苏儿）来苏儿3%3%5%5%，用于器械、排泄物、家俱、地面消毒；，用于器械、排泄物、家俱、地面消毒；1%1%2%2%用于手、皮肤消毒。用于手、皮肤消毒。（3 3）洗必泰：）洗必泰：0.01%0.01%0.05%0.05%，用于术前洗手，阴道冲洗等。，用于术前洗手，阴道冲洗等。2.2.醇类醇类 酒精：酒精：70%70%75%75%，用于皮肤、体温计消毒，不适用于伤，用于皮肤、体温计消毒，不适用于伤口、粘膜。口、粘膜。3.3.氧化剂氧化剂（1 1）高锰酸钾：）高锰酸
30、钾：0.1%0.1%，用于皮肤粘膜、水果、蔬菜、餐具等消毒。，用于皮肤粘膜、水果、蔬菜、餐具等消毒。（2 2）过氧化氢：）过氧化氢：3%3%，用于皮肤创伤、化脓性炎症、厌氧菌感染消，用于皮肤创伤、化脓性炎症、厌氧菌感染消毒。毒。（3 3）过氧乙酸：）过氧乙酸：0.2%0.2%0.5%0.5%，用于塑料、玻璃、人造纤维消毒，用于塑料、玻璃、人造纤维消毒，皮肤消毒皮肤消毒(洗手洗手)。各种消毒剂的应用（4 4）碘伏：）碘伏：2%2%5%5%，用于皮肤消毒。，用于皮肤消毒。（5 5）氯：）氯：0.20.20.5ppm0.5ppm，用于饮水和游泳池水的消毒。，用于饮水和游泳池水的消毒。（6 6）漂白粉
31、：）漂白粉：10%10%20%20%，用于排泄物、地面、厕所消毒，饮，用于排泄物、地面、厕所消毒，饮水消毒。水消毒。4.4.重金属盐类重金属盐类（1 1）硝酸银：）硝酸银：1%1%，用于新生儿滴眼，预防淋球菌感染。，用于新生儿滴眼，预防淋球菌感染。（2 2）红汞：）红汞：2%2%，用于皮肤、粘膜和小创伤消毒，用于皮肤、粘膜和小创伤消毒5.5.表面活性剂表面活性剂（1 1）新洁尔灭：）新洁尔灭：0.1%0.1%，用于手术器械消毒、外科手术洗手；，用于手术器械消毒、外科手术洗手；0.01%0.01%0.05%0.05%用于粘膜及深部伤口感染消毒。用于粘膜及深部伤口感染消毒。（2 2）消毒净：）消毒
32、净：0.1%0.1%，用于手术器械消毒、外科手术洗手。，用于手术器械消毒、外科手术洗手。6.6.烷化剂烷化剂 甲醛：甲醛：10%10%，用于浸泡、物品表面消毒、蒸气消毒。，用于浸泡、物品表面消毒、蒸气消毒。7.7.染料及酸碱类。染料及酸碱类。影响消毒作用的因素影响消毒作用的因素 1.消毒剂的浓度和作用时间消毒剂的浓度和作用时间 2.环境有机物的存在环境有机物的存在 3.细菌的种类细菌的种类 4.温度温度 5.pH值值介绍常用灭菌器材介绍常用灭菌器材1、手提式高压蒸汽灭菌器手提式高压蒸汽灭菌器 凡耐高温的普通培养基、药品、凡耐高温的普通培养基、药品、手术器械、外科敷料等，均可手术器械、外科敷料等
33、，均可用此法灭菌。为保证灭菌效果用此法灭菌。为保证灭菌效果和安全，器内要加入足量的水，和安全，器内要加入足量的水，装入的物品不要过挤，冷空气装入的物品不要过挤，冷空气必须排尽，注意压力表的工作必须排尽，注意压力表的工作情况，防止压力表失灵而造成情况，防止压力表失灵而造成事故事故 使用方法：使用方法：(1)(1)先将筒内注水，然后把要灭菌的物品装入内筒，再先将筒内注水，然后把要灭菌的物品装入内筒，再把盖拧紧，打开排气阀门，开始加热。把盖拧紧，打开排气阀门，开始加热。(2)(2)水沸腾后，排气阀门开始排出气体，待筒内气体全水沸腾后，排气阀门开始排出气体，待筒内气体全部排出后，关闭排气阀门。部排出后
34、，关闭排气阀门。(3)(3)筒内压力达到要求时，调节热源，维持筒内压力达到要求时，调节热源，维持1031034kPa4kPa、121121，20-30min20-30min，即可达到灭菌的目的。，即可达到灭菌的目的。(4)(4)关闭热源，自然放凉，待压力表指针下降到零时，关闭热源，自然放凉，待压力表指针下降到零时，方可开盖取物。方可开盖取物。注意事项：注意事项：1 1）冷空气彻底排除；）冷空气彻底排除；）加水；）加水；3 3）压力降为）压力降为“0”0”时方可打开时方可打开。在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨
35、胀压大的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表力与温度的关系见表 干热湿热穿透力及灭菌效果比较透过布层的温度/20层10层100层干热1301404867270.5不完全湿热105.33101101101完全2、干烤箱 干烤箱是用两层金属板制成的方形箱，干烤箱是用两层金属板制成的方形箱，中间充满石棉，箱底有热源中间充满石棉，箱
36、底有热源(电炉电炉)，并附有温度计和自动温度调节器。灭并附有温度计和自动温度调节器。灭菌时，打开通气口，加热到菌时，打开通气口，加热到8080时，时，关闭通气口，待温度上升关闭通气口，待温度上升到到160-170160-170时，保持时，保持2h2h。最高温度。最高温度不得超过不得超过180180，超过，超过180180棉塞和棉塞和包装纸会被烤焦。灭菌后，待温度包装纸会被烤焦。灭菌后，待温度下降下降4040以下，再开箱取物。否则，以下，再开箱取物。否则，冷空气突然进入，玻璃器材会炸裂。冷空气突然进入，玻璃器材会炸裂。耐高温的玻璃器材、瓷器等常用此法灭菌，如耐高温的玻璃器材、瓷器等常用此法灭菌，
37、如培养细菌用的试管、平皿、吸管等。经清洗和培养细菌用的试管、平皿、吸管等。经清洗和晾干后，烧瓶和试管口要塞上棉塞，平皿和吸晾干后，烧瓶和试管口要塞上棉塞，平皿和吸管要放入特制的筒内或用纸包好后再行灭菌，管要放入特制的筒内或用纸包好后再行灭菌，以使灭菌后的器材保持无菌状态。以使灭菌后的器材保持无菌状态。油浸镜的原理、使用、保护 显微镜的使用方法显微镜的使用方法 显微镜是医学实验中常用的仪器，显微镜是医学实验中常用的仪器，尤其对作为形态学科的病原生物学尤其对作为形态学科的病原生物学来说，显微镜更是必不可少的仪器来说，显微镜更是必不可少的仪器之一。所以要求医学类专业的学生之一。所以要求医学类专业的学
38、生必须熟练掌握显微镜的使用方法，必须熟练掌握显微镜的使用方法，特别是油浸镜的使用方法。特别是油浸镜的使用方法。一、普通光镜的基本结构一、普通光镜的基本结构 无论其外观形状如何，它都由两部分构成，即无论其外观形状如何，它都由两部分构成，即机械部分和光学部分。机械部分包括镜座、镜臂、机械部分和光学部分。机械部分包括镜座、镜臂、载物台及台上的标本推进器、镜筒、物镜转换盘以载物台及台上的标本推进器、镜筒、物镜转换盘以及升降调节器等，其主要作用是支撑、固定镜头，及升降调节器等，其主要作用是支撑、固定镜头，调节物像焦距，搁置和移动标本。光学系统包括反调节物像焦距，搁置和移动标本。光学系统包括反光镜、聚光器
39、，物镜和目镜。它的作用是收集光源光镜、聚光器，物镜和目镜。它的作用是收集光源并聚集于标本上，然后通过透镜放大成像映于眼帘，并聚集于标本上，然后通过透镜放大成像映于眼帘，使肉眼本不能分辨的物体得以清楚观察。使肉眼本不能分辨的物体得以清楚观察。光学系统是光学显微镜的核心部分，而物镜有光学系统是光学显微镜的核心部分，而物镜有又是其中最重要的部件。一般的光镜配有又是其中最重要的部件。一般的光镜配有3 34 4个物个物镜（镜（4 4倍、倍、1010倍、倍、4040倍、和倍、和100100倍），标本的放大主倍），标本的放大主要靠物镜。为了使用方便，常用红、黄、蓝、白的要靠物镜。为了使用方便，常用红、黄、蓝
40、、白的色圈分别标记物镜倍数。另外，在镜头上还刻有一色圈分别标记物镜倍数。另外，在镜头上还刻有一些符号和数值来表示放大倍数、镜口率、镜筒长度、些符号和数值来表示放大倍数、镜口率、镜筒长度、盖玻片厚度等。盖玻片厚度等。二、普通光镜的使用方法二、普通光镜的使用方法 使用方法：使用方法：双手托持显微镜，轻拿轻放。双手托持显微镜，轻拿轻放。检查显微镜有无问题，如发现问题，立即向任课教检查显微镜有无问题，如发现问题，立即向任课教师报告。师报告。调光。检查未染色标本时，以弱光线为宜，此时可调光。检查未染色标本时，以弱光线为宜，此时可将集光撂下降或缩小光栅。检查染色标本时，以强将集光撂下降或缩小光栅。检查染色
41、标本时，以强光线为宜，此时应适当升高集光器或将光栅打开。光线为宜，此时应适当升高集光器或将光栅打开。自然光源用平面反光镜，人工光源用囚面反光镜。自然光源用平面反光镜，人工光源用囚面反光镜。标本观察。将标本置于载物台上，先用低倍镜标本观察。将标本置于载物台上，先用低倍镜观察。用粗调节器调出物像后，再用细调节器调观察。用粗调节器调出物像后，再用细调节器调出清晰物像。在换高倍镜观察时，由于高倍镜视出清晰物像。在换高倍镜观察时，由于高倍镜视野范围比低倍镜小，故须先将观察内容移至视野野范围比低倍镜小，故须先将观察内容移至视野中央后再换之。有时显微镜存在偏心现象，此时中央后再换之。有时显微镜存在偏心现象，
42、此时要记住其偏心的方向和距离。寄生虫标本绝大多要记住其偏心的方向和距离。寄生虫标本绝大多数为封片标本，有一定厚度，因此在观察时应不数为封片标本，有一定厚度，因此在观察时应不断调节细调节器。断调节细调节器。三、三、油浸镜的原理、使用、保护油浸镜的原理、使用、保护 原理：显微镜的放大倍数与玻璃透镜的大小有原理：显微镜的放大倍数与玻璃透镜的大小有关。油镜的透镜小，镜孔也小，观察时由于聚光器关。油镜的透镜小，镜孔也小，观察时由于聚光器聚集的光源要通过载玻片、空气，才能进入物镜中。聚集的光源要通过载玻片、空气，才能进入物镜中。玻璃与空气的折光率不同，会产生折射，使一部分玻璃与空气的折光率不同，会产生折射
43、，使一部分光线失掉，进入物镜的光线减少，致使观察视野暗光线失掉，进入物镜的光线减少，致使观察视野暗淡，物像不清。如果使用折射率与玻璃相近的油介淡，物像不清。如果使用折射率与玻璃相近的油介质，即可减少折射，增加视野亮度，提高分辨率。质，即可减少折射，增加视野亮度，提高分辨率。物镜干燥系物镜干燥系(A)(A)与油浸系与油浸系(B)(B)的光线能通路如图的光线能通路如图0 02 2所示。所示。油镜头使用原理油镜头使用原理 使用使用：油浸镜观察。应先将集光器升至最高，光栅增至油浸镜观察。应先将集光器升至最高，光栅增至最大。转开物镜镜头，在玻片上加一滴镜油，再转换最大。转开物镜镜头，在玻片上加一滴镜油，
44、再转换油镜头。眼从侧方看，调节粗调节器，使镜头浸入镜油镜头。眼从侧方看，调节粗调节器，使镜头浸入镜油中，以轻轻接触玻片为止油中，以轻轻接触玻片为止(注意勿压碎玻片注意勿压碎玻片)。眼看。眼看目镜，调节粗调节器缓慢下降载物台，看到物像，立目镜，调节粗调节器缓慢下降载物台，看到物像，立即停止，改用细调节器调出清晰物像。观察结束后，即停止，改用细调节器调出清晰物像。观察结束后，应用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭油镜头，再用于擦镜纸应用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭油镜头，再用于擦镜纸擦去残存二甲苯。下降集光器，竖起反光镜，将物镜擦去残存二甲苯。下降集光器，竖起反光镜，将物镜镜头摆成镜头摆成“人人”字型，对号送入镜盒
45、内字型，对号送入镜盒内。保护保护：细调节器是显微镜最精细、最脆弱的细调节器是显微镜最精细、最脆弱的机械部分，只能做有限的旋转。当旋转机械部分，只能做有限的旋转。当旋转中遇到阻力，表明已达到极限，应立即中遇到阻力，表明已达到极限，应立即返回。病原学标本及血涂片标本必须按返回。病原学标本及血涂片标本必须按一定顺序，逐个检查，以免遗漏。一定顺序，逐个检查，以免遗漏。紫外线杀菌试验（示教）紫外线杀菌试验（示教）波长波长200300nm的紫外线具有杀菌作用，其中以的紫外线具有杀菌作用，其中以265266nm最强，这与最强，这与DNA的吸收光谱范围一致。紫外线主要的吸收光谱范围一致。紫外线主要作用于作用于
46、DNA，使一条，使一条DNA链上相邻的二个胸腺嘧啶共价结链上相邻的二个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体，因而改变合而形成双聚体，因而改变DNA的分子构型，干扰的分子构型，干扰DNA的的复制与转录，导致细菌的死亡或变异。复制与转录，导致细菌的死亡或变异。紫外线释放的能量较低，故穿透力较弱，普通玻璃、纸张、紫外线释放的能量较低，故穿透力较弱，普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线，故只能用于手术室、传染尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线，故只能用于手术室、传染病房、细菌实验室的空气消毒，或用于不耐热物品的表面消病房、细菌实验室的空气消毒，或用于不耐热物品的表面消毒。杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼睛有损
47、伤作用，使用毒。杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用，使用时应注意防护。时应注意防护。实验材料：实验材料：（1 1）菌种：）菌种：葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物。葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物。（2 2）培养基）培养基:普通琼脂平板培养基。普通琼脂平板培养基。（3 3）紫外线灯，接种环）紫外线灯，接种环,酒精灯等。酒精灯等。实验方法实验方法(1)(1)按无菌操作法用接种环分别从葡萄球菌、大肠杆菌按无菌操作法用接种环分别从葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物上沾取细菌，反复交叉密涂于平板培养斜面培养物上沾取细菌，反复交叉密涂于平板培养基上基上(注意不要划破培养基注意不要划破培养基)。注明标记。注明标记
48、。(2)(2)打开平皿盖，将小镊子用酒精灯灭菌后，夹取无菌打开平皿盖，将小镊子用酒精灯灭菌后，夹取无菌三角形黑纸片，贴琼脂平板中央，并轻轻压紧。放三角形黑纸片，贴琼脂平板中央，并轻轻压紧。放在紫外线灯管下在紫外线灯管下30cm30cm处，直接照射处，直接照射10min10min。(3)(3)取下黑纸片，取下黑纸片，投入消毒缸内，随即盖上平皿盖，投入消毒缸内，随即盖上平皿盖，置于置于3737培养培养181824h24h观察结果。观察结果。实验方法实验方法(1)(1)按无菌操作法用接种环分别从葡萄球菌、大肠杆按无菌操作法用接种环分别从葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物上沾取细菌，反复交叉密涂于平板菌斜面
49、培养物上沾取细菌，反复交叉密涂于平板培养基上培养基上(注意不要划破培养基注意不要划破培养基)。注明标记。注明标记。(2)(2)打开平皿盖，将小镊子用酒精灯灭菌后，夹取无打开平皿盖，将小镊子用酒精灯灭菌后，夹取无菌三角形黑纸片，贴琼脂平板中央，并轻轻压紧。菌三角形黑纸片，贴琼脂平板中央，并轻轻压紧。放在紫外线灯管下放在紫外线灯管下30cm30cm处，直接照射处，直接照射10min10min。(3)(3)取下黑纸片，取下黑纸片，投入消毒缸内，随即盖上平皿盖，投入消毒缸内，随即盖上平皿盖，置于置于3737培养培养181824h24h观察结果。观察结果。自然界细菌的分布自然界细菌的分布目的：了解细菌在
50、自然界及正常人体的目的：了解细菌在自然界及正常人体的分布，树立严格的无菌操作观念。分布，树立严格的无菌操作观念。1、水中细菌的检查水中细菌的检查2、空气中细菌的检查、空气中细菌的检查3、手指细菌的检查、手指细菌的检查4、口腔中细菌的检查、口腔中细菌的检查水中细菌的检查材料材料高层琼脂培养基高层琼脂培养基、灭菌平皿、灭菌平皿、1mL自来水自来水方法方法采用倾注平板法采用倾注平板法：1、取、取1mL自来水置于灭菌平皿中。自来水置于灭菌平皿中。2、取、取1支溶化且已经冷至支溶化且已经冷至45左右的高层琼脂培左右的高层琼脂培养基养基 倾入平皿中，与自来水混匀后静置待凝。倾入平皿中，与自来水混匀后静置待
