1、实验兔血清免疫球蛋实验兔血清免疫球蛋白分离和纯化白分离和纯化实验一实验一 兔血清免疫球蛋白分离兔血清免疫球蛋白分离四、实验步骤四、实验步骤1 兔免疫血清的制备兔免疫血清的制备（1）取制备好的血清）取制备好的血清20ml，逐滴加入（，逐滴加入（NH4）2SO4饱和溶液饱和溶液20ml，使成，使成50%（NH4）2SO4溶液，边加边搅拌，充分混合后，溶液，边加边搅拌，充分混合后，静置静置10min。（2）3000r/min离心离心10min，弃去上清。，弃去上清。（3）用）用6ml磷酸盐缓冲液溶解沉淀，再加（磷酸盐缓冲液溶解沉淀，再加（NH4）2SO4饱和溶液饱和溶液3ml，使成，使成33%（NH
2、4）2SO4溶液，充分混合，静置溶液，充分混合，静置10min。（4）3000r/min离心离心10min，弃上清。，弃上清。（5）为进一步纯化，可重复步骤）为进一步纯化，可重复步骤3 23次。次。（6）用）用5mlPBS溶解沉淀，装入透析袋。溶解沉淀，装入透析袋。（7）透析除盐，中间换液数次，至奈氏试剂测透析外液）透析除盐，中间换液数次，至奈氏试剂测透析外液无黄色。无黄色。蛋白含量（蛋白含量（mg/mL）（1.45OD 280nm 0.74 OD 260nm）样品稀释度样品稀释度 注：式中注：式中1.45与与0.74为常数，为常数，nm为波长。为波长。蛋白质及其定量鉴定：取样品少许作适量稀释，以紫蛋白质及其定量鉴定：取样品少许作适量稀释，以紫外分光光度计测量蛋白含量外分光光度计测量蛋白含量 260、280nm处读数处读数
