1、 免疫磁性微粒分离与纯化技术免疫磁性微粒分离与纯化技术 磁性微粒磁性微粒(magnetic microspheres,MMS)是是80年代初，用高分子材料和金属年代初，用高分子材料和金属离子为原料，聚合而成的离子为原料，聚合而成的一种以金属离子一种以金属离子为核心，外层均匀地包裹高分子聚合体的为核心，外层均匀地包裹高分子聚合体的固相微粒固相微粒。在液相中，受外加磁场的吸引在液相中，受外加磁场的吸引作用，作用，MMS可快速沉降而自行分离，无可快速沉降而自行分离，无需进行离心沉淀需进行离心沉淀。因此，将。因此，将MMS应用于应用于免疫检测，可使操作过程大为简化。免疫检测，可使操作过程大为简化。经过
2、经过特异性抗体包被制成免疫特异性抗体包被制成免疫MMS，与检样，与检样中的抗原结合形成免疫中的抗原结合形成免疫MMS-靶分子靶分子(或靶或靶细胞细胞)复合体复合体，通过外加磁场的作用即可，通过外加磁场的作用即可与其他成分分离开来。再以适当方式使复与其他成分分离开来。再以适当方式使复合体解离，在磁场吸引下除去游离的免疫合体解离，在磁场吸引下除去游离的免疫MMS，即，即可获得纯化的靶分子或细胞可获得纯化的靶分子或细胞 11/5/20221肿瘤标志物专题知识讲座放射免疫技术放射免疫技术 是利用放射性核素可探测的灵敏度、精确度和抗原抗体反应特异是利用放射性核素可探测的灵敏度、精确度和抗原抗体反应特异性
3、相结合的一种免疫技术。灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及性相结合的一种免疫技术。灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量小是其优点；但核素的放射性，对工作人员和环境易造成危试剂用量小是其优点；但核素的放射性，对工作人员和环境易造成危害和污染，是其缺点害和污染，是其缺点放射免疫分析放射免疫分析【RIA】是是标记抗原标记抗原（Ag*）和非标记抗原（）和非标记抗原（Ag）对有限量的）对有限量的特异性抗体特异性抗体竞争性结合反应竞争性结合反应Ag*AgAb Ag*AbAg*AgAb第二Ab法聚乙二醇沉淀法PR法活性炭吸附法分离免疫放射分析免疫放射分析【IRMA】是是非竞争性免疫结合反应非竞争性免
4、疫结合反应，用过量的放射性核素，用过量的放射性核素标记抗体标记抗体（Ab*）与待测抗原反应，待充分反应后，除去游离的与待测抗原反应，待充分反应后，除去游离的Ab*，AgAb*Ab*结结合物的放射性强度与待测抗原呈正比关系合物的放射性强度与待测抗原呈正比关系AgAb*=AgAb*Ab*Ag双点位IRMA单点位IRMAAg固相抗原Ag11/5/20222肿瘤标志物专题知识讲座放射免疫分析【放射免疫分析【RIA】模式】模式放射免疫分析广义还包括放射受体分析及放射配体结合分析放射免疫分析广义还包括放射受体分析及放射配体结合分析放射免疫分析常用的放射性核素有放射免疫分析常用的放射性核素有125I、130
5、I、3H、14C等等11/5/20223肿瘤标志物专题知识讲座基因芯片技术基因芯片技术基因芯片（基因芯片（Gene Chip）通常指）通常指DNA芯片，其芯片，其基本原理是将指大量寡核苷酸分子固定于支持基本原理是将指大量寡核苷酸分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量11/5/20224肿瘤标志物专题知识讲座 蛋白芯片技术蛋白芯片技术蛋白芯片是将大量蛋蛋白芯片是将大量蛋白质分子按预先设置白质分子按预先设置的排列固定于一种载的排列固定于一种载体表面行成微阵列，体表
6、面行成微阵列，根据蛋白质分子间特根据蛋白质分子间特异性结合的原理，构异性结合的原理，构建微流体生物化学分建微流体生物化学分析系统，以实现对生析系统，以实现对生物分子的准确、快速、物分子的准确、快速、大 信 息 量 的 检 测大 信 息 量 的 检 测11/5/20225肿瘤标志物专题知识讲座605040302010 0肿瘤患者肿瘤患者%7.0 7.0 4.2 7.0 7.4临界值临界值(ng g/ml)5033282722在实体肿瘤患者中在实体肿瘤患者中,CEA特异性为特异性为95%时的敏感性时的敏感性参考值范围：参考值范围：3ng g/ml在实体肿瘤患者中在实体肿瘤患者中CEA表达状况表达状
7、况11/5/20226肿瘤标志物专题知识讲座100 80 60 40 20(%)959127142293900 15 15100 1001000 100010,000 10,000100,000原发性肝细胞癌原发性肝细胞癌肝转移癌肝转移癌AFP(ng/ml)g/ml)原发性肝细胞癌原发性肝细胞癌和其他恶性肿瘤肝转移癌中和其他恶性肿瘤肝转移癌中AFP表达状况表达状况参考值范围：参考值范围：15ng g/ml巨型快多结节型介入介入11/5/20227肿瘤标志物专题知识讲座原发性肝细胞癌和肝转移癌原发性肝细胞癌和肝转移癌AFP和和CEA的表达的表达100 90 80 70 60 50 40 30 2
8、0 10 095992507213(%)AFP15ng/mlg/mlCEA3ng g/mlCEA10ng/mlg/ml原发性肝细胞癌原发性肝细胞癌肝转移癌肝转移癌参考值范围：参考值范围：3ng/ml参考值范围：参考值范围：15ng/ml11/5/20228肿瘤标志物专题知识讲座肺癌中肿瘤标志物的应用肺癌中肿瘤标志物的应用CYFRA21-1CEANSE治疗前治疗前治疗后复查治疗后复查组织类型不明确组织类型不明确腺癌腺癌鳞状细胞癌鳞状细胞癌小细胞肺癌小细胞肺癌大细胞肺癌大细胞肺癌11/5/20229肿瘤标志物专题知识讲座胃癌单项或联合测定胃癌单项或联合测定CEA、CA19-9及及CA72-4的敏感
9、性的敏感性80604020 0敏感性（敏感性（%）272966406672CEA（10.1）CA19-9（96）CA72-4（2.4）CA19-9（107）CEA（10.1）CA72-4（2.4）CA19-9（260）CA72-4（2.4）CEA（10.4）胃癌特异性胃癌特异性95%时时核医学核医学11/5/202210肿瘤标志物专题知识讲座用用ROC曲线解读肺鳞状细胞癌曲线解读肺鳞状细胞癌TM的特异性的特异性1.00.80.60.40.2 01.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0敏感性敏感性(%)特异性特异性(%)CYFRA21-1 CEASCCNSECYFRA21-1对于鳞状细胞肺癌的
10、敏感性可达对于鳞状细胞肺癌的敏感性可达60%，高于，高于SCC，也优于，也优于其他两种其他两种TM，是非小细胞肺癌的，是非小细胞肺癌的TM下面积越大，敏感性与特异性越好11/5/202211肿瘤标志物专题知识讲座血清血清2-m浓度对于生存时间的影响浓度对于生存时间的影响100 80 60 40 20 00 2 4 6 8 10 122-m3.0mg/L3.0 2-m5mg/L2-m5mg/L生存率生存率(%)第一次调查后的年数第一次调查后的年数参考值范围：参考值范围：1.22.5mg/L11/5/202212肿瘤标志物专题知识讲座各种类型肿瘤发生率各种类型肿瘤发生率(不考虑性别不考虑性别)10
11、0 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0271318751252124597073843475467肺肺乳腺乳腺结直肠结直肠胃胃前列腺前列腺卵巢卵巢胰腺胰腺膀胱膀胱宫颈宫颈发生率发生率5年生存率年生存率数据来自数据来自the American Cancer Society11/5/202213肿瘤标志物专题知识讲座肿瘤标志物测定的频率肿瘤标志物测定的频率首次治疗前首次治疗前(手术、放疗、化疗、激素治疗）手术、放疗、化疗、激素治疗）各种治疗后，如术后各种治疗后，如术后210天天（根据肿瘤生物周期而定）（根据肿瘤生物周期而定）首次治疗后首次治疗后12年年3个月检查一次个月检查一
12、次首次治疗后首次治疗后35年年6个月检查一次个月检查一次任何治疗前任何治疗前怀疑有复发或转移怀疑有复发或转移重新分期重新分期肿瘤标志物明显增高后肿瘤标志物明显增高后46周周11/5/202214肿瘤标志物专题知识讲座影响肿瘤标志物浓度的因素影响肿瘤标志物浓度的因素肝肾功能衰竭、胆道淤积，肝肾功能衰竭、胆道淤积，CA19-9浓度可达浓度可达3000U/ml直肠指检、膀胱镜、留置尿管等可导致直肠指检、膀胱镜、留置尿管等可导致PSA、PAP值增高值增高化疗药物作用使肿瘤标志物释放，影响化疗药物作用使肿瘤标志物释放，影响TM检测浓度检测浓度吸烟者血清吸烟者血清CEA可高达可高达1020ng/ml储存不
13、当可使碱磷酶水平下降储存不当可使碱磷酶水平下降放置时间超过放置时间超过1小时，小时，NSE由于血小板释放明显增高由于血小板释放明显增高溶血时红细胞可释放溶血时红细胞可释放NSE；黄疸可使；黄疸可使PSA假阳性增加假阳性增加唾液污染标本对唾液污染标本对SCC、CA19-9的影响大的影响大顺铂、丝裂霉素、雌二醇、顺铂、丝裂霉素、雌二醇、VitC等导致等导致PSA假性增高假性增高11/5/202215肿瘤标志物专题知识讲座临床用于筛查和判断预后价值的临床用于筛查和判断预后价值的TMAFPAFP用于肝硬化患者的筛查用于肝硬化患者的筛查降钙素用于可疑甲状腺髓样癌的筛查降钙素用于可疑甲状腺髓样癌的筛查AF
14、PAFP和和HCGHCG用于可疑胚胎细胞肿瘤的筛查用于可疑胚胎细胞肿瘤的筛查单克隆单克隆IgIg及本周氏蛋白对可疑多发性骨髓瘤的筛查及本周氏蛋白对可疑多发性骨髓瘤的筛查PSAPSA对对5050岁以上有前列腺疾病患者的筛查岁以上有前列腺疾病患者的筛查CEACEA对大肠癌治疗跟踪对大肠癌治疗跟踪AFPAFP和和HCGHCG对胚胎细胞肿瘤的治疗跟踪对胚胎细胞肿瘤的治疗跟踪2-M2-M对多发性骨髓瘤的治疗跟踪对多发性骨髓瘤的治疗跟踪科学应用科学应用杜绝浪费杜绝浪费避免伤害避免伤害11/5/202216肿瘤标志物专题知识讲座正确分析、解释肿瘤标志物结果正确分析、解释肿瘤标志物结果检查治疗效果检查治疗效果
15、 根据根据TMTM变化可提早反映临床治疗是否有效变化可提早反映临床治疗是否有效监测疾病进程监测疾病进程 如如CEACEA对大肠癌可提早对大肠癌可提早6 6个月提示复发和转移个月提示复发和转移鉴别残余肿瘤鉴别残余肿瘤 卵巢癌术后卵巢癌术后CA125CA125持续或继发性增高持续或继发性增高早期发现早期发现 肝硬化、前列腺癌、大肠多发性息肉等肝硬化、前列腺癌、大肠多发性息肉等判断某些肿瘤预后判断某些肿瘤预后 如多发性骨髓瘤预后直接干预治疗方案如多发性骨髓瘤预后直接干预治疗方案11/5/202217肿瘤标志物专题知识讲座结结 语语 正确使用肿瘤标志物对于患者帮助正确使用肿瘤标志物对于患者帮助巨大，甚至可以降低费用，相反，若巨大，甚至可以降低费用，相反，若使使用错误，则会给患者造成沉重的经济负用错误，则会给患者造成沉重的经济负担和心理创伤。不能正确地评价检测结担和心理创伤。不能正确地评价检测结果甚至会导致错误的治疗策略果甚至会导致错误的治疗策略11/5/202218肿瘤标志物专题知识讲座
