1、第15章免疫细胞功能检测技术医大一院检验科医大一院检验科本章内容吞噬细胞功能检测技术吞噬细胞功能检测技术 免疫细胞功能检测的临床应用免疫细胞功能检测的临床应用免疫细胞功能检测技术免疫细胞功能检测技术 淋巴细胞的功能检测淋巴细胞的功能检测免疫细胞淋巴淋巴细胞群细胞群识别特异性抗识别特异性抗原原，被激活显，被激活显示出特异性应答示出特异性应答吞噬吞噬细胞细胞T细胞细胞B细胞细胞NK细胞细胞中性粒中性粒细胞细胞巨噬巨噬细胞细胞树突状树突状细胞细胞捕获抗原，处理捕获抗原，处理抗原，提呈给淋抗原，提呈给淋巴细胞或表现其巴细胞或表现其他免疫功能他免疫功能一、一、T细胞功能的检测细胞功能的检测 二、二、B细
2、胞功能检测细胞功能检测 三、三、NK细胞活性测定细胞活性测定第一节第一节 淋巴细胞的淋巴细胞的功能检测功能检测淋巴细胞淋巴细胞T细胞细胞NK和和K细胞细胞B细胞细胞细胞免疫功能细胞免疫功能非特异性免疫作用非特异性免疫作用体液免疫功能体液免疫功能淋巴细胞功能测定间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应有丝分裂原的应答反应体内实验体内实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定试验及淋巴细胞分泌产物的测定体外实验体外实验4T细胞增殖试验细胞增殖试验
3、123T细胞介导的细胞毒试验细胞介导的细胞毒试验T细胞分泌功能测定细胞分泌功能测定体内试验体内试验一、一、T细胞功能的检测细胞功能的检测（一）T细胞增殖试验DNA合成合成刺激刺激分化分化有丝分裂有丝分裂原原/抗原抗原淋巴淋巴细胞细胞淋巴淋巴母细胞母细胞细胞变大细胞变大细胞浆扩大细胞浆扩大空泡空泡核仁明显核仁明显核染色质疏松核染色质疏松空泡空泡 未转化和转化淋巴细胞的形态特征未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞淋巴母细胞 过渡型过渡型细胞大小细胞大小(直径直径m)m)12122020121216166 68 8核大小、染色质核大小、
4、染色质增大、疏松增大、疏松增大、疏松增大、疏松不增大、密集不增大、密集核仁核仁清晰、清晰、1 14 4个个有或无有或无无无有丝分裂有丝分裂有或无有或无无无无无胞质、着色胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色极少、天青色浆内空泡浆内空泡有或无有或无有或无有或无无无伪足伪足有或无有或无有或无有或无无无检测方法（1）形态学检查法）形态学检查法（2）3H-TdR掺入法掺入法优点：简便易行优点：简便易行缺点：重复性和准确性差缺点：重复性和准确性差刺激物刺激物PHAConA优点：敏感性高，客观性强优点：敏感性高，客观性强 重复性好重复性好缺点：设备条件缺点：设备条件 放射性核素污染
5、放射性核素污染%100胞数转化和未转化的淋巴细转化的淋巴细胞数转化率淋巴细胞（淋巴细胞（4-6天）天）母细胞化母细胞化 淋巴细胞淋巴细胞DNA合成期合成期 3HTdR掺入掺入 测定细胞内的测定细胞内的3H均 值对照孔A均 值试验孔A570nm570nmSI（3）MTT比色法比色法PHA刺激管cpm均值对照管cpm均值SI=优点：操作简便，无放射性污染优点：操作简便，无放射性污染缺点：敏感性低于缺点：敏感性低于3H-TdR掺入法掺入法培养终止前加入培养终止前加入MTT 测定溶解的甲臜测定溶解的甲臜(二)T细胞分泌功能测 体外培养的体外培养的T T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后细胞经各种丝裂原或抗原
6、刺激后,分泌各分泌各种细胞因子种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映反映T T细胞功能。细胞功能。（三）T细胞介导的细胞毒试验靶细胞靶细胞抗原抗原靶细胞杀伤活力靶细胞杀伤活力T细胞细胞致敏致敏CTL检测方法（1）形态学方法形态学方法（2）51Cr释放释放法法 CTL淋巴细胞淋巴细胞+肿瘤细胞肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞计数残留肿瘤细胞淋巴细胞淋巴细胞+含含51Cr 的肿瘤细胞的肿瘤细胞 测定测定射线射线肿瘤患者肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能
7、力杀伤肿瘤细胞的能力：判断预后，观察疗效判断预后，观察疗效 PHA皮试皮试非特异性刺激非特异性刺激T细胞发细胞发生母细胞转化生母细胞转化（四）体内试验Please write down about details of introducing your company.(Vision,duties,and customer service of company)Add your vision in here特异性抗原皮试特异性抗原皮试结核结核白色念珠菌白色念珠菌皮肤毛癣菌素皮肤毛癣菌素腮腺炎病毒等腮腺炎病毒等迟发型超敏迟发型超敏反应反应4B细胞增殖能力的试验细胞增殖能力的试验123B细胞抗体形
8、成功能的检测细胞抗体形成功能的检测溶血空斑试验溶血空斑试验体内试验体内试验二、二、B细胞功能的检测细胞功能的检测（一）B细胞增殖试验DNA合成合成刺激刺激分化分化有丝分裂有丝分裂原原/抗原抗原淋巴淋巴细胞细胞淋巴淋巴母细胞母细胞细胞变大细胞变大细胞浆扩大细胞浆扩大空泡空泡核仁明显核仁明显核染色质疏松核染色质疏松空泡空泡 未转化和转化淋巴细胞的形态特征未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞淋巴母细胞 过渡型过渡型细胞大小细胞大小(直径直径m)m)12122020121216166 68 8核大小、染色质核大小、染色质增大、疏松增大、疏
9、松增大、疏松增大、疏松不增大、密集不增大、密集核仁核仁清晰、清晰、1 14 4个个有或无有或无无无有丝分裂有丝分裂有或无有或无无无无无胞质、着色胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色极少、天青色浆内空泡浆内空泡有或无有或无有或无有或无无无伪足伪足有或无有或无有或无有或无无无检测方法（1）形态学检查法）形态学检查法（2）3H-TdR掺入法掺入法优点：简便易行优点：简便易行缺点：重复性和准确性差缺点：重复性和准确性差刺激物刺激物SPA/抗抗IgM(人人)LPS（鼠）（鼠）优点：敏感性高，客观性强优点：敏感性高，客观性强 重复性好重复性好缺点：设备条件缺点：设备条件 放射性核
10、素污染放射性核素污染%100胞数转化和未转化的淋巴细转化的淋巴细胞数转化率淋巴细胞（淋巴细胞（4-6天）天）母细胞化母细胞化 淋巴细胞淋巴细胞DNA合成期合成期 3HTdR掺入掺入 测定细胞内的测定细胞内的3H均 值对照孔A均 值试验孔A570nm570nmSI（3）MTT比色法比色法PHA刺激管cpm均值对照管cpm均值SI=优点：操作简便，无放射性污染优点：操作简便，无放射性污染缺点：敏感性低于缺点：敏感性低于3H-TdR掺入法掺入法培养终止前加入培养终止前加入MTT 测定溶解的甲？测定溶解的甲？（二）溶血空斑试验经典溶血空斑试验经典溶血空斑试验被动溶血空斑试验被动溶血空斑试验检测抗体：抗
11、检测抗体：抗RBC抗体抗体检测抗体：抗检测抗体：抗SRBC吸附抗原的抗体吸附抗原的抗体用于测定药物和手术等因用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响素对体液免疫功能的影响评价免疫治疗或免疫重建评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。后机体产生抗体的能力。(三)B细胞抗体形成功能的检测 酶联免疫斑点法l可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。l优点：优点：稳定、特异、抗原用量少；稳定、特异、抗原用量少；可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。可检测组织切片中
12、分泌抗体的单个细胞。（四）体内试验体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后后1 1周、周、2 2周、周、3 3周分别采血，分离血清，测定受检者免周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B B细胞的功能。细胞的功能。三、NK细胞活性测定三、NK细胞活性测定形态法形态法酶释放法酶释放法 放射性核放射性核素释放法素释放法化学发光化学发光
13、测测CPM值值染色计数染色计数上清上清LDH或或AKP测发光强度测发光强度杀伤肿瘤细胞杀伤肿瘤细胞K562方法学评价：方法学评价：简便简便有主观性有主观性方法学评价：方法学评价：经济、快速、简便、可定量经济、快速、简便、可定量敏感性较低敏感性较低方法学评价：方法学评价：敏感性高，客观精确敏感性高，客观精确设备要求，核素污染设备要求，核素污染方法学评价：方法学评价：快速、简便、样品量少，敏快速、简便、样品量少，敏感，可定量感，可定量一、一、中性粒细胞功能检测技术中性粒细胞功能检测技术二、二、巨噬细胞功能检测技术巨噬细胞功能检测技术第第二节二节 吞噬细胞功能吞噬细胞功能检测技术检测技术吞噬吞噬趋化
14、趋化 胞内杀伤作用胞内杀伤作用细胞趋化功能的检测细胞趋化功能的检测12吞噬和杀菌功能的检测吞噬和杀菌功能的检测一、中性粒细胞功能的检测一、中性粒细胞功能的检测（一）趋化功能检测 原理原理 方法方法滤膜渗透法滤膜渗透法琼脂糖平板法琼脂糖平板法微生物细胞成微生物细胞成分及代谢产物分及代谢产物补体活性片段补体活性片段细胞因子等细胞因子等中性粒细胞中性粒细胞趋化运动趋化运动（二）吞噬和杀菌功能测定100(%)计数的白细胞数吞噬细菌的白细胞数吞噬率100(%)计数的白细胞数数胞内含着染菌体的细胞杀菌率显微镜检查法显微镜检查法溶菌法溶菌法 NBT还原试验还原试验 100min0min9060301(%)）
15、菌落数菌落数或、作用（杀菌率二、巨噬细胞功能的检测4炭粒廓清试验炭粒廓清试验1235巨噬细胞溶酶体酶测定巨噬细胞溶酶体酶测定吞噬功能检测吞噬功能检测细胞毒作用测定细胞毒作用测定巨噬细胞促凝血活性测定巨噬细胞促凝血活性测定给小鼠定量静脉注射印度墨汁给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液炭粒悬液)，间隔，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度用鸡红细胞、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬用鸡红细胞、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。出液获得鼠巨噬细胞。1 1酸
16、性磷酸酶的测定酸性磷酸酶的测定 2 2非特异性酯酶的测定非特异性酯酶的测定 用用IFN-IFN-激活小鼠巨噬细胞，观察其对激活小鼠巨噬细胞，观察其对125I-UdR125I-UdR标记标记DBA/2DBA/2小鼠肥大细胞瘤小鼠肥大细胞瘤P815P815的杀伤活性。的杀伤活性。取已经取已经3737预温的正常兔血浆和预温的正常兔血浆和CaClCaCl2 2混合液，加混合液，加入经粘附有单层巨噬细胞的试管中，移置入经粘附有单层巨噬细胞的试管中，移置3737，即时记录血浆凝固时间。即时记录血浆凝固时间。第三节第三节免疫细胞功能免疫细胞功能检测的临床应用检测的临床应用反映机体免疫功能状态反映机体免疫功能状态肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预后监测后监测组织器官移植后排斥反应的早期发现组织器官移植后排斥反应的早期发现Thank You!此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！
