1、第四章生物化学与分子生物第四章生物化学与分子生物学技术实践学技术实践第四章生物化学与分子生物学技术实践第四章生物化学与分子生物学技术实践栏目栏目导引导引第一节生物成分的分离与测定技术第一节生物成分的分离与测定技术栏目栏目导引导引学习导航学习导航1.尝试蛋白质的提取和分离。尝试蛋白质的提取和分离。(重点重点)2理解蛋白质分离与纯化的原理。理解蛋白质分离与纯化的原理。(重难点重难点)3研究从生物材料中提取某些特定成分。研究从生物材料中提取某些特定成分。(重点重点)4尝试测定生物材料中某些化学物质的含量。尝试测定生物材料中某些化学物质的含量。(难点难点)栏目栏目导引导引新知初探新知初探思维启动思维启
2、动提取步骤提取步骤提取方法提取方法分离生物组织分离生物组织机械破碎机械破碎破碎细胞破碎细胞_、超声波法、超声波法、酶解法等酶解法等抽提：根据蛋白质抽提：根据蛋白质的不同特性，选择的不同特性，选择不同溶剂进行抽提，不同溶剂进行抽提，使蛋白质呈溶解状使蛋白质呈溶解状态释放出来态释放出来酸性蛋白质：用酸性蛋白质：用_抽抽提提水溶性蛋白质：用水溶性蛋白质：用_(中性缓冲中性缓冲液液)抽提抽提脂溶性蛋白质：用脂溶性蛋白质：用_抽抽提提研磨法研磨法稀碱性溶液稀碱性溶液透析液透析液有机溶剂有机溶剂栏目栏目导引导引2.纯化纯化(1)原理：蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之原理：蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间
3、在分子大小、溶解度、间在分子大小、溶解度、_、吸附性质等方面存在差异。吸附性质等方面存在差异。(2)方法方法透析法：利用蛋白质分子不能透过透析法：利用蛋白质分子不能透过_的特性使蛋白质与的特性使蛋白质与_分离分离开来。开来。所带电荷的多少所带电荷的多少半透膜半透膜其他小分子化合物其他小分子化合物栏目栏目导引导引离心沉降法：通过控制离心速率，使得分子离心沉降法：通过控制离心速率，使得分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层。大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层。电泳法电泳法a含义：带电颗粒在电场作用下向着与其电性含义：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象；相反的电极移动的现象；b原理
4、：不同物质在同一电场中的原理：不同物质在同一电场中的_不同；不同；泳动速度泳动速度栏目栏目导引导引c泳动特点：带电颗粒直径越小，越接近于球泳动特点：带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷形，所带净电荷_，则在电场中的泳动速，则在电场中的泳动速度越快；反之，则越慢。度越快；反之，则越慢。越多越多栏目栏目导引导引1(1)常用吸水涨破的方法释放哺乳动物成常用吸水涨破的方法释放哺乳动物成熟的红细胞中的蛋白质。熟的红细胞中的蛋白质。()(2)通过透析可以去除样品中分子质量较大的通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质。杂质。()(3)电泳是带电颗粒在电场作用下向着与其电电泳是带电颗粒在电场作用下向着
5、与其电性相同的电极移动的现象。性相同的电极移动的现象。()判一判判一判栏目栏目导引导引二、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的操作二、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的操作1.原理原理血清蛋白包含一组蛋白质，其大小、形状、所血清蛋白包含一组蛋白质，其大小、形状、所带净电荷各不相同，在电场作用下会发生带净电荷各不相同，在电场作用下会发生_。2.操作流程操作流程配制试剂配制试剂_浸泡薄膜浸泡薄膜细心点样细心点样_实施电泳实施电泳_漂洗漂洗脱色。脱色。电泳电泳架滤纸桥架滤纸桥平悬薄膜平悬薄膜染色染色栏目栏目导引导引3.实验结果分析实验结果分析呈现呈现5条蛋白质色素带，从点样处一侧开始，条蛋白质色素带，从点样处一侧开始
6、，依次是：依次是：-球蛋白、球蛋白、_蛋白、蛋白、2-球球蛋白、蛋白、1-球蛋白和球蛋白和_。-球球清蛋白清蛋白栏目栏目导引导引人们常说的血清蛋白是一种蛋白质吗？说说你了人们常说的血清蛋白是一种蛋白质吗？说说你了解的情况。解的情况。提示：提示：不是一种蛋白质，而是包含多种蛋白质：不是一种蛋白质，而是包含多种蛋白质：清蛋白、清蛋白、1-球蛋白、球蛋白、2-球蛋白、球蛋白、-球蛋白、球蛋白、-球球蛋白。蛋白。想一想想一想栏目栏目导引导引三、从生物材料中提取某些特定成分三、从生物材料中提取某些特定成分芳香油特点：具有芳香油特点：具有_，能与水蒸气一，能与水蒸气一起蒸发，易溶于起蒸发，易溶于_，如石油
7、醚、乙，如石油醚、乙醚或醚或_等。等。橘皮芳香油的特点：橘皮芳香油存在于橘皮芳香油的特点：橘皮芳香油存在于_中，具有一定的中，具有一定的_，其沸点其沸点_水的沸点。水的沸点。植物芳香油提取方法：蒸馏、植物芳香油提取方法：蒸馏、_等。等。挥发性挥发性有机溶剂有机溶剂酒精酒精果皮的油细胞果皮的油细胞挥发性挥发性低于低于萃取萃取栏目栏目导引导引2(1)水蒸气蒸馏法的基本原理是植物芳香油水蒸气蒸馏法的基本原理是植物芳香油易溶于水。易溶于水。()(2)蒸馏装置中进水口在上方，出水口在下方。蒸馏装置中进水口在上方，出水口在下方。()(3)橘皮油可以通过机械加压、压榨出果皮中的橘皮油可以通过机械加压、压榨出
8、果皮中的芳香油进行提取。芳香油进行提取。()判一判判一判栏目栏目导引导引要点突破要点突破讲练互动讲练互动电泳法、影响电泳泳动速度电泳法、影响电泳泳动速度的因素、注意事项及容易产的因素、注意事项及容易产生的几种现象生的几种现象1.电泳法：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相电泳法：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。支持物电泳是目前反的电极移动的现象称为电泳。支持物电泳是目前纯化蛋白质的一种较为普遍的方法。纯化蛋白质的一种较为普遍的方法。栏目栏目导引导引支持物可以是滤纸、醋酸纤维薄膜、大分子支持物可以是滤纸、醋酸纤维薄膜、大分子凝胶等。采用醋酸纤维薄膜作为支持物具有凝胶等
9、。采用醋酸纤维薄膜作为支持物具有方法简单、快速、分离清晰、灵敏度高、样方法简单、快速、分离清晰、灵敏度高、样品用量少、没有吸附、点样后区带界限清晰品用量少、没有吸附、点样后区带界限清晰等优点，广泛应用于科学实验、临床化验和等优点，广泛应用于科学实验、临床化验和生化产品的分析生化产品的分析(血清蛋白、血红蛋白、糖蛋血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白等的分离与鉴定白等的分离与鉴定)等方面。等方面。栏目栏目导引导引栏目栏目导引导引几点说明：几点说明：(1)膜的预处理：必须于电泳前将薄膜浸泡于膜的预处理：必须于电泳前将薄膜浸泡于缓冲液中，浸透后，取出薄膜并用滤纸吸去缓冲液中，浸透后，取出薄膜并用滤纸吸去多余的
10、缓冲液，不可吸得过干。多余的缓冲液，不可吸得过干。(2)加样：样品用量依样品浓度、本身性质、加样：样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决定。对血清蛋染色方法及检测方法等因素决定。对血清蛋白的常规电泳分析，每厘米加样线不超过白的常规电泳分析，每厘米加样线不超过23 L，相当于，相当于6080 g的蛋白质。的蛋白质。栏目栏目导引导引(3)电泳：可在室温下进行。电压为电泳：可在室温下进行。电压为25 V/cm，电流为电流为0.40.8 mA/cm。(4)染色：一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春染色：一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春红，血浆蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸红，血浆蛋白用甲苯胺蓝或
11、过碘酸Schiff试试剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色。剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色。(5)脱色与透明：对水溶性染料应用最普遍的脱脱色与透明：对水溶性染料应用最普遍的脱色剂是色剂是5%醋酸水溶液。为了长期保存或进行光醋酸水溶液。为了长期保存或进行光吸收扫描测定，可浸入冰醋酸吸收扫描测定，可浸入冰醋酸 无水乙醇无水乙醇3 7的透明液中。的透明液中。栏目栏目导引导引特别提醒特别提醒第一步中缓冲液要用容量瓶准确配制，试剂要第一步中缓冲液要用容量瓶准确配制，试剂要多配一些备用。第二步中要驱除气泡，贴紧贴多配一些备用。第二步中要驱除气泡，贴紧贴实，避免影响电泳速度和分离效果。第三、四实，避免
12、影响电泳速度和分离效果。第三、四步中作有记号的醋酸纤维薄膜光泽面朝下。第步中作有记号的醋酸纤维薄膜光泽面朝下。第七步中染色时间要适中七步中染色时间要适中(510 min)，不宜过长，不宜过长或过短。第八步中漂洗要彻底，防止遮盖蛋白或过短。第八步中漂洗要彻底，防止遮盖蛋白质色带颜色。质色带颜色。栏目栏目导引导引2.响电泳泳动速度的因素响电泳泳动速度的因素影响电泳泳动速度的因素很多，其中主要因素影响电泳泳动速度的因素很多，其中主要因素有带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所有带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带净电荷的多少；此外，还有电场强度、溶液带净电荷的多少；此外，还有电场强度、溶液的的p
13、H等因素。等因素。3.注意事项注意事项(1)保持醋酸纤维薄膜的清洁，避免用手直接接保持醋酸纤维薄膜的清洁，避免用手直接接触薄膜。触薄膜。栏目栏目导引导引(2)点样要适量，点样要适量，2次左右即可，盖玻片的边缘次左右即可，盖玻片的边缘应避免出现明显液滴，点样要尽量在一条直应避免出现明显液滴，点样要尽量在一条直线上。线上。(3)电泳时间不低于电泳时间不低于1 h。(4)点样处不要搭在滤纸上，以免血清渗入滤点样处不要搭在滤纸上，以免血清渗入滤纸。纸。(5)醋酸纤维薄膜应绷直，避免电泳槽隔离板醋酸纤维薄膜应绷直，避免电泳槽隔离板的干扰。的干扰。(6)不可同时接触正负极，防止触电。不可同时接触正负极，防
14、止触电。栏目栏目导引导引4.容易产生的几种现象容易产生的几种现象(1)电泳图谱不齐：点样时血清滴加不匀。电泳图谱不齐：点样时血清滴加不匀。(2)电泳图谱出现条痕：点样后薄膜过干，或由于电泳图谱出现条痕：点样后薄膜过干，或由于电泳槽密闭性不良，或电流过大，温度升高，薄电泳槽密闭性不良，或电流过大，温度升高，薄膜水分蒸发干燥造成的。膜水分蒸发干燥造成的。(3)分离不良：样品滴加过多。分离不良：样品滴加过多。(4)区带拖尾：缓冲液离子强度小于区带拖尾：缓冲液离子强度小于0.05。(5)区带过于紧密：缓冲液离子强度大于区带过于紧密：缓冲液离子强度大于0.075。栏目栏目导引导引(6)染色后清蛋白中间色
15、浅：染色时间不足，或清蛋染色后清蛋白中间色浅：染色时间不足，或清蛋白含量过高，此时可减少检样用量或延长染色时白含量过高，此时可减少检样用量或延长染色时间。间。(7)球蛋白向反方向移动：系电渗现象，可升高点样球蛋白向反方向移动：系电渗现象，可升高点样端缓冲液液面高度，或适当加大电流量克服之。端缓冲液液面高度，或适当加大电流量克服之。(8)透明时若膜不干或透明液中醋酸含量不足，可造透明时若膜不干或透明液中醋酸含量不足，可造成膜发白，不能完全透明；若透明液中醋酸含量过成膜发白，不能完全透明；若透明液中醋酸含量过高，或室温过高，可使膜溶解，此时可酌情减少醋高，或室温过高，可使膜溶解，此时可酌情减少醋酸
16、含量。酸含量。栏目栏目导引导引 (2012南京高二检测南京高二检测)仔细观察下图，所仔细观察下图，所带负电荷少的球蛋白是带负电荷少的球蛋白是()栏目栏目导引导引A1-球蛋白球蛋白B2-球蛋白球蛋白C-球蛋白球蛋白 D-球蛋白球蛋白【解析解析】对于几种球蛋白来说直径相差不对于几种球蛋白来说直径相差不大，引起泳动速度的差异主要来自于所带电大，引起泳动速度的差异主要来自于所带电荷多少，由图可知球蛋白由右向左泳动，因荷多少，由图可知球蛋白由右向左泳动，因右侧为负极，且右侧为负极，且-球蛋白距点样处最近，所以球蛋白距点样处最近，所以-球蛋白所带负电荷最少。球蛋白所带负电荷最少。【答案答案】D栏目栏目导引
17、导引【探规寻律探规寻律】必须清楚泳动速度的差异主必须清楚泳动速度的差异主要取决于电荷的多少。所带净电荷越多，则要取决于电荷的多少。所带净电荷越多，则在电场中泳动的速度越快，反之则越慢。在电场中泳动的速度越快，反之则越慢。栏目栏目导引导引1.有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pH分别分别为为4.5、5.2、6.6、7.2，电泳时欲使其中三种泳，电泳时欲使其中三种泳向正极，缓冲液的向正极，缓冲液的pH应该是应该是()A2.0 B5.0C6.0 D7.0解析：选解析：选D。在缓冲液的。在缓冲液的pH为为7.0的溶液中，的溶液中，pH分别为分别为4.5、5.2、6.6的蛋
18、白质均带负电荷，在电的蛋白质均带负电荷，在电泳时移向正极。泳时移向正极。变式训练变式训练栏目栏目导引导引比较水蒸气蒸馏、压榨法和比较水蒸气蒸馏、压榨法和有机溶剂萃取的异同点有机溶剂萃取的异同点实验原理实验原理方法步骤方法步骤适用范围适用范围水蒸水蒸气蒸气蒸馏馏利用水蒸气利用水蒸气将挥发性较将挥发性较强的芳香油强的芳香油携带出来携带出来水蒸气蒸馏水蒸气蒸馏分离油层分离油层除水过滤除水过滤 适用于提取适用于提取玫瑰油、薄玫瑰油、薄荷油等挥发荷油等挥发性强的芳香性强的芳香油油栏目栏目导引导引实验原理实验原理方法步骤方法步骤适用范围适用范围压榨压榨法法通过机械加通过机械加压，压榨出压，压榨出果皮中的芳
19、果皮中的芳香油香油石灰水浸泡、石灰水浸泡、漂洗漂洗压榨、过滤压榨、过滤静置静置再次过滤再次过滤 适用于柑橘、柠适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料檬等易焦糊原料的提取的提取有机有机溶剂溶剂萃取萃取使芳香油溶使芳香油溶解在有机溶解在有机溶剂中，蒸发剂中，蒸发溶剂后就可溶剂后就可获得芳香油获得芳香油粉碎、干燥粉碎、干燥萃取、过滤萃取、过滤浓缩浓缩 适用范围广，要适用范围广，要求原料的颗粒要求原料的颗粒要尽可能细小，能尽可能细小，能充分浸泡在有机充分浸泡在有机溶液中溶液中栏目栏目导引导引特别提醒特别提醒在用萃取法提取芳香油时，由于要将有机溶在用萃取法提取芳香油时，由于要将有机溶剂从萃取液中蒸发出去，故萃取剂
20、的沸点要剂从萃取液中蒸发出去，故萃取剂的沸点要比所要提取芳香油的沸点低。比所要提取芳香油的沸点低。栏目栏目导引导引在蒸馏过程中，要提高产品质量，应该在蒸馏过程中，要提高产品质量，应该采取的措施是采取的措施是()A提高蒸馏温度，延长蒸馏时间提高蒸馏温度，延长蒸馏时间B提高蒸馏温度，缩短蒸馏时间提高蒸馏温度，缩短蒸馏时间C降低蒸馏温度，缩短蒸馏时间降低蒸馏温度，缩短蒸馏时间D严控蒸馏温度，延长蒸馏时间严控蒸馏温度，延长蒸馏时间栏目栏目导引导引【思路点拨思路点拨】解答本题可以从两个角度分解答本题可以从两个角度分析：析：温度过高会破坏蒸馏提取物的有效成分。温度过高会破坏蒸馏提取物的有效成分。时间过短会
21、使有效成分得不到有效提取。时间过短会使有效成分得不到有效提取。栏目栏目导引导引【解析解析】用蒸馏法分离植物有效成分时，用蒸馏法分离植物有效成分时，温度会影响其性质，如果温度过高则破坏其温度会影响其性质，如果温度过高则破坏其结构，温度过低则分离不出其有效成分。如结构，温度过低则分离不出其有效成分。如果在一定温度范围内延长蒸馏时间，就可以果在一定温度范围内延长蒸馏时间，就可以得到较多的植物有效成分。得到较多的植物有效成分。【答案答案】D栏目栏目导引导引互动探究互动探究在水蒸气蒸馏装置中，为什么要让冷水由冷在水蒸气蒸馏装置中，为什么要让冷水由冷凝管的下方流入，上方流出？凝管的下方流入，上方流出？【提
22、示提示】这样可以冷却得更充分。这样可以冷却得更充分。栏目栏目导引导引从植物材料中提取某些特定从植物材料中提取某些特定成分成分1.蒸馏法：植物芳香油提取的常用方法蒸馏法：植物芳香油提取的常用方法蒸馏法的蒸馏法的类型类型水中蒸馏水中蒸馏水上蒸馏水上蒸馏水气蒸馏水气蒸馏特点特点原料放在原料放在蒸馏容器蒸馏容器的水中，的水中，水要完全水要完全浸没浸没容器中水容器中水的上方有的上方有筛板，水筛板，水量以沸腾量以沸腾时不浸润时不浸润原料为宜原料为宜蒸馏容器下方有蒸馏容器下方有一个通气孔，连一个通气孔，连接外源蒸气，上接外源蒸气，上方有筛板，上面方有筛板，上面放有原料放有原料栏目栏目导引导引(1)水蒸气蒸馏
23、装置的安装顺序和方法水蒸气蒸馏装置的安装顺序和方法栏目栏目导引导引如上图所示，整套蒸馏装置可分为左、中、如上图所示，整套蒸馏装置可分为左、中、右三部分，其中左边的部分通过加热进行蒸右三部分，其中左边的部分通过加热进行蒸馏，中部将蒸馏物冷凝，右边的部分用来接馏，中部将蒸馏物冷凝，右边的部分用来接收。安装仪器一般都按照自下而上、自左到收。安装仪器一般都按照自下而上、自左到右的顺序，拆卸仪器的顺序与安装时相反。右的顺序，拆卸仪器的顺序与安装时相反。具体安装顺序和方法如下：具体安装顺序和方法如下：固定热源固定热源酒精灯。酒精灯。栏目栏目导引导引固定蒸馏瓶，使其离热源的距离如上图中固定蒸馏瓶，使其离热源
24、的距离如上图中所示，并且保持蒸馏瓶轴心与铁架台的水平所示，并且保持蒸馏瓶轴心与铁架台的水平面垂直。面垂直。安装蒸馏头，使蒸馏头的横截面与铁架台安装蒸馏头，使蒸馏头的横截面与铁架台平行。平行。连接冷凝管。保证上端出水口向上，通过连接冷凝管。保证上端出水口向上，通过橡皮管与水池相连；下端进水口向下，通过橡皮管与水池相连；下端进水口向下，通过橡皮管与水龙头相连。橡皮管与水龙头相连。连接接液管连接接液管(或称尾接管或称尾接管)。栏目栏目导引导引将接收瓶瓶口对准尾接管的出口。常压蒸将接收瓶瓶口对准尾接管的出口。常压蒸馏一般用锥形瓶而不用烧杯作接收瓶，接收馏一般用锥形瓶而不用烧杯作接收瓶，接收瓶应在实验前
25、称重，并作好记录。瓶应在实验前称重，并作好记录。将温度计固定在蒸馏头上，使温度计水银将温度计固定在蒸馏头上，使温度计水银球的上限与蒸馏头侧管的下限处在同一水平球的上限与蒸馏头侧管的下限处在同一水平线上。线上。栏目栏目导引导引栏目栏目导引导引2.萃取法萃取法(1)原理：植物芳香油可以溶于有机溶剂原理：植物芳香油可以溶于有机溶剂(石油石油醚、酒精、乙醚、戊烷等醚、酒精、乙醚、戊烷等)中，对于不适于蒸中，对于不适于蒸馏的原料可以采用萃取法。大致方法是将干馏的原料可以采用萃取法。大致方法是将干燥的植物粉碎，用有机溶剂浸泡后，芳香油燥的植物粉碎，用有机溶剂浸泡后，芳香油就会溶解在溶剂中，然后蒸发掉有机溶
26、剂就就会溶解在溶剂中，然后蒸发掉有机溶剂就可以获得植物芳香油了。可以获得植物芳香油了。栏目栏目导引导引栏目栏目导引导引栏目栏目导引导引玫瑰精油提取的过程是玫瑰精油提取的过程是()A鲜玫瑰花水鲜玫瑰花水水蒸气蒸馏水蒸气蒸馏油水混合物油水混合物分离油层分离油层除水除水B鲜玫瑰花水鲜玫瑰花水油水混合物油水混合物水蒸气蒸馏水蒸气蒸馏分离油层分离油层除水除水C鲜玫瑰花水鲜玫瑰花水油水混合物油水混合物除水除水分离分离油层油层D鲜玫瑰花水鲜玫瑰花水油水混合物油水混合物水蒸气蒸馏水蒸气蒸馏分离油层分离油层除水除水栏目栏目导引导引【解析解析】玫瑰精油提取的一般流程是将鲜玫瑰精油提取的一般流程是将鲜玫瑰花和清水先
27、按玫瑰花和清水先按14的质量比混合，然后的质量比混合，然后利用水蒸气蒸馏法获得油水混合物，再加入利用水蒸气蒸馏法获得油水混合物，再加入NaCl，分离油层，进而加入无水，分离油层，进而加入无水Na2SO4，将油层中的水进一步除去，最后过滤获得玫将油层中的水进一步除去，最后过滤获得玫瑰精油。瑰精油。【答案答案】A栏目栏目导引导引变式训练变式训练2.用蒸馏法提取玫瑰精油的有关叙述错误的是用蒸馏法提取玫瑰精油的有关叙述错误的是()A蒸馏温度高，水和玫瑰精油挥发得就容蒸馏温度高，水和玫瑰精油挥发得就容易，所以在高温下蒸馏效果好一些易，所以在高温下蒸馏效果好一些B为了充分蒸馏玫瑰精油，应该在较低温度为了充
28、分蒸馏玫瑰精油，应该在较低温度下延长蒸馏时间下延长蒸馏时间C在乳浊液分层的时候，为了利于水和油层在乳浊液分层的时候，为了利于水和油层的分开，向乳化液中加入氯化钠的分开，向乳化液中加入氯化钠栏目栏目导引导引D水和油层分开后，应在初提取的玫瑰精油水和油层分开后，应在初提取的玫瑰精油中加入适量的无水硫酸钠吸去残留的水分，放中加入适量的无水硫酸钠吸去残留的水分，放置过夜，经过滤除去固体硫酸钠后，就可以得置过夜，经过滤除去固体硫酸钠后，就可以得到玫瑰精油到玫瑰精油解析：选解析：选A。蒸馏温度太高、时间太短，玫瑰。蒸馏温度太高、时间太短，玫瑰精油的品质就比较差，如果要提高品质，就需精油的品质就比较差，如果
29、要提高品质，就需要在较低温度下延长蒸馏时间。要在较低温度下延长蒸馏时间。栏目栏目导引导引向乳浊液中加入氯化钠，增加盐的浓度，有向乳浊液中加入氯化钠，增加盐的浓度，有利于水和油分层，通过分液漏斗排去水，得利于水和油分层，通过分液漏斗排去水，得到粗提取的玫瑰精油，再加入适量的无水硫到粗提取的玫瑰精油，再加入适量的无水硫酸钠吸去残留的水分，放置过夜，过滤除去酸钠吸去残留的水分，放置过夜，过滤除去固体硫酸钠后，就可以得到玫瑰精油。固体硫酸钠后，就可以得到玫瑰精油。栏目栏目导引导引实验探究实验探究专项突破专项突破【操作与实践】【操作与实践】血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验步骤实验步骤
30、操作方法操作方法配制试剂配制试剂配制巴比妥缓冲液、染色液、漂洗配制巴比妥缓冲液、染色液、漂洗液、透明液液、透明液架滤纸桥架滤纸桥取双层滤纸条，一端与支架前沿对取双层滤纸条，一端与支架前沿对齐，另一端浸入电泳槽的缓冲液，齐，另一端浸入电泳槽的缓冲液，待滤纸条湿润后，驱除气泡，使滤待滤纸条湿润后，驱除气泡，使滤纸紧贴于支架上纸紧贴于支架上栏目栏目导引导引实验步骤实验步骤操作方法操作方法浸泡薄浸泡薄膜膜用镊子夹取醋酸纤维薄膜，识别出光泽用镊子夹取醋酸纤维薄膜，识别出光泽面，并在光泽面的一角用笔做记号，然面，并在光泽面的一角用笔做记号，然后放在巴比妥缓冲液中浸泡后放在巴比妥缓冲液中浸泡20 min细心
31、点细心点样样取出薄膜，吸去多余液体，平铺在玻璃取出薄膜，吸去多余液体，平铺在玻璃板上，有记号的一面朝下，点样时用盖板上，有记号的一面朝下，点样时用盖玻片在血清中蘸一下，在离薄膜一端玻片在血清中蘸一下，在离薄膜一端23 cm处轻轻按下，随即提起处轻轻按下，随即提起平悬薄平悬薄膜膜将点样端平贴在电泳槽负极支架的将点样端平贴在电泳槽负极支架的“滤滤纸桥纸桥”上，有记号的一面朝上，另一端上，有记号的一面朝上，另一端平贴于正极，呈绷直状态平贴于正极，呈绷直状态栏目栏目导引导引实验步骤实验步骤操作方法操作方法实施电泳实施电泳盖上电泳槽盖，电泳盖上电泳槽盖，电泳6090 min染色染色取下薄膜，放入染色液中
32、浸泡取下薄膜，放入染色液中浸泡510 min漂洗漂洗取出薄膜，在漂洗液中漂洗数次，取出薄膜，在漂洗液中漂洗数次，直至蛋白质区底色脱净为止直至蛋白质区底色脱净为止脱色脱色用滤纸压平并吸干薄膜，再浸入透用滤纸压平并吸干薄膜，再浸入透明液中约明液中约5 min，取出后平贴于玻，取出后平贴于玻璃板上，待完全干燥后便成透明膜璃板上，待完全干燥后便成透明膜栏目栏目导引导引【结果及分析结果及分析】1.区带不分离，没有出现理论上的区带不分离，没有出现理论上的5条带。条带。原因：电泳时间不够，电压偏低，点样量过多。原因：电泳时间不够，电压偏低，点样量过多。2.区带不清晰，颜色很浅。区带不清晰，颜色很浅。原因：点
33、样量不够。原因：点样量不够。3.区带不平行，弯曲、间断。区带不平行，弯曲、间断。原因：点样时未点在一条直线上，醋酸纤维薄膜原因：点样时未点在一条直线上，醋酸纤维薄膜上的醋酸纤维素粉涂布不均匀。上的醋酸纤维素粉涂布不均匀。栏目栏目导引导引【问题与探究问题与探究】1.漂洗液与透明液的区别是什么？漂洗液与透明液的区别是什么？【提示提示】从功能上看，漂洗液用来洗脱背景从功能上看，漂洗液用来洗脱背景颜色，而透明液用来脱水固定颜色，而透明液用来脱水固定(使显色后的区带使显色后的区带长久保存长久保存)；从成分上看，透明液中乙醇含量；从成分上看，透明液中乙醇含量70%(V/V)，远高于漂洗液，脱水效果明显。，
34、远高于漂洗液，脱水效果明显。栏目栏目导引导引2.为什么要盖上盖子进行电泳？为什么要盖上盖子进行电泳？【提示提示】为了使电泳槽内维持饱和蒸汽压，为了使电泳槽内维持饱和蒸汽压，以免醋酸纤维薄膜在电泳过程中因电流通过发以免醋酸纤维薄膜在电泳过程中因电流通过发热而变干。热而变干。栏目栏目导引导引【例题例题】某蛋白质等电点为某蛋白质等电点为7.5，在，在pH为为6.0的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为为()A向负极移动向负极移动B向正极移动向正极移动C不运动不运动 D同时向正极和负极移动同时向正极和负极移动栏目栏目导引导引【解析解析】在在pH6.0的缓冲液中蛋白质带正的缓冲液中蛋白质带正电荷，其泳动方向为向负极移动。电荷，其泳动方向为向负极移动。【答案答案】A栏目栏目导引导引知能演练知能演练 轻巧夺冠轻巧夺冠栏目栏目导引导引本部分内容讲解结束本部分内容讲解结束按按ESC键退出全屏播放键退出全屏播放
