1、HPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu Corporation液相色谱流程图溶剂输液泵进样器柱温箱检测器数据处理HPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu Corporation溶溶 剂剂 等等
2、级级波长波长(nm)纯化水纯化水去离子水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物纯化水中去除了无机和有机的污染物HPLC Business DeptShimadzu Corporation水水/MeOH梯度梯度ODS 柱柱鬼峰鬼峰Gradient Curve1 ml/min,0-100%MeOHover 10 mins and hold for15 mins.溶溶 剂剂 等等 级级HPLC Business DeptShimadzu Corporation溶溶 剂剂 等等 级级都经过蒸馏和都经过蒸馏和0.45u的过滤的过滤
3、(除纤维毛除纤维毛,未溶解的机械颗粒未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过级经过0.2u的过滤的过滤,且除去有紫外吸收的杂质且除去有紫外吸收的杂质HPLC Business DeptShimadzu Corporation甲醇甲醇 乙睛乙睛 正己烷正己烷分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图溶溶 剂剂 等等 级级HPLC Business DeptShimadzu CorporationGeneral Maintenance and Troubleshooting缓冲液的使用缓冲液的使用 使用前必须过
4、滤使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:用纯水冲洗用纯水冲洗30-60min（1ml/min），），再用甲醇冲洗再用甲醇冲洗30min易受到细菌和霉菌的影响易受到细菌和霉菌的影响 溶溶 剂剂 等等 级级不能直接用有机溶剂冲洗不能直接用有机溶剂冲洗HPLC Business DeptShimadzu Corporation溶溶 剂剂 前前 处处 理理HPLC Business DeptShimadzu Corporation岛津VP系列输液泵目的 单元 流速范围特性和应用 分析 LC-10ADVP0.001-9.999无脉动
5、，适于半微量LC 和 LC-MS LC-10ATVP0.001-9.999非凡的耐用性，适于常量分析*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度HPLC Business DeptShimadzu CorporationLC-10ATvp泵：泵：串联式往复泵串联式往复泵LC-10ADvp泵：泵：并联式微体积往复泵并联式微体积往复泵LC-10ADVP/LC-10ATVP工作原理工作原理HPLC Business DeptShimadzu Corporation单向阀结构单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球单向阀原理单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头
6、HPLC Business DeptShimadzu Corporationv线性梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化和时间成线性比例v指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度随时间的变化呈指数关系v折线梯度：v高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入v低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。HPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu Corporation优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度v溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差v梯度混合
7、的溶剂互溶性要好v梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）HPLC Business DeptShimadzu Corporation1.使用流动相溶解样品 -减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要 -保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀 2.进样前最好使用0.45um 的膜进行过滤 如果样品很脏，要使用0.2um的膜进行过滤HPLC Business DeptShimadzu Corporation进样器HPLC Business DeptShimadz
8、u Corporation进样量和检测器响应的关系示意图进样量和检测器响应的关系示意图进样进样体体积积 检检测测器器响响应应值值定量定量环环体体积积的一半的一半3倍定量倍定量环环体体积积全量注入全量注入部分注入部分注入HPLC Business DeptShimadzu Corporation手动进样器的原理图手动进样器的原理图 装填状态装填状态进样状态进样状态HPLC Business DeptShimadzu Corporation微量注射器微量注射器 红色表示残留样品红色表示残留样品HPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business D
9、eptShimadzu Corporation手手动进样动进样法法HPLC Business DeptShimadzu Corporation柱温箱HPLC Business DeptShimadzu Corporation返回HPLC Business DeptShimadzu Corporation硅胶基底硅胶基底聚合物基底聚合物基底pH 范围范围2-7.5宽范围宽范围有机溶剂有机溶剂所有所有有限制有限制压力压力 250 kgf/cm2低压低压温度温度宽范围宽范围60C色谱柱的类型及适用范围色谱柱的类型及适用范围HPLC Business DeptShimadzu Corporation分
10、分 析析 柱柱 的的 维维 护护1.在在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下(0.2-0.3 ml/min)冲洗冲洗 30 mins，长时间未用的分析柱也要同样长时间未用的分析柱也要同样 处理处理2.定期使用强溶剂冲洗柱子定期使用强溶剂冲洗柱子3、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗4、净化样品净化样品5、分离条件、分离条件6、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯HPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business D
11、eptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu Corporation二极管阵列检测器二极管阵列检测器HPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu Corporation 样品池样品池二极管阵列二极管阵列光栅光栅D2/W 灯灯每一组分可在每一波每一组分可在每一波长处得到一吸光度值长处得到一吸光度值二极管阵列检测器二极管阵列检测器HPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu CorporationHPLC Business DeptShimadzu Corporation返回
