1、质粒质粒DNA的提取与酶切电的提取与酶切电泳鉴定泳鉴定n质粒提取关键：质粒提取关键：基因组基因组DNA与质粒与质粒DNA的有效分离的有效分离（碱裂解法碱裂解法）高高pH使质粒使质粒DNA和染色体和染色体DNA变性，同时沉淀蛋白变性，同时沉淀蛋白质。再将质。再将pH值调至中性，质粒值调至中性，质粒DNA较小，很容易复性较小，很容易复性成双链。而染色体成双链。而染色体DNA较大，不会复性，缠结成网状较大，不会复性，缠结成网状不溶物质，从而可以通过离心除去。不溶物质，从而可以通过离心除去。注意事项:实验方法实验方法 1、挑取携带目标DH5单菌落于3-5 ml LB（含Amp 100g/ml）,37
2、振荡培养过夜（12-16 h）；2、取2 ml培养液倒入1.5ml EP管中（分次加入，离心），4 12000 rpm 离心30s-1min，弃去上清；3、用涡旋混匀器使菌体沉淀重悬浮于250l冰预冷的溶液。4、加入新配制的溶液250l，盖紧管口，快速温和颠倒离心管5次，菌液变得透亮，以混匀内容物（千万不要振荡）。5、加入350l预冷的溶液，盖紧管口，反复颠倒离心管5次，出现白色沉淀，使沉淀混匀，4 12000rpm 离心10分钟。6、上清液移入干净离心管中，加入等体积的酚/氯仿（1:1），振荡混匀，4下12000 rpm离心2分钟。7、将上层水相移入干净离心管中，加入2倍体积的无水乙醇，振荡混匀后室温放置2分钟，然后4下12000 rpm离心5分钟。8、彻底弃上清，将管口敞开倒置于卫生纸上使所有液体流出，加入1ml70乙醇洗沉淀一次，4下12000 rpm离心2分钟。9、吸除上清液，将管倒置于卫生纸上使液体流尽，室温开盖放置10-15min，使乙醇挥发殆尽。10、将沉淀溶于30-50l TE缓冲液（pH8.0，含20g/mlRNaseA）中，储于-20冰箱中。11、酶切鉴定并将没有酶切的质粒与酶切的质粒进行琼脂糖凝胶电泳。（酶切体系一般1-2ul提取的质粒，10buffer，相应的酶，余下加水，一般鉴定所用的酶切体系建议10ul）
