1、流式细胞术原理及应用精选ppt1流式细胞术原理及应用精选p p t 1一、什么是流式细胞术？一、什么是流式细胞术？流式细胞仪的构造流式细胞仪的构造二、怎样设计流式实验？二、怎样设计流式实验？三、流式实验中涉及到的关键步骤三、流式实验中涉及到的关键步骤四、常见流式细胞术应用四、常见流式细胞术应用精选ppt2一、什么是流式细胞术？流式细胞仪的构造二、怎样设计流式实验？一、流式细胞术基本概念?流式细胞术（Flow Cytometry）是对于处在快速直线流动中的细胞和生物颗粒进行 多参数、快速的定量分析和分选技术.?研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等。?对生物颗粒的物理参数及生物学
2、特性进行定性和定量分析。精选ppt3一、流式细胞术基本概念?流式细胞术（F l o w C y t o m e t精选ppt4精选p p t 4流式细胞仪构造图精选ppt5流式细胞仪构造图精选p p t 5流式细胞仪五大系统?流动室与液流驱动系统流动室与液流驱动系统激光光源及光束成形系统激光光源及光束成形系统光学系统光学系统信号检测与分析系统信号检测与分析系统细胞分选系统细胞分选系统精选ppt6流式细胞仪五大系统?流动室与液流驱动系统激光光源及光流动室与液流驱动系统1.空气加压进样2.蠕动泵精确定量进样流动室，430180um,鞘液Injector SheathTipfluidFluoresc
3、encesignalsFocused laserbeam精选ppt7流动室与液流驱动系统1.空气加压进样2.蠕动泵精确定量进样流激光光源与光束成形系统1.氩离子气体激光器，2266um2.固体激光器405nm,488nm,561nm,635nm精选ppt8激光光源与光束成形系统1.氩离子气体激光器，2 2 6 6 u m 2光学系统透镜、滤光片、小孔；LP：long-pass filter SP：short-pass filterBP：band-pass filter460 500 540LP 500SP 500BP500/50精选ppt9光学系统透镜、滤光片、小孔；L P：l o n g-p
4、 a s s f i l信号检测与分析系统物理参数?FSC：前向角散色光，代表细胞大小?SSC：侧向角散色光，代表细胞颗粒度精选ppt10信号检测与分析系统物理参数?F S C：前向角散色光，代表细胞大?实验中，常利用FSC和SSC这两种参数的组合，区分不同的细胞群体，去除碎片、死细胞和粘连细胞的干扰。粒细胞粒细胞单核细胞单核细胞淋巴细胞淋巴细胞红细胞、死细胞和碎片红细胞、死细胞和碎片精选ppt11?实验中，常利用F S C 和S S C 这两种参数的组合，区分不同的细?阈值：溶液中的杂质或者死细胞，很容易产生微小的干扰信号，所以必须设置阈值，排除杂质、细胞碎片或体积较小的死细胞。?FSC反映
5、细胞体积的大小，FCM应用时常选取FSC设定阈值。5%32%默认阈值精选ppt升高阈值后12?阈值：溶液中的杂质或者死细胞，很容易产生微小的干扰信号，所荧光信号?细胞自发荧光?特异荧光素标记激发的荧光信号?荧光信号的线性测量和对数测量-光电倍增管1）检测光子，转换成电信号2）将电信号等比例的放大?荧光信号的面积、宽度和高度精选ppt13荧光信号?细胞自发荧光?特异荧光素标记激发的荧光信号?荧光信?由于光信号比较弱，需将其等比例放大，方便计算机分析处理，一般信号的放大可以使用线性或对数两种方式。?一般FSC和SSC变异范围较小，故使用线性放大；荧光信号变异范围较大，多使用对数放大。?线性测量：DNA 含量、RNA 含量、总蛋白含量?对数测量：细胞膜表面抗原检测精选ppt14?由于光信号比较弱，需将其等比例放大，方便计算机分析处理，一直方图（Distribution Histogram）散点图（Dot Plot）?横坐标：某细胞参数?横坐标：道数相对含量?纵坐标：细胞数?纵坐标：该细胞另一参数含量等高线图（Contour Plot）精选ppt15直方图（D i s t r i b u t i o n H i s t o g r a m）散点图
