1、主要内容主要内容临床输血发展简史临床输血发展简史免疫血液学基础概念免疫血液学基础概念红细胞血型抗原系统红细胞血型抗原系统红细胞血型血清学检测技术红细胞血型血清学检测技术医院血库的工作职责医院血库的工作职责2020/11/32人类历史上早期输血尝试人类历史上早期输血尝试1667年法国御医Jean用羊血治疗精神病患者2020/11/331818年英国产科医生James 首次用人血输治患者早期的床边直接输血早期的床边直接输血2020/11/34血型之父血型之父1901发现ABO血型又发现MN，P，Rh等血型，赢得了“血型之父”的誉称。1930年因发现人类ABO血型系统而获得诺贝尔奖金Karl Lan
2、dsteinerKarl Landsteiner(1868.06.141943.06.26)2020/11/35真正使输血变得容易的人卢因森真正使输血变得容易的人卢因森（19151915年年1 1月）月）纽约的卢因森博士发明了实用的柠檬酸钠抗凝剂方便献血方便输血方便保存方便运输使建立血库成为可能2020/11/36临床输血发展简史临床输血发展简史1901、1940年奥地利科学家Landsteiner等人先后发现了ABO和RH血型系统，使输血治疗有了牢固的科学基础，从而极大地提高了临床输血的安全性1937年世界上第一个血库在芝加哥Cock County医院建立，标志着输血开始成为临床医学的重要组
3、成部分和常规治疗手段现在输血已经发展成一门涉及多学科的独立的边缘学科-输血医学2020/11/37二战促进了输血医学的发展二战促进了输血医学的发展失血是战场死亡的主要原因朝鲜战场上90的士兵死于没有及时输血输血的早期实践者之一 白求恩2020/11/38在二战中战场输血非常普遍在二战中战场输血非常普遍2020/11/391944年 我国第一个冻干血库中心在昆明建立。1947年 我国第一个医院血库在南京建立。1953年 我国第一个大型中心血库在沈阳建立。我国输血事业的发端我国输血事业的发端2020/11/310免疫血液学免疫血液学免疫血液学免疫血液学（ImmunohematologyImmuno
4、hematology，IHIH），是一门研究人体是一门研究人体血型抗原及抗体血型抗原及抗体，并通，并通过过输血前测试血型抗原输血前测试血型抗原-抗体反应抗体反应，找到，找到合适的血液源，从而达到安全输血目的合适的血液源，从而达到安全输血目的的实验室医学分支学科。的实验室医学分支学科。2020/11/311血型抗原血型抗原KDCCKBAD存在于红细胞表面化学结构：蛋白质 蛋白质上的糖类抗原 糖蛋白或脂类（糖脂）2020/11/312ABO A、BRh(Rhesus)D、C、E、c、eK(Kell)K、k(cellano)Fy(Duffy)Fya、FybJk(Kidd)Jka、JkbLe(Lewi
5、s)Lea、LebMNS系统P1血型抗原系统举例血型抗原系统举例2020/11/313当某种抗原分子进入不含该决定簇的机体时，刺激机体产生相应抗体的能力免疫原=抗原 D抗原：强免疫原 Fya抗原：弱免疫原免疫原性的强弱与以下因素有关 抗原分子的氨基酸序列(一级结构)及空间构象(二级结构及三、四级结构)红细胞上该抗原分子的表达数量血型抗原的免疫原性血型抗原的免疫原性2020/11/314只识别相对应的红细胞抗原并与之结合与红细胞上相对应的抗原结合后，可引起红细胞的破坏、溶解(溶血反应)两种表现形式“天然抗体”：机体自然产生的抗体 如：抗-A、抗-B（可用于反定型）“免疫性抗体”-“不规则抗体”：
6、经免疫原刺激后而产生的应答性抗体 如：抗-D、抗-K，等等血型抗体血型抗体2020/11/315自身抗体(Auto-antibody)可凝集或致敏机体自身的红细胞，常见于自身免疫性溶血性贫血、药物性溶血性贫血或各种自身免疫病同种抗体(Allo-antibody)可凝集或致敏机体外来的红细胞，常见于各种输血引起的溶血性疾病血型抗体血型抗体免疫性抗体根据应答机制又可分为两大类:2020/11/316IgM=“完全抗体”=室温下发生发应 =如：抗-A、抗-B、抗-M、抗-Lea、抗-P1 =大部分的血型分析试剂及“冷”抗体是IgM类抗体IgG =“不完全抗体”=37oC下反应 =如：抗-D、抗-K、
7、抗-Jka、抗-Fya，等 =几乎所有临床有意义的不规则抗体都是IgG抗体血型抗体血型抗体2020/11/317 IgMIgM IgG IgG血型抗体模式图血型抗体模式图2020/11/318完全抗体完全抗体可以直接凝集红细胞可以直接凝集红细胞IgMIgM分子分子的跨度可的跨度可达达3434nmnm2020/11/319不完全抗体不完全抗体不能直接凝集红细胞不能直接凝集红细胞IgGIgG分子的分子的跨度仅为跨度仅为1414nmnm2020/11/320抗抗-A A抗体破坏抗体破坏A A型红细胞型红细胞缩短红细胞寿命缩短红细胞寿命破坏红细胞破坏红细胞溶血溶血死亡死亡抗抗-A-A抗体抗体血型抗原血
8、型抗原-抗体反应抗体反应2020/11/321目前所发现的人类最重要的血型抗原系统ABO血型系统的“天然抗体”几乎存在于不含相对应抗原所有人的外周血中“天然抗体”临床上可用于反定型ABO血型系统亚型 A：A1、A2、A3、Ax、Am，等 B：B2、B3、Bx、Bm，等ABOABO血型系统血型系统2020/11/322ABO ABO 血型血型RBCRBC上的抗原上的抗原血清血清中的抗体中的抗体基因型基因型O OH HAnti-A,BAnti-A,BO/OO/OA AA AAnti-BAnti-BA/A or A/OA/A or A/OB BB BAnti-AAnti-AB/B or B/OB/B
9、 or B/OABAB A&B A&BNoneNoneA/BA/BABOABO血型系统血型系统2020/11/323ABOABO以外以外重要的血型系统及其抗体重要的血型系统及其抗体2005年，29个红细胞血型系统274个抗原2020/11/324除ABO外与输血有关的最重要的血型系统之一最重要的五种抗原 C、c、D、E、e根据D抗原是否存在，一般将Rh系统定义为 Rh阳性：D抗原阳性 Rh阴性：D抗原阴性RhRh血型系统血型系统2020/11/325RhRh阴性知多少阴性知多少1540.42020/11/326RhRh血型对输血影响有多大？血型对输血影响有多大？ABO血型发现后40年才发现Rh
10、血型无数Rh阴性人输了Rh阳性血后无反应Levinelandsteinerwiener2020/11/327输血死亡主要原因分析输血死亡主要原因分析(美国，美国，1980)1980)10%10%16%16%8%8%1%1%2%2%2%2%61%61%非ABO溶血性反应非ABO溶血性反应肝炎肝炎循环过载ARDS循环过载ARDS移植物抗宿主病移植物抗宿主病血液处理粗心血液处理粗心感染血感染血ABO反应ABO反应2020/11/328免疫血液学能解决什么问题免疫血液学能解决什么问题保证人们用血（输血）保证人们用血（输血）,包括血液、血液成分或包括血液、血液成分或血液制品的安全、有效。血液制品的安全、
11、有效。输血是一项广泛应用且十分重要的治疗手段输血是一项广泛应用且十分重要的治疗手段v恢复及维持机体的氧恢复及维持机体的氧(O O2 2)供应供应v治疗临床上严重的失血性疾病治疗临床上严重的失血性疾病 v治疗血液系统紊乱性疾病治疗血液系统紊乱性疾病v新生儿溶血病的治疗新生儿溶血病的治疗2020/11/329如何保证输血安全有效如何保证输血安全有效检测献血员和用血者血液中的抗原和抗体，选择抗检测献血员和用血者血液中的抗原和抗体，选择抗原，抗体尽可能相容的血液进行输血：原，抗体尽可能相容的血液进行输血：红细胞定型红细胞定型血浆（血清）抗体筛查血浆（血清）抗体筛查/抗体鉴定，抗体鉴定，红细胞的直接抗人
12、球蛋白试验和吸收放散试验红细胞的直接抗人球蛋白试验和吸收放散试验献血员与受血者之间的交叉配血献血员与受血者之间的交叉配血制备用于输血的成分血制备用于输血的成分血 献血员的筛查：肝功能，传染性疾病献血员的筛查：肝功能，传染性疾病评价溶血性贫血评价溶血性贫血母婴相容性检测母婴相容性检测2020/11/330我国的采供血程序我国的采供血程序及输血前检测及输血前检测志愿献血员志愿献血员血液中心（中心血站）血液中心（中心血站）初检初检复检复检医院医院输血输血筛选合格筛选合格献血员献血员 问卷 快速测试传染病检测：HBs Ag,HCV,HIV,ALT,Syphilis红细胞定型（正定）采血采血 进口或国产
13、试剂随机检测随机检测输血前检测（1）住院患者血型定型（正定）（2）用血患者血型在此定型（正反定型），（3）交叉配血，抗体筛查，抗体鉴定多数医院输血前不再进行传染病检测2020/11/331红细胞血型血清学检测技术红细胞血型血清学检测技术盐水凝集法低离子强度盐水法酶技术凝聚胺技术抗人球蛋白检测法柱凝集技术检测法2020/11/332一、盐水凝集法一、盐水凝集法红细胞和抗血清在盐水溶液中直接反应特点是操作简便，设备简单，缺点是影响因素多，灵敏度低孵育30分钟2020/11/333二、低离子强度盐水法二、低离子强度盐水法通过降低介质溶液的离子强度，减少红细胞外围离子云的强度，促进IgG分子在两个红细
14、胞间桥联，而促进凝集特点是缩短抗原抗体反应时间，提高反应灵敏度孵育1分钟2020/11/334三、酶技术三、酶技术利用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面唾液酸，使红细胞失去电荷，缩小细胞间距离同时改变红细胞膜表面结构，使某些隐蔽的抗原暴露，从而增强凝集反应主要用于一些不完全抗体的检测2020/11/335四、凝聚胺技术四、凝聚胺技术利用多聚季胺盐在介质溶液中产生大量正电荷中和红细胞表面的负电荷，减少红细胞间排斥，促进凝集2020/11/336五、柱凝集技术检测法五、柱凝集技术检测法是微柱凝集技术与上述所有技术相结合的产物1986年由法国人Dr.Yves Lappierre发明1994年获得美国FDA
15、认证，目前在许多发达国家已经作为常规技术应用于临床柱凝集技术原理柱凝集技术原理2020/11/337六、抗人球蛋白试验六、抗人球蛋白试验CoombsCoombs试验试验在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促进红细胞的凝集2020/11/338 +Anti-Human Globulin(AHG)+Anti-Human Globulin(AHG)试剂试剂致敏红细胞的致敏红细胞的IgGIgG抗体抗体或补体成份或补体成份加入抗人球蛋白试剂后加入抗人球蛋白试剂后形成肉眼可见的凝集反应形成肉眼可见的凝集反应抗人球蛋白实验抗人球蛋白实验2020/1
16、1/339抗人球蛋白实验抗人球蛋白实验1.1.红细胞致敏反应红细胞致敏反应 2.AHG2.AHG反应反应肉眼不可见肉眼不可见肉眼可见肉眼可见 2020/11/340直接抗人球蛋白实验直接抗人球蛋白实验(DAT)DAT)红细胞在红细胞在体内体内(in vivo)in vivo)即被不规则抗体所致敏，因此即被不规则抗体所致敏，因此直接加入抗人球试剂即可进行测定；如某些过敏性直接加入抗人球试剂即可进行测定；如某些过敏性药物及引起溶血性输血反应的抗体、自身抗体等药物及引起溶血性输血反应的抗体、自身抗体等间接抗人球蛋白实验间接抗人球蛋白实验(IDAT)IDAT)红细胞在红细胞在体外体外(in vitro
17、)in vitro)首先被不规则抗体或抗血清试首先被不规则抗体或抗血清试剂所致敏，然后再加入抗人球试剂进行测定；如抗剂所致敏，然后再加入抗人球试剂进行测定；如抗体筛查、抗体鉴定、交叉配血等体筛查、抗体鉴定、交叉配血等抗人球蛋白实验抗人球蛋白实验2020/11/341医院输血科的主要职责医院输血科的主要职责提供临床所需的血液成份提供血型相符或配合的血液为临床提供血型相关的检测诊断2020/11/342输血前测试流程输血前测试流程2020/11/343常用输血前测试方法常用输血前测试方法1.平板法 -细胞浓度适宜，避免交叉污染，及时观察结果2.试管法 -加样顺序，反应条件，洗涤细胞注意事项3.微量
18、板法 -加样和振荡避免交叉污染4.柱凝集法 -避免假阳性，使用前观察凝胶板2020/11/344 ABO血型鉴定 Rh血型鉴定 红细胞血型抗体筛查/鉴定 交叉配血试验 HDN血型血清学检查常用输血前检测项目常用输血前检测项目2020/11/345方法方法:红细胞凝集试验红细胞凝集试验 正定型正定型 用已知抗用已知抗-A-A或抗或抗-B-B定型试剂来测定红细定型试剂来测定红细 胞上有无相应的胞上有无相应的A A抗原或抗原或/和和B B抗原抗原 反定型反定型 用已知用已知A A1 1型细胞和型细胞和B B型细胞来测定血清中型细胞来测定血清中 有无相应的抗有无相应的抗-A-A或或/和抗和抗-B-B
19、正反定型结果不一致或有疑问，需进一步行正反定型结果不一致或有疑问，需进一步行ABOABO血型确血型确认试验。认试验。ABOABO血型鉴定血型鉴定2020/11/346ABOABO血型鉴定正常反应结果血型鉴定正常反应结果血型血型抗抗-A A抗抗-B BA A型红细胞型红细胞 B B型红细胞型红细胞A A+-+B B-+-ABAB+-O O-+2020/11/347RhRh血型鉴定血型鉴定原理:Rh血型系统最常见的抗原主要有C,c,D,E,e 5种。可分别用抗C、抗c、抗D、抗E、抗e这5种Rh 定型试剂通过血凝试验来检查红细胞上是否存 在相应抗原。在临床输血中，一般只做D抗原 的鉴定。凡被检红细
20、胞和抗D试剂凝集者为 RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。2020/11/348检测目的 对受血者的血清或血浆做常规的抗体筛查试验，发现有临床意义的不规则抗体。实验方法 让受检的血清/血浆与特殊的试剂红细胞组（已知抗原表型的筛选红细胞）一起反应，以发现样品中可能存在的不规则抗体。抗体筛查抗体筛查/抗体鉴定抗体鉴定2020/11/349测定结果 反应阳性：抗体存在 反应阴性：抗体不存在抗体鉴定 抗体一旦被检出，应作抗体鉴定抗体筛查抗体筛查/抗体鉴定抗体鉴定2020/11/350检测目的 分析受者和供者血液是否完全相符反应原理 主侧：受者血清/血浆+供者红细胞 次侧：受者红细胞+供者血清/血浆交叉配
21、血交叉配血2020/11/351新生儿溶血病血型血清学检查新生儿溶血病血型血清学检查新生儿溶血病(HDN)是由母婴血型不合引起,胎儿和新生儿红细胞被来自母体的 IgG抗体致敏,并在其自身网状内皮系统受到免疫性破坏。2020/11/352方法:婴儿及其父母ABO/RH血型鉴定 婴儿及母亲血清中血型抗体鉴定 (盐水介质法、酶法、抗球蛋白法等)婴儿红细胞上 血型抗体鉴定 (抗球蛋白法、放散试验)新生儿溶血病血型血清学检查新生儿溶血病血型血清学检查2020/11/353谢谢各位！谢谢各位！2020/11/354强生强生OCDOCD免疫血液学产品发展历程免疫血液学产品发展历程19371937：Phili
22、p B.HofmannPhilip B.Hofmann在新泽西创建在新泽西创建OrthoOrtho公司；公司；19441944：Philip LevinePhilip Levine博士加入博士加入OrthoOrtho研究基金会；研究基金会；19471947：推出第一个：推出第一个RhRh血清凝集试剂及抗人血清；血清凝集试剂及抗人血清；19561956：建立、推广全球第一个标准化交叉配血方法及程序；：建立、推广全球第一个标准化交叉配血方法及程序；19601960：在美国成立了第一家正规的血型技术学院；：在美国成立了第一家正规的血型技术学院；19681968：第一个防止新生儿：第一个防止新生儿Rh
23、Rh系统溶血的药物系统溶血的药物RhoGAMRhoGAM上市；上市；19851985：BioCloneBioClone抗人球蛋白试剂及抗抗人球蛋白试剂及抗A A、抗抗B B试剂上市；试剂上市；19921992：更简便及标准化操作的柱凝集技术（：更简便及标准化操作的柱凝集技术（CATCAT）血型及交叉配血试剂血型及交叉配血试剂开发成功；开发成功；19971997：全球第一台全自动血型分析系统：全球第一台全自动血型分析系统AutoVueAutoVue问世。问世。20002000：AutoVueAutoVue第二代产品第二代产品AutoVue InnovaAutoVue Innova面世面世2020
24、/11/355强生强生OCDOCD全球最大的免疫血液学产品供应商全球最大的免疫血液学产品供应商2020/11/356强生强生OCDOCD提供全面的免疫血液学解决方案提供全面的免疫血液学解决方案 手工手工自动自动Ortho BioVue系统工作站系统工作站离心机离心机孵育器孵育器工作架工作架移液器移液器Ortho AutoVue InnovaOrtho AutoVue UltraOrtho AutoVue2020/11/357BioVueBioVue 柱凝集系统柱凝集系统BioVueBioVue：与血型诊断试剂卡配套的手工工作站与血型诊断试剂卡配套的手工工作站AutoVue InnovaAuto
25、Vue Innova：使用血型诊断试剂卡的使用血型诊断试剂卡的全自动分析系统全自动分析系统2020/11/358临床检测项目临床检测项目 血型抗原测定血型抗原测定(Blood Typing)Blood Typing)抗体筛查抗体筛查(Antibody Screening)Antibody Screening)抗体鉴定抗体鉴定(Antibody Identification)Antibody Identification)交叉配血交叉配血(Cross Match)Cross Match)抗人球蛋白实验抗人球蛋白实验(Anti-Human Globulin Test)Anti-Human Glob
26、ulin Test)2020/11/359Ortho BiovueOrtho Biovue血型诊断试剂卡血型诊断试剂卡条形码条形码效期效期批号批号实验结果实验结果病人病人IDID试剂卡名称试剂卡名称v 六个反应柱六个反应柱v 合成塑料卡结构合成塑料卡结构v 标准微孔板孔间距标准微孔板孔间距v 条形码识别条形码识别v 锡箔纸封口锡箔纸封口试剂成份试剂成份2020/11/360微微 柱柱空气柱空气柱玻璃珠玻璃珠反应舱反应舱试剂试剂2020/11/361微微 柱柱椭圆型设计，较大的结果观测区椭圆型设计，较大的结果观测区240240l l大容量反应舱大容量反应舱锥型底部设计以增加灵敏度锥型底部设计以增
27、加灵敏度预装载预装载BioCloneBioClone试剂及密度梯度稀释液试剂及密度梯度稀释液225225保存保存TOPFRONTSIDE特点：特点：2020/11/362玻璃珠玻璃珠 球状外形球状外形 直径直径7 70 0 8080umum 批间稳定无差异批间稳定无差异 惰性物质，理化性质稳定惰性物质，理化性质稳定 耐受高速离心耐受高速离心 功能类似过滤器功能类似过滤器 未凝集的未凝集的RBCRBC（阴性）（阴性）凝集的凝集的RBCRBC（阳性）（阳性）离心力作用离心力作用2020/11/363密度梯度稀释液密度梯度稀释液离心力作用离心力作用 未结合的血清蛋白（低密度）停留在密度梯度稀释液未结
28、合的血清蛋白（低密度）停留在密度梯度稀释液上面上面 血清与红细胞的混合物（中间密度）在密度梯度稀释血清与红细胞的混合物（中间密度）在密度梯度稀释液中液中 红细胞（高密度）移动进入玻璃珠中红细胞（高密度）移动进入玻璃珠中2020/11/364反应结果示意图反应结果示意图注：注：玻璃珠的作用象一个过滤器，可以将凝玻璃珠的作用象一个过滤器，可以将凝集的红细胞集的红细胞“阻挡阻挡”在玻璃珠上面；未凝集在玻璃珠上面；未凝集的红细胞则可自由通过玻璃珠而到达柱的底的红细胞则可自由通过玻璃珠而到达柱的底部部阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应2020/11/365结果判读结果判读2020/11/366Ortho BioVue Ortho BioVue 试剂卡操作示意图试剂卡操作示意图加样加样离心离心孵育孵育读卡读卡2020/11/367
