1、实验五实验五 激素对血糖浓度的影响激素对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定及血糖浓度的测定实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓1v 血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡萄糖，所以一般认为，血糖是指血液中的葡萄糖。萄糖，所以一般认为，血糖是指血液中的葡萄糖。正常人空腹血糖浓度为正常人空腹血糖浓度为4.44.46.7mmol/L6.7mmol/L（8080120mg/100ml120mg/100ml）。）。v血糖是糖在体内的运输形式。全身各组织都从血液血糖是糖在体内的运输形式。全身各组织都从血液中摄取葡萄糖以氧化供能，特别是脑、肾、红细胞、中摄取葡萄糖以氧化
2、供能，特别是脑、肾、红细胞、视网膜等组织合成糖原能力极低，几乎没有糖原贮视网膜等组织合成糖原能力极低，几乎没有糖原贮存，必须不断由血液供应葡萄糖。当血糖下降到一存，必须不断由血液供应葡萄糖。当血糖下降到一定程度时，就会严重妨碍脑等组织的能量代射，从定程度时，就会严重妨碍脑等组织的能量代射，从而影响它们的功能。所以维持血糖浓度的相对恒定而影响它们的功能。所以维持血糖浓度的相对恒定有着重要的临床意义。有着重要的临床意义。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓2实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓3血糖浓度的调节血糖浓度的调节v血糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在血糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在一整套高效率的
3、调节机制，精细地控制着血一整套高效率的调节机制，精细地控制着血糖的来源与去路，使之达到动态平衡。糖的来源与去路，使之达到动态平衡。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓4神经系统的调节作用神经系统的调节作用 神经系统对血糖浓度的调节作用主要通过神经系统对血糖浓度的调节作用主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路关键酶的活后者再通过影响血糖来源与去路关键酶的活性来实现。神经系统的调节最终通过细胞水性来实现。神经系统的调节最终通过细胞水平的调节来达到目的。平的调节来达到目的。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓5激素激素v使血糖浓度降低的激
4、素使血糖浓度降低的激素 胰岛素胰岛素v使血糖浓度升高的激素使血糖浓度升高的激素 胰高血糖素、肾上腺素、肾上胰高血糖素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长素、甲状腺素腺皮质激素、生长素、甲状腺素v它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。实现的。v在激素发挥调节血糖浓度的作用中，最重要的是胰岛素和胰在激素发挥调节血糖浓度的作用中，最重要的是胰岛素和胰高血糖素。肾上腺素在应激时发挥作用，而肾上腺皮质激素、高血糖素。肾上腺素在应激时发挥作用，而肾上腺皮质激素、生长激素、甲状腺素等都可影响血糖水平，但在生理性调节生长激素、甲状腺素等都可
5、影响血糖水平，但在生理性调节中仅居次要地位。中仅居次要地位。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓6胰岛素胰岛素v使肌肉和脂肪组织细胞膜对葡萄糖的通透性增加，使肌肉和脂肪组织细胞膜对葡萄糖的通透性增加，利于血糖进入这些组织进行代谢。利于血糖进入这些组织进行代谢。v诱导葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的诱导葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成，加速细胞内葡萄糖的分解利用。合成，加速细胞内葡萄糖的分解利用。v通过使细胞内通过使细胞内cAMPcAMP含量减少，激活糖原合成酶和含量减少，激活糖原合成酶和丙酮酸脱氢酶系，抑制磷酸化酶和糖异生关键酶丙酮酸脱氢酶系，抑制磷酸化酶和糖异生关键酶等，使糖原合成增
6、加，糖的氧化利用、糖转变为等，使糖原合成增加，糖的氧化利用、糖转变为脂肪的反应增加，血糖去路增快；使糖原分解和脂肪的反应增加，血糖去路增快；使糖原分解和糖异生减少或受抑制，使血糖来源减少，最终使糖异生减少或受抑制，使血糖来源减少，最终使血糖浓度降低。血糖浓度降低。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓7 胰高血糖素胰高血糖素 主要通过提高靶细胞内主要通过提高靶细胞内cAMPcAMP含量达到调节血糖浓度含量达到调节血糖浓度的目的。细胞内的的目的。细胞内的cAMPcAMP可激活依赖可激活依赖cAMPcAMP的蛋白激酶，的蛋白激酶，后者通过酶蛋白的共价修饰改变细胞内酶的活性，后者通过酶蛋白的共价修饰改变细胞内
7、酶的活性，即激活糖原分解和糖异生的关键酶，抑制糖原合成即激活糖原分解和糖异生的关键酶，抑制糖原合成和糖氧化的关键酶，使血糖升高。和糖氧化的关键酶，使血糖升高。肾上腺素肾上腺素 通过通过cAMPcAMP激活肝中糖原磷酸化酶使糖原分解，还激活肝中糖原磷酸化酶使糖原分解，还有诱导肝中磷酸烯醇式丙酮酸激酶及果糖二磷酸酶有诱导肝中磷酸烯醇式丙酮酸激酶及果糖二磷酸酶的合成促进糖异生作用，使氨基酸转化成葡萄糖，的合成促进糖异生作用，使氨基酸转化成葡萄糖，从而使血糖上升。从而使血糖上升。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓8 激素对血糖浓度的影响激素对血糖浓度的影响 -邻甲苯胺法测血糖邻甲苯胺法测血糖实验五胰岛素肾上
8、腺素对血糖浓9目的及要求：目的及要求：掌握邻甲苯胺测血糖的原理和方法掌握邻甲苯胺测血糖的原理和方法掌握血糖的正常范围和意义掌握血糖的正常范围和意义掌握胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响及掌握胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响及作用机制作用机制 实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓10 基本原理基本原理v葡萄糖在有机酸溶液中能与某些芳香胺类化合物如葡萄糖在有机酸溶液中能与某些芳香胺类化合物如苯胺、联苯胺、邻甲苯胺等起缩合反应，生成希夫苯胺、联苯胺、邻甲苯胺等起缩合反应，生成希夫氏（氏（Schiff)Schiff)碱式有色衍生物，再通过分光光度计碱式有色衍生物，再通过分光光度计比色测定得到葡萄糖浓度。比色测定
9、得到葡萄糖浓度。v本实验用的是邻甲苯胺法。本实验用的是邻甲苯胺法。v邻甲苯胺不与非糖还原性物质显色，而与已醛糖显邻甲苯胺不与非糖还原性物质显色，而与已醛糖显色。葡萄糖的醛基在热醋酸溶液中与邻甲苯胺的氨色。葡萄糖的醛基在热醋酸溶液中与邻甲苯胺的氨基互相缩合成兰绿色的希夫氏碱，该兰绿色在一定基互相缩合成兰绿色的希夫氏碱，该兰绿色在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。此法测得正常人的空范围内与葡萄糖浓度成正比。此法测得正常人的空腹血糖值为腹血糖值为70-100mg/dl,70-100mg/dl,兔约为兔约为130mg/dl130mg/dl左右。左右。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓11操作操作1.1.取预先饥
10、饿取预先饥饿14-1614-16小时的正常家兔小时的正常家兔2 2只，称重。只，称重。2.2.从耳缘静脉采血：剪毛从耳缘静脉采血：剪毛二甲苯棉球擦拭二甲苯棉球擦拭干棉球干棉球擦干擦干碘酒、酒精消毒碘酒、酒精消毒77号针头穿刺取血号针头穿刺取血放入加放入加有抗凝剂（草酸钠：有抗凝剂（草酸钠：2mg/ml2mg/ml）的烧杯中）的烧杯中摇匀。摇匀。3.13.1只家兔肌肉注射胰岛素（只家兔肌肉注射胰岛素（5u/Kg5u/Kg），另一只家兔皮），另一只家兔皮下注射肾上腺素（下注射肾上腺素（0.5mg/0.5mg/每只动物）。每只动物）。4.304.30分钟后，分别从耳缘静脉取血。分钟后，分别从耳缘静脉
11、取血。5.5.无蛋白血滤液的制备：取短试管无蛋白血滤液的制备：取短试管3 3只，各加空腹、胰只，各加空腹、胰岛素、肾上腺素处理抗凝血岛素、肾上腺素处理抗凝血0.4ml0.4ml，5%5%三氯醋酸三氯醋酸3.6ml3.6ml，混匀，混匀，3000rpm3000rpm离心离心5min5min，上清即为无蛋白，上清即为无蛋白血滤液。血滤液。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓126.取取4支试管按下表操作（单位：支试管按下表操作（单位：ml）空白管空白管 标准管标准管 样品管样品管1（空腹）（空腹）样品管样品管2（用药）（用药）蒸馏水蒸馏水 1.0 -标准液标准液 -1.0 -血滤液血滤液 -1.0（空腹）
12、（空腹）1.0（用药）（用药）邻甲苯邻甲苯胺试剂胺试剂 2.5 2.5 2.5 2.5 混匀，混匀，100水浴水浴8分钟，冷却。分钟，冷却。630nm比色，读取光密度。比色，读取光密度。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓13 血糖血糖mg/dl=mg/dl=(mg%)计算计算测定管吸光度测定管吸光度标准管吸光度标准管吸光度100实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓14 注意事项注意事项 1.离心机的使用离心机的使用 .离心前一定要配平（位置配平和重量配平）。离心前一定要配平（位置配平和重量配平）。.使用时离心机的盖子一定要盖紧，以免发生意外。使用时离心机的盖子一定要盖紧，以免发生意外。.要等离心机完全静止后
13、才能打开盖子。要等离心机完全静止后才能打开盖子。2.微量移液器的使用微量移液器的使用 3.取血时的注意事项取血时的注意事项 .注射器、刀片的使用。注射器、刀片的使用。.注射器在取血前要肝素化。注射器在取血前要肝素化。.心脏取血时要注意进针的位置和深度。心脏取血时要注意进针的位置和深度。.注意不要将空气注入动物体内。注意不要将空气注入动物体内。血液放入试管中时要先将注射器的针头取下，以防溶血。血液放入试管中时要先将注射器的针头取下，以防溶血。4.邻甲苯胺具有毒性和腐蚀性，操作时要注意。邻甲苯胺具有毒性和腐蚀性，操作时要注意。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓15v临床意义临床意义 1.1.血糖升高：病
14、理性主要见于糖尿病，其血糖升高：病理性主要见于糖尿病，其他内分泌疾病如肾上腺皮质机能亢进，垂体他内分泌疾病如肾上腺皮质机能亢进，垂体前叶机能亢进等。前叶机能亢进等。2.2.血糖降低：病理性如胰岛细胞瘤、胰岛血糖降低：病理性如胰岛细胞瘤、胰岛素分泌过多，过量胰岛素治疗，肾上腺皮质素分泌过多，过量胰岛素治疗，肾上腺皮质功能减退等。功能减退等。实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓16本次实验报告已论文形式书写本次实验报告已论文形式书写实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓17标题标题作者作者单位单位 邮编邮编【摘要】目的：【摘要】目的：方法：方法：结果：结果：结论：结论：【关键词】【关键词】3-5个个正文正文简介简介材料与方法材料与方法1 实验材料实验材料1.1仪器仪器1.2试剂试剂2 实验方法实验方法 详述实验步骤（如给药、取血等）详述实验步骤（如给药、取血等）结果结果 各管各管OD值，给药前后值，给药前后OD及计算及计算讨论讨论参考文献参考文献作者（作者（3人以上就写等）人以上就写等）标题标题 杂志名杂志名年，卷（期）：页码（起年，卷（期）：页码（起-止）止）实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓18
