1、 综合实训三综合实训三 水中菌落总数及大肠菌群数的测定水中菌落总数及大肠菌群数的测定任务一任务一 水中菌落总数的测定水中菌落总数的测定 项目九 综合实训-水中菌落总数的测定水中菌落总数的测定水中菌落总数的测定 检验依据：GB/T5750.12-2006 方法：平皿计数法项目九 综合实训-水中菌落总数的测定菌落总数（菌落总数（colony forming unit)colony forming unit)菌落总数（cfu)水样经过处理，在一定条件下培养后水样经过处理，在一定条件下培养后,所得所得1mL1mL水水样中细菌菌落数量。样中细菌菌落数量。细菌总数 一定数量水样经过处理，在显微镜下对细菌进
2、行一定数量水样经过处理，在显微镜下对细菌进行直接计数。直接计数。项目九 综合实训-水中菌落总数的测定实验目标实验目标 掌握生活饮用水菌落总数的测定方法 掌握水源水菌落总数的测定方法 判定水被细菌污染的程度和水的卫生质量项目九 综合实训-水中菌落总数的测定实验内容实验内容1 1培养基制备培养基制备2 2水样稀释与接种水样稀释与接种3 3结果分析与报告结果分析与报告项目九 综合实训-水中菌落总数的测定实验器材实验器材 水样1、4号号自来水自来水2、5号号水源水（养殖场）水源水（养殖场）3、6号号桶装水桶装水 培养基 营养琼脂培养基营养琼脂培养基项目九 综合实训-水中菌落总数的测定实验器材实验器材
3、设备、器材 无菌工作台、无菌工作台、酒精灯酒精灯、灭菌灭菌吸管吸管、灭菌试管灭菌试管、稀释液稀释液、灭菌平皿灭菌平皿、恒温、恒温培养箱培养箱、高高压蒸汽灭菌器、菌落计数器、压蒸汽灭菌器、菌落计数器、天平、电炉等天平、电炉等项目九 综合实训-水中菌落总数的测定检验程序检验程序生活饮用水水源水倾注培养基培养接种平皿稀释菌落计数项目九 综合实训-水中菌落总数的测定实验操作实验操作 生活饮用水 用灭菌吸管吸取用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中充分混匀的水样，注入灭菌平皿中 水源水 吸取吸取1ml充分混匀的水样，注入盛有充分混匀的水样，注入盛有9ml灭菌生理盐水的灭菌生理盐水的试管中，混
4、匀制成试管中，混匀制成1:10稀释液稀释液 吸取吸取1:10的稀释液的稀释液1ml注入盛有注入盛有9mL灭菌生理盐水的试灭菌生理盐水的试管中，混匀制成管中，混匀制成1：100稀释液稀释液项目九 综合实训-水中菌落总数的测定实验操作实验操作 按同法依次稀释成按同法依次稀释成1:1000,1:10000稀释液等备用稀释液等备用 根据对水样污染情况的估计，选择根据对水样污染情况的估计，选择3 3个个适宜稀释度适宜稀释度,分别作分别作1010倍递增稀释的同时，倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度即以吸取该稀释度的吸管移的吸管移1mL1mL稀释液于灭菌平皿中稀释液于灭菌平皿中项目九 综合实训-水中菌落总数
5、的测定1ml1ml1ml1:1001:101:10001ml1ml1ml加入加入46营养琼脂营养琼脂1520ml水样稀释剂1ml项目九 综合实训-水中菌落总数的测定 每递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管 每个稀释度制作2个平皿 同时做空白试验项目九 综合实训-水中菌落总数的测定实验操作实验操作 倾注营养琼脂培养基 温度：温度：4646左右左右 用量：用量：15mL20mL15mL20mL 培养 温度：温度：3636士士11 时间：时间：4848士士2h2h水样与培养基水样与培养基混匀后混匀后项目九 综合实训-水中菌落总数的测定4848小时后小时后项目九 综合实训-水中菌落总数的测定平皿菌
6、落生长情况平皿菌落生长情况同一稀释度两个平皿同一稀释度两个平皿 一个水样所有平皿一个水样所有平皿平皿菌落平皿菌落项目九 综合实训-水中菌落总数的测定平皿菌落生长情况平皿菌落生长情况同一稀释度两个平皿一个水样所有平皿一个水样所有平皿平皿菌落平皿菌落项目九 综合实训-水中菌落总数的测定平皿菌落生长情况平皿菌落生长情况同一稀释度两个平皿一个水样所有平皿一个水样所有平皿平皿菌落平皿菌落平皿菌落生长情况平皿菌落生长情况项目九 综合实训-水中菌落总数的测定菌落计数及报告方法菌落计数及报告方法 记下各平板的菌落数后，求出同一稀释度两个平板的平均菌落数 选择平均菌落数在30300之间者进行计算项目九 综合实训
7、-水中菌落总数的测定不同稀释度的选择及报告方法不同稀释度的选择及报告方法 只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告（见表中实例（见表中实例1 1）实实例例不同稀释液的平均菌落数不同稀释液的平均菌落数菌落总数菌落总数（CFU/mLCFU/mL）报告方式报告方式 （CFU/mLCFU/mL）1010-1-11010-2-21010-3-31 113651365164164202016 40016 40016 00016 000项目九 综合实训-水中菌落总数的测定不同稀释度的选择及报告方法不同稀释度的选择及报告方法 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则视二
8、者之比值来决定（见表中实例（见表中实例2 2、3 3、4 4）实实例例不同稀释液的平均菌落数不同稀释液的平均菌落数两个稀释两个稀释度菌落数度菌落数之比之比菌落总数菌落总数（CFU/mLCFU/mL）报告方式报告方式 （CFU/mLCFU/mL）1010-1-11010-2-21010-3-32 22760276029529566661.61.6377503775038 00038 0003 32890289027127160602.22.2271002710027 00027 0004 4 150 150 30308 8 2 2 1500 1500 1500 1500项目九 综合实训-水中菌落
9、总数的测定不同稀释度的选择及报告方法不同稀释度的选择及报告方法 只若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中实例（见表中实例5 5）实实例例不同稀释液的平均菌落数不同稀释液的平均菌落数菌落总数菌落总数（CFU/mLCFU/mL）报告方式报告方式 （CFU/mLCFU/mL）1010-1-11010-2-21010-3-35 5多不可计多不可计16501650513513513000513000510 000510 000项目九 综合实训-水中菌落总数的测定不同稀释度的选择及报告方法不同稀释度的选择及报告方法 只有若所有稀释度的平均菌落数均小于3
10、0，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中实例（见表中实例6 6）实实例例不同稀释液的平均菌落数不同稀释液的平均菌落数菌落总数菌落总数（CFU/mLCFU/mL）报告方式报告方式 （CFU/mLCFU/mL）1010-1-11010-2-21010-3-36 62727 11 115 5270270270270项目九 综合实训-水中菌落总数的测定不同稀释度的选择及报告方法不同稀释度的选择及报告方法 若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中实例（见表中实例7 7）实实例例不同稀释液的平均菌落数不同稀释液的平均菌落
11、数菌落总数菌落总数（CFU/mLCFU/mL）报告方式报告方式 （CFU/mLCFU/mL）1010-1-11010-2-21010-3-37 7多不可计多不可计3053051212305003050031 00031 000项目九 综合实训-水中菌落总数的测定不同稀释度的选择及报告方法不同稀释度的选择及报告方法 若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之 不要用“多不可计”报告项目九 综合实训-水中菌落总数的测定菌落计数的报告菌落计数的报告 菌落数在100以内时 按实有数字，以整数报告按实有数字，以整数报告 菌落数大于100时 第第3 3位数位数“四舍五入四舍五入”，取前，取前2 2
12、位数字，后面用位数字，后面用0 0代替代替 也可用也可用10的指数来表示的指数来表示 见表中见表中“报告报告方式方式”栏栏项目九 综合实训-水中菌落总数的测定实实例例不同稀释液的平均菌落数不同稀释液的平均菌落数两个稀释两个稀释度菌落数度菌落数之比之比菌落总数菌落总数（CFU/mLCFU/mL）报告方式报告方式 （CFU/mLCFU/mL）1010-1-11010-2-21010-3-31 1136513651641642020-16 40016 40016 00016 000或或1.61.610104 42 22760276029529566661.61.6377503775038 00038
13、 000或或3.83.810104 43 32890289027127160602.22.2271002710027 00027 000或或2.72.710104 44 4 150 150 30308 8 2 2 1500 1500 1500 1500或或1.51.510103 35 5多不可计多不可计16501650513513-513000513000510 000510 000或或5.15.110105 56 62727 11 115 5-2702702702707 7多不可计多不可计3053051212-305003050031 00031 000或或3.13.110104 4项目九
14、综合实训-水中菌落总数的测定注意事项注意事项 1.无菌操作。2.进行稀释时,吸管口不得与下一个稀释液接触。3.从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过15min。项目九 综合实训-水中菌落总数的测定 4.稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，不可作为水样计数报告的依据。考虑水中含抑菌物质 5.应提前作好稀释用试管和各稀释度培养皿的标记。6.若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。项目九 综合实训-水中菌落总数的测定习题作业习题作业1.平皿计数法(GB/T5750.12-2006)测定的细菌数量是样品中的实际菌数吗？为什么？2.某样品菌落总数测定时，所有稀释度平板上都无菌落生长，试分析出现此结果的原因有哪些。项目九 综合实训-水中菌落总数的测定习题作业习题作业 3.某种鸡厂对生产用水井的水样进行菌落总数测定时，按国家标准将水样处理及培养后，培养皿上生长的菌落数量记录如下：稀释度稀释度皿号皿号 菌落数菌落数10-110-210-31#2913502#279373项目九 综合实训-水中菌落总数的测定习题作业习题作业 请回答下列问题：（1）对水样进行处理及培养条件是指什么？（2）本次实验选择的稀释度是多少？选择依据是什么？（3）列式计算并正确对测定结果进行报告。（4）该指标（菌落总数）国家检验标准是什么（写出GB代号）？简要写出其检验程序。
