1、环境内分泌干扰物环境内分泌干扰物内容内容2一、环境内分泌干扰物的分类一、环境内分泌干扰物的分类二、环境内分泌干扰物的危害二、环境内分泌干扰物的危害三、环境内分泌干扰物的作用机制三、环境内分泌干扰物的作用机制四、环境内分泌干扰物的筛检方法四、环境内分泌干扰物的筛检方法一、环境内分泌干扰物的分类一、环境内分泌干扰物的分类（一）内分泌干扰物名称由来1997年年掠夺未来掠夺未来,提出了内分泌干扰提出了内分泌干扰(endocrine disrupting，ED)物质的概念。物质的概念。31996年年“Our Stolen Future”提出。提出。环境中存在着一类化学物质，当进入动物体内之后环境中存在着
2、一类化学物质，当进入动物体内之后能起到干扰体内正常激素分泌的作用，从而影响生能起到干扰体内正常激素分泌的作用，从而影响生殖功能，导致恶性肿瘤的产生，这类化学物质即所殖功能，导致恶性肿瘤的产生，这类化学物质即所谓的谓的“外源性内分泌干扰物质外源性内分泌干扰物质”内分泌干扰物质是指可通过干扰生物或人为保持自身平衡和调节发育过程而在体内产生的天然激素的合成、分泌、运输、结合、反应和代谢等，从而对生物或人体的生殖、神经和免疫系统等的功能产生影响的外源性化学物质。美国 EPA的定义 内分泌调节物：引起完好无损生物体或其后代中内分泌功能变化不利影响的外源物质，它们主要是通过人类的生产和生活排放到环境中的污
3、染物，又可以称之为环境激素。欧盟定义（二）内分泌干扰物的定义（二）内分泌干扰物的定义4(三三)环境内分泌干扰物的分类环境内分泌干扰物的分类5EDCs天然天然化学物化学物人工合成人工合成化学物化学物天然雌激素天然雌激素植物雌激素植物雌激素真菌雌激素真菌雌激素人工合成的雌激素人工合成的雌激素环境化学污染物环境化学污染物雌二醇、雌酮、雌三醇大豆异黄酮香豆雌酚玉米赤霉烯酮己烯雌酚、己烷雌酚炔雌醇、炔雌醚等二噁英、多氯联苯双酚A、邻苯二甲酸酯类等6按照按照EDCs的干扰功能分类的干扰功能分类EDCs雌激素干扰物雌激素干扰物雄激素干扰物雄激素干扰物甲状腺干扰物甲状腺干扰物胰岛素干扰物胰岛素干扰物糖皮质激素
4、干扰物糖皮质激素干扰物肾上腺皮质激素干扰物肾上腺皮质激素干扰物 按照对按照对EDCsEDCs的认识程度分类的认识程度分类二、环境内分泌干扰物的危害二、环境内分泌干扰物的危害危害危害致癌致畸致癌致畸生殖异常生殖异常 动物雌性化现象动物雌性化现象神经毒性神经毒性其他其他如阻止植物固氮如阻止植物固氮免疫毒性免疫毒性1.1.男婴出生率下降男婴出生率下降 自20世纪70年代以来，加拿大男婴的出生率下降了0.22%，美国下降了0.1%。2.2.男性精子男性精子异常且不育患者增加，男子女性化程度加剧异常且不育患者增加，男子女性化程度加剧 从1940年到1990年这50年间，人类的精子密度下降了50%3.3.
5、诱发女性生殖系统问题诱发女性生殖系统问题 性早熟、月经失调、子宫内膜炎症、不孕症、卵巢癌、乳性早熟、月经失调、子宫内膜炎症、不孕症、卵巢癌、乳腺癌等增加腺癌等增加 现在全球每年约有50万名妇女死于乳腺癌，且发病率以每年520的速度上升；20世纪60年代，美国女性一生中乳腺癌的发生几率仅为1/20，而20世纪90年代上升为1/8(一一)对人体健康的影响对人体健康的影响4.对发育的影响对发育的影响 胎儿和婴儿胎儿和婴儿出现先天性畸形、发育不全和痴呆的出现先天性畸形、发育不全和痴呆的病例增加。病例增加。5.引起人的引起人的神经系统神经系统功能障碍、智力低下。功能障碍、智力低下。6.可损害人体可损害人
6、体免疫系统免疫系统，降低免疫力。，降低免疫力。7.诱发诱发肿瘤发生肿瘤发生(一一)对人体健康的影响对人体健康的影响日本米糠油事件中日本米糠油事件中PCBs（多氯联苯）受害者的惨状（多氯联苯）受害者的惨状（二）对野生生物的危害（二）对野生生物的危害上世纪上世纪50年代：年代：英国水獭英国水獭种群数量下降；种群数量下降；1952年：年：佛罗里达鹰佛罗里达鹰的数量下降；的数量下降；上世纪上世纪60年代：年代：蜜歇根湖貂类蜜歇根湖貂类丧失生殖能力丧失生殖能力，出生率下降；，出生率下降；1970年：安大略湖年：安大略湖80%鸥鸟鸥鸟死亡；死亡；1980年：佛罗里达鳄鱼发育异常；年：佛罗里达鳄鱼发育异常；
7、1988年：年：北欧大批海豹北欧大批海豹死亡；死亡；上世纪上世纪90年代早期：年代早期：地中海大批海豚地中海大批海豚死亡死亡19981998年发现多只年发现多只北极熊北极熊生殖器官变异；生殖器官变异；19941994年年4 4月，日本月，日本7 7条河流中的条河流中的雄鲤鱼雄鲤鱼有有1/41/4雌性化；雌性化；Missing back left legExtra back right legTail not absorbed 19961996年夏天在明尼苏达州发现的畸形青蛙年夏天在明尼苏达州发现的畸形青蛙（二）对野生生物的危害（二）对野生生物的危害三、环境内分泌干扰物的作用机制三、环境内分泌干
8、扰物的作用机制 EDCs能干扰体内內源激素的合成、分泌、运输、结合、代谢，影响内分泌系统的正常生理功能，而内分泌系统紊乱又使免疫系统和中枢神经系统受到伤害。（一）影响机体正常内分泌功能的机制（一）影响机体正常内分泌功能的机制 1.与受体直接结合（1）与雄激素受体结合，表现出抗雄激素效应 烯菌酮、杀虫剂N-（3、5-二氯苯基）-1、2-二甲基环丙烷-1、2-二甲酰亚胺和p、p-DDE2,2-双-(对氯苯基)-1,1-二氯乙烯 1.与受体直接结合（2）雌激素受体（ER）介导的反应这些化学品的效应与这些化学品的效应与-雌二醇（雌二醇（E2E2）等内源雌激素相似，）等内源雌激素相似，包括包括DDTDD
9、T、烷基苯酚、双酚、烷基苯酚、双酚A A等等（一）影响机体正常内分泌功能的机制（一）影响机体正常内分泌功能的机制2：与生物体内激素竞争靶细胞上的受体 通过竞争的结果，环境激素与靶细胞上的受体结合，减少受体对天然激素的吸附或阻碍天然激素与受体结合，从而减少了天然激素的作用。天然激素与受体的结合受环境激素的阻碍，进而影响激素信号在细胞、器官、组织的传递，导致机体功能失调。（一）影响机体正常内分泌功能的机制（一）影响机体正常内分泌功能的机制3：有些内分泌干扰物可产生类似雌激素的效应，却与雌激素受体的信号传递途径无关。芳烃受体（AhR）即为性激素受体外的一种信号传递途径，它可以与许多环境污染物如二恶英
10、和呋喃结合，产生抗雌激素活性，包括增加雌激素代谢（降低内源雌激素水平）、降低雌激素受体ER的结合活性以及降低ER介导的基因表达等。（一）影响机体正常内分泌功能的机制（一）影响机体正常内分泌功能的机制 EDCs影响大脑皮层、下丘脑、脑垂体等对激素的调节作用，导致激素合成、释放、运输异常。如有机磷农药能与体内胆碱酯酶结合，形成稳定的磷酸化胆碱酯酶，使胆碱酯酶失去活性，丧失分解乙酰胆碱的能力，造成体内胆碱的蓄积，从而引起神经传导功能紊乱，出现一系列中毒症状。（二）影响神经递质的传导，毒害神经系统（二）影响神经递质的传导，毒害神经系统 金属铅和许多农药都对睾丸有较强的毒性作用；在雌性生殖系统中，环境激
11、素可以影响卵泡的发育和成熟、性激素的合成与释放。有机氯农药能使鸟类产蛋数目减少，蛋壳变薄和胚胎不易发育。(三三)作用于生物体的生殖腺，影响性激素分泌作用于生物体的生殖腺，影响性激素分泌 环境毒物通过影响肝肾代谢功能，改变体内的激素水平。有机磷、有机氯农药可以诱导肝脏甾醇羟化酶、微粒体酶，从而加速内源性激素的代谢和排泄。艾氏剂和狄氏剂可使大鼠的谷丙转氨酶和醛缩酶的活性升高 DDT对ATP酶有抑制作用。(四四)作用于生物体的肝脏肾脏作用于生物体的肝脏肾脏 人的免疫系统在环境激素的长期作用下，会发生免疫失调和病理反应。Pb、Hg可使机体产生过敏性发病综合症；一些杀虫剂可引起免疫性溶血性贫血。(五五)
12、影响机体免疫细胞对抗原的识别影响机体免疫细胞对抗原的识别（六六）致癌、致畸作用）致癌、致畸作用 一些环境激素可作用于染色体，使其数目或结构发生变化，改变某些基因的序列，使得组织、细胞生长失控，产生肿瘤，如发生在生殖细胞，则可造成流产、畸胎或遗传性疾病；胎儿出生后体细胞遗传物质的突变易引起肿瘤。DEHP处理导致的子代小鼠无尾畸形处理导致的子代小鼠无尾畸形右边个体为对照组右边个体为对照组箭头所示的红点处为箭头所示的红点处为本应长尾的位置本应长尾的位置25Perinatal Exposure to the Phthalates DEHP,BBP,and DINP,but Not DEP,DMP,or
13、 DOTP,Alters Sexual Differentiation of the Male RatEffect of DEHP on testicular development.研究范例研究范例 L.Earl Gray Jr et al./TOXICOLOGICAL SCIENCES 58,350365(2000)Testis were malformation and stunting after DINP treatmentLeft:Maternal treatment with corn oil 0.75 g/kg/dayRight:Maternal treatment with
14、DINP 0.75 g/kg/dayEDCs能干扰体内內源激素的合成、分泌、运输、结合、代谢，影响内分泌系统的正常生理功能，而内分泌系统紊乱又使免疫系统和中枢神经系统受到伤害。这种鉴定的终点是雌激素反应蛋白或蛋白mRNA，与雌激素受体结合实验相比，结果更具可信性。人乳癌细胞（MCF-7）增殖实验3：有些内分泌干扰物可产生类似雌激素的效应，却与雌激素受体的信号传递途径无关。上世纪90年代早期：地中海大批海豚死亡1997年掠夺未来,提出了内分泌干扰(endocrine disrupting，ED)物质的概念。Tail not absorbed人的免疫系统在环境激素的长期作用下，会发生免疫失调和病理
15、反应。雌激素受体竞争性抑制法1997年掠夺未来,提出了内分泌干扰(endocrine disrupting，ED)物质的概念。22%，美国下降了0.如有机磷农药能与体内胆碱酯酶结合，形成稳定的磷酸化胆碱酯酶，使胆碱酯酶失去活性，丧失分解乙酰胆碱的能力，造成体内胆碱的蓄积，从而引起神经传导功能紊乱，出现一系列中毒症状。天然激素与受体的结合受环境激素的阻碍，进而影响激素信号在细胞、器官、组织的传递，导致机体功能失调。Tail not absorbed（1）酵菌转基因获得的性激素受体表达实验双酚A、邻苯二甲酸酯类等1、研究不足，情况不明Compared to control testes,this
16、DINP-treated male right testes display atrophic tubules that lack any evidence of spermatogenesis.In addition,the lumen of both the left and right caudae epididymidis from this male contain cellular debris and reduced numbers of sperm.controlDINP27研究范例研究范例Leon E.Gray,Jr et al./TOXICOLOGICAL SCIENCES
17、 123(1),206216(2011)Dose-Response Assessment of Fetal Testosterone Production and GeneExpression Levels in Rat Testes Following In Utero Exposure to DEHP,DIBP,DIHP,DINP28With the drug concentration increased,testosterone levels gradually decline.研究范例研究范例Leon E.Gray,Jr et al./TOXICOLOGICAL SCIENCES 1
18、23(1),206216(2011)研究范例研究范例Leon E.Gray,Jr et al./TOXICOLOGICAL SCIENCES 123(1),206216(2011)Insl3:胰岛素样因子胰岛素样因子3StAR:类固醇激素合成急性调节蛋白类固醇激素合成急性调节蛋白Cyp11A:细胞色素细胞色素P450亚家族成员亚家族成员四、环境内分泌干扰物筛检方法四、环境内分泌干扰物筛检方法（一）体内实验 1.动物喂养实验 2.啮齿动物切除卵巢后子宫肥大实验或动情期 实验（二）体外实验 1.雌激素受体竞争性抑制法 2.标志基因鉴定30 1.动物喂养实验（一）体内实验（一）体内实验31EDCs妊
19、娠鼠妊娠鼠皮下注射皮下注射雄性子代雄性子代后代不育情况后代不育情况成年后睾丸发育情况成年后睾丸发育情况生殖腺损害情况生殖腺损害情况通过测定EDCs对动物是否具有促进子宫生长的作用来评价其雌激素活性。该种实验直接作用于雌激素效应器，可以直接显示化学物的类雌激素功能。2.2.啮齿类动物切除卵巢后子宫肥大实验或动情啮齿类动物切除卵巢后子宫肥大实验或动情期实验期实验32动物实验的优缺点：动物实验的优缺点：优点：优点：1.最具真实性最具真实性 2.最具说服力最具说服力缺点：缺点：1.实验过程繁琐实验过程繁琐 2.实验结果受动物年龄、性别、品系、个实验结果受动物年龄、性别、品系、个 体差别及取样误差等影响
20、体差别及取样误差等影响 3.对环境低浓度暴露不易获得正确结果对环境低浓度暴露不易获得正确结果（一）体内实验（一）体内实验1.1.雌激素受体竞争性抑制法雌激素受体竞争性抑制法基于基于ELISA的受体竞争结合法检测环境雌激素的受体竞争结合法检测环境雌激素方法：采用免疫测定介导受体竞争结合试验定量检测环境雌激素将17-雌二醇-BSA固定在微孔板上，环境雌激素与微孔板上的17-雌二醇-BSA竞争性的与雌激素受体结合，与微孔板上17-雌二醇-BSA结合的受体与雌激素受体的抗体、雌激素受体抗体的二抗形成一个三明治形式的复合物，通过显色剂显色，最后用比色法对试验结果进行定量。结果：整个反应中环境雌激素浓度越
21、高，溶液的吸光度值的变化就越小，环境雌激素的浓度与吸光度值成负相关。（二）体外实验（二）体外实验34NoImage（1）酵菌转基因获得的性激素受体表达实验）酵菌转基因获得的性激素受体表达实验 主要检测雌激素受体结合依赖性转录和转录活性。此法是用具有完整的人雌激素受体DNA的表达质粒和带有-半乳糖苷酶结构基因上游的雌激素反应元件的标志质粒转化酵母菌酿酒酵母菌形成激素依赖性转录活化因子，然后加入雌激素或待测的物质培养当雌性物质结合到受体上激活相应的激素反应元件合成-半乳糖苷酶，利用酶-底物法检测其活性。2.2.标志基因鉴定标志基因鉴定烯菌酮、杀虫剂N-（3、5-二氯苯基）-1、2-二甲基环丙烷-1
22、、2-二甲酰亚胺和p、p-DDE2,2-双-(对氯苯基)-1,1-二氯乙烯该种实验直接作用于雌激素效应器，可以直接显示化学物的类雌激素功能。Gray,Jr et al.Expression Levels in Rat Testes Following In Utero Exposure to DEHP,DIBP,DIHP,DINP自来水厂加氯消毒的副产物，工业固体废弃物的随意堆放等因素导致EDCs渗入水环境；Pb、Hg可使机体产生过敏性发病综合症；这种鉴定利用原代肝细胞受试，原代培养的细胞刚刚离体，其生物学特征未发生很大变化，保留了细胞的代谢活性，可最接近和反映体内生长特性。Tail not
23、absorbed22%，美国下降了0.上世纪50年代：英国水獭种群数量下降；啮齿类动物切除卵巢后子宫肥大实验或动情期实验EDCs能干扰体内內源激素的合成、分泌、运输、结合、代谢，影响内分泌系统的正常生理功能，而内分泌系统紊乱又使免疫系统和中枢神经系统受到伤害。NoImageNoImage人雌激素受体人雌激素受体DNA-半乳糖苷酶结构基因上游雌激素反应元件半乳糖苷酶结构基因上游雌激素反应元件NoImage待测物质待测物质有颜色显示有颜色显示无颜色显示无颜色显示(2)质粒载体转染法 构建含有由雌激素、雄激素或视黄酸应答的DNA加强元件的激素诱导控制下的莹虫酶基因的标志质粒载体，然后将这些载体短暂转
24、染入含有相应受体的人类卵巢瘤BG-1细胞系中，显示它们同各自激素反应诱导莹虫酶的能力。2.2.标志基因鉴定标志基因鉴定3.细胞增殖实验细胞增殖实验 人乳癌细胞（MCF-7）增殖实验实验原理实验原理MCF-7：激素依赖性细胞系，加入雌激素后诱导细胞增殖。实验结果判断实验结果判断比较在加入10%血清后的培养液中，加或不加 E2 或类雌激素物质培养后的细胞数量。研究实例Harris 等利用此细胞系研究二噁英（TCDD）及其结构类似物对雌激素受体的影响，认为TCDD及TCDD类似物通过诱导CYP1A1基因表达而产生抗雌激素作用。39实验原理实验原理卵黄黄素：卵生脊椎动物幼年期由肝脏合成的 雌激素依赖性
25、蛋白前体，成年雌性体内含量极微或不能检出，但在 雌激素或类雌激素物质作用下可过度表达。实验结果判断实验结果判断检测VTG或其mRNA含 量即可判断该化合物有无雌激素活性或其作用强度。应用价值应用价值 作为鱼、蟾蜍、爬行动物等卵生动物的雌性激素的一种生物标志，其诱导实 验检测环境雌激素干扰物质暴露。4.卵黄黄素诱导实验卵黄黄素诱导实验 这种鉴定利用原代肝细胞受试，原代培养的细胞刚刚离体，其生物学特征未发生很大变化，保留了细胞的代谢活性，可最接近和反映体内生长特性。这种鉴定的终点是雌激素反应蛋白或蛋白mRNA，与雌激素受体结合实验相比，结果更具可信性。4.卵黄黄素诱导实验卵黄黄素诱导实验五五.我国
26、我国EDCs防治现状防治现状问题及对策问题及对策我国我国EDCs污染研究控制中的问题污染研究控制中的问题 基础研究较薄弱，识别和鉴定存在一定困难，基础研究较薄弱，识别和鉴定存在一定困难，名录的确定存在很大争议；名录的确定存在很大争议；很多很多EDCs的具体作用机制仍不明朗，各种环的具体作用机制仍不明朗，各种环境激素的致毒浓度等参数仍需进一步研究；境激素的致毒浓度等参数仍需进一步研究；国内的国内的EDCs研究正处于起步阶段，所得数据研究正处于起步阶段，所得数据有限；有限；v EDCs的来源十分广泛，垃圾焚烧、汽车尾气、的来源十分广泛，垃圾焚烧、汽车尾气、烹饪油烟、烹饪油烟、化工生产过程等均可产生化工生产过程等均可产生EDCs；v农药、化肥的大量使用，有机废水的排放农药、化肥的大量使用，有机废水的排放;v自来水厂加氯消毒的副产物，工业固体废弃物的自来水厂加氯消毒的副产物，工业固体废弃物的随意堆放等因素导致随意堆放等因素导致EDCs渗入水环境；渗入水环境；v渤海每年铅入海量渤海每年铅入海量，镉，镉，汞，汞，砷，砷，有机锡的年使，有机锡的年使用量高达用量高达7500t；五五.我国我国EDCs防治现状防治现状问题及对策问题及对策NoImage谢谢观看谢谢观看NoImage谢谢观看谢谢观看
