1、1第七章第七章 体液蛋白质检验体液蛋白质检验人人类白蛋白分子类白蛋白分子 2v本章内容概要：本章内容概要：第二节第二节 体液蛋白质测定体液蛋白质测定第一节第一节 概述概述31 1、掌握掌握血浆蛋白质的组成、功能及分类；个别血浆蛋白质血浆蛋白质的组成、功能及分类；个别血浆蛋白质（前白蛋白、白蛋白）的来源和生理功能；血清总蛋白和白（前白蛋白、白蛋白）的来源和生理功能；血清总蛋白和白蛋白的测定方法和原理。蛋白的测定方法和原理。2 2、熟悉熟悉急性时相反应蛋白的概念和种类；血清球蛋白和纤急性时相反应蛋白的概念和种类；血清球蛋白和纤维蛋白原的测定方法。维蛋白原的测定方法。3 3、了解了解其他蛋白质的来源
2、和生理功能；尿液蛋白和脑脊液其他蛋白质的来源和生理功能；尿液蛋白和脑脊液蛋白的检测蛋白的检测 。v本章教学要求：本章教学要求：第一节第一节 概述概述一、血浆蛋白质的分类和功能二、血清蛋白质电泳组分的临床分析三、血浆蛋白质及其异常四、其他体液蛋白质4一、血浆蛋白质的分类和功能一、血浆蛋白质的分类和功能v组成：组成：种类：种类：1000种种 500种种 200种种含量：含量：g mg g来源：肝脏是蛋白质主要的加工厂来源：肝脏是蛋白质主要的加工厂（一）血浆蛋白质的组成、功能及分类（一）血浆蛋白质的组成、功能及分类6血浆蛋白质血浆蛋白质的功能的功能血浆蛋白质血浆蛋白质的分类的分类7 7v分离方法分离
3、方法盐析法：白蛋白盐析法：白蛋白/球蛋白球蛋白（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液）半饱和的硫酸铵溶液）电泳法：电泳法：醋酸纤维素薄膜电泳：醋酸纤维素薄膜电泳：6种种琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳：13种种聚丙烯酰胺凝胶电泳：聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种种SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：300种种分分辨辨率率增增高高-+纤维蛋白原纤维蛋白原醋酸纤维素薄膜醋酸纤维素薄膜醋纤膜电泳或琼脂糖电泳：5个成分 清蛋白1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白分辨率高时：可有7个成分 有1和2 2中也可有两条聚丙烯酰胺凝胶电泳：可以分出30多种蛋白质醋纤膜电泳或琼脂糖电泳：5个成分清蛋白 1
4、球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白2.电泳分类法电泳分类法是临床实验室常是临床实验室常 用的血浆蛋白质用的血浆蛋白质 电泳方法电泳方法分辨率高时：可有7个成分 有1和2 2中也可有两条聚丙烯酰胺凝胶电泳：可以分出30多种蛋白质93.功能分类法功能分类法（1）运输载体类u血浆脂蛋白：包括血浆脂蛋白：包括CMCM、VLDLVLDL、LDLLDL、HDLHDL等等u前清蛋白与清蛋白前清蛋白与清蛋白u甲状腺素结合球蛋白甲状腺素结合球蛋白u皮质素结合球蛋白皮质素结合球蛋白u类固醇激素结合球蛋白类固醇激素结合球蛋白u视黄醛结合蛋白视黄醛结合蛋白u转铁蛋白转铁蛋白u触珠蛋白触珠蛋白u血色素结合蛋白血色素结合蛋
5、白u铜蓝蛋白铜蓝蛋白（2）蛋白酶抑制物：包括1-抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋白酶、2-巨球蛋白等6种以上（3）血清酶类：血浆固有酶如LCAT等组织细胞少量释放的细胞内酶 细胞破裂而进入血循环的细胞内酶（4）蛋白类激素：胰岛素、胰高血糖素、生长激素等（5）凝血蛋白类（6）免疫球蛋白类（7）补体蛋白类（2）蛋白酶抑制物：包括1-抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋白酶、2-巨球蛋白等6种以上（3）血清酶类：血浆固有酶如LCAT等组织细胞少量释放的细胞内酶 细胞破裂而进入血循环的细胞内酶（4）蛋白类激素：胰岛素、胰高血糖素、生长激素等（5）凝血蛋白类（6）免疫球蛋白类（7）补体蛋白类还有许多种类的蛋白质未被认识还有许多
6、种类的蛋白质未被认识2.功能分类法功能分类法 1 1.作为运载蛋白作为运载蛋白 2 2.组织蛋白酶抑制物组织蛋白酶抑制物 3 3.在血浆中起催化作用的酶在血浆中起催化作用的酶 4 4.参与代谢调控作用的蛋白质和肽类激素参与代谢调控作用的蛋白质和肽类激素 5 5.参与凝血与纤维蛋白溶解参与凝血与纤维蛋白溶解 6 6.组成体液免疫防御系统（组成体液免疫防御系统（IgIg与补体与补体）所有血浆蛋白质能所有血浆蛋白质能 维持血浆胶体渗透压维持血浆胶体渗透压 组成血液组成血液pHpH缓冲系统缓冲系统（二）血浆蛋白质的功能（二）血浆蛋白质的功能生物生物化学化学急性时相反应（acute phase reac
7、tion，APR）：血浆蛋白质对急性炎症和组织损伤的非特异性反应。此时许多蛋白质：如1-抗胰蛋白酶、1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、C4、C3、纤维蛋白原和C-反应蛋白等浓度显著升高或升高，而少数蛋白质如前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白则出现相应下降。急性时相反应蛋白(acute phase reactive protein，APP)：对急性炎症和组织损伤起非特异反应从而出现浓度变化的血浆蛋白质。增加的蛋白质称为正向APP下降的蛋白质称为负向APP121.急性时相反应（三）影响血浆蛋白质浓度的因素（三）影响血浆蛋白质浓度的因素机体哪些情况会出现急性时相反应？急性细菌性感染如急性肺炎、链球菌感染
8、性肾炎急性非特异性炎症如风湿性关节炎、类风湿性关节炎、风湿性心脏病等急性心肌梗死恶性肿瘤手术、创伤13APR的机制的机制v炎症损伤部位释放的细胞因子，包括白介素、炎症损伤部位释放的细胞因子，包括白介素、肿瘤坏死肿瘤坏死因子因子和和、干扰素以及血小板活化因子等，、干扰素以及血小板活化因子等，引发肝细引发肝细胞中上述蛋白质合成量的改变胞中上述蛋白质合成量的改变。v正向正向APPAPP是机体防御机制的一个部分，如：是机体防御机制的一个部分，如：增加的蛋白酶抑制剂控制组织中的酶活性增加的蛋白酶抑制剂控制组织中的酶活性 触珠蛋白保护从破坏红细胞中释放的触珠蛋白保护从破坏红细胞中释放的Hb Hb C C反
9、应蛋白等可活化反应蛋白等可活化补体补体v负向负向APPAPP多作为营养蛋白，此时合成减少，可为多作为营养蛋白，此时合成减少，可为合成正向合成正向APPsAPPs提供更多的氨基酸原料。提供更多的氨基酸原料。14 APR的时相的时相vC-C-反应蛋白：首先升高反应蛋白：首先升高v1-1-酸性糖蛋白：酸性糖蛋白：1212小时内也升高小时内也升高v1-1-抗胰蛋白酶、触珠蛋白、抗胰蛋白酶、触珠蛋白、C4C4和纤维蛋白原然后和纤维蛋白原然后升高升高vC3C3和铜蓝蛋白：最后是升高和铜蓝蛋白：最后是升高v通常在通常在2 25 5天内这些天内这些APPsAPPs达到最高值达到最高值15测定测定APP的临床意
10、义的临床意义帮助帮助监测炎症的发生、变化和观察治疗监测炎症的发生、变化和观察治疗反应，反应，尤其尤其是那些升高最早和最多的蛋白质是那些升高最早和最多的蛋白质1630二、血清蛋白质电泳组分的临床分析二、血清蛋白质电泳组分的临床分析血浆蛋白质和血清蛋白质有何不同？血浆：为生理状况血清：为常用检测标本血浆蛋白质和血清蛋白质有何不同？血浆：为生理状况血清：为常用检测标本31（一）血清蛋白质电泳的正常组分及其含量（一）血清蛋白质电泳的正常组分及其含量清蛋白：5768 1球蛋白：1.05.7 2球蛋白：4.911.2 球蛋白：713 球蛋白：9.818.2醋纤膜电泳正常百分含量清蛋白：5768 1球蛋白：
11、1.05.7 2球蛋白：4.911.2 球蛋白：713 球蛋白：9.818.2醋纤膜或琼脂糖电泳正常区带区带图谱区带图谱扫描图谱扫描图谱kk1.肾病综合征2.肝硬化肝硬化正常图谱典型的典型的-桥桥不典型不典型-桥桥IgG型IgA型3.多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤2典型的异常电泳图谱及其扫描曲线典型的异常电泳图谱及其扫描曲线（四）（四）球蛋白增多与球蛋白增多与M蛋白蛋白Ig多克隆性增多：区带呈弥散性升高见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞 疾病或寄生虫感染。Ig单克隆性增多M蛋白：区带局部有深染窄带浆细胞病、尤其恶性浆细胞病时，异常浆细胞单克隆增殖，产生大量单克隆Ig或轻链或重链片段，病人血清
12、或尿液中可出现结构单一的M蛋白Ig多克隆性增多：区带呈弥散性升高见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞 疾病或寄生虫感染。Ig单克隆性增多M蛋白：区带局部有深染窄带浆细胞病、尤其恶性浆细胞病时，异常浆细胞单克隆增殖，产生大量单克隆Ig或轻链或重链片段，病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白2223二、血浆蛋白质二、血浆蛋白质（一）前白蛋白（一）前白蛋白（PAPA）（二）白蛋白（二）白蛋白（ALBALB）（三）（三）1-1-酸性糖蛋白（酸性糖蛋白（AAGAAG）（四）甲胎蛋白（四）甲胎蛋白(AFP)(AFP)（五）结合珠蛋白（五）结合珠蛋白(Hp)(Hp)（六）（六）2-2-巨球蛋白巨球蛋白
13、(AMG)(AMG)（七）铜蓝蛋白（七）铜蓝蛋白(CER/CP)(CER/CP)（八）转铁蛋白（八）转铁蛋白(TRF)(TRF)（九）（九）2 2 微球蛋白微球蛋白(BMG)(BMG)（十）（十）C-C-反应蛋白质反应蛋白质(CRP)(CRP)24v结构：结构：MW=54000MW=54000，四个相同亚基构成的四聚体。，四个相同亚基构成的四聚体。v理化性质：理化性质：p p4.74.7，肝细胞合成，肝细胞合成，半寿期半寿期12 12 小时小时。v测定方法：测定方法：免疫比浊法免疫比浊法免疫扩散技术免疫扩散技术。25v功能：功能：营养指标，载体功能（甲状腺素维生素）。营养指标，载体功能（甲状腺
14、素维生素）。v临床意义临床意义：1.1.作为营养不良的早期指标；作为营养不良的早期指标；2.2.作为肝功能不全的指标，比作为肝功能不全的指标，比AlbAlb更灵敏；更灵敏；3.3.负性急性时相反应蛋白，负性急性时相反应蛋白，急性炎症，恶性肿瘤，急性炎症，恶性肿瘤，肝硬化肝硬化及肾炎等情况下，及肾炎等情况下，PAPA迅速降低。迅速降低。v参考值参考值：0.180.180.45g/L 0.45g/L。26 急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 272829v结构结构：585585个个aaaa残基构成的单链多肽，残基构成的单链多肽，MW=66458MW=66458，含，含17个个二硫二硫键。键。v理化性
15、质理化性质：pI=4pI=45.85.8，肝细胞合成但不储存，半衰期为，肝细胞合成但不储存，半衰期为15-19 15-19 天，占总蛋白的天，占总蛋白的40%40%60%60%，p p7.47.4时带负电。时带负电。v测定方法测定方法：色素结合法：色素结合法:溴甲酚绿（溴甲酚绿（BCGBCG），溴甲酚紫（），溴甲酚紫（BCPBCP）,盐析等。盐析等。（二）白蛋白（二）白蛋白（ALBALB）急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 30v功能功能：营养作用，载体功能（高亲和力），维持血浆渗透压：营养作用，载体功能（高亲和力），维持血浆渗透压和正常和正常p p值。值。v临床意义临床意义：合成受食物影响，敏
16、感性较低。：合成受食物影响，敏感性较低。降低降低:在营养不良，肝功不全，急慢性肝疾病时在营养不良，肝功不全，急慢性肝疾病时;增高增高:少见少见,假性升高。假性升高。v参考值参考值：35-50 g/35-50 g/31v功能功能：蛋白酶抑制物（具有：蛋白酶抑制物（具有9090的抑制蛋白酶活力）。如的抑制蛋白酶活力）。如糜蛋白酶，弹性蛋白酶，但此抑制作用有明显的糜蛋白酶，弹性蛋白酶，但此抑制作用有明显的p p依赖性。依赖性。v临床意义：临床意义：降低：血浆降低：血浆AATAAT仅见于胎儿呼吸迫综合症。仅见于胎儿呼吸迫综合症。升高：炎症、术后，某些激素治疗后。升高：炎症、术后，某些激素治疗后。v参考
17、值：参考值：0.83 0.831.99g/L 1.99g/L 32v结构：结构：181181个个aaaa残基构成的单链多肽，残基构成的单链多肽，MW=4MW=4万，万，含含45%45%的糖，的糖，其中唾液酸占其中唾液酸占11%11%12%12%。v理化性质：理化性质：pIpI值值2.72.73.53.5，肝合成，脓毒症时粒细胞和单核，肝合成，脓毒症时粒细胞和单核细胞及某些肿瘤组织也可合成。细胞及某些肿瘤组织也可合成。位于位于1-1-球蛋白区带。球蛋白区带。v测定方法：测定方法：免疫化学法（扩散免疫化学法（扩散,浊度）浊度）,化学法（间接法），化学法（间接法），ELISAELISA法等法等（三）
18、（三）1-1-酸性糖蛋白（酸性糖蛋白（AAGAAG）急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 33v功能：功能：与免疫防御功能有关，机制不详；抑制血小板凝集与免疫防御功能有关，机制不详；抑制血小板凝集影响胶原纤维形成；参与脂类运输。影响胶原纤维形成；参与脂类运输。v临床意义：临床意义：升高：急性炎症，组织损伤，风湿，肿瘤，升高：急性炎症，组织损伤，风湿，肿瘤，AMI AMI，溃结时；，溃结时；降低：营养不良降低降低：营养不良降低,严重肝损伤和雌激素作用。严重肝损伤和雌激素作用。v参考值：参考值：.25.252.0g/L 2.0g/L。34v结构：结构：590590个个aaaa残基构成的单链多肽，残基构
19、成的单链多肽，MW=6.5万万，万万，含含4%4%的糖。的糖。v理化性质理化性质：pIpI值值.7.7-.8.8，在白蛋白和，在白蛋白和1-1-球蛋白之间。胎球蛋白之间。胎儿肝卵黄囊合成，成人量微，升高由于肿瘤细胞合成。儿肝卵黄囊合成，成人量微，升高由于肿瘤细胞合成。v测定方法：测定方法：免疫化学法（扩散免疫化学法（扩散,火箭电泳）火箭电泳）,ELISA,ELISA等等（四）（四）甲胎蛋白甲胎蛋白(AFP)(AFP)35v功能：功能：胎儿血浆主要蛋白质，调节肝细胞生长和脑细胞发胎儿血浆主要蛋白质，调节肝细胞生长和脑细胞发育；抑制细胞和体液的免疫反应；维持正常妊娠，防止母婴育；抑制细胞和体液的免
20、疫反应；维持正常妊娠，防止母婴排斥。排斥。v临床意义：临床意义：胎儿产前监测（羊水或母血）胎儿产前监测（羊水或母血）增高：原发性肝癌患者诊断和鉴别（增高：原发性肝癌患者诊断和鉴别（80%80%原发增高），原发增高），其他其他癌症也可见增高。癌症也可见增高。v参考值：参考值：20-100g/L(20-100g/L(成人成人)5g/L(5g/L(新生儿新生儿)36v结构：结构：两对肽链形成四聚体，有变异体。两对肽链形成四聚体，有变异体。v理化性质：理化性质：肝合成，肝合成，pIpI 值值为为4.14.1，电泳位，电泳位a2-a2-球蛋白区带球蛋白区带v测定方法：测定方法：电泳法，免疫化学法（扩散电
21、泳法，免疫化学法（扩散,浊度）浊度）,化学法等化学法等（五）结合珠蛋白（五）结合珠蛋白(HpHp)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 37v功能：功能：v与红细胞中释出自由与红细胞中释出自由Hb Hb 结合结合,防止防止Hb Hb 从尿中丢失保存从尿中丢失保存铁铁,急性溶血后一周再生恢复。急性溶血后一周再生恢复。v高效的过氧化物酶。高效的过氧化物酶。v需铁细菌的天然抑菌剂。需铁细菌的天然抑菌剂。v临床意义：临床意义：升高：急性时相反应；升高：急性时相反应；降低：血管内溶血时；雌激素作用。降低：血管内溶血时；雌激素作用。v参考值参考值：0.5-2.2 g/L0.5-2.2 g/L38v结构：结构：
22、MW=62MW=6280 80 万万,分子量最大，由四个相同的亚基组分子量最大，由四个相同的亚基组成，含糖量约。成，含糖量约。v理化性质：理化性质：肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成，半寿期肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成，半寿期5 5 天。天。v测定方法：测定方法：免疫化学等免疫化学等（六）（六）2-2-巨球蛋白巨球蛋白(AMG)(AMG)不属于急性时相反应蛋白不属于急性时相反应蛋白 39v功能：功能：与多种分子和离子结合，影响蛋白水解酶活性（主与多种分子和离子结合，影响蛋白水解酶活性（主要的蛋白酶抑制剂具有选择性保护某些酶的作用）。要的蛋白酶抑制剂具有选择性保护某些酶的作用）。v临床意义临床意义
23、：婴幼儿及儿童比成人高；：婴幼儿及儿童比成人高；升高：雌激素，低蛋白血症尤其是肾病综合征时，可显升高：雌激素，低蛋白血症尤其是肾病综合征时，可显著升高以维持血浆胶体渗透压；著升高以维持血浆胶体渗透压；降低：胰腺炎及前列腺癌时。降低：胰腺炎及前列腺癌时。v参考值：参考值：1.31-2.93g/L1.31-2.93g/L40v结构：结构：MW=12-16 MW=12-16 万万,1046,1046个个aaaa残基构成的单链多肽，含残基构成的单链多肽，含糖约，每分子铜蓝蛋白可结合个铜原子。糖约，每分子铜蓝蛋白可结合个铜原子。v理化性质理化性质：肝合成：肝合成,巨噬细胞和淋巴细胞合成少量；巨噬细胞和淋
24、巴细胞合成少量；p pI I 值值为为4.44.4，具遗传基因多态性。具遗传基因多态性。v测定方法测定方法：免疫化学（扩散或比浊）等：免疫化学（扩散或比浊）等（七）（七）铜蓝蛋白铜蓝蛋白(CER(CER/CP/CP)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 41v功能：功能：具氧化酶活性且起抗氧化剂作用，铜的无毒代谢库具氧化酶活性且起抗氧化剂作用，铜的无毒代谢库v临床意义：临床意义：增加增加感染感染,创伤创伤,肿瘤肿瘤;降低降低-营养不良，严重肝病及肾综营养不良，严重肝病及肾综;协助诊断协助诊断WilsonWilson病（肝病（肝豆状核变性）豆状核变性）v参考值：参考值：0.21-0.53g/L0.2
25、1-0.53g/L42v结构结构：MW=7.7 MW=7.7 万万,单链糖蛋白，含糖约。单链糖蛋白，含糖约。v理化性质：理化性质：肝细胞合成，肝细胞合成，pIpI 值值为为5.5-5.9,5.5-5.9,半寿期半寿期7 7 天，可天，可逆结合多价离子如逆结合多价离子如FeFe、CuCu、ZnZn、Co Co 等，一分子等，一分子TRF TRF 可结合两可结合两个三价铁。个三价铁。v测定方法：测定方法：免疫扩散法，放免法和免疫比浊法等。免疫扩散法，放免法和免疫比浊法等。（八）（八）转铁蛋白转铁蛋白(TRF(TRF/Tf/Tf)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 43v功能：功能：运输铁。运输铁。v
26、临床意义：临床意义：血血TRF TRF 浓度受铁供应调节，缺铁浓度受铁供应调节，缺铁TRFTRF升高，铁治升高，铁治疗后恢复。可用于疗后恢复。可用于贫血的诊断贫血的诊断（缺铁性低色素性贫血（缺铁性低色素性贫血TRFTRF升升高，再障时高，再障时TRFTRF正常或者降低）正常或者降低）和对治疗的监测和对治疗的监测。降低降低:急性时相反应、慢性肝病、营养不良及蛋白丢失时；急性时相反应、慢性肝病、营养不良及蛋白丢失时；升高：妊娠或雌激素会使其降低升高：妊娠或雌激素会使其降低;缺铁性低色素贫血。缺铁性低色素贫血。v参考值：参考值：2.5-4.3 g/L(2.5-4.3 g/L(成人成人)1.30-2.
27、75 g/L(1.30-2.75 g/L(新新生儿生儿)44v结构：结构：MW=11800MW=11800，100100个个aaaa残基构成的单链多肽，分子中含残基构成的单链多肽，分子中含一对二硫键，不含糖。一对二硫键，不含糖。v理化性质：理化性质：pIpI 值值为为5.75.7，淋巴细胞合成，存在细胞表面，特，淋巴细胞合成，存在细胞表面，特别是淋巴和肿瘤细胞。释放入血循环。半衰期别是淋巴和肿瘤细胞。释放入血循环。半衰期107 107 分钟，几乎分钟，几乎由肾小管回收。由肾小管回收。v测定方法：测定方法：放射免疫化学等。放射免疫化学等。（九）（九）2 2 微球蛋白微球蛋白(BMG)(BMG)4
28、5v功能：功能：分子量小，可自由通过肾小球滤过膜，在肾小管分子量小，可自由通过肾小球滤过膜，在肾小管几乎全部重吸收，可监测肾小管功能；是几乎全部重吸收，可监测肾小管功能；是HLAHLA（人类白细胞抗原）链的轻链部分。链的轻链部分。v临床意义：临床意义：增高：肾功能衰竭，炎症及肿瘤时。增高：肾功能衰竭，炎症及肿瘤时。v参考值：参考值：1.0 1.0 2.5 mg/L 2.5 mg/L（血浆）（血浆）v性质：性质：因在急性炎症病人血清中出现，可结合肺炎球菌细胞因在急性炎症病人血清中出现，可结合肺炎球菌细胞壁壁C-C-多糖的蛋白质而命名。多糖的蛋白质而命名。v结构：结构：MW11.5-14 MW11
29、.5-14 万万，分子含个相同的亚基，亚基间靠，分子含个相同的亚基，亚基间靠非共价键连接成圆盘状多聚体。非共价键连接成圆盘状多聚体。v理化性质：理化性质：肝合成，肝合成，pIpI 值值为为6.26.2，电泳位于，电泳位于 区带区带。v测定方法：测定方法：半定量沉淀法（早），免疫化学法。半定量沉淀法（早），免疫化学法。（十）（十）C-C-反应蛋白质反应蛋白质(CRP)(CRP)急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 47v功能：功能：结合多糖，磷脂和核酸；激活补体，抗凝。结合多糖，磷脂和核酸；激活补体，抗凝。v临床意义：临床意义：v第一个认定的急性时相反应蛋白第一个认定的急性时相反应蛋白,是急性时相反
30、应的一个是急性时相反应的一个敏感指标敏感指标，在、创伤、感染、外科手术、肿瘤浸润，在、创伤、感染、外科手术、肿瘤浸润时含量迅速升高，达到正常的时含量迅速升高，达到正常的2000倍。倍。vCRPCRP是非特异性指标是非特异性指标，需结合临床病史。，需结合临床病史。v参考值：参考值：8.0mg/L 8.0mg/L（血浆）（血浆）48v急性时相反应蛋白分类：急性时相反应蛋白分类：升高：升高：其他种蛋白质。其他种蛋白质。降低：降低：前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白49第二节第二节 体液蛋白质测定体液蛋白质测定总蛋白测定总蛋白测定个别个别蛋白质的测定蛋白质的测定蛋白分离测定技术蛋白分
31、离测定技术v发展趋势发展趋势:v测定体液标本测定体液标本:血浆血浆：普遍：普遍尿液，脑脊液和胸腹水等尿液，脑脊液和胸腹水等：有选择性的组织病变检查：有选择性的组织病变检查50v免疫化学法特异定量个别蛋白质免疫化学法特异定量个别蛋白质v体液蛋白质的测定方法概括：体液蛋白质的测定方法概括：常规：免疫浊度法、免疫扩散法，免疫电泳法，常规：免疫浊度法、免疫扩散法，免疫电泳法，微量：放射免疫测定（微量：放射免疫测定（RIARIA），酶免疫测定法（），酶免疫测定法（ELA/ELISAELA/ELISA）51v电泳测定：电泳测定：v定量化学测定定量化学测定TPr，Alb电泳电泳 组成图谱组成图谱 半定量半定
32、量 定量定量染料结合法，染料结合法，UVUV法，折光法等法，折光法等52一、血清总蛋白测定v假设：假设：、纯多肽链，含氮量平均为纯多肽链，含氮量平均为16%16%、各种蛋白质与化学试剂反应性一致，仅为相对定量、各种蛋白质与化学试剂反应性一致，仅为相对定量53v测定依据：蛋白质测定一般利用蛋白质以下的结构或性质测定依据：蛋白质测定一般利用蛋白质以下的结构或性质1 1、元素组成测定：、元素组成测定：含含N N稳定；稳定；2 2、重复的肽链结构：、重复的肽链结构：具有多个肽键；具有多个肽键；3 3、酪氨酸和色氨酸与、酪氨酸和色氨酸与Folin-Folin-酚试剂反应酚试剂反应显色显色或或UV UV
33、吸收；吸收；4 4、与色素结合的能力：、与色素结合的能力：与染料以离子键或共价键连接；与染料以离子键或共价键连接；5 5、沉淀后借浊度测定：、沉淀后借浊度测定：光度计测定；光度计测定；6 6、光折射测定：、光折射测定：折射仪测定。折射仪测定。54v方法方法：1.1.凯氏定氮法参考方法凯氏定氮法参考方法2.2.双缩脲法双缩脲法(推荐推荐)3.3.酚试剂法酚试剂法4.4.散射比浊法散射比浊法5.5.染料结合法染料结合法6.UV 6.UV 法法.折光测定法折光测定法551.凯氏定氮法参考标准方法凯氏定氮法参考标准方法(0.05mg N 0.3g pro)消化消化用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵；（耗时）
34、用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵；（耗时）蒸馏蒸馏用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发；用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发；吸收吸收用酸性溶液（硼酸）吸收气态氨（使用酸性溶液（硼酸）吸收气态氨（使HH+）滴定滴定用已标定的无机酸滴用已标定的无机酸滴（使（使H+恢复），恢复），计算总氮量计算总氮量定蛋白定蛋白（总氮量总氮量-非蛋白氮）非蛋白氮）6.25=6.25=蛋白含量蛋白含量纳氏试剂：碘化汞和碘化钾的碱性溶液与氨反应生成淡黄棕色胶态化合物，其色度与氨氮含纳氏试剂：碘化汞和碘化钾的碱性溶液与氨反应生成淡黄棕色胶态化合物，其色度与氨氮含 量成正比。量成正比。v原理：原理：56v评价：评价：v优点：准确度高，精
35、密度优点：准确度高，精密度高，灵敏度高，是公认的参高，灵敏度高，是公认的参考方法。考方法。v缺点：操作复杂，费时，缺点：操作复杂，费时，不适合常规检测，血清各蛋不适合常规检测，血清各蛋白含氮量会有所变化尤其是白含氮量会有所变化尤其是疾病时。疾病时。v应用：应用：标准蛋白的标定标准蛋白的标定及校正其它常规方法及校正其它常规方法572.双缩脲法双缩脲法v原理：原理：蛋白质中的肽键蛋白质中的肽键（-CONH-CONH-）在在碱性碱性溶液中能与溶液中能与Cu2+作用而产生作用而产生紫红色络合物紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。其颜色的深浅与蛋白质的浓度
36、成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。条件：至少含两个肽键（条件：至少含两个肽键（-CONH-CONH-）基团才能和）基团才能和CuCu2+2+形成络合物形成络合物,氨基酸及二肽无反氨基酸及二肽无反 应应,三肽以上才能反应。三肽以上才能反应。双缩脲生成 加热加热NH322H180022222N 端端C 端端58v评价：评价：v优点：简便，准确，重复性好，优点：简便，准确，重复性好，10g-120g/L10g-120g/L线性好，线性好，特异性与精密度好，批内特异性与精密度好，批内CV%CV%2%2%，显色稳定。，显色稳定。v缺点：灵敏度较差，对蛋白质含量低的体液标本不适缺点：灵敏度较差，
37、对蛋白质含量低的体液标本不适合。合。v应用：应用：常规推荐方法。手工或上机使用。常规推荐方法。手工或上机使用。593.3.酚试剂法酚试剂法v原理：原理：蛋白质分子中的蛋白质分子中的酪氨酸残基酪氨酸残基和和色氨酸残基色氨酸残基能够和能够和酚试剂酚试剂中的中的磷钨酸磷钨酸-磷钼酸磷钼酸反应生成蓝色化合物，反应生成蓝色化合物，LowryLowry改良法：改良法：在在酚试剂中加入酚试剂中加入CuCu2+2+（75%75%呈色），提高了呈色），提高了呈色的灵敏度，为呈色的灵敏度，为双缩脲法的双缩脲法的100100倍左右。倍左右。60v评价及应用：评价及应用：v优点：操作简单，改良法灵敏度高（优点：操作简
38、单，改良法灵敏度高（10g-6010g-60g），适合，适合测定蛋白含量少的标本。测定蛋白含量少的标本。v缺点：各种蛋白质缺点：各种蛋白质酪氨酸酪氨酸和和色氨酸色氨酸比例不同，只适合测定比例不同，只适合测定单一蛋白质。受一些药物干扰。单一蛋白质。受一些药物干扰。614.4.比浊法比浊法v原理：原理：v评价及应用：评价及应用：优点：简便不需特殊仪器。优点：简便不需特殊仪器。缺点：浊度形成的干扰因素多（加试剂方法，反应温度，蛋缺点：浊度形成的干扰因素多（加试剂方法，反应温度，蛋白絮状沉淀等）白絮状沉淀等）某些酸类（磺基水杨酸等）和血清蛋白质结合产生沉淀，某些酸类（磺基水杨酸等）和血清蛋白质结合产生
39、沉淀，测其浊度，与标准对比，可求蛋白含量。测其浊度，与标准对比，可求蛋白含量。625.5.染料结合法染料结合法 在酸性环境下，带正电的蛋白质（在酸性环境下，带正电的蛋白质（-NH3+)与染料的阴离子与染料的阴离子产生颜色反应，使染料的吸收峰改变，可既而用分光光度法产生颜色反应，使染料的吸收峰改变，可既而用分光光度法比色测定。比色测定。v原理：原理：常用染料：常用染料：氨基黑，考马斯亮蓝等氨基黑，考马斯亮蓝等v评价及应用：评价及应用：v优点：操作简便，重复性好，灵敏度高，且干扰因素少。优点：操作简便，重复性好，灵敏度高，且干扰因素少。v缺点：特异性不高；不同蛋白质和染料的结合力不一致，标准物不易
40、缺点：特异性不高；不同蛋白质和染料的结合力不一致，标准物不易确定。确定。636.6.紫外分光光度法紫外分光光度法 蛋白质分子中的蛋白质分子中的酪氨酸酪氨酸和和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在白质溶液在280nm280nm处有一吸收峰处有一吸收峰。可用于测定蛋白质但需避可用于测定蛋白质但需避免核酸干扰。免核酸干扰。（1 1）Lowry-Kalcker Lowry-Kalcker 公式公式 蛋白质浓度（蛋白质浓度（mg/mlmg/ml）=1.45 A=1.45 A 280280-0.74 A -0.74 A 260260 （2 2）Warburg-Christian
41、Warburg-Christian 公式公式 蛋白质浓度（蛋白质浓度（mg/mlmg/ml）=1.55 A=1.55 A 280280-0.76 A -0.76 A 260260 v原理：原理：64v评价及应用：评价及应用：v优点：敏感而简便，可优点：敏感而简便，可保留蛋白生物活性保留蛋白生物活性，常用与较纯的酶，常用与较纯的酶和免疫球蛋白。需和免疫球蛋白。需紫外分光光度计及石英比色皿。紫外分光光度计及石英比色皿。v缺点：各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同；在缺点：各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm280nm测定易受游离色测定易受游离色aaaa和酪和酪aaaa以及尿酸和胆
42、红素的干扰；导以及尿酸和胆红素的干扰；导致准确性和特异性受影响。致准确性和特异性受影响。v措施：在措施：在220-225nm220-225nm波长区域，用波长区域，用0.15mol/l0.15mol/l的的NaClNaCl稀释稀释1000-20001000-2000倍可消除干扰。倍可消除干扰。657.7.折光测定法折光测定法 溶解在溶液中的固体可增加溶液的光折射率，在固定溶解在溶液中的固体可增加溶液的光折射率，在固定波长和温度下，光折射率和血清中蛋白质含量成正比。波长和温度下，光折射率和血清中蛋白质含量成正比。v原理：原理：v评价及应用：评价及应用：v优点：简便、快速，易掌握，重复性较好，适合
43、临床急诊，体检筛查优点：简便、快速，易掌握，重复性较好，适合临床急诊，体检筛查和胸腹水蛋白质测定。和胸腹水蛋白质测定。v缺点：准确性较差，易受高血脂症，高胆红素血症以及溶血等因素影缺点：准确性较差，易受高血脂症，高胆红素血症以及溶血等因素影响，会由于响，会由于A/GA/G比值变化而产生误差。比值变化而产生误差。66v参考范围：成人参考范围：成人606080g/L80g/Lv临床意义：临床意义：总蛋白升高：总蛋白升高：总蛋白降低总蛋白降低：丢失过多丢失过多 消耗增加消耗增加 白蛋白合成减少白蛋白合成减少 水肿水肿真性升高：真性升高：MMMM、巨球蛋白血症、自身免疫性疾病等、巨球蛋白血症、自身免疫
44、性疾病等假性升高：机体明显失水，总蛋白含量相对升高，假性升高：机体明显失水，总蛋白含量相对升高，A/GA/G几乎不变几乎不变67二、血清白蛋白测定v方法方法：1.1.染料结合法染料结合法(推荐推荐)2.2.盐析法盐析法3.3.电泳法电泳法4.4.免疫化学法免疫化学法681.1.染料结合法染料结合法(推荐推荐)v原理原理:血清血清ALBALB可通过可通过离子键或疏水键离子键或疏水键与包括与包括染料染料在内的各种在内的各种有机离子结合有机离子结合,而而GLBGLB很少结合外源性染料很少结合外源性染料,可在可在不分离不分离ALBALB与与GLBGLB的情况下直接测定的情况下直接测定ALBALB。染料
45、染料BCGBCGBCPBCP优点优点 缺点缺点 易于和非人源性白蛋白结合易于和非人源性白蛋白结合 与白蛋白结合特异性较差与白蛋白结合特异性较差 与与非人源性白蛋白结合力弱非人源性白蛋白结合力弱 与白蛋白结合特异性好与白蛋白结合特异性好 在在3030秒内测可提高特异性秒内测可提高特异性69v应用及评价应用及评价:严格控制反应时间的严格控制反应时间的BCGBCG法法既适合既适合手工手工也适合也适合自动自动化分析。化分析。临床上推荐使用临床上推荐使用。70v原理原理:盐析是由于加入大量的中性盐破坏了蛋白质的盐析是由于加入大量的中性盐破坏了蛋白质的水化膜、水化膜、中和其所带的中和其所带的电电荷荷从而使
46、蛋白质分子聚集而从而使蛋白质分子聚集而沉淀沉淀析出。析出。各种蛋白质的各种蛋白质的亲水性亲水性和和带电荷不同带电荷不同，故盐析时所需，故盐析时所需盐浓度与盐浓度与pHpH不同。不同。GLBGLB在生理在生理pHpH下带电荷及水化膜比下带电荷及水化膜比ALBALB少少，可被较低浓度中性盐沉淀。，可被较低浓度中性盐沉淀。2.2.盐析法盐析法中性盐：中性盐：硫酸铵、硫酸钠等硫酸铵、硫酸钠等71v应用及评价应用及评价:操作繁琐，操作繁琐，不宜自动化，基本不用不宜自动化，基本不用723.3.电泳法电泳法v操作：操作：醋纤膜电泳醋纤膜电泳染色染色晾干晾干透明透明光密度仪扫描光密度仪扫描洗脱洗脱比色比色染色
47、染色分离分离测得蛋白组分百分比测得蛋白组分百分比计算得出各种蛋白质含量计算得出各种蛋白质含量半定量半定量定量定量73v评价及应用：评价及应用：优点优点：电泳特异性好，可了解血清蛋白质全貌：电泳特异性好，可了解血清蛋白质全貌缺点缺点：电泳技术繁琐，不易自动化；白蛋白与染料：电泳技术繁琐，不易自动化；白蛋白与染料亲和力高会导致结果偏高亲和力高会导致结果偏高744.4.免疫化学法免疫化学法v原理及特点原理及特点:v应用：应用：特异性高特异性高,但成本较高但成本较高,费时费时,生化检验用的不多生化检验用的不多.75v参考范围参考范围:成人成人353555g/L.55g/L.v临床意义：临床意义：白蛋白
48、升高：白蛋白升高：白蛋白降低：白蛋白降低：丢失过多丢失过多 消耗增加消耗增加 白蛋白合成减少白蛋白合成减少 水肿水肿 先天性先天性ALBALB缺乏病缺乏病真性升高：未见真性升高：未见假性升高：机体明显失水，或治疗输入过多白蛋白假性升高：机体明显失水，或治疗输入过多白蛋白76三、血清球蛋白测定三、血清球蛋白测定v方法方法：间接法间接法:TP-ALB=GLBTP-ALB=GLB直接法直接法:乙醛酸比色法乙醛酸比色法(GLB(GLB中的色氨酸远大于中的色氨酸远大于ALBALB中的色氨酸含量中的色氨酸含量)色氨酸色氨酸+乙醛酸乙醛酸 紫色化合物紫色化合物H H+Hopkins-ColeHopkins-
49、Cole反应反应:v参考范围参考范围:成人成人202030g/L.30g/L.A/G A/G：1.51.52.52.5A/G1,A/G1,比例倒置，清蛋白降低亦可因球蛋白增高引起，见比例倒置，清蛋白降低亦可因球蛋白增高引起，见于严重肝功能损伤及于严重肝功能损伤及M M蛋白血症，如慢性重度以上持续性肝蛋白血症，如慢性重度以上持续性肝炎、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋炎、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等。白血症等。77v临床意义：临床意义：球蛋白升高球蛋白升高：球蛋白降低球蛋白降低：合成减少、低或无合成减少、低或无-球蛋白血症球蛋白血症 真性升高（常见）：自身
50、免疫性疾病、感染反真性升高（常见）：自身免疫性疾病、感染反应、应、MMMM、巨球蛋白血症。、巨球蛋白血症。假性升高（少见）：机体明显失水。假性升高（少见）：机体明显失水。78四、血浆纤维蛋白原测定v血浆纤维蛋白原：血浆纤维蛋白原：结构特点：凝血因子结构特点：凝血因子，肝合成，肝合成，MW=3.4万，大分子糖蛋白，万，大分子糖蛋白，pI5.3，222功能特点：参与凝血功能特点：参与凝血血凝过程中的作用血凝过程中的作用：纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白网纤维蛋白网血凝块血凝块纤维蛋白细丝纤维蛋白细丝血液凝块构造（红色为红血球，兰色为血小板，黄色为纤维蛋白）血液凝块构造（红色为红血球，兰色为血小板，黄色
