1、幽门螺杆菌检测讲课内容讲课内容第一节第一节 幽门螺杆菌特点幽门螺杆菌特点 第二节第二节 幽门螺杆菌感染的检测方法幽门螺杆菌感染的检测方法第三节第三节 幽门螺杆菌检测方法的临床应用幽门螺杆菌检测方法的临床应用123第一节第一节 幽门螺杆菌特点幽门螺杆菌特点 幽门螺杆菌（幽门螺杆菌（Helicobacter pylori Helicobacter pylori 简称简称HPHP），呈），呈弧形或弧形或S S形，有形，有1212个微小弯曲，属个微小弯曲，属微需氧菌微需氧菌，在在pHpH值值为为6868时繁殖时繁殖最为活跃，该菌具有丰富的最为活跃，该菌具有丰富的尿素酶尿素酶，可，可分解食物中的尿素产生
2、氨，该菌生长于胃粘液深层，分解食物中的尿素产生氨，该菌生长于胃粘液深层，胃粘膜表面，多在胃窦部以胃小凹、上皮皱褶的内折胃粘膜表面，多在胃窦部以胃小凹、上皮皱褶的内折及腺腔内为多。及腺腔内为多。H.Pylori感染和十二指肠溃疡感染和十二指肠溃疡H.Pylori感染感染 D/G细胞功能改变细胞功能改变遗传易感性遗传易感性壁细胞总体增加壁细胞总体增加B型慢性胃窦炎型慢性胃窦炎 胃泌素胃泌素 胃酸分泌量胃酸分泌量H.Pylori的迁移的迁移十二指肠粘膜胃上皮化生十二指肠粘膜胃上皮化生十二指肠球炎十二指肠球炎十二指肠球溃疡十二指肠球溃疡H.Pylori感染和胃癌的关系感染和胃癌的关系浅表性胃炎浅表性胃
3、炎正常胃粘膜正常胃粘膜基因损伤基因损伤H.Pylori感染感染弥漫性胃癌弥漫性胃癌萎缩性胃炎萎缩性胃炎环境因素环境因素胃粘膜肠上皮化生胃粘膜肠上皮化生 高高CagA+-HP滴度滴度宿主因素宿主因素 的的H.pylori菌株菌株感染感染肠型早期胃癌肠型早期胃癌进展期胃癌进展期胃癌3.HP的毒力作用的毒力作用取决于取决于 定植能力定植能力 菌株的基因型菌株的基因型 细菌的圆球体样型态细菌的圆球体样型态 对抗菌药物的敏感性对抗菌药物的敏感性第二节第二节 幽门螺杆菌感染的检测幽门螺杆菌感染的检测侵入性检测方法非侵入性检测方法l 快速尿素酶试验l 病理切片染色l 培养l 黏膜涂片革兰氏染色l 基因方法:
4、PCR等l13C-或14C-尿素呼气试验l Hp粪便抗原试验l Hp血清抗体试验试验原理试验原理HP能产生丰富能产生丰富尿素酶，将尿素尿素酶，将尿素分解、产生分解、产生2个个分子的氨，使培分子的氨，使培养基变为碱性，养基变为碱性，酚红呈粉红色。酚红呈粉红色。操作过程操作过程活检同时取活检同时取2块块组织进行检测组织进行检测（胃窦和胃体各（胃窦和胃体各1块），标本放块），标本放置于试剂后观察置于试剂后观察颜色变化。颜色变化。注意事项注意事项检测结果受试剂检测结果受试剂pH值、取材部值、取材部位、组织大小、位、组织大小、细菌量、观察时细菌量、观察时间、环境温度等间、环境温度等因素影响因素影响（一）
5、快速尿素酶试验（一）快速尿素酶试验RUTRUT一一、创伤性检查、创伤性检查 胃镜检查胃黏膜取材胃镜检查胃黏膜取材,直接涂片革兰氏染色，直接涂片革兰氏染色，也可包埋切片，常规也可包埋切片，常规HEHE染色或银染，直接镜检染色或银染，直接镜检观察观察HpHp。直接镜检直接镜检（二）组织学检查（二）组织学检查1.1.免疫组化染色特异性免疫组化染色特异性高。高。2.HE2.HE染色可同时作病理染色可同时作病理诊断；诊断；3.3.荧光原位杂交（荧光原位杂交（FISHFISH）具有较高敏感性具有较高敏感性1.1.在胃镜取胃粘膜放在转在胃镜取胃粘膜放在转运培养基中。运培养基中。2.2.接种于接种于HpHp牛
6、脑浸液培牛脑浸液培养基，分区划线。养基，分区划线。3.3.置置5-125-12CO2CO2培养箱培养箱35-3735-37，3-5d3-5d形成小的形成小的半透明灰色菌落，有微弱半透明灰色菌落，有微弱的溶血环。的溶血环。培养过程培养过程诊断诊断HpHp最可靠的方法，可最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验作为验证其他诊断性试验的的“金标准金标准”。一般用于药敏试验和科研。一般用于药敏试验和科研。（三）细菌培养（三）细菌培养 幽门螺杆菌的尿素酶幽门螺杆菌的尿素酶(A(A、B B、C C、D)D)基因、基因、16S-rDNA16S-rDNA基因、基因、VacAVacA及及CagACagA基因均已克
7、隆成功，基因均已克隆成功，根据幽门螺杆菌不同的耙基因，根据幽门螺杆菌不同的耙基因，设计不同的引物，从而建立不设计不同的引物，从而建立不同的同的PCRPCR系统，扩增产物可经系统，扩增产物可经凝胶电泳分析凝胶电泳分析.原理与方法原理与方法（四）（四）聚合酶链反应试验聚合酶链反应试验(PCR(PCR检测技术检测技术)1.1.与细菌培养和组织学染色镜检比较与细菌培养和组织学染色镜检比较无明显优越性。无明显优越性。2.2.现在可收集胃液现在可收集胃液PCRPCR检测幽门螺杆菌检测幽门螺杆菌敏感性高，但可能与口腔和胃内其它敏感性高，但可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应尿素酶阳性菌丛起交叉反应教
8、学过程：销售经理会管理好销售人员的销售进度一看，二闻，三摸摸，颜色不对，气味不正，出现霉点，食物软化，立刻丢掉不为错。_使学生知道课间活动守秩序应该怎样做。（2）说说你在出行中，看到人们是怎样遵守交通法规的？1客户意向级别的设定询问接待员对某应聘者的印象，他们的意见有助于你对应聘者的性格及是否适合该工作做出全面的评价。出差：是否要求定期长时间出差。学生汇报研究结果，师总结板书。1.1.8考虑岗位现状注：注：HPHP的基因分型（的基因分型（HPHP菌属亚群）及致病性菌属亚群）及致病性分布比例分布比例VacAVacA基因基因CacACacA基因基因致病性致病性型型56%56%+胃炎、十二指肠溃疡、
9、胃癌胃炎、十二指肠溃疡、胃癌型型16%16%-胃炎胃炎中间表达型中间表达型28%28%+/-+/-+/-+/-VacA基因表达空泡毒素基因表达空泡毒素87KDCagA基因表达细胞毒素相关蛋白基因表达细胞毒素相关蛋白128KDCagA基因仅出现于基因仅出现于VacA产生细胞毒效应时产生细胞毒效应时，是是VacA产产生效果的标志生效果的标志原理和过程原理和过程HPHP能产生丰富尿素酶，能分解胃能产生丰富尿素酶，能分解胃中的尿素，当中的尿素，当整粒整粒摄入含同位素摄入含同位素碳碳-13-13的尿素胶囊后，碳的尿素胶囊后，碳-13-13尿素尿素在尿素酶作用下，分解为氨和碳在尿素酶作用下，分解为氨和碳-
10、1313二氧化碳，碳二氧化碳，碳-13-13二氧化碳二氧化碳被小肠上段吸收后，进入血循环，被小肠上段吸收后，进入血循环，并随呼气排出，分析呼气中的碳并随呼气排出，分析呼气中的碳-1313就可诊断该细菌的存在就可诊断该细菌的存在特点和注意事项特点和注意事项1.易于操作；可反映全易于操作；可反映全胃胃Hp感染状况。感染状况。2.检测前一个周内应停检测前一个周内应停用抗生素、铋剂、质子用抗生素、铋剂、质子泵抑制剂等药。泵抑制剂等药。3.孕妇、哺乳期妇女及孕妇、哺乳期妇女及儿童不宜做。儿童不宜做。（一）（一）13C-13C-或或14C-14C-尿素呼气试验尿素呼气试验二、非创伤性检查二、非创伤性检查
11、多采用多采用ELISAELISA双抗体夹双抗体夹心法，或胶体金试条法。心法，或胶体金试条法。留取晨粪便，用稀释液留取晨粪便，用稀释液稀释，再加入试条或微稀释，再加入试条或微孔板检测。孔板检测。原理与方法原理与方法（二）幽门螺杆菌粪便抗原检测（二）幽门螺杆菌粪便抗原检测1.1.粪便抗原检测灵敏度粪便抗原检测灵敏度高、准确性好，高、准确性好，HPHP死亡死亡但抗原成分仍保留下来，但抗原成分仍保留下来，故在治疗前后都可用。故在治疗前后都可用。2.2.适用于所有年龄和类适用于所有年龄和类型的患者（型的患者（儿童儿童）。）。多采用多采用ELISAELISA双抗原夹双抗原夹心法，或胶体金试条法。心法，或胶
12、体金试条法。可快速检测人血清、血可快速检测人血清、血浆或全血中幽门螺杆菌浆或全血中幽门螺杆菌抗体。抗体。原理与方法原理与方法（三）幽门螺杆菌血清抗体检测（三）幽门螺杆菌血清抗体检测1.1.检测的抗体是检测的抗体是IgGIgG，反，反映一段时间内映一段时间内HpHp感染情感染情况，部分试剂盒可同时况，部分试剂盒可同时检测检测CagACagA和和VacAVacA抗体。抗体。2.2.主要适用于流行病学主要适用于流行病学调查。调查。5.学生要听从教师指导，学会正确的运动技术和自我保护。甘油能与乙醇或水相混溶，不能与氯仿、乙醚及脂肪油相混溶，溶解范围虽然不及水和乙醇，但仍为一种良好溶剂。可溶解碱、大多数
13、的盐类、鞣质等成分，也能溶解树胶、可溶性碳水化合物、淀粉等无效物质。甘油黏度大，很少直接用于浸提药材，将甘油加于最初的少量溶剂中（水或醇）可增加鞣质的浸出稳定性。（2）学生必须遵守课堂常规，按时上课，听从指挥、不迟到早退。1.学校网络管理中心必须认真执行中华人民共和国信息系统安全保护条例。2经营的食品必须索证。5.谈判、评审程序和成交标准为了提高中药疗效，拓宽给药途径，使中药得到国际市场的广泛认可，中药生产正兴起剂型创新的热潮，现在出现了颗粒剂、片剂、注射剂、气雾剂、滴剂、膜剂等，这些新剂型的共同要求都需要把中药材中的有效成分分离出来，除去药渣，得到浸出的浓溶液或有效成分的浸出物或有效成分的精
14、制品，才能制成投药途径方便、灵活，疗效好的新剂型。中药提取物制备中成药是中药工业现代化、中药剂型现代化的重要内容之一。七、消防安全管理人应该报当地公安消防科室备案。由于溶液中溶质的存在，在蒸发浓缩过程中溶液浓度会升高，黏度增大，导致溶液沸点的升。2未成交供应商谈判保证金在成交通知书发出后五个工作日内全额无息退还；成交供应商的谈判保证金将在合同签订生效并按规定交纳了履约保证金后五个工作日内全额无息退还。雾化器结构安装：对旋转式雾化器运转时要防止振动。抗蛇毒血清治疗：又名蛇毒抗毒素，有单价多价两种。特异性高，效果确切，应用越早，疗效越好。1、一旦触电，应立即关闭总开关，截断电源。与应聘者握手可以感
15、受他们的心态。如果应聘者轻松自在，他们的手暖而干；紧张的应聘者手凉而有汗。2、外出就餐要注意哪些卫生安全？如果想在这一阶段对应聘者的材料进行核实，需要准备好询问证明人的问题，譬如应聘者安排工作进度及按时完成工作的能力如何？首先需要核实最近的工作经历。询问证明人认识应聘者多久了，了解他们哪些方面的能力？还需要与证明人联系核实书面证明内容光焕发，详细了解应聘者的优缺点。询问证明人应聘者的业余兴趣什么？应聘者说“慈善工作”具体包括哪些内容？应聘者是否真的有时间投入，投入时间多少？常见的煤气中毒原因:1、在密闭居室中使用煤炉取暖、做饭，由于通风不良，供氧不充分，可产生大量一氧化碳积蓄在室内。包括门窗紧
16、闭，又无通风措施，未安装或不正确安装风斗，疏忽大意，思想麻痹，致使煤气大量溢出；气压低，煤气难以流通排出。2、城市居民使用管道煤气，如果管道漏气，开关不紧，均可使煤气大量溢出，造成中毒。3、使用燃气热水器，通风不良，洗浴时间过长。4、冬季在车内发动汽车或开动车内空调后在车内睡眠，都可能引起煤气中毒。第一个，员工每天根据什么卖车；一个公司的老总来到某专营店，他想给主管销售的副总配一辆车。他看了一款车后觉得很不错，价格方面也没问题。这时销售人员说：“既然你都满意了，那我们就可以办手续了。”一、教学目标：别人的意见总能为你的决策提供有价值的参考。如你的某位同事面试过某应聘者，尽快与其交换看法，讨论有分歧的意见。如果你是唯一的面试者，可以征求与该应聘者有一面之交的同事的意见。另外前台的接待人员对应聘者的印象也有参考价值。应聘者是否礼貌、镇静，还是手足无措，神情紧张？将前台接待人员对应聘者的印象与你对他们的印象放在一起，就可以得到对应聘者比较全面的评价。小提示76：告诉应聘者，你还有许多其他的人要面试。第三节第三节 幽门螺杆菌检测方法的临床应用幽门螺杆菌检测方法的临床应用
