1、目 录实验一：生物学实验基本要求实验二：使用高倍显微镜观察叶绿体、线粒体的形态和分布实验三：果酒和果醋的制作实验四：制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 实验五：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验六：菊花的组织培养实验七：植物芳香油的提取实验八：胡萝卜素的提取实验九：物理、化学因素诱导植物染色体数目变化实验十：观察DNA和RNA在细胞中分布实验十一：酵母细胞的固定化实验十二：DNA的制备和鉴定实验十三：微生物的实验室培养实验十四：血红蛋白的提取和分离实验十五：果胶酶在果汁生产中的作用实验一：生物学实验基本要求v一.生物化学实验室规则v1.每个同学都应该自觉遵守课堂纪律,维护课堂秩序,不迟到,不早退,不
2、大声谈笑,v2.实验前必须认真预习,熟悉本次实验的目的.原理.操作步骤,懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法,否则不能开始实验,实验过程中要严肃认真地按操作规程进行实验,并把实验结果和数据及时.如实记录在实验记录本上,文字简练.准确,要求同学们记录完整准确的实验数据,养成良好的实事求是的工作作风和求真务实的科学态度,严禁伪造实验数据,弄虚作假,v3.实验台面应随时保持整洁,仪器.药品摆放整齐,公用试剂用毕,应立即盖严放回原处,勿使试剂.药品洒在实验台面和地上,实验完毕,仪器须洗净放好,将实验台面抹试干净,才能离开实验室,v4.使用仪器.药品.试剂和各种物品必须注意节约,洗涤和使用仪器
3、时,应小心细致,防止损坏仪器,使用贵重精密仪器时,应严格遵守操作规程,发现故障须立即报告教员,不得擅自动手检修,v5.实验室内严禁吸烟！煤气灯应随用随关,严格做到:人在火在,人走火灭,乙醇.丙酮.乙醚等易燃品不能直接加热,并要远离火源操作和放置,实验完毕,应立即关好煤气开关和水笼头,拉下电闸,离开实验室以前应认真.负责地进行检查,严防发生安全事故,v6.所有实验用的废液,废弃物等,都要收集在适当的容器内,加以储存再处理,不能倒在水槽内或到处乱扔,v7.仪器损坏时,应如实向教员报告,并填写损坏仪器登记表,然后补领,v8.实验室内一切物品,未经本室负责教员批准,严禁携出室外,借物必须办理登记手续,
4、v9.每次实验课由班长负责安排值日生,值日生的职责是负责当天实验室的卫生.安全和一切服务性的工作及填写实验情况登记卡和实验记录,二.生物学实验室常用仪器使用方法与保养1.冷冻离心机低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段,基因片段的分离.酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中,都离不开低温离心技术,因此低温冷冻离心机已成为分子生物学研究中必需的重要工具,使用方法:(1)离心机应放置在水平坚固的地板或平台上,并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器震动,(2).打开电源开关,按要求装上所需的转头,将预先以托盘天平平衡好的样品放置于转头样品架上(离心筒须与样品同时平衡),关闭机盖
5、,(3).按功能选择键,设置各项要求:温度.速度.时间.加速度及减速度,带电脑控制的机器还需按储存键,以便记忆输入的各项信息,(4).按启动键,离心机将执行上述参数进行运作,到预定时间自动关机,(5).待离心机完全停止转动后打开机盖,取出离心样品,用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁,待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖,注意事项:(1).机体应始终处于水平位置,外接电源系统的电压要匹配,并要求有良好的接地线,(2).开机前应检查转头安装是否牢固,机腔有无异物掉入,(3).样品应预先平衡,使用离心筒离心时离心筒与样品应同时平衡,(4).挥发性或腐蚀性液体离心时,应使用带盖的离心管,并确保液体不
6、外漏,以免腐蚀机腔或造成事故,(5).擦拭离心机腔时动作要轻,以免损坏机腔内温度感应器,(6).每次操作完毕应作好使用情况记录,并定期对机器各项性能进行检修,(7).离心过程中若发现异常现象,应立即关闭电源,报请有关技术人员检修,附:相对离心力与每分钟转速的换算离心机的转速,在以前实验资料中一般以每分钟多少转来表示,由于离心力不仅为转速函数,亦为离心半径的函数,即转速相同时,离心半径越长,产生的离心力越大,因此仅以转速表达离心力是不够科学的,近年来主张用相对离心力(RCF)来表示比较合理,现在国际资料中,已改用相对离心力来表示,2.分光光度计不同物质对不同波长入射光的吸收程度各不相同,从而形成
7、特征性的吸收光谱,分光光度法不仅适应于可见光区,同时还可扩展至紫外光区及红外光区,因此给科研实验带来了极大方便,下面重点介绍分光光度计的使用及注意事项,使用规则(1).接通稳压器电源,待稳压器输出电压稳定至200V后打开光度计电源,仪器自动进入初始化,(2).初始化约需时10min,内容包括:寻找零级光；建立基线；最后当显示器指示nm时,表明仪器完成初始化程序,可进入检测状态,(3).按要求输入各项参数,选择相应比色杯(玻璃或石英),将空白管.标准管及待测管依次放入比色皿架内,关上比色池盖,(4).以空白管自动调零,(5).试样槽依次移至样品位置,待数据显示稳定后按“START/STOP”键,
8、打印机自动打印所测数据,重复上述步骤,直到所有样品检测完毕,(6).检测结束后应及时取出比色杯,并清洗干净放回原处,同时关上仪器电源开关及稳压器电源开关,做好使用情况登记,注意事项(1).仪器初次使用或使用较长时间(一般为一年),需检查波长准确度,以确保检测结果的可靠性,(2).由于长途运输或室内搬运可能造成光源位置偏移,导致亮电流漂移增大,此时对光源位置进行调整,直至达到有关技术指标为止,若经调整校正后波长准确度.暗电源漂移及亮电流漂移三项关键指标仍未符合要求,则应停止使用,并及时通知有关技术人员检修,(3).每次检测结束后应检查比色池内有否溶液溢出,若有溢出应随时用滤纸吸干,以免引起测量误
9、差或影响仪器使用寿命,(4).仪器每次使用完毕,应于灯室内放置数袋硅胶(或其它干燥剂),以免反射镜受潮霉变或沾污,影响仪器使用,同时盖好防尘罩,(5).仪器室应通常保持洁净干燥,室温以5-35为宜,相对温度不得超过85%,有条件者应于室内配备空调机及除湿机,以确保仪器性能稳定,(6).仪器室不得存放酸.碱.挥发性或腐蚀性等物质,以免损坏仪器,(7).仪器长时间不用时,应定时通电预热,每周1次,每次30min,以保证仪器处于良好使用状态3.电泳仪:电泳技术是生物化学与分子生物学研究不可缺少的重要分析手段,电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类,自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳.等速电泳.
10、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用,而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸.醋酸纤维薄膜.非凝胶性支持物.凝胶性支持物及硅胶-G薄层等,分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳,所谓电泳,是指带电粒子在电场中的运动,不同物质由于所带电荷及分子量的不同,因此在电场中运动速度不同,根据这一特征,应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析,或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备,这在临床检验或实验研究中具有极其重要的意义,电泳仪正是基于上述原理设计制造的,使用方法(1).首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接,注意极性不要接反,(2).电泳仪
11、电源开关调至关的位置,电压旋钮转到最小,根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围,(3).接通电源,缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止,设定电泳终止时间,此时电泳即开始进行,(4).工作完毕后,应将各旋钮.开关旋至零位或关闭状态,并拨出电泳插头,注意事项(1).电泳仪通电进入工作状态后,禁止人体接触电极.电泳物及其它可能带电部分,也不能到电泳槽内取放东西,如需要应先断电,以免触电,同时要求仪器必须有良好接地端,以防漏电,(2).仪器通电后,不要临时增加或拨除输出导线插头,以防短路现象发生,虽然仪器内部附设有保险丝,但短路现象仍有可能导致仪器损坏,(3).由于不同介质支持物的电阻值不同,
12、电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳至终点所需时间也不同,故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行,(4).在总电流不超过仪器额定电流时(最大电流范围),可以多槽关联使用,但要注意不能超载,否则容易影响仪器寿命,(5).某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时,允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必须先接好负载再开机,否则电压表指针将大幅度跳动,容易造成不必要的人为机器损坏,(6).使用过程中发现异常现象,如较大噪音.放电或异常气味,须立即切断电源,进行检修,以免发生意外事故,4.分析天平:分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要仪器,充分了解仪器性能及熟练掌握其使用方法,是获得
13、可靠分析结果的保证,分析天平的种类很多,有普通分析天平.半自动/全自动加码电光投影阻尼分析天平及电子分析天平等,操作方法(1).检查并调整天平至水平位置,(2).事先检查电源电压是否匹配(必要时配置稳压器),按仪器要求通电预热至所需时间,(3).预热足够时间后打开天平开关,天平则自动进行灵敏度及零点调节,待稳定标志显示后,可进行正式称量,(4).称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上,关上侧门,轻按一下去皮键,天平将自动校对零点,然后逐渐加入待称物质,直到所需重量为止,(5).被称物质的重量是显示屏左下角出现“”标志时,显示屏所显示的实际数值,(6).称量结束应及时除去称量瓶(纸),关上侧门,切
14、断电源,并做好使用情况登记,注意事项(1).天平应放置在牢固平稳水泥台或木台上,室内要求清洁.干燥及较恒定的温度,同时应避免光线直接照射到天平上,(2).称量时应从侧门取放物质,读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动,前门仅在检修或清除残留物质时使用,(3).电子分析天平若长时间不使用,则应定时通电预热,每周一次,每次预热2h,以确保仪器始终处于良好使用状态,(4).天平箱内应放置吸潮剂(如硅胶),当吸潮剂吸水变色,应立即高温烘烤更换,以确保吸湿性能,(5).挥发性.腐蚀性.强酸强碱类物质应盛于带盖称量瓶内称量,防止腐蚀天平,实验二：使用高倍显微镜观察叶绿体、线粒体的形态和分布一 、实验目的
15、1使用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体的形态和分布。2识别光学显微镜下的叶绿体和线粒体。二 、实验原理地球上绝大多数生命活动所需能量的最终源头是太阳能，绿色植物是主要的能量转换者，完成这一能量转换的细胞器是叶绿体。叶绿体利用光能将二氧化碳和水合成糖类等有机物，同时产生氧。在高等植物细胞中叶绿体呈椭球形，长径510 m，短径24 m，厚23 m。高等植物的叶肉细胞中一般含50200个叶绿体，可占细胞质的40%。叶绿体的数目因同种植物不同细胞类型、生态环境、生理状态而有所不同。在藻类细胞中，叶绿体形状多样，有网状、带状、裂片状和星形等，而且体积巨大，长径可达100 m。线粒体普遍存在于植物细胞和动物细
16、胞中，线粒体的形态多样，有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。线粒体是细胞进行有氧呼吸的主要场所，内含细胞色素氧化酶系。健那绿是一种碱性染料,可以专一性地对线粒体进行染色。与线粒体内的细胞色素氧化酶系发生作用时，染料始终保持氧化状态,呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的状态，线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色可以在高倍显微镜下观察到呈现蓝绿色的线粒体的形态和分布。三 、试剂与仪器1、材料：新鲜的藓类的叶（或菠菜叶、黑藻叶等），人的口腔上皮细胞，洋葱内表皮，幼苗或幼根。2、器具：数码显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，吸水纸，镊子，消毒牙签。3、试剂的配制（1） 0.5g詹姆斯
17、绿溶解于50ml生理盐水中1%詹姆斯绿染液（2） 配制0.9%的生理盐水200ml。称取1g詹姆斯绿，溶于50ml生理盐水中，再用生理盐水稀释100倍，得0.02%詹姆斯绿染液装入棕色瓶备用。（3）0.05g 詹姆斯绿溶解于5ml Ringer液。Ringer液（复合生理盐水）：0.25g kcl+0.85gNacl+0.03gCacl 加入100ml水）注意事项： 詹姆斯绿染液浓度不宜过高，染色时间不宜太长，否则细胞质会重新氧化成有色状态而不能充分还原染料成无色状态。配制时间：詹姆斯绿染液宜在使用时配制新鲜液，不可久存。四 、方法与步骤1、选材的原则：选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察
18、；观察叶绿体时选用：藓类的叶、黑藻的叶。取这些材料的原因是：叶子薄而小，叶绿体清楚，可取整个小叶直接制片，所以作为实验的首选材料。若用菠菜叶作实验材料，要取菠菜叶的下表皮并稍带些叶肉。洋葱鳞片叶表皮细胞(为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞) 取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞2、 制作鲜类叶片临时装片在洁净的载玻片中央滴一滴清水。用镊子取一片藓类的小叶，或者取菠菜叶稍带些叶肉的下表皮，放入水滴中，盖上盖玻片。注意：临时装片中的叶片不能放干了，要随时保持有水状态。 3、观察叶绿体将制作好的叶片临时装片放在低倍显微镜下
19、观察，找到叶片细胞后，换用高倍镜，仔细观察叶片细胞内叶绿体的形态和分布情况。 4、制作人的口腔上皮细胞临时装片(1)把清洁的载玻片平放在桌上，滴上数滴詹姆斯绿染液于载玻片中央。(2)用消毒牙签的钝端在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取口腔上皮细胞，均匀地涂到载玻片的染液中。盖上盖玻片，四周溢出的染液用吸水纸吸干。(3)5分钟后用高倍镜或油镜观察，可以看到在接近无色的口腔上皮细胞的细胞质中，特别是在细胞核周围，散布着许多被染成蓝绿色的短棒状或颗粒状结构，即为线粒体。5、观察洋葱鳞茎表皮细胞线粒体(1)撕取55毫米一块新鲜洋葱鳞茎内表皮，展平在洁净载玻片中央。(2)滴上数滴詹姆斯绿染液染色10分钟，盖上盖
20、玻片，用吸水纸吸去周围溢出的染液。(3)在高倍镜或油镜下可以观察到细胞质中的线粒体被染成蓝绿色，呈条状或颗粒状。6、观察线粒体在高倍镜下观察经过染色的人的口腔上皮细胞临时装片，可以看到蓝绿色的线粒体，细胞质接近无色。 五、实验报告1、显微镜下绘出叶绿体、线粒体的图叶绿体的辨认依据：叶绿体是绿色的，呈扁平的椭圆球形或球形。线粒体辨认依据：线粒体的形态多样，有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。六、问题与讨论1选择观察叶绿体的实验材料时，应注意什么问题？2具有较多线粒体的细胞在功能上有什么特点？3为什么用健那绿染液作为观察线粒体的染色剂？4细胞中的叶绿体和线粒体的共同特点是什么？5、细胞质基质中的叶绿
21、体，是不是静止不动的？为什么？答：不是。呈椭球体形的叶绿体在不同光照条件下可以运动，这种运动能随时改变椭球体的方向，使叶绿体既能接受较多光照，又不至于被强光灼伤。6、叶绿体的形态和分布，与叶绿体的功能有什么关系？答：叶绿体的形态和分布都有利于接受光照，完成光合作用。如叶绿体在不同光照条件下改变方向。又如叶子上面的叶肉细胞中的叶绿体比下面的多，这可以接受更多的光照。七、相关知识线粒体是动植物细胞中重要的细胞器，与能量转换有关。线粒体一般呈粒状或棒状，因不同的细胞种类和生理状态而不同，可呈环形、哑铃形、线状、分支状或其他形状。线粒体数目因细胞种类和生理状态不同有所差异，一般在一个细胞中有数百到数千
22、个。植物细胞因有叶绿体的缘故，线粒体数目相对较少；肝细胞中约有1 300个线粒体，占细胞体积的20%；巨大变形虫中线粒体数目可达50万个；许多哺乳动物成熟的红细胞中无线粒体；酵母细胞中有一个大型分支状的线粒体。线粒体通常分布在细胞生命活动旺盛的区域。例如，在肝细胞中呈均匀分布；在肾细胞中靠近微血管，呈平行或栅栏状排列；在精子中集中在尾的基部。线粒体在细胞质中可以向生命活动旺盛的区域迁移。线粒体是一种动态的易变结构。经过处理在光学显微镜下呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体的形态和数量随不同生物、不同组织及不同生理状态而发生变化，例如肝细胞、胰细胞的线粒体通常呈线状，成熟的卵细胞内线粒体呈颗粒状
23、，肾细胞内的线粒体呈棒状。显示线粒体的方法可以概括为以下几种：1、生活细胞的观察。如将组织培养细胞或其他生活细胞，放在相差显微镜下，就可以看到细胞质内有线状小体活动，这就是线粒体。2、活细胞染色法。就是利用某些无毒或毒性较小的染料，显示出细胞内某些特殊结构存在的真实性，而并不对细胞的活动有影响，如Janus green B（詹纳斯绿B），就是一种毒性较小的碱性染料。将其配制成一定浓度，对活细胞进行染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体，这就是线粒体。还可看到其在细胞质内的活动状况。线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而
24、在周围的细胞质中的染料被还原呈无色。3、固定染色法（即永久制片法）。用特殊的固定液染色处理动物的组织或细胞后，可显示出线粒体的形态。但所用材料必须新鲜，否则线粒体常因已经破坏而显示不出，线粒体的组成成分主要是脂蛋白，脂类又以磷脂为主，用于线粒体的固定液含有饿酸，重铬酸钾等。因为两者均能使脂类物质保存下来，故可显示出线粒体的形态。用于显示线粒体形态的固定、染色方法较多，常用的有Altmann染色法、Regand染色法及Chmpy-Kull染色法等，但欲显示线粒体的细微结构，则要用电镜技术。实验三：果酒和果醋的制作在中华民族悠久的历史长河中，很多事物都走在世界前列，酒也一样，有着它本身的光辉篇章。
25、在酒的记载中，有许多关于酒的有趣传说。果酒与生活果酒中虽然含有酒精，但含量与白酒、啤酒和葡萄酒比起来非常低，一般为5到10度，最高的也只有14度。因此，被很多成年人当作饭后或睡前的软饮料来喝。果酒简单来说就是汲取了水果中的全部营养而做成的酒，其中含有丰富的维生素和人体所需的氨基酸。有时候即使生吃水果也不能吸收的营养，通过果酒却可以吸收，因为营养成分已经完全溶解在果酒里了。果酒里含有大量的多酚，可以起到抑制脂肪在人体中堆积的作用，使人不容易积累脂肪和赘肉。此外，与其他酒类相比，果酒对于护理心脏、调节女性情绪的作用更明显一些。一、实验目的：1、理解果酒、果醋制作的原理。2、根据果酒制作的原理设计果
26、酒制作过程，体验制果酒的实践操作。3、在对果酒制作结果进行分析与评价环节，培养实验分析能力和严谨的思维能力。4、讲述果酒酿制历史的追述， 培养对酿酒技术的认识。5、设计制作装置制作果酒和果醋。二、实验原理1、材料选择和处理：选择新鲜优质的葡萄，依次进行冲洗、除去枝梗和榨汁处理。在葡萄酒的自然发酵过程中，起主要作用的是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌。发酵过程中，随着酒精度的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈现深红色。在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌能大量生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。先冲洗后去枝梗的目的是防止杂菌感染。2防止发酵液被污染：对榨汁机、发酵装置
27、等器械进行消毒并使发酵装置处于封闭状态。3发酵过程的控制：发酵液装瓶后保持1/3的剩余空间。酒精发酵时温度控制在1825范围内，发酵时间在1012天左右。醋酸发酵时温度控制在3035范围内，发酵时间在78天左右，并保持不断充气。在发酵液装瓶后要保持1/3的剩余空间，是为了暂时存储发酵产生的CO2，起到缓冲作用。4果酒酵母菌的代谢类型及其呼吸过程：酵母菌的呼吸：果酒的制作离不开酵母菌。酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，反应式如下：酶 C6H1206+6O2 6CO2+6H20+能量 在无氧条件下，反应式如下： 酶 C6H12O6 2C2H5OH+2C02+能量5.果醋的制作：醋酸菌是种好氧性
28、细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。变酸的酒的表面观察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。实验表明，醋酸菌对氧气的含当量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通人氧气，也会引起醋酸菌死亡。当氧气、糖源都充足时，醋酸茵将葡萄汁中的果糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸(反应简式如下)。醋酸菌的最适生长温度为30一35。三、实验材料1、酿酒用葡萄若干、酵母菌、成品果醋2、仪器：榨汁机、生化培养箱、试剂瓶、漏斗3、试剂：重铬酸钾、浓硫酸四、实验设计： 1实验流程： 2设计发酵装置： （1）在酒精发酵过程中每隔一段时间拧松瓶盖或打开排气口，其原因
29、是在发酵过程中产生CO2，防止瓶内气压过高引起爆裂。（2）在醋酸发酵过程中，要持续向发酵液中补充氧气（新鲜空气）。（3）在左图装置中，充气口的作用是在醋酸发酵中补充氧气；排气口的作用是在发酵中排出CO2或残余气体；出料口的作用是便于取样检查和放出发酵液；排气口胶管长而弯曲的作用是防止空气中杂菌感染。五、实验具体操作步骤：1.对发酵瓶、纱布、榨汁机、盛葡萄汁的器皿等实验用具进行清洗并消毒。先用温水反复冲洗几次,再用体积分数为75%的酒精擦拭消毒，晾干待用。2. 取葡萄500g，去除枝梗和腐烂的子粒。3. 用清水冲洗葡萄12遍除去污物，注意不要反复多次冲洗。4. 用榨汁机榨取葡萄汁后，将其装入发酵
30、瓶中（装置参见上图），或将葡萄打成浆后，用洁净的纱布过滤至发酵瓶中，盖好瓶盖。如果没有合适的发酵装置，可以用500 mL的塑料瓶替代，但注入的果汁量不要超过塑料瓶总体积的2/3。5. 将发酵瓶置于适宜的温度下发酵。6. 由于发酵旺盛期CO2的产量非常大，因此需要及时排气，防止发酵瓶爆裂。如果使用简易的发酵装置，如瓶子（最好选用塑料瓶），每天要拧松瓶盖24次，进行排气。7.7- 10 d以后，可以开始进行取样检验工作。例如，可以检验酒味、酒精的含量、进行酵母菌的镜检等工作。8. 当果酒制成以后，可以在发酵液中加入醋酸菌或醋曲，然后将装置转移至3035 的条件下发酵，适时向发酵液中充气。如果找不到
31、醋酸菌菌种或醋曲，可尝试自然接种，但效果不是很好。如果没有充气装置，可以将瓶盖打开，在瓶口盖上纱布，以减少空气中尘土等的污染。9. 果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色，检测时，先在试管中加入发酵液2mL，再滴人物质的量浓度为3molL的H2SO4 3滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色的变化。设置清水为阴性对照，酒精为阳性对照。六、结果分析与评价： 1实验现象：填写表格发酵酒精发酵醋酸发酵气味和味道酒味酸味气泡和泡沫产生气泡和泡沫无气泡和泡沫发酵液颜色混浊混浊，液面形成白色菌膜2检验：在酸性条件下重铬酸钾
32、与酒精反应呈灰绿色。七、思考题1、影响发酵质量的因素还有什么？优良菌种等。2、你知道酵母菌需要适宜温度的原因吗？ 酵母菌有不同的最适温度说明了什么？八、补充资料：（1）温度对发酵的影响酵母菌只能在一定温度下生活。温度低于10，酵母菌发育很缓慢。随着温度的升高，繁殖速度加快，20时为最佳繁殖温度，此时酵母菌生殖速度快、生活力强。超过35，酵母菌生长受到抑制，繁殖速度迅速下降，到40酵母菌停止出芽，开始出现死亡。如果想要获得高酒精浓度的发酵液、减少究竟的损耗，必须控制好发酵温度。（2）一般情况下，葡萄酒呈红色的原因？（在发酵的过程中，随着酒精度的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈红色。）
33、（3）葡萄酒分成干红、干白等种类的依据是什么？ 根据葡萄酒的颜色分成白葡萄酒、红葡萄酒和桃红葡萄酒三种。 白葡萄酒：用白葡萄酿造，皮汁分离发酵； 红葡萄酒：用红葡萄酿造，皮汁混合发酵； 桃红葡萄酒：颜色介于白葡萄酒和红葡萄酒之间，皮的发酵时间短。 根据葡萄酒的含糖量分成干、半干、半甜、甜四种。 干葡萄酒：含糖量低于4克/升； 半干葡萄酒：含糖量介于4克-12克/升之间； 半甜葡萄酒：含糖量介于12克-50克/升之间； 甜葡萄酒：含糖量高于50克/升。） 菌种来源：自然发酵、人工培养 （在果酒的工业生产中为了提高果酒的品质也可以直接在果汁中加入人工培养的酵母菌，例如：干酵母或酒药）（4）. 果酒
34、制作的原理-需要解决的问题1）果酒的制作需要什么微生物？2）酵母菌的形态、结构、分布、种类及菌落？3）酵母菌的代谢类型及其呼吸过程的反应式如何？4）酵母菌的适宜温度是多少？5）为什么在一般情况下葡萄酒呈红色？6）什么叫发酵？发酵等同于无氧呼吸吗？酵母菌有何实际应用？果酒和果醋的制作专题检测选择题1.生产果醋用的醋酸菌等细菌都具有的特征是 A都是异养生物 B仅在有水条件下繁殖C仅在有氧条件下生长 D生存温度都超过802.关于果醋制作过程中的叙述正确的是A打开发酵瓶是因为全过程需要通入氧气，排出二氧化碳B醋酸菌在糖源和氧气充足时，能将葡萄糖分解成醋酸和二氧化碳C当糖源不足时，醋酸菌可将酒精分解成醋
35、酸D要使果酒变成果醋只需通入氧气，加入醋酸菌就可以了3.用酵母菌发酵制作葡萄酒时，酒精成分一般不会超过14，正确解释是A原料中用于发酵的成分太少 B酒精达到一定的浓度会抑制酵母菌的发酵C酒精达到一定的浓度会妨碍酵母菌的存活D随着发酵的进行，高温会使酵母菌死亡4.下列关于醋酸菌的叙述，正确的是 A醋酸菌为严格有氧呼吸 B醋酸菌有氧无氧都能生存C醋酸菌能形成芽孢 D醋酸菌能将淀粉分解成醋酸 5.下列关于果酒制作过程中的叙述，正确的是 A应先除去葡萄的枝梗，再进行冲洗，这样洗得彻底B使发酵装置的温度维持在20左右最好C在发酵过程中，需从充气口不断通入空气D由于酵母菌的繁殖能力很强，不需对所用装置进行
36、消毒处理6.果酒和果醋制作过程中，发酵条件的控制至关重要，相关措施正确的是A葡萄汁要装满发酵瓶，造成无氧环境，有利于发酵B在葡萄酒发酵过程中，每隔12h左右打开瓶盖一次，放出C02C果酒发酵过程中温度控制在30，果醋发酵过程中温度控制在20D在果醋发酵过程中，要适时通过充气口充气，有利于醋酸菌的发酵7.下列评价果酒和果醋制作是否成功的方法中，不合理的是A通过观察相关微生物的存在或数量变化进行鉴定B通过向果酒发酵液中加入重铬酸钾试剂进行鉴定C通过检测果醋发酵前后发酵液的pH变化进行鉴定D通过检测果酒发酵前后发酵液的温度变化进行鉴定8.用酵母菌发酵制作葡萄酒时，酒精成分一般不会超过14，正确解释是
37、A原料中用于发酵的成分太少 B酒精达到一定的浓度会抑制酵母菌的发酵C酒精达到一定的浓度会妨碍酵母菌的存活D随发酵的进行，高温会使酵母菌死亡9.酵母菌能够进行下列哪些反应 C6H12O6 +6H2O+6O26CO2+12H2O C6H12O6 2C2H5OH+ 2CO2C2H5OH+ O2CH3COOH+H2O CO2+H2O（CH2O）+ O2 A B C D10.有甲、乙两组等量酵母菌。甲组酵母菌进行有氧呼吸，乙组酵母菌进行发酵。若它们消耗了等量的葡萄糖，则它们放出的CO2之和与它们消耗的O2之和比为 A11 B30 C60 D4311. 葡萄酒呈现红色的原因 A在发酵过程中产生了红色的物质
38、B在发酵的最后程序中，加入了红色的食用色素C红色葡萄皮中的色素溶解在发酵液中 D酒精发酵的最终产物C2H5OH是红色的12. 醋的制作原理为 A醋酸菌果将C2H5OH还原为醋酸 B醋酸菌将C2H5OH氧化成醋酸C醋酸菌将C2H5OH分解成CO2和醋酸 D醋酸菌能将C2H5OH直接氧化成醋酸，不需生成中间物质乙醛13. 下列不是酵母菌、醋酸杆菌均有的细胞结构是A细胞壁 B细胞核 C细胞膜 D核糖体14. 在利用葡萄酿制果酒的过程中，不能观察到的现象有A有酒精大量产生 B发酵液逐渐澄清 C发酵液中有大量气泡产生D发酵液红色加深15. 交警检验司机是否酒后驾车时，所用的仪器中装有:Zxxk.CoA重
39、铬酸钾 BMnO2 C斐林试剂 DBaCl216下列关于果醋制作的说法正确的是 A醋酸菌是好氧菌，在制作过程中要一直打开发酵瓶B在制作葡萄醋的过程中，温度应严格控制在1825C当糖源不足时，醋酸菌先将酒精转变成乙醛，再将乙醛变为醋酸D醋酸菌在糖源和氧气充足时，能将葡萄糖分解成醋酸和二氧化碳17下列关于果酒和果醋制作的叙述，错误的是A制作果酒时瓶口需密闭，而制作果醋时中断通氧可能会引起醋酸菌死亡 B温度对酵母菌酒精发酵的影响很大，而对醋酸菌的发酵影响不大 C在变酸的果酒的表面观察到的菌膜可能是醋酸菌在液面大量繁殖形成的D制作果酒和果醋时都应用70%的酒精对发酵瓶消毒并注意无菌操作18下列关于果醋
40、的制作，错误的是A.果醋的制作需用醋酸菌，醋酸菌是一种好氧菌，所以在制作过程中需要通氧气B.醋酸菌是一种嗜温菌，温度要求较高，一般在50左右C.醋酸菌能将果醋变成果醋D.当氧气、糖源充足时，醋酸菌可将葡萄中的糖分解成醋酸19果酒和果醋制作过程中，发酵条件的控制至关重要，相关措施正确的是A葡萄汁要装满发酵瓶，造成无氧环境，有利于发酵B在葡萄酒发酵过程中，每隔12h左右打开瓶盖一次，放出C02C果酒发酵过程中温度控制在30，果醋发酵过程中温度控制在20D在果醋发酵过程中，要适时通过充气口充气，有利于醋酸菌的发酵20下列评价果酒和果醋制作是否成功的方法中，不合理的是A通过观察相关微生物的存在或数量变
41、化进行鉴定B通过向果酒发酵液中加入重铬酸钾试剂进行鉴定C通过检测果醋发酵前后发酵液的pH变化进行鉴定D通过检测果酒发酵前后发酵液的温度变化进行鉴定 资料编辑：石河子大学生命科学学院 王爱英实验四：制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 一、实验目的要求能够独立完成泡菜的制作，并对亚硝酸盐的含量进行检测。通过本课题的开展，可以了解生活中我们所吃的泡菜是怎么制作的，泡菜中可能含有较多的亚硝酸盐是怎么产生的，如何去测定泡菜中的亚硝酸盐的含量。1、了解乳酸菌的代谢特征和泡菜制作的原理、方法，尝试制作泡菜；2、了解亚硝酸盐对人体的危害及测定其含量的原理，尝试用比色法测定泡菜中亚硝酸盐的含量变化，讨论与此相关的食品安
42、全问题。3、 通过参与整个教学过程，让学生体会知识的产生和形成过程，培养学生不断发现和勇于探索的精神，激发学生学生物、用生物的热情，并渗透“科学、技术、社会”的教育理念。通过日常生活中人们喜爱的泡菜食品，引入主题制作泡菜并测定泡菜中亚硝酸盐含量，引导学生关注食品安全，注重身体健康。在进行实验设计时，先给学生展示泡菜制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程，让学生依据实验流程设计制作泡菜的实验步骤，并学会检测泡菜中亚硝酸盐的方法。二、实验原理1、泡菜是一种以湿态发酵方式（乳酸菌厌氧发酵）加工制成的浸制品，为泡酸菜类的一种。泡菜制作容易，成本低廉，营养卫生，风味可口，利于贮存。目前较受欢迎的是川味和韩味泡
43、菜，在许多风味餐馆里，都有其踪影，它鲜嫩清脆，可以增进食欲，帮助消化与吸收。由于泡菜在开始腌制时，坛内环境有利于某些细菌的繁殖（包括一些硝酸盐还原菌），这些细菌可以促进硝酸盐还原为亚硝酸盐。但随着腌制时间的延长，乳酸细菌也大量繁殖，对硝酸盐还原菌产生一定的抑制作，使其生长繁殖受到影响，造成泡菜中亚硝酸盐的含量又有所下降。亚硝酸盐，一类无机化合物的总称。主要指亚硝酸钠，亚硝酸钠为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。外观及滋味都与食盐相似，肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高。食入0.30.5克的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡。2、亚硝酸盐，亚硝酸盐类食物中毒
44、又称肠原性青紫病、紫绀症、乌嘴病，是一种白色不透明结晶的化工产品，形状极似食盐。肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高。亚硝酸盐中毒是指由于食用硝酸盐或亚硝酸盐含量较高的腌制肉制品、泡菜及变质的蔬菜可引起中毒， 或者误将工业用亚硝酸钠作为食盐食用而引起，也可见于饮用含有硝酸盐或亚硝酸盐苦井水、蒸锅水后，亚硝酸盐能使血液中正常携氧的低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，因而失去携氧能力而引起组织缺氧。3、 亚硝酸盐测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1萘基乙二胺盐酸盐结合生成玫瑰红色颜料。将经过显色后的待测样品与标准显色
45、液进行比色，即可计算出样品中的亚硝酸盐含量。三、实验材料1、将白菜和莲花白分别腌制在0%、5%、10%、15%的盐浓度中，持续1d、2d、3d、4d和5d时间；2、配制的试剂1）4mg/mL 对氨基苯磺酸溶液：0.4g对氨基苯磺酸，溶解于100mL 20%的盐酸中，避光保存。2）2mg/mL N-1萘基乙二胺盐酸盐溶液：0.2g N-1萘基乙二胺盐酸盐，溶解于100mL水中，避光保存。3）5g/mL亚硝酸钠溶液：0.10g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，定容至500mL，再转移5mL至200mL容量瓶中定容。4）提取液：50g氯化镉与50g氯化钡溶解于1L蒸馏水中，用盐酸调节pH至1。5）氢氧化铝乳液：125g硫酸铝溶解于1L蒸馏水中，形成氢氧化铝胶状物。经过真空抽滤，用蒸馏水反复洗涤沉淀，直至洗涤液分别用氯化钡或硝酸银溶液检验不发生混浊为止。取沉淀物，加适量蒸馏水，将胶状物沉淀调至稀浆糊状，捣匀备用。3、仪器：标本瓶、烧杯、容量瓶、真
