1、兽医免疫学综合实验兽医免疫学综合实验华中农业大学华中农业大学 2015.4 2015.4实验五实验五 吞噬细胞吞噬鸡红细胞试验吞噬细胞吞噬鸡红细胞试验吞噬细胞简介大、小吞噬细胞大、小吞噬细胞专司吞噬功能，在特异性免疫发挥作用前，防控病原异物侵袭，为特异性免疫赢得时间赢得时间。小吞噬细胞小吞噬细胞是主要的吞噬细胞。数量多(60%白细胞的60%)、体积小(1012M)、变形和穿越能力强、行动快(6h达峰值，10倍增加)、寿命短(数小时)。胞浆有大量中性颗粒，大多是溶酶体，内含髓过氧化酶、溶菌酶、碱性磷酸酶、酸性水解酶。呼吸爆发：呼吸爆发：在吞噬后激活位于细胞膜上和吞噬体内膜面的氧化酶，产生毒性物质
2、，有效杀伤病原微生物，接着在吞噬溶酶体内水解之。对肿瘤和病毒感染细胞具有强大的杀伤功能。部分是定居的组织特异M，部分成为游走M(如腹腔M），以变形虫样方式游走各处。体积大（:5080M），感染时比小吞噬细胞滞后出现,数量少(白细胞的1%-3%)。胞浆中有吞噬泡、线粒体和粗面内质网、溶酶体。溶酶体内有过氧化物酶、酸性磷酸酶、非特异性酯酶和溶菌酶。静息M杀伤功能低下，被LPS或IFN-活化后具有较强的吞噬杀灭能力。在吞噬抗原的同时，还可加工提呈抗原，又是NK-C的激活剂。大吞噬细胞大吞噬细胞一、实验目的1.观察吞噬细胞的吞噬现象，理解吞噬现象的原理、吞噬作用的过程及其在机体非特异性免疫中的作用。2
3、.学习小鼠腹腔炎症模型的制备技术，掌握小鼠腹腔注射和颈椎脱臼处死的方法。二、实验原理淀粉可以刺激小鼠腹腔，引起非感染性炎症滲出，在腹腔局部出现较多吞噬细胞，吞噬细胞则能吞噬注入腹腔的鸡红细胞等异物。可计算出吞噬有异物的细胞数和吞噬细胞中吞入的异物数。在吞噬细胞中亦可见到鸡红细胞发生形态改变。据此可判断吞噬细胞的吞噬、消化功能，用以评价机体的免疫状态评价机体的免疫状态。三三、实实验材料验材料1.小鼠2.2%淀粉溶液、生理盐水。3.0.5%鸡红细胞悬液：从鸡翼下静脉或心脏取血，加入适量抗凝剂，用前用生理盐水洗3次，第3次洗涤2000rpm 离心5min，弃上清，压积细胞用生理盐水配成0.5%细胞悬
4、液。4.注射器、眼科镊、眼科剪、载玻片、瑞氏染色液、显微镜。四、实验方法1.实验前2天，每天向小鼠腹腔注射灭菌2%淀粉肉汤1mL/只，诱导吞噬细胞聚集（此步由教师在实验前完成)；2.实验时，每组取2只上述处理的小鼠，腹腔注射鸡红细胞1mL/只，轻揉其腹部使之分散均匀；3.15min、25min后，分别取1只小鼠颈椎脱臼处死；四、实验方法4.将小鼠固定在解剖板上，打开腹腔，向腹腔加入1ml生理盐水，混匀生理盐水与腹腔液，取腹腔液滴于载玻片上作成涂片，涂片自然干燥；5.涂片用瑞氏染液染色：加瑞氏染液覆盖涂片，染色13min(染液易挥发，需补加)，滴加相当于染液1.5倍的蒸馏水于涂片上，轻轻混匀，再
5、染810min，流水轻洗；6.印干，油镜观察染色结果。从鸡翼下静脉取血从鸡翼下静脉取血方法方法小鼠腹腔注射给药的方法小鼠腹腔注射给药的方法右手抓住鼠尾提起，放在实验台上，用左手的拇指和食指抓右手抓住鼠尾提起，放在实验台上，用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，住小鼠两耳和头颈皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手的无名指和小指按住尾巴与后肢，前肢可用中指固定，用左手的无名指和小指按住尾巴与后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部后即可在腹部后 l/2处的一侧注射。处的一侧注射。右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时
6、向下按住鼠头，使脊髓与脑髓间断开指同时向下按住鼠头，使脊髓与脑髓间断开致鼠死亡致鼠死亡)。颈椎脱臼处死小鼠的方法颈椎脱臼处死小鼠的方法五五、结果观察、结果观察及示例及示例观察观察大、小吞大、小吞噬细胞对鸡红血细胞的吞噬现象，并观察鸡红细胞的消化程度。计算计算吞噬百分比和吞噬指数 吞噬百分比：100个吞噬细胞中吞噬有鸡红血球的数量。吞噬指数：100个吞噬细胞中吞噬鸡红血球的总数除以100两 者一般是平行的。鸡红细胞被消化的程度分4级：级：未消化，胞质浅红或浅黄，胞核浅紫红色。级：轻度消化，胞质浅黄绿色，核固缩，呈紫蓝色。级：重度消化，胞质淡染，胞核呈浅灰黄色。级：完全消化，只见形状类似鸡红细胞大
7、小的空泡，胞核隐约可见。巨噬细胞中性粒细胞自然杀伤细胞 嗜酸粒细胞单核细胞鸡红细胞鸡红细胞巨噬细胞巨噬细胞吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞IL-8生物活性测定试验中的豚鼠嗜中性粒细胞豚鼠嗜中性粒细胞IL-8对嗜中性粒细胞和对嗜中性粒细胞和T淋巴细胞有趋化作用。淋巴细胞有趋化作用。IL-8的趋化作用没有种属特异性的趋化作用没有种属特异性。实验报告实验报告按六个要素完成实验报告，对实验结果要求如下：按六个要素完成实验报告，对实验结果要求如下：1.1.图示你所观察到的小鼠腹腔吞噬细胞吞噬鸡红图示你所观察到的小鼠腹腔吞噬细胞吞噬鸡红细胞各种形态。细胞各种形态。2.2.计算吞噬百分比。计算吞噬百分比。思考如下问题：思考如下问题：1.1.在高等动物中哪些细胞具有吞噬功能？在高等动物中哪些细胞具有吞噬功能？2.2.在什么情况下巨噬细胞吞噬功能加强？在什么情况下巨噬细胞吞噬功能加强？
