1、 培养基和试剂的质量要求培养基和试剂的质量要求 GB 4789.282013 GB 4789.282013 食品室：赵文食品室：赵文目 录一一 贮存贮存二二 培养基的制备培养基的制备 三三 灭菌灭菌四四 培养基的使用培养基的使用五五 培养基质量要求培养基质量要求贮存贮存脱水合成培养基及其添加成分的质量管理和质量控制脱水合成培养基一般为粉状或颗粒状形式包装于密闭的容器中。用于微生物选择或鉴定的添加成分通常为冻干物或液体。培养基的购买应有计划，以利于存货的周转（即掌握先购先用的原则）。实验室应保存有效的培养基目录清单，清单应包括以下内容：容器密闭性检查；记录首次开封日期；内容物的感官检查贮存贮存实
2、验室自制的培养基在保证其成分不会改变条件下保存，即避光、干燥保存，必要时在5 3 冰箱中保存:通常建议平板不超过2周4周瓶装及试管装培养基不超过3个月6个月除非某些标准或实验结果表明保质期比上述的更长。建议需在培养基中添加的不稳定的添加剂应即配即用，除非某些标准或实验结果表明保质期更长；含有活性化学物质或不稳定性成分的固体培养基也应即配即用，不可二次融化。二二 培养基的配置培养基的配置一般要求一般要求实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息，如：培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积（分装体积）、无菌措施（包括实施的方式、温度
3、及时间）、配置日期、人员等，以便溯源。二二 培养基的配置培养基的配置实验用水的电导率在25时不应超过25S/cm(相当于电阻率0.4 cm)，除非另有规定要求。水的微生物污染不应超过103CFU/mL。应按GB 4789.2，采用平板计数琼脂培养基，在36 1 培养48h2 h进行定期检查微生物污染。小心称量所需要的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸收含有有毒物质的培养基粉末），先加入适量的水充分混合（注意避免培养基结块），然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其快速分散，必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前浸泡几分钟。二二 培养基的制备培养基的制备 pH p
4、H的测定和调整的测定和调整用用pHpH测测pHpH，必要时在灭菌前进行调整，除特，必要时在灭菌前进行调整，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至殊说明外，培养基灭菌后冷却至2525时，时，pHpH应在标准应在标准pHpH0.20.2范围内。一般使用浓度约范围内。一般使用浓度约为为40g/L(40g/L(约约1mol/L)1mol/L)的氢氧化钠溶液或浓度的氢氧化钠溶液或浓度约为约为36.5g/L(36.5g/L(约约1mol/L)1mol/L)的盐酸溶液调整培的盐酸溶液调整培养基的养基的pHpH。如需灭菌后进行调整，则使用灭。如需灭菌后进行调整，则使用灭菌或除菌的溶液。菌或除菌的溶液。分装分装将配好
5、的培养基分装到适当的容器中，将配好的培养基分装到适当的容器中，容器的体积应比培养基体积最少大容器的体积应比培养基体积最少大20%20%。湿热灭菌湿热灭菌湿热灭菌在高压锅湿热灭菌在高压锅中进行，一般采用中进行，一般采用1211213 3灭菌灭菌15min15min，灭菌效果的，灭菌效果的控制是关键问题，控制是关键问题，加热后采用适当的加热后采用适当的方式冷却，以防加方式冷却，以防加热过度。热过度。过滤除菌可在真空过滤除菌可在真空或加压条件下进行。或加压条件下进行。使用孔径为使用孔径为0.20.2m m的无菌设备和滤膜。的无菌设备和滤膜。消毒过滤设备的各消毒过滤设备的各个部分或使用预先个部分或使用
6、预先消毒的设备。消毒的设备。应对经湿热灭菌或应对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基过滤除菌的培养基进行检查，尤其要进行检查，尤其要对对pHpH、色泽、灭菌、色泽、灭菌效果或均匀度指标效果或均匀度指标进行检查。有毒成进行检查。有毒成分添加必要时应在分添加必要时应在通风柜中进行。通风柜中进行。过滤除菌过滤除菌 检查检查 三 灭菌融化后的培养基放入4750的恒温水浴锅中冷却保温直至使用，融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4 h。未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。倾注到样品中的培养基温度应控制在约45左右。将倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延长储存期限。为了避免冷凝水的产生，平板应冷却
7、后再装入袋中。储存前不要对培养基表面进行干燥处理。四 培养基的使用五五 培养基的质量要求培养基的质量要求生长特性 选择下列方法对每批成品培养基或试剂进行评价：定量方法；半定量方法；定性方法。采用定量方法时，应使用参考培养基进行对照；采用半定量和定性方法时，使用参考培养基或能得到“阳性”结果的培养基进行对照有助于结果的解释。参考培养基应选择近期批次中质量良好的培养基或是来自其他供应商的具有长期稳定性的批次培养基或即用型培养基。五五 培养基的质量要求培养基的质量要求生长率按规定用适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中。每种培养基上菌株的生长率应达到所规定的最低限值。选择
8、性为定量评估培养基的选择性，应按照规定以适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至选择性培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。例如：XLD生长率：定量测试(TSA为参比培养基)PR0.5选择性：半定量大肠 G 5金葡 G1五五 培养基的质量要求培养基的质量要求性能评价和结果解释性能评价和结果解释若按照规定的所有测试菌株的性能若按照规定的所有测试菌株的性能测试达到标准，则该批培养基或试剂测试达到标准，则该批培养基或试剂的性能测试结果符合规定。若基本要的性能测试结果符合规定。若基本要求和微生物学要求均符合规定，则该求和微生物学要求均符合规定，则该批培养基或试剂可被接受。批培养基或试剂可被
9、接受。培养基不能凝固培养基不能凝固制备过程中过度加热制备过程中过度加热低低pHpH造成培养基酸解造成培养基酸解称量不正确称量不正确琼脂未完全溶解琼脂未完全溶解培养基成分未充分混培养基成分未充分混匀匀pHpH不正确不正确制备过程中过度加热制备过程中过度加热水质不佳水质不佳外部化学物质污染外部化学物质污染测定测定pHpH时温度不正确时温度不正确pHpH计未正确校准计未正确校准脱水培养基质量差脱水培养基质量差颜色异常颜色异常制备过程中过度加热制备过程中过度加热水质不佳水质不佳pHpH不正确不正确外来污染外来污染脱水培养基质量差脱水培养基质量差常见问题 常见问题产生沉淀制备过程中过度加热水质不佳脱水培养基质量差pH未正确控制原料中的杂质培养基出现抑制/低的生长率制备过程中过度加热脱水培养基质量差水质不佳使用成分不正确，如成分称量不准，添加剂浓度不正确制备容器或水中的有毒残留物选择性差制备过程中过度加热脱水培养基质量差配方使用不对添加成分的加入不正确，例如加入添加成分时培养基过热或添加浓度错误添加剂污染 污染不适当的灭菌无菌操作技术存在问题添加剂污染。
