1、细胞工程细胞工程 指应用细胞生物学和指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，分子生物学的原理和方法，通过某种工程学手段，在通过某种工程学手段，在细胞整体水平或细胞器水细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合获得细胞产品的一门综合科学技术。根据操作对象科学技术。根据操作对象的不同，可分为植物细胞的不同，可分为植物细胞工程和动物细胞工程两大工程和动物细胞工程两大领域。领域。应用的原理和方法应用的原理和方法研究的水平研究的水平研究的目的研究的目的分类分类知识点一植物细胞工程知识点一植物细胞工程一植物组织培养
2、一植物组织培养1 1、定义、定义：生物体的生物体的细胞细胞具有发育成具有发育成完整个体完整个体的潜能的的潜能的特性。特性。2 2、原因：、原因：生物体的每一个细胞都包含有该物种生物体的每一个细胞都包含有该物种所特所特有的有的全套全套 ，都有发育成为完整都有发育成为完整个体所必需的个体所必需的 。3 3、差异：、差异：（1 1）受精卵的全能性最高受精卵的全能性最高 （2 2）受精卵分化后的细胞中，体细胞受精卵分化后的细胞中，体细胞的全能性比生殖细胞的低。的全能性比生殖细胞的低。植物细胞的全能性植物细胞的全能性受精卵受精卵生殖细胞生殖细胞体细胞体细胞4 4、大小、大小遗传物质遗传物质全部基因全部基
3、因 让让已经分化已经分化的细胞，经过诱导后，失的细胞，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成去其特有的结构和功能而转变成未分化未分化细胞细胞的过程。的过程。脱分化产生的愈伤组织继续进行培脱分化产生的愈伤组织继续进行培养又可以养又可以重新分化重新分化成根或芽等器官，这成根或芽等器官，这一过程称为植物细胞的再分化。一过程称为植物细胞的再分化。1 1、植物细胞全能性的必要条件？、植物细胞全能性的必要条件？离体、完全营养和激素、无菌条件和光照离体、完全营养和激素、无菌条件和光照2 2、脱分化的目的？、脱分化的目的？3 3、决定脱分化和再分化的关键因素是？、决定脱分化和再分化的关键因素是？表现出全能
4、性表现出全能性 4 4、整个过程严格无菌操作的原因是？、整个过程严格无菌操作的原因是？避免污染，因为一些微生物的代谢生长避免污染，因为一些微生物的代谢生长比未分化的细胞快。比未分化的细胞快。植物激素植物激素 生长素生长素 细胞分裂素细胞分裂素离体的植物器官、组织或细胞离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织愈伤组织胚状体或丛芽胚状体或丛芽植物体植物体外植体外植体脱分化脱分化(避光避光)植物激素：植物激素：细胞分裂素、生长素细胞分裂素、生长素再分化再分化（光照）（光照）植物组织培养植物组织培养关键词：关键词：外植体、脱分化、再外植体、脱分化、再分化、愈伤组织分化、愈伤组织排列疏松、排列疏松、高度液泡化
5、高度液泡化的薄壁细胞的薄壁细胞团团生长素和细胞分裂素用生长素和细胞分裂素用量的比例对器官的发生量的比例对器官的发生起起决定作用决定作用。植物组织培养的培养基植物组织培养的培养基 无机营养成分无机营养成分：N N、P P、K K等大量元素及等大量元素及部分微量元素、水部分微量元素、水 有机营养成分：有机营养成分：蔗糖、维生素和氨基酸蔗糖、维生素和氨基酸 激素：激素：生长素，细胞分裂素和赤霉素生长素，细胞分裂素和赤霉素 琼脂：琼脂：凝固剂凝固剂 PHPH值：值：5.05.06.06.0P36植物组织培养条件：植物组织培养条件：离体离体，含有全部营养成分的培养基、，含有全部营养成分的培养基、一定的温
6、度、适合的一定的温度、适合的PHPH、空气、无菌环、空气、无菌环境、境、适时光照适时光照等。等。植物组织培养的优点植物组织培养的优点:P38无性繁殖无性繁殖保持优良品种的遗传特性保持优良品种的遗传特性;高效快速地实现种苗的大量繁殖。高效快速地实现种苗的大量繁殖。应用：应用：试管苗的快速繁殖、作物脱毒、生试管苗的快速繁殖、作物脱毒、生产人工种子产人工种子1.微型繁殖微型繁殖 (1)微型繁殖技术微型繁殖技术:用于用于快速繁殖快速繁殖优良品种的优良品种的植物组织植物组织培养技术培养技术.2.作物脱毒作物脱毒 (1)材料材料:植物植物分生区（茎尖）分生区（茎尖）的的病毒极少病毒极少，甚至，甚至无病毒无
7、病毒。(2)脱毒苗脱毒苗:切取切取茎尖茎尖进行进行 ，再生的植株就有再生的植株就有可能不带病毒，从而可能不带病毒，从而获得脱毒苗获得脱毒苗 （3）优点：使农作物不会或极少感染病毒，提高作物）优点：使农作物不会或极少感染病毒，提高作物的的产量和品质。产量和品质。植物细胞工程的实际应用植物细胞工程的实际应用组织培养组织培养 3.神奇的神奇的人工种子人工种子 (1)优点优点:后代无性状分离后代无性状分离 不受气候不受气候,季节和地域限制季节和地域限制 (2)技术技术:植物组织培养植物组织培养.(3)结构结构:人工薄膜包装人工薄膜包装胚状体胚状体或或不定芽不定芽或或顶芽顶芽或或腋芽腋芽.植物细胞工程的
8、实际应用植物细胞工程的实际应用P39人工种皮要求：人工种皮要求：1 1、能透水、透气、含有各种营养成分。、能透水、透气、含有各种营养成分。2 2、含有农药、杀虫剂、含有农药、杀虫剂 3 3、含有生长调节剂、含有生长调节剂 4 4、可添加有益菌，如根瘤菌。、可添加有益菌，如根瘤菌。4 4、单倍体育种、单倍体育种 方法方法:花药离体培养花药离体培养5 5、突变体的利用（组培过程中细胞易突变）、突变体的利用（组培过程中细胞易突变）6 6、生产蛋白质、脂肪、糖类、生产蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、药物、香料、生生物碱等物碱等.(20112011江苏江苏)下列有关植物组织培养的叙述，正确的是A愈伤组织
9、是一团有特定结构和功能的薄壁细胞B二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株C用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子D植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得D(2010年新课标全国高考年新课标全国高考)请回答请回答:(1)植物微型繁殖技术属于植物组织培养的范畴。该技植物微型繁殖技术属于植物组织培养的范畴。该技术可以保持品种的术可以保持品种的 ,繁殖种苗的速繁殖种苗的速。离。离体的叶肉细胞在适宜的条件下培养体的叶肉细胞在适宜的条件下培养,最终能够形成完整最终能够形成完整的植株的植株,说明该叶肉细胞具有该植物的全部说明该叶肉细胞具有该植物的全部。(2)把
10、试管苗转接到新的培养基上时把试管苗转接到新的培养基上时,需要在超净工作台需要在超净工作台上进行上进行,其原因是避免其原因是避免 的污染。的污染。(3)微型繁殖过程中微型繁殖过程中,适宜浓度的生长素单独使用可诱导适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗试管苗,而与而与配比适宜时可促进芽配比适宜时可促进芽的增殖。若要抑制试管苗的生长的增殖。若要抑制试管苗的生长,促使愈伤组织产生和促使愈伤组织产生和生长生长,需要使用的生长调节剂是需要使用的生长调节剂是 (脱落酸、脱落酸、2,4D).遗传特性遗传特性快快遗传信息遗传信息微生物微生物生根生根细胞分裂素细胞分裂素2,4-D 2,4-D(4)将某植物试管苗培养
11、在含不同浓度蔗糖的培养基将某植物试管苗培养在含不同浓度蔗糖的培养基上一段时间后上一段时间后,单株鲜重和光合作用强度的变化如图。单株鲜重和光合作用强度的变化如图。据图分析据图分析,随着培养基中蔗糖浓度的增加随着培养基中蔗糖浓度的增加,光合作用光合作用强度的变化趋势是强度的变化趋势是,单株鲜重的变化趋势是单株鲜重的变化趋势是 。据图判断。据图判断,培养基中不含蔗糖时培养基中不含蔗糖时,试管苗光合作试管苗光合作用产生的有机物的量用产生的有机物的量(能、不能能、不能)满足自身满足自身最佳生长的需要。最佳生长的需要。(5)据图推测据图推测,若要在诱导试管苗生根的过程中提若要在诱导试管苗生根的过程中提高其
12、光合作用强度高其光合作用强度,应应(降低、增加降低、增加)培养基中蔗糖浓度培养基中蔗糖浓度,以便以便提高试管苗的自养能力。提高试管苗的自养能力。逐渐减小逐渐减小先增加后下降先增加后下降不能不能降低降低二、植物体细胞杂交技术二、植物体细胞杂交技术1 1、定义：、定义：将将不同种植物不同种植物的体细胞，在的体细胞，在一定条件下一定条件下融合成融合成杂种细胞杂种细胞，并把杂种细胞培育成并把杂种细胞培育成新的植新的植物体物体的方法。的方法。2 2、优势：、优势：（与有性杂交方法比较）与有性杂交方法比较）克服远缘杂交不亲和的障碍克服远缘杂交不亲和的障碍P36原理：原理：原理：原理：3 3、植物体细胞杂交
13、、植物体细胞杂交(1)(1)过程过程为去除为去除 获得具有活力的原生质体，常获得具有活力的原生质体，常用方法是用方法是酶解法酶解法，所用到的酶是，所用到的酶是 。(2)(2)过程过程是原生质体的融合，人工诱导的是原生质体的融合，人工诱导的物理方法物理方法包包 等；等；化学方法化学方法一般用一般用 作诱导剂。作诱导剂。(3)(3)过程过程是原生质体融合后再生出是原生质体融合后再生出 ，这是原生质，这是原生质体融合成功的标志体融合成功的标志,与过程密切相关的具有单层膜结构与过程密切相关的具有单层膜结构的细胞器为的细胞器为 涉及的分裂方式为涉及的分裂方式为。细胞壁细胞壁纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶
14、酶离心、振动、电刺激离心、振动、电刺激聚乙二醇聚乙二醇细胞壁细胞壁细胞膜的流动性细胞膜的流动性 植物细胞的全能性植物细胞的全能性高尔基体高尔基体脱分化脱分化再分化再分化有丝分裂有丝分裂（2013.2013.天津高考）天津高考）花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生
15、质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。下图。据图回答下列问题：据图回答下列问题：（1 1）过程所需的酶是）过程所需的酶是。（2 2）过程后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体）过程后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的的存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。三维三维P229P229纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶叶绿体叶绿体（3 3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是持一定的渗透压，其作用是 。原生质。原生
16、质体经过体经过再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。（4 4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和株和 植株的根尖，通过植株的根尖，通过 、染、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。体的形态和数目。保持原生质体完整性保持原生质体完整性细胞壁细胞壁双亲（或花椰菜和黑芥）双亲（或花椰菜和黑芥）解离解离漂洗漂洗（5 5）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNADNA进行进行PCRPCR扩增，得到
17、两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1414进行进行PCRPCR扩增的结果。据图判断，再生植株扩增的结果。据图判断，再生植株1414中一定是杂种植中一定是杂种植株的有株的有。（6 6）对杂种植株进行）对杂种植株进行接种实验，可筛选出具有接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。高抗性的杂种植株。1 1、2 2、4 4黑腐病菌黑腐病菌“白菜白菜甘蓝甘蓝”是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长周期短、耐热性强和易储存等优点。品种，它具有生
18、长周期短、耐热性强和易储存等优点。图是图是“白菜甘蓝白菜甘蓝”的杂交过程示意图，请据图回答：的杂交过程示意图，请据图回答：白 菜细 胞原 生 质 体 A甘 蓝细 胞原 生 质 体 B正 在 融 合 的 原 生 质 体杂 种细 胞愈 伤组 织“白 菜 甘 蓝”植 株（1）在上述方法中，除去细胞壁的方法是）在上述方法中，除去细胞壁的方法是_。（2）图中原生质体）图中原生质体A和原生质体和原生质体B能融合形成一个杂种能融合形成一个杂种细胞，所依据的生物学原理是细胞，所依据的生物学原理是_。（3）通常情况下，白菜和甘蓝杂交是不成功的，原因是）通常情况下，白菜和甘蓝杂交是不成功的，原因是_纤维酶和果胶酶
19、处理纤维酶和果胶酶处理细胞膜的流动性细胞膜的流动性 存在生殖隔离存在生殖隔离2X（4）若白菜细胞中含）若白菜细胞中含2X条染色体，甘蓝细胞中含条染色体，甘蓝细胞中含2Y条染色体，则杂种细胞中染色体数为条染色体，则杂种细胞中染色体数为_，发，发育成的植株育成的植株倍体倍体.（5）若白菜和甘蓝的基因型分别为）若白菜和甘蓝的基因型分别为AaBB,ccDd,通通过细胞工程可获得哪几种基因型的融合细胞过细胞工程可获得哪几种基因型的融合细胞_，_2X2X2X2Y2YAAaaBBBBAAaaBBBB ccccDDddccccDDdd AaccBBDdAaccBBDd四四“白菜白菜甘蓝甘蓝”是用细胞工程的方法
20、培育出来的蔬菜新是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长周期短、耐热性强和易储存等优点。品种，它具有生长周期短、耐热性强和易储存等优点。图是图是“白菜甘蓝白菜甘蓝”的杂交过程示意图，请据图回答：的杂交过程示意图，请据图回答：白 菜细 胞原 生 质 体 A甘 蓝细 胞原 生 质 体 B正 在 融 合 的 原 生 质 体杂 种细 胞愈 伤组 织“白 菜 甘 蓝”植 株 就是从动物机体中取出就是从动物机体中取出相关组织相关组织，将它分，将它分散成散成单个细胞单个细胞，然后放在，然后放在适宜的培养基适宜的培养基中，让中，让这些细胞这些细胞生长和繁殖生长和繁殖。1 1、概念和应用：、概念和应用
21、：依据的原理：依据的原理：细胞增殖细胞增殖知识点二动物细胞工程知识点二动物细胞工程P442.2.操作流程操作流程:胰蛋白酶胰蛋白酶细胞悬液细胞悬液原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶（1 1）.细胞贴壁：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面光要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。滑、无毒、易于贴附。（2 2）.接触抑制：接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。接触抑制
22、。动物细胞培养特点：动物细胞培养特点：贴壁生长、接触抑制贴壁生长、接触抑制（3 3）、）、原代培养：原代培养：动物组织消化后的初动物组织消化后的初次培养。次培养。（4 4）、）、传代培养：传代培养：贴满瓶壁的细胞，出贴满瓶壁的细胞，出现现接触抑制接触抑制后，需要重新用后，需要重新用胰蛋白酶胰蛋白酶等等处理，然后分瓶培养，让细胞处理，然后分瓶培养，让细胞继续增殖继续增殖。动物胚胎或幼动物胚胎或幼龄动物组织块龄动物组织块增殖能力强，代增殖能力强，代谢旺盛，分化程谢旺盛，分化程度低，容易培养度低，容易培养：或胶原蛋白酶或胶原蛋白酶：分解组织间蛋白，分解组织间蛋白，将组织分散成单个将组织分散成单个细胞
23、细胞P441 1、保证细胞所需要的营养供给、保证细胞所需要的营养供给2 2、保证细胞内有害代谢产物的、保证细胞内有害代谢产物的及时排出及时排出：贴壁生长贴壁生长接触抑制接触抑制洗涤、稀释、分离洗涤、稀释、分离（1 1）、无菌、无毒的环境）、无菌、无毒的环境 （无菌处理、添加一定量的抗生素，定期更换培养（无菌处理、添加一定量的抗生素，定期更换培养液）液）（2 2）、营养）、营养 （葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、维生素、（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、维生素、微量元素等、微量元素等、血清、血浆血清、血浆）（3 3）、温度和）、温度和PHPH 温度温度36.5+0.5度，pH7.27.4
24、（4 4）、气体环境）、气体环境 O O2 2和和COCO2 2（95%95%空气和空气和5%CO5%CO2 2 ）3 3、动物细胞培养条件、动物细胞培养条件保证细胞顺利的生长增殖保证细胞顺利的生长增殖离体培养的细胞对离体培养的细胞对微生物和有毒物质微生物和有毒物质没有防御能力没有防御能力O O2 2细胞代谢所必需；细胞代谢所必需；COCO2 2维持培养液的维持培养液的PHPH课本课本P46动物胚胎或出生不久的动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织幼龄动物的器官或组织植物幼嫩部位或花药等植物幼嫩部位或花药等取材取材葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无、氨基酸、无机盐、维生素、促生机盐、维生素、促生长因子
25、、长因子、动物血清动物血清等等水、矿质元素、维生水、矿质元素、维生素、素、蔗糖蔗糖、氨基酸、氨基酸、琼脂、琼脂、植物激素植物激素成分成分液体培养基液体培养基固体或半固体培养基固体或半固体培养基类型类型培培养养基基细胞增殖细胞增殖植物细胞全能性植物细胞全能性理论基础理论基础动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养项目项目新的细胞系或细胞株，不形新的细胞系或细胞株，不形成个体，不体现全能性成个体，不体现全能性新的组织或植株个体，新的组织或植株个体，可以体现全能性可以体现全能性结果结果过程过程动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养项目项目两技术手段培养过程中细胞都进行有丝分裂，都是
26、两技术手段培养过程中细胞都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称克隆，都不涉及减数分裂无性繁殖，都可称克隆，都不涉及减数分裂均为无菌操作，需要适宜的温度、均为无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件等条件相同点相同点蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产皮肤移植材料的培育皮肤移植材料的培育检测有毒物质检测有毒物质生理、病理、药理学研究生理、病理、药理学研究植株快速繁殖植株快速繁殖脱毒植株的培育脱毒植株的培育人工种子人工种子生产药物、杀虫剂等生产药物、杀虫剂等转基因植物的培育转基因植物的培育目的目的动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养项目项目三维三维P227 P227 易误提醒易误提醒 1
27、.1.概念：概念：将动物的一个细胞的将动物的一个细胞的细胞核细胞核，移，移入一个已经入一个已经去掉细胞核的去掉细胞核的卵母细胞卵母细胞中，使其中，使其重组并发育成一个新的重组并发育成一个新的胚胎胚胎，这个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成最终发育成动物个体动物个体。核移植核移植（难度高）（难度高）二、动物体细胞核移植技术二、动物体细胞核移植技术胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复细胞分化程度低，恢复全能性容易全能性容易用核移植的方法得到的动物用核移植的方法得到的动物称为克隆动物称为克隆动物供体供体受体受体结结果果原理：原理：动物细胞动物细胞核核的的全能
28、性全能性课本课本P47P47二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1.1.原理原理:动物动物细胞核细胞核的的_。2.2.供体和受体供体和受体:(1)(1)供体细胞供体细胞:一般选优良动物的传代一般选优良动物的传代_以内以内的细胞。的细胞。(2)(2)受体细胞受体细胞:去核的去核的_。全能性全能性1010代代减数第二次分裂减数第二次分裂中期中期的卵母细胞的卵母细胞3.3.过程过程:细胞培养细胞培养重组细胞重组细胞去核去核供体供体三、动物细胞融合（细胞杂交）三、动物细胞融合（细胞杂交）1、概念：、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个指两个或多个动物细胞结合形成一个细
29、胞的过程。细胞的过程。2、结果：、结果：形成单核的杂交细胞形成单核的杂交细胞3、原理：、原理：细胞膜的流动性细胞膜的流动性4、诱导、诱导 因素因素物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒生物法：灭活的病毒5、过程、过程膜融合、质融合、核融合膜融合、质融合、核融合通过有丝分裂进行核融合通过有丝分裂进行核融合动物细胞动物细胞融合成功融合成功的标志：的标志：核融合核融合P5237ppt课件课件6、意义：克服远缘杂交不亲和的障碍。、意义：克服远缘杂交不亲和的障碍。7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿、应用：成为研究细胞遗传、细胞
30、免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体A A野生夏菊和栽培秋菊自然杂交后是四倍体，属于同野生夏菊和栽培秋菊自然杂交后是四倍体，属于同一物种一物种B B过程常选择酶解法去壁，一般在低渗溶液中进行过程常选择酶解法去壁，一般在低渗溶液中进行C C过程有关的细胞器只有高尔基体比较活跃过程有关的细胞器只有高尔基体比较活跃D Dd d植株含有夏菊和秋菊的遗传物质植株含有夏菊和秋菊的遗传物质D为了培育菊花新品种，科学家利用二倍体野生夏菊和六为了培育菊花新品种，科学家利用二倍体野生夏菊和六倍体栽培秋菊进行杂交，
31、培育过程如图所示。下列有关倍体栽培秋菊进行杂交，培育过程如图所示。下列有关叙述正确的是叙述正确的是 解析解析 夏菊和秋菊二者存在生殖隔离，夏菊和秋菊二者存在生殖隔离，二者属于不同物种。酶解后形成的原生质二者属于不同物种。酶解后形成的原生质体没有细胞壁，在低渗溶液中会出现吸水体没有细胞壁，在低渗溶液中会出现吸水涨破的现象。涨破的现象。过程属于形成新细胞壁的过程属于形成新细胞壁的过程，细胞中线粒体和高尔基体都比较活过程，细胞中线粒体和高尔基体都比较活跃。跃。d d植株属于杂种植株，含有亲本夏菊植株属于杂种植株，含有亲本夏菊和秋菊的遗传物质。和秋菊的遗传物质。四四 制备单克隆抗体制备单克隆抗体前提是
32、：免疫的动物抗原侵入机体，引发抗原侵入机体，引发体液免疫体液免疫，B B淋巴细胞受抗原淋巴细胞受抗原刺激后，可以刺激后，可以产生抗体产生抗体。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。B B淋巴细胞不能无限增殖淋巴细胞不能无限增殖B淋巴细胞（浆细胞）淋巴细胞（浆细胞）能产生抗体，但不能产生抗体，但不能无限增殖；能无限增殖；骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞不不能产生抗体，能产生抗体，但能无限增殖。但能无限增殖。融合形成的融合形成的杂交瘤细胞杂交瘤细胞既能产生专一性抗体，既能产生专一性抗体，又能无限增殖又能无限增殖细胞融合是随机的且融合率达不到细胞融合是随机的且融合率达不到100%100
33、%细胞培养细胞培养6 6、单克隆抗体的应用：、单克隆抗体的应用：特异性强、灵敏度高、并可大量制备特异性强、灵敏度高、并可大量制备 最广泛的用途是作为体外诊断试剂：准确识别最广泛的用途是作为体外诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合各种抗原物质，并与特异性结合 优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗5 5、单克隆抗体的特点：、单克隆抗体的特点：（2 2）、混淆单克隆抗体制备中两次筛选的目的）、混淆单克隆抗体制备中两次筛选的目的三维三维P229 P229 易误提醒易
34、误提醒(2013(2013海南高考海南高考)单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒I I 型型(HSV(HSVI)I)可引可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSVHSV1 1 的单克隆抗体可快速检测的单克隆抗体可快速检测HSVHSVI I。回答下列问题：。回答下列问题：(1)(1)在制备抗在制备抗HSVHSV1 1 的单克隆抗体的过程中，先给的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的小鼠注射一种纯化的HSVHSV1 1 蛋白，一段时间后，蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗若小鼠血清中抗_的抗体检测呈阳性，的抗体检测呈阳性，说明小鼠体内产生了说明小鼠体内产生了_反
35、应，再从小鼠反应，再从小鼠的的_中获取中获取B B 淋巴细胞。将该淋巴细胞。将该B B 淋巴细淋巴细胞与小鼠的胞与小鼠的_细胞融合，再经过筛选、细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是有的特点是_。HSVHSV1 1蛋白蛋白体液免疫体液免疫脾脏脾脏骨髓瘤骨髓瘤能无限增殖且可产生专一抗体能无限增殖且可产生专一抗体(2)(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的杂交瘤细胞注射到小鼠的_中使其增殖，中使其增殖，再从再从_中提取、纯化获得。中提取、纯化获得。(3
36、)(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种这种HSVHSVI I蛋白，蛋白，其原因是该抗体具有其原因是该抗体具有_和和_等特等特性。性。腹腔腹腔腹水腹水特异性强特异性强灵敏度高灵敏度高（20142014新课标新课标I I卷卷.40.40.）（1515分）分）某研究者用抗原（某研究者用抗原（A A）分别免疫）分别免疫3 3只同种小鼠（只同种小鼠（X X、Y Y和和Z Z），），每只小鼠免疫每只小鼠免疫5 5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），的效价（能检测出抗原
37、抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。结果如下图所示。若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B B淋巴细胞淋巴细胞（染色体数目（染色体数目4040条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目髓瘤细胞（染色体数目6060条）按一定比例加入试管中，条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗得到不断分泌抗A A抗体的杂交瘤细胞抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题回答下列问题：（1 1）制备融合所需的）制备融合所需的B B淋巴
38、细胞时，所用免疫淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到小鼠的血清抗体效价需达到1600016000以上，则小鼠以上，则小鼠最少需要经过最少需要经过 次免疫后才能有符合要次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的求的。达到要求后的X X、Y Y、Z Z这这3 3只免疫小鼠中，只免疫小鼠中，最适合用于制备最适合用于制备B B淋巴细胞的是淋巴细胞的是 小鼠，理小鼠，理由是由是 。（2 2）细胞融合实验完成后，融合体系中除含有）细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有有 ，体系中出现多种类型细胞的原因，体系中出现多种类型细胞的原因是是
39、 。（3 3）杂交瘤细胞中有）杂交瘤细胞中有 个细胞核，染色体个细胞核，染色体数目最多是数目最多是 条。条。（4 4）未融合的）未融合的B B淋巴细胞经多次传代培养后都淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是不能存活，原因是 。1 1）四）四 Y Y Y Y 小鼠的小鼠的 B B 淋巴细胞产生抗淋巴细胞产生抗体数量较多体数量较多（2 2）杂交瘤细胞自身融合产物、）杂交瘤细胞自身融合产物、B B 淋巴细淋巴细胞自身融合产物胞自身融合产物 细胞融合不具有特细胞融合不具有特异性，在诱导剂的作用下，相同种类和不异性，在诱导剂的作用下，相同种类和不同种类的细胞均可以融合同种类的细胞均可以融合（3 3）
40、1 1001 100（4 4）B B 淋巴细胞高度分化，不能恶性增淋巴细胞高度分化，不能恶性增殖；不可能渡过原代培养和传代培养过殖；不可能渡过原代培养和传代培养过程中的两次危机程中的两次危机(江苏卷江苏卷)关关于现代生物技术应用的叙述，错误的于现代生物技术应用的叙述，错误的是是A A蛋白质工程可以合成自然界不存在的蛋白质蛋白质工程可以合成自然界不存在的蛋白质B B体细胞杂交技术可以用于克隆动物和制备单体细胞杂交技术可以用于克隆动物和制备单克隆抗体克隆抗体C C植物组织培养技术可用于植物茎尖脱毒植物组织培养技术可用于植物茎尖脱毒D D动物细胞培养技术可用于转基因动物的培养动物细胞培养技术可用于转
41、基因动物的培养解析解析克隆动物应用的是细胞核移植技术，所以克隆动物应用的是细胞核移植技术，所以B B选项叙述错误。选项叙述错误。答案答案B B(广东卷广东卷)新新技术的建立和应用对生物学发展至关技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术重要。下列技术(或仪器或仪器)与应用匹配正确的是与应用匹配正确的是(双双选选)()()。A APCRPCR技术技术扩增蛋白质扩增蛋白质B B杂交瘤技术杂交瘤技术制备单克隆抗体制备单克隆抗体C C光学显微镜光学显微镜观察叶绿体的基粒观察叶绿体的基粒D D花粉离体培养花粉离体培养培育单倍体植物培育单倍体植物解析解析本题主要考查学生的理解能力。本题主要考查学生的理
42、解能力。PCRPCR技术技术只能用来扩增核酸，不能用来扩增蛋白质；利用只能用来扩增核酸，不能用来扩增蛋白质；利用光学显微镜无法观察到叶绿体中的基粒。光学显微镜无法观察到叶绿体中的基粒。答案答案BDBD(浙江卷浙江卷)下下列关于动物细胞培养的叙述，正确的列关于动物细胞培养的叙述，正确的是是A A培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞成多层细胞B B克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变发生改变C C二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的D D恶性细胞系的细胞可进行传代培
43、养恶性细胞系的细胞可进行传代培养答案答案D(全国卷全国卷)下下列关于植物体细胞杂交或植物细胞列关于植物体细胞杂交或植物细胞质遗传的叙述，错误的是质遗传的叙述，错误的是()A A利用植物体细胞杂交技术可克服生殖隔离的利用植物体细胞杂交技术可克服生殖隔离的限制，培育远缘杂种限制，培育远缘杂种B B不同种植物原生质体融合的过程属于植物体不同种植物原生质体融合的过程属于植物体细胞杂交过程细胞杂交过程C C两个不同品种的紫茉莉杂交，正交、反交所两个不同品种的紫茉莉杂交，正交、反交所得得F F1 1的表现型一致的表现型一致D D两个不同品种的紫茉莉杂交，两个不同品种的紫茉莉杂交，F F1 1的遗传物质的遗
44、传物质来自母本的多于来自父本的来自母本的多于来自父本的答案答案C(浙江卷浙江卷)用用动、植物成体的体细胞进行离体培养动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是，下列叙述正确的是()。A A都需用都需用COCO2 2培养箱培养箱 B B都须用液体培养基都须用液体培养基C C都要在无菌条件下进行都要在无菌条件下进行 D D都可体现细胞的全能性都可体现细胞的全能性解析解析动、植物成体的体细胞进行离体培养都要动、植物成体的体细胞进行离体培养都要在无菌条件下进行，动物成体的体细胞离体培养在无菌条件下进行，动物成体的体细胞离体培养用液体培养基，不能体现细胞的全能性，植物成用液体培养基，不能体现细胞的全能性，植物成体的体细胞离体培养不一定用液体培养基，能体体的体细胞离体培养不一定用液体培养基，能体现细胞的全能性。故现细胞的全能性。故C C正确。正确。答案答案C C
