1、第五章第五章 OOOOOOOHOOOOHOHOOCH234567123456OOOO2346545236OHOOOOHOOOOHOOH+OHO2346545236OOHOOHOOOHOHOOH2 2、颜色反应、颜色反应还原反应还原反应l盐酸盐酸-镁粉反应：镁粉反应：阳性：阳性：黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）橙红橙红-紫红紫红（少数（少数显紫显紫 蓝色蓝色）。）。（B B环有环有-OH-OH或或OCH3OCH3取代时，颜色随之加深）取代时，颜色随之加深）阴性：阴性：查耳酮、橙酮、儿茶素、异黄酮查耳酮、橙酮、儿茶素、异黄酮 假阳性：假阳性：花色素、部分查耳酮、橙酮等。花色素、
2、部分查耳酮、橙酮等。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应生成阳碳离子所致生成阳碳离子所致 OOOHOHOH+二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应槲皮素槲皮素花色苷元（红色）花色苷元（红色）双花色苷元双花色苷元l盐酸盐酸-锌粉反应：锌粉反应：阳性：阳性：二氢黄酮醇、黄酮醇二氢黄酮醇、黄酮醇-3-O-3-O糖苷（糖苷（红红-紫紫）阴性：阴性：黄酮醇、二氢黄酮醇黄酮醇、二氢黄酮醇-3-O-3-O糖苷糖苷l四氢硼钠反应：四氢硼钠反应：NaBHNaBH4 4是对二氢黄酮类化合物的专属反应。是对二氢黄酮类化合物的专属反
3、应。方法：方法：取样品取样品10mg10mg溶于甲醇，加溶于甲醇，加2%NaBH2%NaBH4 410mg10mg，再滴加再滴加1%1%浓盐酸或浓硫酸，呈浓盐酸或浓硫酸，呈 红红-紫紫色。色。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应紫色至紫红色紫色至紫红色金属盐类试剂的络合反应金属盐类试剂的络合反应分子结构：分子结构：5-OH,4=O 5-OH,4=O 3-OH,4=O 3-OH,4=O 邻二酚羟基邻二酚羟基l铝盐：铝盐：试剂：试剂：1%AlCl3或或Al(NO3)3：络合物
4、为络合物为(max=415nm)，具荧光。具荧光。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应l铅盐：铅盐：试剂：试剂：1%Pb(OAc)1%Pb(OAc)2 2或碱式醋酸铅水溶液。或碱式醋酸铅水溶液。醋酸铅醋酸铅Pb(OAc)Pb(OAc)2 2：沉淀具有沉淀具有邻二酚羟基邻二酚羟基、兼有、兼有3-3-OH,4=OOH,4=O、5-OH,4=O5-OH,4=O者。者。产生黄红色沉淀。产生黄红色沉淀。碱式醋酸铅碱式醋酸铅Pb(OH)(OAcPb(OH)(OAc)：可使可使所有含酚所有含酚OHOH的化的化合物产生合物产生红色红色沉淀，可用于分离。沉淀，可用于分
5、离。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应l锆盐：锆盐：2%2%氯氧化锆甲醇液氯氧化锆甲醇液 黄酮类分子中有游离的黄酮类分子中有游离的3 3或或5-OH5-OH存在时，均可反应生存在时，均可反应生成成的锆络合物。的锆络合物。观察颜色2%枸橼酸甲醇液黄色1ml2%ZrOCl210ml甲醇溶样品0.5-1mg黄色不褪黄色褪去2%枸橼酸黄色锆络合物 锆盐3-OH,4=O5-OH,4=O二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应OClZrOOHOHOHHOOOH2O说明：说明：3-OH,4-C=O黄酮稳定性黄酮稳定性 5-
6、OH,4-C=O黄酮黄酮l 镁盐：镁盐：区别二氢黄酮（醇）类化合物。区别二氢黄酮（醇）类化合物。二氢黄酮（醇）：二氢黄酮（醇）：天蓝色天蓝色荧光荧光 若具有若具有C C5 5-OH-OH，色泽更明显。，色泽更明显。黄酮、黄酮醇、异黄酮：黄酮、黄酮醇、异黄酮：-橙黄橙黄-褐色褐色。方法：方法：在纸片上滴加样品液，喷在纸片上滴加样品液，喷醋酸镁甲醇醋酸镁甲醇液，加热干液，加热干燥，燥，UVUV观察。观察。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应l氯化锶氯化锶(SrCl(SrCl2 2)：检识具有邻二酚羟基的黄酮。检识具有邻二酚羟基的黄酮。试剂：试剂：氨性甲醇
7、溶液氨性甲醇溶液 与分子中具有与分子中具有邻二酚羟基邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成结构的黄酮类化合物生成绿色绿色 棕色棕色乃至黑色沉淀。乃至黑色沉淀。l 氯化铁氯化铁(FeCl(FeCl3 3)：检查酚羟基。检查酚羟基。v含有含有3-OH,5-OH,3-OH,5-OH,邻二邻二OHOH时，可显红、绿等较明显的时，可显红、绿等较明显的颜色。颜色。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应2+Sr +2OH+2H2OOOOHHOOOOHSrOHOHOHHOOOOH 硼酸显色反应硼酸显色反应条件：条件：l具有下列结构（具有下列结构（5-5-羟基黄酮，羟基黄酮，
8、2-2-羟基查耳酮羟基查耳酮）二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应CCCOOH显黄色并带 显黄色绿色荧光 无荧光 枸丙 橼 酸酮+草酸亮黄色当含 结构时与硼酸无机酸或有机酸存在OOHOOOH2碱性试剂显色反应：碱性试剂显色反应：在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱性试剂处理后的色变情况。性试剂处理后的色变情况。lNHNH3 3蒸汽显色蒸汽显色-深黄色，慢慢褪色深黄色，慢慢褪色(NH(NH3 3挥发性挥发性)lNaNa2 2COCO3 3显色：显显色：显橙橙-红色。红色。二、理化性质二、理化性质（一）
9、化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应HOHOHOOOl黄酮醇类在碱液中先呈黄酮醇类在碱液中先呈黄色黄色，通入空气后变为，通入空气后变为棕色棕色，据此可与黄酮类区别。，据此可与黄酮类区别。l黄酮类化合物当分子中有黄酮类化合物当分子中有邻二酚羟基邻二酚羟基取代或取代或3,4-3,4-二羟基二羟基取代时，在碱液中不稳定，很快取代时，在碱液中不稳定，很快氧化，由氧化，由黄色黄色深红色深红色绿棕色绿棕色沉淀。沉淀。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 2 2、颜色反应、颜色反应3 3、WesselyWessely-Moser-Moser重排重排 黄酮类黄酮类6-6-及及8-
10、C-8-C-糖苷糖苷在常规酸水解条件下在常规酸水解条件下不能被水解，但可发生互变，成为不能被水解，但可发生互变，成为6-6-及及8-C-8-C-糖苷的混合物。糖苷的混合物。二、理化性质二、理化性质（一）化学性质（一）化学性质 3 3、Wessely-Moser重排重排+glucoseOHOHHOOOHOOHOHHOOOOHOHHOOOHOHOOH6h6%HClOHOHHOOOOglu请将下列化合物的结构式和名称配对请将下列化合物的结构式和名称配对,并说明各化合物并说明各化合物的结构类型的结构类型芦丁、槲皮素、葛根素、水飞蓟素:HO OH OH OH OH OH OH HO HO O HO O
11、OH O Oglc rha OH OH O OH O O OH B A C OH O OCH3 HO O O OH OH OH O D 1.OOHOOHOHglcOOHOOHOHOglcAB用化学方法区别下列各组化合物：用化学方法区别下列各组化合物：2.BAOOHOOHOglcOOHOOHOHOOHOOHOHOHC3.OOHOOHOHOglcAOOHOOHOHOHOglcBOOglcOOHOHOHC4.OOHOOHOHOglcOOHOOHOOOHABC.预测芦丁的显色反应结果：预测芦丁的显色反应结果：vHCL-Mg反应反应vHCL-Zn反应反应vZaBH4反应反应v锆锆-枸橼酸反应枸橼酸反应v
12、SrCl2反应反应v硼酸硼酸+草酸反应草酸反应vMolish反应反应OOOHOHOHHOrutinose某化合物有：某化合物有：四氢硼钠反应呈紫红色；四氢硼钠反应呈紫红色；氯氯化锶反应阳性；化锶反应阳性；锆锆-枸椽酸反应黄色褪去等枸椽酸反应黄色褪去等性质，则该化合物应为：性质，则该化合物应为：(1)(2)(3)(4)HOOHOOOHOHHOOHOOOHOHOHHOOHOHOHOOHOOHOOOH母核上取代基相同的以下各类化合物的亲水性由母核上取代基相同的以下各类化合物的亲水性由大到小的顺序为：大到小的顺序为：二氢黄酮类二氢黄酮类 黄酮类黄酮类 花色苷元花色苷元某中药水提取液中，在进行某中药水提
13、取液中，在进行HClHCl-Mg-Mg粉反应时，粉反应时，加入加入MgMg粉无颜色变化，加入浓粉无颜色变化，加入浓HClHCl则有颜色变化，则有颜色变化，只加浓只加浓HClHCl不加不加MgMg粉也有红色出现，加水稀释后粉也有红色出现，加水稀释后红色也不褪去，则该提取液中可确定含有：红色也不褪去，则该提取液中可确定含有：A.A.异黄酮异黄酮 B.B.黄酮醇黄酮醇 C.C.花色素花色素 D.D.黄酮类黄酮类酸性最弱的黄酮类化合物是：酸性最弱的黄酮类化合物是：1.7-OH1.7-OH黄酮黄酮2.4-OH2.4-OH黄酮黄酮3.5-OH3.5-OH黄酮黄酮4.2-OH4.2-OH黄酮黄酮5.7,4-
14、5.7,4-二二OHOH黄酮黄酮溶于石油醚的黄酮类化合物是：溶于石油醚的黄酮类化合物是：1.1.槲皮素槲皮素2.2.黄芩苷黄芩苷3.3.芹菜素芹菜素4.4.葛根素葛根素5.5,6,7,8,3,4-5.5,6,7,8,3,4-六甲氧基黄酮六甲氧基黄酮试分析下列化合物酸性大小的顺序试分析下列化合物酸性大小的顺序OHOOHOOHOHOHOOOHOHOH（1）（2）（3）（4）OOOHOHOHOHH3COOOOCH3OHOH黄酮类化合物有哪些主要的显色反黄酮类化合物有哪些主要的显色反应？如何用这些显色反应区别下列应？如何用这些显色反应区别下列各组化合物？各组化合物？（1 1）黄酮与双氢黄酮）黄酮与双氢
15、黄酮 （2 2）双氢黄酮与查耳酮）双氢黄酮与查耳酮（3 3）黄酮与异黄酮）黄酮与异黄酮 （4 4）5-5-羟基黄酮与羟基黄酮与6 6，7-7-二羟基黄酮二羟基黄酮本章内容本章内容一、结构类型二、理化性质三、提取分离四、结构鉴定五、生物活性（一）提取一）提取苷元：苷元：l大多数黄酮：大多数黄酮：CHClCHCl3 3、EtEt2 2OO、EtOAcEtOAc等等l多甲氧基黄酮：苯、石油醚多甲氧基黄酮：苯、石油醚l极性大的成分：极性大的成分：EtOAcEtOAc、EtOHEtOH、MeMe2 2COCO、MeOHMeOH、HH2 2OO等混合溶剂。等混合溶剂。三三、提取分离提取分离（一）提取（一）
16、提取苷类：苷类：l用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、极性较大的混用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、极性较大的混合溶剂或热水提取合溶剂或热水提取l多糖苷：沸水多糖苷：沸水l常用溶剂：常用溶剂：甲醇甲醇-水（水（1 1：1 1）、甲醇）、甲醇 注意：注意：1 1、苷类提取防止酶解。、苷类提取防止酶解。2 2、含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。、含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。3 3、提取花青素类可加入少量酸（、提取花青素类可加入少量酸（0.1%0.1%盐酸），但盐酸），但一般黄酮类化合物则应避免。一般黄酮类化合物则应避免。三三、提取分离提取分离（一）提取（一）提取水提法：水提法：适合于多糖苷的提取适合于多糖
17、苷的提取原料H2O,水提液 沉淀 滤液(蛋白质等)n-BuOH 水液(多糖甙)n-BuOH萃取加入EtOH过滤粗提物的精制处理粗提物的精制处理v1 1、溶剂萃取法：、溶剂萃取法：v原理：利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选原理：利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行萃取而达到精制纯化目的。用不同溶剂进行萃取而达到精制纯化目的。醇类溶剂提取：醇类溶剂提取：MeOH,EtOHv石油醚：石油醚：除油脂、蜡、叶绿素除油脂、蜡、叶绿素、胡罗卜素等、胡罗卜素等；v水溶醇沉：水溶醇沉：除蛋白质、多糖、大分子；除蛋白质、多糖、大分子；v逆流分配：逆流分配：水水-乙酸乙酯，正丁醇乙酸乙酯，正
18、丁醇-石油醚石油醚三三、提取分离提取分离（一）提取（一）提取药材药材水或醇水或醇-水，加热提取水，加热提取浓缩，加浓缩，加3-4倍量醇倍量醇醇水液醇水液沉淀沉淀浓缩，回收醇，加水浓缩，回收醇，加水水液水液依次石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取依次石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚层石油醚层氯仿层氯仿层乙酸乙酯层乙酸乙酯层正丁醇层正丁醇层水层水层提取液提取液（黄酮苷（黄酮苷)（极性大的苷元，（极性大的苷元，极性小的苷）极性小的苷）（黄酮苷元）（黄酮苷元）（极性小（极性小 大）大）（水提醇沉法）（水提醇沉法）（叶绿素等（叶绿素等脂溶性成分）脂溶性成分）（水杂）（水杂）黄酮提取（粗分）：黄酮提
19、取（粗分）：2 2、碱水提酸沉淀法、碱水提酸沉淀法原理：原理：酚羟基与碱成盐，溶于水，加酸后析出。酚羟基与碱成盐，溶于水，加酸后析出。适用于含适用于含酚羟基酚羟基的化合物，如芦丁、橙皮的化合物，如芦丁、橙皮苷、黄芩苷等。苷、黄芩苷等。l常用碱水常用碱水：石灰水石灰水Ca(OH)2，NaNa2 2COCO3 3，稀，稀NaOHNaOH，碱，碱性稀醇；性稀醇；l酸沉酸沉：盐酸。盐酸。三三、提取分离提取分离（一）提取（一）提取槐米中芦丁的提取槐米中芦丁的提取v槐米槐米（槐树（槐树SophoraSophora japonica L.japonica L.花蕾）加约花蕾）加约6 6倍量水，煮沸，在搅拌下
20、缓缓加入倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳石灰乳至至pH89pH89，在此，在此pHpH条件下微沸条件下微沸20302030分钟，趁分钟，趁热抽滤，残渣同上再加热抽滤，残渣同上再加4 4倍水煎倍水煎1 1次，趁热抽滤。次，趁热抽滤。合并滤液，在合并滤液，在60706070下，用下，用浓盐酸浓盐酸调至调至pHpH为为5 5，搅匀，静置，搅匀，静置2424小时，抽滤。沉淀物水洗小时，抽滤。沉淀物水洗至中性，至中性，6060干燥得干燥得芦丁粗品芦丁粗品，于水中重结晶，于水中重结晶，70807080干燥得干燥得芦丁纯品芦丁纯品。三三、提取分离提取分离（一）提取（一）提取注意事项：注意事项：酸碱度不宜
21、过大：酸碱度不宜过大：碱性过强，破坏黄酮母核；碱性过强，破坏黄酮母核；酸性过强，生成佯盐，影响产率。酸性过强，生成佯盐，影响产率。邻二酚羟基的保护：邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易碱性条件下，邻二酚羟基易被氧化，加硼砂保护；被氧化，加硼砂保护；用用石灰水石灰水可除去花、果中含大量鞣质，果胶，粘可除去花、果中含大量鞣质，果胶，粘液质，有利于纯化。但浸出效果不及液质，有利于纯化。但浸出效果不及NaOHNaOH，且有些，且有些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。稀黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。稀NaOHNaOH浸出效率高，浸出效率高，但杂质多。但杂质多。三三、提取分离提取分离（一）提取（一）提取3
22、3、炭粉吸附法、炭粉吸附法适用于苷类的精制工作。适用于苷类的精制工作。植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全(上清液上清液无黄酮反应无黄酮反应)，过滤得吸附苷的活性炭粉末。，过滤得吸附苷的活性炭粉末。依次用依次用沸甲醇、沸水、沸甲醇、沸水、7%7%酚酚/水、水、15%15%酚酚/醇醇洗脱，分步收集、检查、合并。洗脱，分步收集、检查、合并。大部分苷类可用大部分苷类可用7%7%酚酚/水洗水洗下，经减压浓缩至下，经减压浓缩至小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较纯黄酮苷。纯黄酮苷。三三、提取分离提取分离（一）提取（一）提取 CH
23、Cl3CHCl3Et2O浓缩液减压浓缩A B C DA 沸MeOH洗B 沸水洗C 7%酚/水D 15%酚/醇洗 石油醚液(叶绿素,水层 蜡,胡萝卜素等)活性碳直接柱层析加入少量水、石油醚萃取活性碳吸附至上清检不出黄酮化合物溶剂萃取浓缩液回收溶剂醇提取液MeOH或EtOH提取原料适用于甙类萃取水层EtOAc(或n-BuOH)回收溶剂总黄酮甙总黄酮层EtOAc层回收溶剂萃取萃取水液液浓缩黄酮甙(酚)除去酚类(黄酮甙可用7%酚/水洗下)Et2Ov补充：活性炭层析是分离水溶性物质(氨基酸、糖类及其某些甙)的主要方法之一。其特点是样品上柱量大，分离效果好，活性炭来源较易，价格便宜，适用于大量制备分离。但
24、，由于活性炭的生产原料不同，制备方法及规格不一，其吸附力级别尚无理想方法测定，因而限制了其广泛应用。活性炭为非极性吸附剂，洗脱溶剂极性由强弱，溶质：极性大的Rf值大。（二）分离（二）分离依据：依据：1 1、极性不同极性不同硅胶、氧化铝分离（极性吸附）硅胶、氧化铝分离（极性吸附）聚酰胺分离（氢键吸附）聚酰胺分离（氢键吸附）（酚羟基数目、位置不同酚羟基数目、位置不同）2 2、分子量不同分子量不同凝胶凝胶色谱色谱3 3、酸性不同酸性不同PHPH梯度萃取梯度萃取4 4、特殊结构特殊结构化学分离化学分离三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离 1 1、极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离、极性大小
25、不同，利用吸附或分配原理进行分离常用的吸附剂或载体：常用的吸附剂或载体：硅胶、聚酰胺、纤维素粉、硅胶、聚酰胺、纤维素粉、氧化铝、氧化镁及硅藻土氧化铝、氧化镁及硅藻土等。等。硅胶柱色谱：硅胶柱色谱：v吸附层析洗脱剂：吸附层析洗脱剂：C6H6,CHCl3,CH2Cl2,EtOAc/少量少量MeOHv分配层析洗脱剂：分配层析洗脱剂：EtOAc:丁酮丁酮:HCOOH:H2O(5:3:1:17,上上层层)；丁醇丁醇:HOAc:H2O(4:1:5 上层上层)三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离硅胶的活度与应用硅胶的活度与应用含含H H2 2O O量量活度活度应用应用0%0%I I级级吸附层析吸附层析
26、适于分离：适于分离：异黄酮、二氢异黄酮、二氢黄酮黄酮(醇醇)及高度甲基化及高度甲基化(或或乙酰化乙酰化)的黄酮及黄酮醇类。的黄酮及黄酮醇类。5%5%II II级级15%15%IIIIII级级25%25%IVIV级级分配层析分配层析适于分离：适于分离：多羟基黄酮醇多羟基黄酮醇及其苷类及其苷类38%38%V V级级聚酰胺色谱：聚酰胺色谱：v原理：由两个理论来说明，原理：由两个理论来说明，“氢键吸附氢键吸附”理论，理论，“双重层析双重层析”理论。理论。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离v“氢键吸附氢键吸附”v分离原理：分离原理：由于聚酰胺分子内有很多酰胺键，可与酚类、酸类、由于聚酰胺分子内有
27、很多酰胺键，可与酚类、酸类、醌类、硝基化合物等形成氢键，因而对这些物质形成醌类、硝基化合物等形成氢键，因而对这些物质形成氢键缔合氢键缔合而而吸附，吸附，主要依据与被分离物质成氢键能力主要依据与被分离物质成氢键能力大小大小不同进行分离。不同进行分离。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离CH2NCCH2CH2CH2CH2CH2NCCH2HOHOHOHOCH2NCCH2CH2CH2CH2CH2NCCH2OHOO醌类，硝基化合物酚类，酸类v吸附力的大小吸附力的大小由由酚羟基的数目酚羟基的数目和和酚羟基的位置酚羟基的位置来来决定：决定：酚羟基数目，吸附，酚羟基数目，吸附，RfRf值；反之，亦然。值
28、；反之，亦然。另，酚羟基的酸性，吸附，另，酚羟基的酸性，吸附，RfRf值。值。聚酰胺层析分离黄酮类化合物就是利用黄酮类聚酰胺层析分离黄酮类化合物就是利用黄酮类化合物分子中酚化合物分子中酚OHOH的数目与位置及溶剂与黄酮类的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小不同而达到分离目的的。不同而达到分离目的的。适用于分离各种类型的适用于分离各种类型的黄酮类化合物。黄酮类化合物。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离B洗脱剂：洗脱剂：l水水-乙醇乙醇-甲醇甲醇-丙酮丙酮-ZaOH水液（或氨水）水液（或氨水）-甲酰胺甲酰胺-尿素水液
29、尿素水液 （洗脱能力依次增强）（洗脱能力依次增强）v洗脱能力最弱洗脱能力最弱 先用水洗脱，洗去不能形成氢键的物质先用水洗脱，洗去不能形成氢键的物质 不同浓度醇洗脱：不同浓度醇洗脱：20%20%，30%100%MeOH30%100%MeOH或或 MeMe2 2COCO洗脱。形成氢键能力弱的先洗下来，强的后下来。洗脱。形成氢键能力弱的先洗下来，强的后下来。v 常用洗脱剂常用洗脱剂：水水-乙醇乙醇，水可洗下非黄酮体水溶性成分及少数水可洗下非黄酮体水溶性成分及少数黄酮体苷；黄酮体苷；10%-30%10%-30%醇可洗下黄酮苷；醇可洗下黄酮苷；50-95%50-95%乙醇可洗下乙醇可洗下黄酮苷元。黄酮苷
30、元。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离黄酮类化合物从聚酰胺柱上的洗脱规律：黄酮类化合物从聚酰胺柱上的洗脱规律：l苷元相同，洗脱先后顺序一般为：苷元相同，洗脱先后顺序一般为：三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元l酚酚OHOH数目越多，越难洗脱数目越多，越难洗脱;酚羟基数目相同酚羟基数目相同,酸性弱、酸性弱、易成分子内氢键者吸易成分子内氢键者吸附弱。附弱。羟基位置的影响：羟基位置的影响：邻位羟基黄酮邻位羟基黄酮 对位（或间对位（或间位）羟基黄酮位）羟基黄酮 ；l不同类型的黄酮类化合物，先后：不同类型的黄酮类化合物，先后：异黄酮异黄酮 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 黄酮黄酮 黄酮醇；黄
31、酮醇；l分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，二氢黄酮二氢黄酮 查耳酮。查耳酮。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离“双重层析双重层析”v聚酰胺具有聚酰胺具有“双重层析双重层析”性能，因聚酰胺分子中既有性能，因聚酰胺分子中既有非极性的脂肪链非极性的脂肪链，又有又有极性酰胺基团极性酰胺基团。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离CH2NCCH2CH2CH2CH2CH2NCCH2HOHOHOHOCH2NCCH2CH2CH2CH2CH2NCCH2OHOO醌类，硝基化合物酚类，酸类v当极性溶剂作移动相时当极性溶剂作移动相时(如：水溶剂系统如：水溶剂系统)，聚
32、酰胺，聚酰胺作为非极性固定相，相当于反相分配层析，极性大作为非极性固定相，相当于反相分配层析，极性大的物质先洗脱出来；的物质先洗脱出来；v当非极性溶剂作移动相时当非极性溶剂作移动相时(如：如：CHClCHCl3 3-CH-CH3 3OHOH系系统统)，聚酰胺作为极性固定相，相当于正相分配层析，聚酰胺作为极性固定相，相当于正相分配层析，极性小的物质先洗脱出来。极性小的物质先洗脱出来。v双重层析理论适用于解释：萜类、甾体、生物碱等双重层析理论适用于解释：萜类、甾体、生物碱等的分离。的分离。聚酰胺层析适用于分离极性和非极性物质，聚酰胺层析适用于分离极性和非极性物质，如：黄酮体、酚类、醌类、有机酸、生
33、物碱、萜类、如：黄酮体、酚类、醌类、有机酸、生物碱、萜类、甾体、苷类、糖类、氨基酸衍生物、核苷类等。尤甾体、苷类、糖类、氨基酸衍生物、核苷类等。尤其对黄酮体、酚类、醌类物质的分离，远比其它方其对黄酮体、酚类、醌类物质的分离，远比其它方法优越。法优越。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离聚酰胺柱色谱分离黄酮类化合物的原理是什么聚酰胺柱色谱分离黄酮类化合物的原理是什么?用聚酰胺柱色谱分离下列化合物，以浓度递增用聚酰胺柱色谱分离下列化合物，以浓度递增的乙醇液洗脱时的洗脱顺序如何的乙醇液洗脱时的洗脱顺序如何?简述理由。简述理由。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离聚酰胺对黄酮类化合物发生最
34、强吸附作聚酰胺对黄酮类化合物发生最强吸附作用时用时,应在（应在（）中。）中。A A、95%95%乙醇乙醇 B B、15%15%乙醇乙醇 C C、水、水 DD、酸水酸水 E E、甲酰胺、甲酰胺 聚酰胺色谱的原理是（聚酰胺色谱的原理是（）。）。A A、分配、分配 B B、氢键缔合、氢键缔合 C C、分子筛、分子筛 DD、离子交换、离子交换 三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离提取分离示例提取分离示例三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离2 2、利用分子大小不同，用葡聚糖凝胶分子、利用分子大小不同，用葡聚糖凝胶分子筛分离筛分离Y主要用两种型号的凝胶：主要用两种型号的凝胶：SephadexS
35、ephadex-G-G型型（适用于水溶性成分分离适用于水溶性成分分离）Sephadex-LH20Sephadex-LH20型型（可用于亲脂性成分分离可用于亲脂性成分分离）Y常用洗脱剂：常用洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液碱性水溶液，含盐水溶液 醇及含水醇醇及含水醇 含水丙酮，甲醇氯仿含水丙酮，甲醇氯仿三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离Y 原理：原理：l分离分离游离黄酮游离黄酮-主要是吸附作用，吸附程度主要是吸附作用，吸附程度取决于游离酚羟基的数目。极性小取决于游离酚羟基的数目。极性小大洗脱。大洗脱。（凝胶非完全惰性，有一定吸附力，这种吸附力来自分凝胶非完全惰性，有一定吸附力，这种吸附力来
36、自分子间的氢键。子间的氢键。）l分离分离黄酮苷类黄酮苷类-主要是分子筛作用，分子主要是分子筛作用，分子大大小洗脱。小洗脱。总的洗脱顺序：总的洗脱顺序：糖多的苷糖多的苷糖少的苷糖少的苷游离苷元（极性小游离苷元（极性小大）大）三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离用用Sephadex LH-20柱层析分离下列化合物，柱层析分离下列化合物，用甲醇洗脱，其流出柱外的先后顺序为用甲醇洗脱，其流出柱外的先后顺序为:ADCB在葡聚糖凝胶色谱柱上，如果用甲醇在葡聚糖凝胶色谱柱上，如果用甲醇-水水洗脱，最先被洗脱下来的黄酮类化合物洗脱，最先被洗脱下来的黄酮类化合物是：是：1.1.槲皮素槲皮素-3-3-芸香糖
37、苷芸香糖苷2.2.槲皮素槲皮素-3-3-鼠李糖苷鼠李糖苷3.3.山奈酚山奈酚-3-3-半乳糖半乳糖-鼠李糖鼠李糖-7-7-鼠李糖苷鼠李糖苷4.4.木樨草素木樨草素5.5.槲皮素槲皮素三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离 3 3、利用酸性强弱，采用、利用酸性强弱，采用pHpH梯度萃取法梯度萃取法Y适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。NaHCO3、Na2CO3、0.2%NaOH、4%NaOH7,4二羟基二羟基 7或或4羟基羟基 一般酚羟基一般酚羟基 5羟基黄酮羟基黄酮方法：总黄酮溶于方法：总黄酮溶于Et2O，再用碱性由弱，再用碱性由弱强碱液依次萃取，强碱液
38、依次萃取，达到分离目的。达到分离目的。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离下列化合物用下列化合物用pHpH梯度法进行分离时，从梯度法进行分离时，从EtOAc中，用中，用5%NaHCO3、0.2%NaOH、4%NaOH的的水溶液依次萃取，先后萃取出的顺序应为：水溶液依次萃取，先后萃取出的顺序应为：OOOHOHHOOCH3OOOCH3OHOHOOO已知下列四种化合物存在于松木心材的乙醚提取液已知下列四种化合物存在于松木心材的乙醚提取液中中,并可按下列程序分出并可按下列程序分出,试问各自应在何部位提取试问各自应在何部位提取物中出现物中出现?为什么为什么?OOROOHCOOHC 松香酸CHCHH
39、3COOHD 松香酸甲醚A 白杨素 R=HB 白杨素甲醚 R=CH3乙醚液5%NaHCO3依次用NaOH0.2%5%NaHCO3、5%、Na2CO34%NaOH 萃取5%Na2CO30.2%NaOH4%NaOH()()()()4 4、根据分子中某些特定官能团进行分离、根据分子中某些特定官能团进行分离 醋酸铅沉淀法：醋酸铅沉淀法：可分离含邻二酚羟基和不含邻二可分离含邻二酚羟基和不含邻二酚羟基的化合物。酚羟基的化合物。l黄酮类混存的其它物质，如含黄酮类混存的其它物质，如含-COOH-COOH的树胶、粘液、果胶、的树胶、粘液、果胶、有机酸、蛋白质等或含邻二酚有机酸、蛋白质等或含邻二酚OHOH的如：鞣
40、质可与的如：鞣质可与Pb(OAC)Pb(OAC)2 2形成形成除杂质的目的。除杂质的目的。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离具有邻二酚OH黄酮可与中性Pb(OAc)形成沉淀 无邻二酚OH黄酮可与碱式Pb(OH)(OAc)形成沉淀分离含邻二酚OH黄酮形成的沉淀通 脱 或用硫酸盐、磷酸盐脱 或用阳离子交换树脂脱 。H2SPb22+Pb2+Pb2+硼酸络合法：硼酸络合法：根据具有邻二酚羟基的黄酮根据具有邻二酚羟基的黄酮与硼酸络合，生成物易溶于水的性质与其它与硼酸络合，生成物易溶于水的性质与其它类型黄酮分离。类型黄酮分离。三三、提取分离提取分离（二）分离（二）分离例：从芹菜例：从芹菜Apium
41、 graveolensApium graveolens L.L.种子中种子中分离分离graveobiodidegraveobiodide A A及及B BR=芹菜糖II（无邻二酚羟基）I（具有邻二酚羟基）OOROOHOCH3OHOOROOHOHOH浅黄色蔟状结晶(graveobioside A)(I)乙醇重结晶黄色结晶浓缩至小体积，冰箱放置沉淀(PbS)滤液浅黄色针晶(graveobioside B)(II)乙醇重结晶黄色结晶溶于少量乙醇中，放置晶块同铅盐(A)法进行复分解黄色铅盐沉淀(B)加入碱式醋酸铅的热水溶液至沉淀完全，过滤悬浮乙醇中，通H2S，过滤滤液棕色沉淀(A)溶于热水中，煮沸，逐滴加入中性醋酸铅的热水溶液，直至不再析出沉淀为止，乘热过滤醚不溶物减压浓缩后，用醚处理杂质提取液乙醇提取脱脂药料石油醚浸泡脱脂原料（种子）
