1、抗核抗体检测及临床应用,中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科, 半个世纪以来自身抗体的发现和应 用推动了自身免疫性疾病的诊断和 治疗。,自身免疫病相关自身抗体的产生,人体免疫机制出现异常 自身成分 作为异体抗原 T细胞 巨噬细胞 MHC 细胞诱导 细胞产生自身抗体, 自身免疫发生的机制、抗体在自身 免疫性疾病中的作用以及免疫耐受 的损害仍然 是研究的热点。,什么是自身抗体 ?,自身抗体的产生是易感者（易感基因）在环境因素（病毒等）诱导下对自身组织或成分异常的免疫反应。 自身抗体是自身免疫性的标志。 自身抗体的产生是自身免疫反应，与自身免疫性疾病并不同义。,自身抗体的临床意义,自
2、身免疫的生物标记 预示自身免疫病 早期诊断和分类弥漫性结缔组织病 指示疾病活动性、预后,自身抗体是自身免疫性风湿病（ARD） 的生物标记（Bio-marker）,结缔组织病 ANA 干燥综合症 SSA/SSBab SSAab M3Rab 肌炎/皮肤炎 Jo-lab Mi-2ab SRPab （合成酶抗体） 系统性硬化病 Scl-70ab ACA 核仁型ANA 系统性血管炎 ANCA-PR3 ANCA-MPO ENCA （内皮细胞抗体） 原发性胆汁性 AMA AMA-M2ab 核包膜ab 肝硬变,抗核抗体谱（ANAs）分类 抗DNA抗体（anti-dsDNA，anti-ssDNA ） 抗组蛋白抗
3、体（histons: H1 , H2A , H2B , H3 , H4 , H2A-H2B复合物） 抗ENA抗体（抗体: Sm , nRNP , SSA/Ro , SSB/La, rRNP , Scl-70 , Jo-1 , PCNA , RA33 , ANAs 抗非组蛋白抗体 Ku,RANA,Mi-1,Mi-2,PL-7,PL-12.） 抗着丝点抗体（ anti-CENP -A , B , C ，D，F，G） 抗核仁抗体（抗体: RNA-polymerase-1 , PM-Scl/PM-1，Th/To, U3nRNP/Fibrillaria，4-6-S-RNA） 抗其他细胞成分抗体（高尔基体
4、，中心体，纺锤体，线粒体，溶酶体， 肌动蛋白，Vimentin，细胞角蛋白，Lamin),抗可提取性核抗原（ENA）抗体 anti-extractable nuclear antigen antibodies,抗ENA抗体是抗核抗体在临床诊断和治疗中 应用最多 、最特异的一族抗体。,可提取性核抗原（ENA） extractable nuclear antigen,ENA：可提取性核抗原,是一类核蛋白的总称。这类 核蛋白，可以用盐水进行提取。 成分：核酸与核蛋白，不含DNA，组蛋白。 功能：参与细胞内DNA的复制、转录以及蛋白的翻 译合成 来源：多种组织中获得，无种属差异，有组织不均一性 理化特
5、性：对温度和RNA酶敏感。,ENA的特点,ENA又称为可提取性核抗原，是核物质中一类蛋白的总称。这类核蛋白不含有DNA，组蛋白，可以用盐水进行提取，所以被称为可提取性核抗原。 ENA抗原可以从多种组织中获得，各种来 源的ENA没有种属间的差异，但是有明显的组织不均一性。 ENA对RNA酶和温度敏感。,抗ENA抗体检测方法,对流免疫电泳法( CIE) 免疫双扩散法(ID or DID) 免疫印迹法(IB) 酶联免疫吸附法(ELISA) 蛋白芯片（Protein chip）,对流免疫电泳(CIE)结果判断,免疫双扩散(ID),0.5% 琼脂糖 0.01M PH7.4磷酸盐缓冲液 2.5mm角膜钻
6、湿盒,已知Ab,已知Ab,Ag,1:1待测血清,1:4,1:16,1:64,U1-RNP,SSA,Sm,SSB,免疫双扩散(ID)检测结果判断 上图为抗Sm、U1-RNP抗体阳性滴度均为1:4 下图为抗SSA、SSB抗体阳性 抗SSA抗体滴度1:64 抗SSB抗体滴度1:16,免疫印迹法（IBT）垂直电泳装置,免疫印迹法（IBT）电泳转印仪, 抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%- 30%）。 可早于疾病12 年出现，是前瞻及回顾性诊 断的指标。 Sm 抗原决定族主要在与U1,U2,U4-u6RNA 连接的B和D 蛋白多肽上，分子量： （29KD），B（28KD),D (13.5KD)。,rR
7、NP,rRNP,sm,sm, Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同 位点，常与U1RNP抗体共存。 SmAb和rRNPAb常同时检出，同为SLE标 记性抗体。, 抗U1RNP抗体在多种结缔组织病中存在， 高滴度有利于MCTD的诊断。在AID中 阳性率40%- 60%。抗原表位分子量: 73 KD 、32 KD 、17.5 KD 、28/29 KD。, 文献报告U1RNP和Sm的B B有共同的 氨基酸序列， 不但Sm Ab和B B C末 端富含脯氨酸的区域结合，这个区域在 其他的小核核蛋白尤其是 U1RNP中都 存在，所以它不止是SmAb识别的抗原 表位，也是U1RNP重要的抗原表位。,RN
8、P,RNP,RNP,RNP,sm,BB 28/29KD 69.9%,ID法与U1RNP抗体符合率=74.4%,ID法不支持抗Sm抗体,N= 2096,CO,sm u1Rnp,sm,ssB,Ro52 ssA, 抗U1RNP抗体在IBT检测中最具多态性 ， 与上述4 个抗原表位可有不同排列组合的 连接。说明其在自身免疫中是多克隆、 多位点的。在不同的病人中存在着显著地 异质性 。, 抗SSA抗体是风湿免疫性疾病中出现频率最高的抗 体,阳性率大约 ： 6 0 -75% 。 两个抗原表位，分子量 52KD, 60KD。 有文献报告：用ELISA法为健康人检测抗 SSA抗 体，阳性率17%。在抗SSA抗
9、体阳性的系统性红斑 狼疮和干燥综合征病人的一级亲属中用同法检测， 阳性率达25%。, 抗SSA 抗体在SLE和SS中最多见，常常和光过敏、 血管炎、血小板减少、紫癜等有关。ANA阴性的 SLE常常有抗SSA 抗体。 抗SSA 、SSB抗体可造成新生儿狼疮，婴儿心脏传 导阻滞等先天性心脏病。 抗SSB抗体： AID 10 -40%，在PSS,SLE中多见。 分子量45KD、47KD、48KD,在各种检测方法中与 抗 SSA抗体伴随出现。,SSA,RO,SSB,两种方法抗SSAab检测结果的比较 n=1075, 抗Scl-70抗体：SSc中 25 -75%, 标记性抗体。 抗Scl-70抗体阳性者
10、较阴性者肺间质变的发生增加 10倍。 抗Jo-1抗体：PM/DM 25%，标记性抗体。在合并 肺间质变的PM/DM病人中抗Jo-1抗体阳性率高达 60%。 抗rRNP抗体： SLE特异性抗体（10%-30%） 抗rRNP抗体与dsDNA、与SSA/RO、ACL相关。 滴度升高仅限于SLE,其他疾病很少见。,抗可提取性核抗原（ENA）抗体 anti-extractable nuclear antigen antibodies 抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%-30%） 抗U1RNP抗体：MCTD 95 -100%（高滴度） 抗SSA抗体： CTD 6 0 -75% 抗SSB抗体： CTD 1
11、0 -40%，PSS,SLE 抗Scl-70抗体：SSc 25 -75%, 标记性抗体 抗Jo-1抗体：PM/DM 25%，标记性抗体 抗rRNP抗体： SLE特异性抗体（10%-30%）,抗ENA抗体检测方法,对流免疫电泳法( CIE) 免疫双扩散法(ID or DID) 免疫印迹法(IB) 酶联免疫吸附法(ELISA) 蛋白芯片（Protein chip）,ENA抗体谱芯片 - Luminex技术,Plate-Based Multiplex Assay System,ArrayELISA,ELISA,Array,ArrayELISA,自身免疫病ENA抗体,ENA抗体检测结果( Array-ELISA),自身抗体预示着自身免疫性风湿病（ARD）,ARD 发病过程 易感性 若干年 自身抗体（+）若干时间 ARD症状 （基因） 无症状 环境 环境 虽无临床症状，但有自身抗体出现，并以具有很长潜伏期为特征。自身抗体具有可以预测疾病的作用。自身抗体先于ARD出现。,总结,自身抗体是自身免疫病的标记 自身抗体出现在自身免疫风湿病（ARD）之前 自身抗体参与疾病的发生与发展 自身抗体提供临床诊断、疾病活动性及预后、脏器损伤、药物疗效的信息 新的自身抗体仍在出现，可能提供指导更多的临床诊治,Thank you,
