1、实验三实验三 硅胶粘合硅胶粘合薄层的活度测定薄层的活度测定指导老师：黄红霞指导老师：黄红霞色谱法用途与分类色谱法用途与分类薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱基本原理薄层色谱基本原理薄层色谱基本特点薄层色谱基本特点薄层色谱法的主要类型和吸附色谱原理薄层色谱法的主要类型和吸附色谱原理 吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂展开剂的选择展开剂的选择比移值比移值(Rf(Rf值值)的求取的求取实验二实验二 硅胶粘合薄层的活度测定硅胶粘合薄层的活度测定 色谱法是色谱法是分离纯化分离纯化和和鉴定鉴定有机物的重有机物的重要方法之一。要方法之一。色谱法可分为色谱法可分为柱色谱、纸色谱、薄层色柱色谱、
2、纸色谱、薄层色谱、气相色谱谱、气相色谱及及高效液相色谱高效液相色谱等类型。等类型。薄层色谱法薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC)固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点样，（密闭的容器中）展开，薄层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质）比较进行定斑点显色，（与对照物质）比较进行定性定量。性定量。依靠毛细作用力或重力，使流动相通过依靠毛细作用力或重力，使流动相通过固定相的一种色谱。固定相的一种色谱。特点：特点：快，需十至几十分钟，同时展开多个快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。试样。试样预处理简单，对试样
3、限制少。试样预处理简单，对试样限制少。载样量比较大，适用于制备。载样量比较大，适用于制备。仪器简单，操作方便。仪器简单，操作方便。分离能力较强。分离能力较强。灵敏度较高。灵敏度较高。薄层色谱法的薄层色谱法的主要类型主要类型和和吸附色谱原理吸附色谱原理 吸附薄层色谱法吸附薄层色谱法原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程。再吸附、再解吸附的过程。吸附系数不等实现分离。吸附系数不等实现分离。一般极性强的组分一般极性强的组分K K大，大，R Rf f值小；极性弱的组分值小；极性弱的组分 K K小，小，R Rf f值大。值大。分配薄层色谱法分配薄层色谱
4、法吸附薄层色谱的吸附剂吸附薄层色谱的吸附剂吸附剂吸附剂硅胶硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。原理：原理：硅醇基硅醇基(吸附中心吸附中心)与与极性基团形成氢键极性基团形成氢键（吸附性）。（吸附性）。组分与硅醇基形成氢键组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同被吸附）的能力不同而分离。而分离。应用：应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等醛类等 硅胶活度与含水量的关系：硅胶活度与含水量的关系：含水量高，活性级高，含水量高，活性级高，活度低。活度低。活化：活化：加热至加热至105左右，除去吸附水提高活度。左
5、右，除去吸附水提高活度。（注意温度不可过高）（注意温度不可过高）吸附薄层色谱的吸附薄层色谱的展开剂展开剂 先用单一溶剂展开，先用单一溶剂展开，若若Rf值太小值太小，则加入一定量，则加入一定量极性强极性强的溶剂，（如乙醇、丙酮等），的溶剂，（如乙醇、丙酮等），如果如果Rf值太大值太大，则加入适量，则加入适量极性弱极性弱的溶剂的溶剂(如环己烷、石油醚等如环己烷、石油醚等)，以降低极性。以降低极性。展开剂展开剂选择原则：选择原则：根据被分根据被分离物质的极性离物质的极性Stahl简图：极性物简图：极性物质质活度低（活性活度低（活性级大）的吸附剂级大）的吸附剂-极性展开剂极性展开剂 定性参数定性参数1
6、 1比移值比移值(Rf值值)溶质移动距离与流动相移动距离溶质移动距离与流动相移动距离之比。之比。Rf=L/L0 L为原点（为原点（origin）至斑点中心的）至斑点中心的距离，距离，L0为原点至溶剂前沿的为原点至溶剂前沿的距离距离 与组分及色谱条件有关与组分及色谱条件有关 一、实验目的一、实验目的 1掌握粘合薄层的制备方法。掌握粘合薄层的制备方法。2了解粘合薄层活度测定方法。了解粘合薄层活度测定方法。二、实验原理二、实验原理 硅胶粘合薄层活度的测定方法，目前一般都采用硅胶粘合薄层活度的测定方法，目前一般都采用Stahl活度测定法，以活度测定法，以二甲黄二甲黄、苏丹红苏丹红G、靛酚蓝各靛酚蓝各4
7、0mg，溶于，溶于100ml挥发性溶剂中，滴加于薄层上，用挥发性溶剂中，滴加于薄层上，用石石油醚展开油醚展开10cm，应不移动，如改用苯展开则应分成三，应不移动，如改用苯展开则应分成三个斑点，其个斑点，其Rf值分别为：二甲黄值分别为：二甲黄0.58，苏丹红，苏丹红0.19（？），靛酚蓝（？），靛酚蓝0.08，展开时间约为，展开时间约为3040分钟，经本分钟，经本法测定合格的硅胶薄层其活度与柱色谱法所定活度的法测定合格的硅胶薄层其活度与柱色谱法所定活度的一一级相当级相当。三、仪器及试剂三、仪器及试剂1色谱缸2二甲黄、苏丹红、靛酚蓝3硅胶(色谱用)、羧甲基纤维素钠。四、操作步骤四、操作步骤1粘合薄
8、层板的铺制：粘合薄层板的铺制：称取羧甲基纤维素钠(CMC-Na)0.75g，加入100ml水中加热使溶解，放冷，放置后取13ml,再分次加入硅胶5g，调成糊状后倒在清洁的玻璃板上，可幌动或转动玻板，使其均匀流布于整块玻板上，而获得均匀的液层。将玻璃平放晾干，然后于110活化40分钟，置干燥器中贮存备用。2点样：点样：取羧甲基维纤素硅胶板一块(7.515cm)在距板一端距板一端 lcm处，用铅笔轻轻划一直线作为起始线，在起始线中点用铅笔作一标记(o)，用内径约lmm的平口毛细管点加混合溶液，其直径应为2-3mm。点样间隔为11.5CM 3.展开展开 将点好的样晾干或吹干后将板置于盛有展开剂石油醚
9、(沸点60-90)的色谱缸中，（展开剂高度0.55cm）浸入深度为0.5cm，待展开剂前沿离起始线约10cm处，混合物应不移动，取出硅胶板，待石油醚挥发后，再按同法以苯为展开剂，展开时间约为30-40分钟，取出薄层板立即划出前沿线，待苯挥散，观察斑点的位置 4 计算比移值（计算比移值（Rf）：干燥后记录原点至主斑点中心，和原点至展开剂前沿的距离。测量Rf值，判断其活度。斑点斑点中心至原点的距离中心至原点的距离 Rf 溶剂前沿至原点的距离溶剂前沿至原点的距离注意：因为同一物质在相同的实验条件下才具有相同的Rf值，所以在测定时，采用标准物质进行对照。五、注意事项五、注意事项 1活化后薄层板应贮于干燥器中，以免吸收湿气而降低活性;2点样量不宜太多，否则会拖尾分离不;3展开剂苯中含水量的多少会影响Rf值，故须用于燥的苯和器皿;4展开剂不要加得过多，起始线切勿浸入展开剂中。六、思考题六、思考题1.薄层色谱的铺板要领是什么？2.涂层的均匀度对实验有何影响？薄层色谱操作方法要求薄层色谱操作方法要求制板制板均匀均匀点样点样集中集中展开展开(多种方式多种方式)预饱和预饱和显色显色
