1、广西中医学院第一附属医院泌尿外科广西中医学院第一附属医院泌尿外科 黄黄 新新泌尿外科解剖与生理1泌尿外科解剖与生理2肾上腺（肾上腺（suprarenal gland）位于腹膜后隙，肾位于腹膜后隙，肾脏的脏的上方,左侧为半月形，右侧似三角形。肾上腺的动脉左侧为半月形，右侧似三角形。肾上腺的动脉有三支：有三支：膈下动脉肾上腺上动脉膈下动脉肾上腺上动脉腹主动脉肾上腺中动脉腹主动脉肾上腺中动脉 肾动脉肾上腺下动脉肾动脉肾上腺下动脉一、肾上腺的解剖一、肾上腺的解剖泌尿外科解剖与生理3左肾上腺静脉左肾静脉左肾上腺静脉左肾静脉右肾上腺静脉下腔静脉右肾上腺静脉下腔静脉少数汇入右膈下静脉右肾静脉少数汇入右膈下静
2、脉右肾静脉泌尿外科解剖与生理4 肾上腺皮质肾上腺皮质由外向内可分为层即球状带、束状带和网状带。由外向内可分为层即球状带、束状带和网状带。球状带球状带主要分泌醛固酮，又称为盐皮质激素，其主要功能是促主要分泌醛固酮，又称为盐皮质激素，其主要功能是促进肾脏对钠离子的主动重吸收和对钾离子的排泄，维持体内水进肾脏对钠离子的主动重吸收和对钾离子的排泄，维持体内水的恒定，增加组织液和血量，这对生命至关重要。的恒定，增加组织液和血量，这对生命至关重要。束状带束状带及及网状带网状带分泌糖皮质激素，主要为皮质醇。皮质醇主要分泌糖皮质激素，主要为皮质醇。皮质醇主要作用是促进糖异生和升高血糖。促使蛋白质分解，使脂肪组
3、织作用是促进糖异生和升高血糖。促使蛋白质分解，使脂肪组织中脂肪分解并在体内重新分布。皮质醇在机体处于应激状态时中脂肪分解并在体内重新分布。皮质醇在机体处于应激状态时可提高其耐受能力。皮质醇还具有抗炎抗过敏和抑制免疫功能可提高其耐受能力。皮质醇还具有抗炎抗过敏和抑制免疫功能的作用。的作用。肾上腺髓质肾上腺髓质由嗜铬细胞构成，主要分泌肾上腺素，也可分泌少由嗜铬细胞构成，主要分泌肾上腺素，也可分泌少量去甲肾上腺素。肾上腺素和去甲肾上腺素对心血管、内脏平量去甲肾上腺素。肾上腺素和去甲肾上腺素对心血管、内脏平滑肌的活动有调节作用。肾上腺髓质是人体极重要的内分泌腺，滑肌的活动有调节作用。肾上腺髓质是人体极
4、重要的内分泌腺，髓质分泌功能障碍将引起人体失去有效的应急能力髓质分泌功能障碍将引起人体失去有效的应急能力泌尿外科解剖与生理5一、肾脏的解剖：一、肾脏的解剖：肾的位置肾的位置肾（肾（kidney）位于脊柱两侧，贴附于腹后壁位于脊柱两侧，贴附于腹后壁 泌尿外科解剖与生理6泌尿外科解剖与生理7泌尿外科解剖与生理8肾蒂（肾蒂（renal pedicle）由出入肾门的肾由出入肾门的肾血管、肾盂、神经和淋巴管组成。由血管、肾盂、神经和淋巴管组成。由前向后为：静、动、盂；前向后为：静、动、盂；由上向下为：动、静、盂。由上向下为：动、静、盂。泌尿外科解剖与生理9泌尿外科解剖与生理10泌尿外科解剖与生理11肾的
5、被膜有三层：由外向内依次为肾肾的被膜有三层：由外向内依次为肾筋膜、脂肪囊和纤维囊。筋膜、脂肪囊和纤维囊。泌尿外科解剖与生理12泌尿外科解剖与生理13输尿管输尿管(ureters)：全长全长25253030cm。可可分三部：分三部：腹部（腰段），从肾盂与输尿管交腹部（腰段），从肾盂与输尿管交界处至跨越髂血管处；界处至跨越髂血管处；盆部（盆段），从跨越髂血管处至盆部（盆段），从跨越髂血管处至膀胱壁；膀胱壁；壁内部（膀胱壁段），斜行穿膀胱壁内部（膀胱壁段），斜行穿膀胱壁。壁。泌尿外科解剖与生理14泌尿外科解剖与生理15泌尿外科解剖与生理16膀胱膀胱(urinary bladder)位于盆腔前部，空位
6、于盆腔前部，空虚时上界约与骨盆上口相当，膀胱体上面虚时上界约与骨盆上口相当，膀胱体上面有腹膜覆盖，下外侧面紧贴耻骨后隙的疏有腹膜覆盖，下外侧面紧贴耻骨后隙的疏松结缔组织、肛提肌和闭孔内肌。男性膀松结缔组织、肛提肌和闭孔内肌。男性膀胱底上部借直肠膀胱陷凹与直肠相邻，下胱底上部借直肠膀胱陷凹与直肠相邻，下部与精囊和输精管壶腹相邻；膀胱颈与前部与精囊和输精管壶腹相邻；膀胱颈与前列腺相接。女性的膀胱底与子宫颈和阴道列腺相接。女性的膀胱底与子宫颈和阴道前壁相贴，膀胱颈与尿生殖膈相邻。前壁相贴，膀胱颈与尿生殖膈相邻。泌尿外科解剖与生理17髂内动脉前干髂内动脉前干膀胱上动脉膀胱上动脉膀胱下动脉膀胱下动脉膀胱
7、上中部膀胱上中部膀胱下部膀胱下部髂内静脉髂内静脉泌尿外科解剖与生理18泌尿外科解剖与生理19阴囊的层次阴囊的层次泌尿外科解剖与生理201.选题背景选题背景 2.研究现状研究现状3.研究目标研究目标和研究内容和研究内容4.技术路线技术路线5.本课题特本课题特点点6.部分预实部分预实验结果验结果7.实验进展实验进展安排安排泌尿外科解剖与生理21 3 HIF-1肿瘤中表达及与生物行为关系肿瘤中表达及与生物行为关系4 HIF-1与化疗耐药的关系与化疗耐药的关系5 p53基因与基因与HIF-1表达的关系表达的关系泌尿外科解剖与生理22胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，化疗仍是治胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，化疗
8、仍是治疗中晚期胃癌的主要手段，但由于肿瘤的多疗中晚期胃癌的主要手段，但由于肿瘤的多药耐药（药耐药（MDR），化疗的效果并不理想。），化疗的效果并不理想。目前认为目前认为mdr-1基因与基因与MDR有关，其编码有关，其编码p-糖蛋白糖蛋白(p-gp)，能把结构功能不同的药物泵，能把结构功能不同的药物泵出细胞外而降低药物浓度出细胞外而降低药物浓度,从而引发肿瘤耐从而引发肿瘤耐药但是对于癌症中药但是对于癌症中p-gp过表达的调节机制过表达的调节机制目前尚不清楚。目前尚不清楚。泌尿外科解剖与生理23泌尿外科解剖与生理24耐药分类:原药耐药原药耐药PDR 多药耐药多药耐药MDR 肿瘤耐药机制 药理耐药药
9、理耐药 .生化耐药生化耐药 凋亡耐药凋亡耐药 细胞动力学耐药细胞动力学耐药 泌尿外科解剖与生理25泌尿外科解剖与生理26泌尿外科解剖与生理27恶性肿瘤生长迅速恶性肿瘤生长迅速 ,当肿瘤细胞生长超当肿瘤细胞生长超过血管生成的速度时过血管生成的速度时,极易发生缺氧极易发生缺氧.因此肿瘤缺氧是肿瘤恶性进展的重要特征因此肿瘤缺氧是肿瘤恶性进展的重要特征.肿肿瘤细胞可通过多种途径对缺氧进行适应性调瘤细胞可通过多种途径对缺氧进行适应性调节节.缺氧诱导因子缺氧诱导因子1（Hypoxia inducible factor 1,HIF-1）是调节细胞缺氧反应的主要转录因）是调节细胞缺氧反应的主要转录因子子 .泌
10、尿外科解剖与生理28泌尿外科解剖与生理29Till Acker，et al.A role for hypoxia and hypoxia-inducible transcription factors in tumor physiology。J Mol Med,2002,80:562575.泌尿外科解剖与生理30 泌尿外科解剖与生理31泌尿外科解剖与生理32泌尿外科解剖与生理33泌尿外科解剖与生理34泌尿外科解剖与生理35 缺氧缺氧 癌基因激活癌基因激活 HER2 FRAP HRAS CSRC 抑癌基因失活抑癌基因失活 VHL PTEN p53 生长因子或细胞因子生长因子或细胞因子 IGR、I
11、nsulin、EGF、IL-1 HIF-1的表达调节因素的表达调节因素泌尿外科解剖与生理36二二.研研 究究 现现 状状1.HIF-1在肿瘤细胞中表达位于细胞核在肿瘤细胞中表达位于细胞核内内.2.HIF-1在多种肿瘤中的表达在多种肿瘤中的表达 ,在肿瘤在肿瘤 附近正常组织中不能测及附近正常组织中不能测及 .3.在结肠癌、肺癌、乳腺癌及前列腺癌的在结肠癌、肺癌、乳腺癌及前列腺癌的研究中发现，研究中发现，HIF-1蛋白表达随乳腺癌蛋白表达随乳腺癌恶性度升高而增加，且与浸润、淋巴结恶性度升高而增加，且与浸润、淋巴结转移有关转移有关 泌尿外科解剖与生理374.发现发现HIF-1-/-组剂量反应曲线较组
12、剂量反应曲线较HIF-1+/+组明显左移组明显左移,IC50也显著减少也显著减少.5.对肿瘤细胞的研究发现对肿瘤细胞的研究发现HIF-1-/-肿瘤细肿瘤细胞对放疗和化疗药物的敏感度都有所增加。胞对放疗和化疗药物的敏感度都有所增加。6.多药耐药基因多药耐药基因MDR1是是 HIF-1的靶的靶基因。基因。泌尿外科解剖与生理387.利用乏氧诱导肺腺癌细胞利用乏氧诱导肺腺癌细胞459表达表达HIF-1，发现，发现p-gp和和MRP随着随着HIF-1表达而增加，并且对表阿表达而增加，并且对表阿霉素和顺铂的耐药性增强。霉素和顺铂的耐药性增强。8.国外的研究也发现，缺氧能导致国外的研究也发现，缺氧能导致p-
13、gp和和HIF-1过过表达，从而产生对表达，从而产生对VP-16、博莱霉素和蒽环类耐药。、博莱霉素和蒽环类耐药。9.国外对卵巢癌的研究已表明突变型国外对卵巢癌的研究已表明突变型P53过表达会过表达会引起引起HIF-1表达升高表达升高.泌尿外科解剖与生理39待解决问题待解决问题目前关于目前关于HIF-1与胃癌生物行为及多药耐与胃癌生物行为及多药耐药机制关系的研究报道甚少。药机制关系的研究报道甚少。目前对于目前对于HIF-1与的研究多用基与的研究多用基因转染方法，应用原代胃癌体外细胞药因转染方法，应用原代胃癌体外细胞药物敏感性进行研究的报道甚少物敏感性进行研究的报道甚少泌尿外科解剖与生理40 三三
14、.研究目标和研究内容研究目标和研究内容1.研究目标研究目标研究研究HIF-1蛋白表达与蛋白表达与p-gp表达的相关表达的相关性，探讨其与胃癌细胞多药耐药的关系。性，探讨其与胃癌细胞多药耐药的关系。探讨探讨HIF-1表达与胃癌生物学行为的关表达与胃癌生物学行为的关系系 .探讨探讨HIF-1蛋白表达与突变蛋白表达与突变P53过表达的过表达的相关性相关性 .泌尿外科解剖与生理412.研究内容研究内容 对例新鲜胃癌标本进行细胞纯化，对例新鲜胃癌标本进行细胞纯化，短期原代培养，应用流式细胞技术和短期原代培养，应用流式细胞技术和MTT法检测其对常用化疗药物的敏感性法检测其对常用化疗药物的敏感性应用免疫组化
15、技术检测应用免疫组化技术检测60例胃癌石蜡标例胃癌石蜡标本本P53、P-gp、HIF-1蛋白表达，并收集蛋白表达，并收集临床病理资料。临床病理资料。泌尿外科解剖与生理42应用应用RT-PCR方法检测相同方法检测相同60例新鲜胃例新鲜胃癌细胞癌细胞HIF-1mRNA的表达水平。的表达水平。应用应用TUNEL、荧光显微镜等方法检测、荧光显微镜等方法检测化疗药诱导胃癌细胞凋亡后的形态学改变。化疗药诱导胃癌细胞凋亡后的形态学改变。泌尿外科解剖与生理43四.技术路线HIF-1RT-PCR 免疫组化免疫组化胃癌手术标本胃癌手术标本细胞分离、短期培养细胞分离、短期培养及流及流式技术检测式技术检测化疗药物体化
16、疗药物体外敏感性外敏感性HIF-1、p-gp、P53 免疫组化免疫组化化疗药诱化疗药诱导胃癌细导胃癌细胞凋亡后胞凋亡后形态学改形态学改变变对结果进行统计对结果进行统计分析分析泌尿外科解剖与生理44五.本课题的特点 从细胞缺氧角度探讨从细胞缺氧角度探讨HIF-1蛋白表达与蛋白表达与p-gp表达的相关性，探讨其与胃癌细胞表达的相关性，探讨其与胃癌细胞多药耐药的关系。国外有类似研究，国多药耐药的关系。国外有类似研究，国内未见报道内未见报道 关于关于HIF-1表达与胃癌生物学行为的表达与胃癌生物学行为的研究国内未见报道。研究国内未见报道。新颖性新颖性关于胃癌中关于胃癌中HIF-1蛋白表达与蛋白表达与P
17、53过表达过表达关系在国内未见报道关系在国内未见报道 泌尿外科解剖与生理45 实用性实用性探讨探讨HIF-1蛋白表达与蛋白表达与p-gp表达的相关性，表达的相关性，可望从一新角度阐述耐药发生机制。可望从一新角度阐述耐药发生机制。研究研究HIF-1表达与胃癌生物学行为的表达与胃癌生物学行为的关系，探讨其作为一种新的独立关系，探讨其作为一种新的独立预后参数的可能性预后参数的可能性。探讨探讨HIF-1蛋白表达与蛋白表达与P53过表达关系过表达关系有助于更好理解胃癌病理生物学特征。有助于更好理解胃癌病理生物学特征。泌尿外科解剖与生理46 国外已有类似的文献报道国外已有类似的文献报道。可行性可行性手术标
18、本充足手术标本充足 ，设备齐全，预实验结果，设备齐全，预实验结果 科学性科学性泌尿外科解剖与生理47免疫组化判断标准：免疫组化判断标准：P53:无阳性细胞或阳性细胞 5%为阴性,(+),()，强阳性()，为（）。P-gp 为胞质和(或)胞膜阳性,阳性细胞 5%为阴性,5%15%为+,16%为。HIF-1判断标准：为阴性，为判断标准：为阴性，为（），为（），为（），为（），为（）（）泌尿外科解剖与生理48药物敏感性判断：药物敏感性判断：高度敏感高度敏感:抑制率抑制率 50%;中度敏感中度敏感:抑制率抑制率30%50%;不敏感不敏感:抑制率抑制率 30%。泌尿外科解剖与生理49HIF-1阳性阳性
19、HIF-1阴性阴性p-gp 阳性阳性p-gp 阴性阴性HIF-1阳性阳性 HIF-1阴性阴性药物敏感性与药物敏感性与HIF-1的关系的关系泌尿外科解剖与生理50HIF-1表达与胃癌生物学行为的研究表达与胃癌生物学行为的研究 按临床病理分期、组织类型、淋巴结转按临床病理分期、组织类型、淋巴结转移与否分组移与否分组泌尿外科解剖与生理51HIF-1阳性阳性 HIF-1阴性阴性P53 阳性阳性p53阴性阴性泌尿外科解剖与生理52 部分预实验结果部分预实验结果泌尿外科解剖与生理53胃癌中突变胃癌中突变p53蛋白的表达蛋白的表达 （10*20倍）倍）细胞核内表达细胞核内表达 泌尿外科解剖与生理54胃癌中胃
20、癌中p-gp的表达的表达 （10*20倍）倍）细胞膜细胞膜/浆表达浆表达泌尿外科解剖与生理55预实验结果小结预实验结果小结基本掌握胃癌细胞分离和短期原代培养的方法基本掌握胃癌细胞分离和短期原代培养的方法原代胃癌细胞法体外药物敏感实验原代胃癌细胞法体外药物敏感实验基本掌握免疫组织化学的实验流程基本掌握免疫组织化学的实验流程泌尿外科解剖与生理56凋亡细胞凋亡细胞DNA片断电泳分析片断电泳分析 1.未加化疗药组未加化疗药组 2.顺铂顺铂1ppc 24小时小时3.顺铂顺铂 10ppc24小时小时 4.顺铂顺铂 10ppc48小时小时 5.顺铂顺铂 10ppc72小时小时1 2 3 4 5泌尿外科解剖与生理57七七.课题研究进度安排课题研究进度安排 2003年年9月月-12月月 文献检索、资料收集文献检索、资料收集 2004年年1月月-5月月 预试验预试验 2004年年6月月 开题报告、调整方案开题报告、调整方案 2004年年7月月-2005年年2月月 正式试验正式试验 2005年年3月月-6月月 统计资料、撰写论文统计资料、撰写论文 论文答辩论文答辩 泌尿外科解剖与生理58泌尿外科解剖与生理59
