1、12/7/20221第六章第六章 化学毒物的一般毒化学毒物的一般毒性作用性作用卫生毒理学教研室卫生毒理学教研室 2004.512/7/20222第六章第六章 基础毒性基础毒性&1 急性毒性作用急性毒性作用&2 蓄积毒性蓄积毒性&3 亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用&4 局部毒性作用局部毒性作用12/7/202231 急性毒性作用急性毒性作用一、急性毒性和急性毒性试验的目的一、急性毒性和急性毒性试验的目的二、急性毒性试验二、急性毒性试验三、急性毒性分级三、急性毒性分级12/7/20224一、急性毒性和急性毒性试验的目的一、急性毒性和急性毒性试验的目的急性毒性急性毒性(acute toxi
2、city)(acute toxicity)是指机体是指机体(人或试验人或试验动物动物)一次接触或一次接触或2424小时内多次接触小时内多次接触化学物后在化学物后在短期短期(最长到最长到1414天天)内所发生的内所发生的毒性效应毒性效应，包括，包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应。效应。12/7/20225一、急性毒性和急性毒性试验的目的一、急性毒性和急性毒性试验的目的目的目的测试和求出化学毒物对一种或几种试验动物的致死量测试和求出化学毒物对一种或几种试验动物的致死量(以以LDLD5050表示表示)以及其它的急性毒性参数，了解急性毒作用以及其它
3、的急性毒性参数，了解急性毒作用强度。强度。并通过观察动物中毒表现和死亡的情况，了解急性毒作并通过观察动物中毒表现和死亡的情况，了解急性毒作用性质、可能的靶器官和致死原因，提供化学毒物的急性用性质、可能的靶器官和致死原因，提供化学毒物的急性中毒资料、初步评价对人体产生损害的危险性。中毒资料、初步评价对人体产生损害的危险性。探求化学毒物急性毒性的剂量探求化学毒物急性毒性的剂量反应关系与中毒特征。反应关系与中毒特征。为亚慢性、慢性毒性作用试验的染毒剂量设计提供参考为亚慢性、慢性毒性作用试验的染毒剂量设计提供参考依据。依据。研究化学毒物急性中毒的预防和急救治疗措施。研究化学毒物急性中毒的预防和急救治疗
4、措施。为毒理学机制研究提供线索为毒理学机制研究提供线索。12/7/20226一、急性毒性和急性毒性试验的目的一、急性毒性和急性毒性试验的目的急性毒性试验常用的毒性参数：急性毒性试验常用的毒性参数：LD50/LC50Zac（LD50/Limac）LD84/LD16(或或LC84LC16)剂量剂量反应曲线斜率反应曲线斜率 12/7/20227二、急性毒性试验二、急性毒性试验(一一)试验动物试验动物 原则原则：急性毒性试验要求选择对化学毒物的代谢急性毒性试验要求选择对化学毒物的代谢和毒效应表现与人的反应尽可能一致的试验和毒效应表现与人的反应尽可能一致的试验动物。动物。动物易于获得动物易于获得品系纯化
5、品系纯化价格较低和易于饲养等条件。价格较低和易于饲养等条件。12/7/20228二、急性毒性试验二、急性毒性试验1 1试验动物的种属和品系试验动物的种属和品系最好用两种种属的动物最好用两种种属的动物啮齿类啮齿类:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非啮齿类：非啮齿类：狗或猴狗或猴。急性皮肤毒性试验可选用成年大鼠、豚鼠或家兔，急性皮肤毒性试验可选用成年大鼠、豚鼠或家兔，优先考虑白色家兔。而急性吸入毒性试验和经口急优先考虑白色家兔。而急性吸入毒性试验和经口急性毒性试验则优先考虑大鼠。性毒性试验则优先考虑大鼠。12/7/20229二、急性毒性试验二、急性毒性试验试验动物的年龄和体重：试验动物
6、的年龄和体重：急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例如：大鼠如：大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔、家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠豚鼠200200250g250g、狗、狗101015kg15kg。同一批试验动物体重同一批试验动物体重变异范围不应超过该批动物平均体重的变异范围不应超过该批动物平均体重的2020。12/7/202210二、急性毒性试验二、急性毒性试验3.3.试验动物的性别：试验动物的性别：急性毒性
7、试验的主要内容是求急性毒性试验的主要内容是求LDLD5050，除特殊要求，除特殊要求外，一般急性毒性试验对动物性别要求为外，一般急性毒性试验对动物性别要求为雌雄各雌雄各半半。如果在预试验时发现化学毒物。如果在预试验时发现化学毒物(如农药如农药)对雌、对雌、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的别求出雌性与雄性动物各自的LDLD5050。如果试验是。如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的LDLD5050测测试。试。12/7/202211二、急性毒性试验二、急性毒性试验4.动物数量与
8、随机分组：动物数量与随机分组：大、小鼠等小动物大、小鼠等小动物 每组每组10只只狗等大动物狗等大动物 每组每组6只只分组原则分组原则随机化原则随机化原则5.禁食：禁食：经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜进食；染毒后禁食隔夜进食；染毒后禁食4h大动物大动物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒染毒后继续禁食染毒后继续禁食24h，但在禁食时要保障饮水。，但在禁食时要保障饮水。6.实验动物的预检：实验动物的预检：选择健康动物选择健康动物12周的检疫期周的检疫期12/7/202212二、急性毒性试验二、急性毒性试验 （二）试验动物的饲养环境（
9、二）试验动物的饲养环境恒定的温度：恒定的温度：223湿度：湿度：3070%照度：昼夜各半照度：昼夜各半饲料合格、饮水合格、垫料合格饲料合格、饮水合格、垫料合格12/7/202213二、急性毒性试验二、急性毒性试验（三）染毒途径的选择（三）染毒途径的选择:染毒途径（染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：）的选择需考虑：模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和方式途径和方式；有利于不同化学物之间急性毒性有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较大小的比较；受试物的性质和用途；各种受试受试物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。物毒
10、性评价程序的要求等。最常用的染毒途径为最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及经口、经呼吸道、经皮及注射途径。注射途径。12/7/202214二、急性毒性试验二、急性毒性试验经口经口(胃肠道胃肠道)接触接触:灌胃灌胃:小鼠小鼠0.20.2 1.0ml/1.0ml/只或只或0.10.1 0.5ml/10g0.5ml/10g 大鼠一次灌胃体积不超过大鼠一次灌胃体积不超过5ml/5ml/只只 家兔不超过家兔不超过10ml/2kg10ml/2kg 狗不超过狗不超过50ml/10kg50ml/10kg 吞咽胶囊吞咽胶囊:经呼吸道接触经呼吸道接触:静式吸入静式吸入 动式吸入动式吸入 经皮肤接触经皮肤接触:
11、注射途径接触注射途径接触:12/7/202215二、急性毒性试验二、急性毒性试验（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:1 1查阅文献查阅文献了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水溶性和脂溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成溶性和脂溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成分与含量等。分与含量等。确定使用哪一种计算方法求确定使用哪一种计算方法求LDLD5050，然后再设计剂量，然后再设计剂量分组。分组。LDLD5050的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍
12、的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍思法等。思法等。找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的接触途径所测得的LDLD5050(LC(LC5050)值作为受试化学物的预期值作为受试化学物的预期毒性中值。毒性中值。12/7/202216二、急性毒性试验二、急性毒性试验（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:2 2预试验预试验 设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并在该剂量的上下各设计在该剂量的
13、上下各设计l l一一2 2个剂量组作为预试验剂量。个剂量组作为预试验剂量。根据确定的剂量组进行染毒。根据确定的剂量组进行染毒。根据预试验的死亡资料确定组距。根据预试验的死亡资料确定组距。可根据以下公式计算出剂量分组：可根据以下公式计算出剂量分组：i=(lgLDi=(lgLD9090-lgLD-lgLD1010)(n-1)(n-1)或：或：i=(lgLDi=(lgLD100100-lgLD-lgLD0 0)(n-1)(n-1)式中式中i i为组距为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差相邻的两个剂量组对数剂量之差)；n n为设计的剂量组数。为设计的剂量组数。12/7/202217二、急性毒性试验二、
14、急性毒性试验（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:3 3正式试验正式试验;一般来说、根据试验设计所选用的一般来说、根据试验设计所选用的LDLD5050计算方法来确定计算方法来确定组数。例如几率单位法、寇氏法一般设组数。例如几率单位法、寇氏法一般设6 61010个剂量组；个剂量组；霍恩法固定设霍恩法固定设4 4个剂量组。求得个剂量组。求得i i值后以最低剂量组值后以最低剂量组(LD(LD0 0或或LDLD1010)的对数剂量加上一个的对数剂量加上一个i i值，即是第二个剂量组值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对数
15、即得出各组剂量的真实值。数即得出各组剂量的真实值。1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 LgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i 12/7/202218二、急性毒性试验二、急性毒性试验（五）试验周期与毒效应观察五）试验周期与毒效应观察1.中毒症状中毒症状12/7/202219二、急性毒性试验二、急性毒性试验（五）试验周期与毒效应观察（五）试验周期与毒效应观察:2.体重体重在观察试验动物中毒症状的过程中，应同时观察体重在观察试验动物中毒症状的过程中，应同时观察体重的变化。的变化。体重可以反映动物中毒后的整体变化。体重可以反映动物中毒后的整体变化。
16、体重体重改变的原因很多，若化学毒物刺激或损伤消化道可出改变的原因很多，若化学毒物刺激或损伤消化道可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减轻。若现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，体重也化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，体重也会减轻。如果化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损会减轻。如果化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损伤，也可能在体重上反映出来。所以，对存活动物尤伤，也可能在体重上反映出来。所以，对存活动物尤其是对低于其是对低于LDLD5050剂量组的存活动物应在观察期剂量组的存活动物应在观察期1414天天内称量其体重的变化以便了解受试物
17、引起毒效应的内称量其体重的变化以便了解受试物引起毒效应的持续时间。持续时间。12/7/202220二、急性毒性试验二、急性毒性试验（五）试验周期与毒效应观察（五）试验周期与毒效应观察:3.3.病理检查及其他指标病理检查及其他指标:急性毒性试验中，对死亡的动物均应及时进行大体解急性毒性试验中，对死亡的动物均应及时进行大体解剖和病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理剖和病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无充血、变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无充血、出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做组
18、织病理学检查。对存活动物在观察期结束时进行大组织病理学检查。对存活动物在观察期结束时进行大体病理检查必要时做组织病理学检查。根据试验需体病理检查必要时做组织病理学检查。根据试验需要可进一步扩大观察项目如体温、心电图、脑电图要可进一步扩大观察项目如体温、心电图、脑电图或进行某些生化指标测定等。或进行某些生化指标测定等。12/7/202221二、急性毒性试验二、急性毒性试验（五）试验周期与毒效应观察五）试验周期与毒效应观察4.死亡和死亡时间死亡和死亡时间重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是最重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死亡数。早出现死亡的时间以
19、及各个剂量组动物的死亡数。分析中毒死亡时间的规律具有一定意义，可为深分析中毒死亡时间的规律具有一定意义，可为深人研究化学物的毒作用机制提供参考。人研究化学物的毒作用机制提供参考。12/7/202222二、急性毒性试验二、急性毒性试验(六六)经典急性毒性试验的局限性经典急性毒性试验的局限性1.消耗的动物量大消耗的动物量大2.获得的信息有限获得的信息有限3.测得的测得的LD50仅仅是一个近似值仅仅是一个近似值4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的症状观察是不够的，更需要的是生理学、血症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒液
20、学及其它化验检查所提供的深入细致的毒性信息。性信息。12/7/202223三、急性毒性评价三、急性毒性评价外源化学物急性毒性分级（外源化学物急性毒性分级（WHO）毒性分级毒性分级大鼠一次经口大鼠一次经口LD50 (mg/kg)6只大鼠吸入只大鼠吸入4小时，死小时，死亡亡24只的浓度只的浓度(ppm)兔经皮兔经皮LD50(/mg/kg)对人可能致死的估计量对人可能致死的估计量g/kg总量总量(g/60kg)剧毒剧毒110515100012/7/202224三、急性毒性评价三、急性毒性评价我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法(1994)急性毒性分级急性毒性分级大鼠经口大鼠经口LD5
21、0(mg/kg)大致相当于大致相当于70kg人的致死量人的致死量6级级(极毒极毒)1稍尝稍尝,150001050克克12/7/202225一、一、基本概念基本概念二二、蓄积毒性试验方法及其评价蓄积毒性试验方法及其评价 2 蓄积毒性蓄积毒性12/7/202226 化学毒物进入机体后，经过生物转化以代化学毒物进入机体后，经过生物转化以代谢产物或化学物原型排出体外。但是，当化学谢产物或化学物原型排出体外。但是，当化学毒物反复多次给动物染毒，化学毒物进入机体毒物反复多次给动物染毒，化学毒物进入机体的速度的速度(或总量或总量)超过代谢转化的速度和排泄的超过代谢转化的速度和排泄的速度速度(或总量或总量)时
22、，化学毒物或其代谢产物就有时，化学毒物或其代谢产物就有可能在机体内逐渐增加并贮留，这种现象称为可能在机体内逐渐增加并贮留，这种现象称为化学毒物的化学毒物的蓄积作用蓄积作用(accumulation)(accumulation)。一、基本概念一、基本概念12/7/202227 蓄积作用实际上有二个含义：蓄积作用实际上有二个含义：物质蓄积物质蓄积(material accumulation)(material accumulation)功能蓄积功能蓄积(functional accumulation)(functional accumulation)一、基本概念一、基本概念12/7/202228二
23、、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价化学毒物的化学毒物的蓄积作用是发生慢性中毒的物质基础蓄积作用是发生慢性中毒的物质基础，因此研究化学毒物在机体内的蓄积性是评价化学因此研究化学毒物在机体内的蓄积性是评价化学毒物能否引起潜在慢性毒性的依据之一，也是卫毒物能否引起潜在慢性毒性的依据之一，也是卫生标准制订过程选择安全系数的主要依据。生标准制订过程选择安全系数的主要依据。蓄积毒性试验是研究化学毒物基础毒性的重要内蓄积毒性试验是研究化学毒物基础毒性的重要内容之一，容之一，目的是通过试验求出蓄积系数目的是通过试验求出蓄积系数K K，了解化，了解化学毒物蓄积毒性的强弱，学毒物蓄积毒性的强弱
24、，并为慢性毒性试验及其并为慢性毒性试验及其他有关毒性试验的剂量选择提供参考。他有关毒性试验的剂量选择提供参考。12/7/202229(一一)蓄积系数法蓄积系数法 蓄积系数蓄积系数(accumulation coefficient)(accumulation coefficient)是多次是多次染毒使半数动物出现效应染毒使半数动物出现效应(或死亡或死亡)的累积剂量的累积剂量EDED5050(n)(n)与一次染毒使半数动物出现相同效应与一次染毒使半数动物出现相同效应(或死亡或死亡)的剂量的剂量EDED5050(1)(1)的比值，即：的比值，即：K KEDED5050(n)/ED(n)/ED5050
25、(1)(1)K KLDLD5050(n)/LD(n)/LD5050(1)(1)二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价12/7/202230 1 1固定剂量法：固定剂量法：一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染毒。一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染毒。先求出先求出LDLD5050，然后选取相同条件的，然后选取相同条件的4040只只(或更多或更多)实验动实验动物，分为两组，一为染毒组，一为对照组，每组至少物，分为两组，一为染毒组，一为对照组，每组至少2020只，雌雄各半。试验组在只，雌雄各半。试验组在1 12020l l50LD50LD5050的范围内的范围内选定一个
26、剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径进选定一个剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径进行染毒行染毒,试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，计算累累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，计算累积总接触剂量积总接触剂量LDLD5050(n)(n)，根据公式计算，根据公式计算K K值，然后依表值，然后依表6 65 5进行评价。但若接触剂量已累积达到进行评价。但若接触剂量已累积达到5 5个个LDLD5050剂量，剂量，也可终止试验。也可终止试验。二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价12/7/202231
27、 2 2剂量递增法：剂量递增法：二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价12/7/2022323 3剂量固定的剂量固定的2020天蓄积法：天蓄积法：它通常采用经口灌胃染毒方式，将动物随机分为它通常采用经口灌胃染毒方式，将动物随机分为5 5个组，个组，包括阴性对照组和包括阴性对照组和1/20 LD1/20 LD5050、l/10 LDl/10 LD5050、1/5 LD1/5 LD5050和和1/2 LD1/2 LD5050四个剂量组，每组动物数四个剂量组，每组动物数1010只，雌雄各半。每日染毒一次，只，雌雄各半。每日染毒一次，连续染毒连续染毒2020天。观察每组雌雄合计的死亡
28、动物数量。试验结天。观察每组雌雄合计的死亡动物数量。试验结束时根据下列标准进行评定：束时根据下列标准进行评定：各剂量组均无死亡，即为蓄各剂量组均无死亡，即为蓄积性不明显；积性不明显；如仅如仅1/2LD1/2LD5050剂量组有死亡，其他组均无死亡，剂量组有死亡，其他组均无死亡，则为弱蓄积性；则为弱蓄积性；如如1/20LD1/20LD5050剂量组无死亡，其他各组间死亡剂量组无死亡，其他各组间死亡数有剂量反应关系时，则为中等蓄积性；数有剂量反应关系时，则为中等蓄积性；如如1/20LD1/20LD5050剂量组剂量组有死亡，且有剂量反应关系，则为强蓄积性。有死亡，且有剂量反应关系，则为强蓄积性。二
29、、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价12/7/202233(二二)生物半减期法：生物半减期法：生物半减期生物半减期(biological half-life(biological half-life，t t1/21/2)法是用毒物动力学原理法是用毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用。描述化学毒物在机体内的蓄积作用。化学毒物在体内蓄积的速度和量与机体单位时间内吸收该物质的速化学毒物在体内蓄积的速度和量与机体单位时间内吸收该物质的速度以及清除速度有关。即使化学毒物以相等的时间间距恒速地吸收入度以及清除速度有关。即使化学毒物以相等的时间间距恒速地吸收入血液，该物质在一定剂量
30、范围内在机体的蓄积量也不呈直线无限地增血液，该物质在一定剂量范围内在机体的蓄积量也不呈直线无限地增加，而是呈曲线形上升并有一定的极限。这是因为化学物质吸收进入加，而是呈曲线形上升并有一定的极限。这是因为化学物质吸收进入机体的同时体内也发生着代谢转化及清除的过程机体的同时体内也发生着代谢转化及清除的过程(包括血中化学毒物包括血中化学毒物向组织脏器的分配过程向组织脏器的分配过程)。当化学毒物的吸收过程与代谢转化。当化学毒物的吸收过程与代谢转化清除的清除的过程达到平衡时，其蓄积量基本上不再增加。过程达到平衡时，其蓄积量基本上不再增加。一般来说，一般来说，t t1/21/2d d较短的化学毒物达到蓄积
31、极限所需的时间也短，较短的化学毒物达到蓄积极限所需的时间也短，t t1/21/2长者达到蓄积极限的时间也长。长者达到蓄积极限的时间也长。二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价12/7/202234一一 亚慢性毒性作用：亚慢性毒性作用：亚慢性毒性的概念亚慢性毒性的概念 亚慢性毒性试验的目的亚慢性毒性试验的目的 亚慢性毒性试验的设计亚慢性毒性试验的设计 二二 慢性毒性作用：慢性毒性作用：慢性毒性的概念慢性毒性的概念 慢性毒性试验的目的慢性毒性试验的目的 慢性毒性试验设计慢性毒性试验设计 3 亚慢性和慢性毒性试验亚慢性和慢性毒性试验12/7/202235(一一)概念：概念：亚慢性毒
32、性亚慢性毒性(subchronic toxicity)是指人是指人 或实验动物连续接触较长时间、较大剂量或实验动物连续接触较长时间、较大剂量的外源化合物所引起的毒性效应。的外源化合物所引起的毒性效应。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或实验是指人或实验动物长期动物长期(甚至终生甚至终生)反复接触低剂量的化反复接触低剂量的化学毒物所产生的毒性效应。学毒物所产生的毒性效应。一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的12/7/202236（二）试验目的：（二）试验目的：1.1.确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱，对在急性及亚急性毒确定受试物亚慢性
33、和慢性毒性的效应谱，对在急性及亚急性毒 性试验中发现的毒作用提供新的信息，并发现在急性及亚急性毒性试验中发现的毒作用提供新的信息，并发现在急性及亚急性毒性试验中未发现的毒作用；性试验中未发现的毒作用；2.2.研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；3.3.研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量反应反应(效应效应)关系，确定其观关系，确定其观察到有害作用的最低剂量察到有害作用的最低剂量(LOAEL)(LOAEL)和未观察到有害作用的剂量和未观察到有害作用的剂量（NOAELNOAEL），提出此受试物的安全限量参考值），提出此受试物的安全限量
34、参考值;4.4.研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性;5.5.亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提 供依据供依据;6.6.确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为将确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为将毒性研究结果外推到人提供依据。毒性研究结果外推到人提供依据。一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的12/7/202237二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计 （一）实验动物选择（一）实验动物选择 亚慢性毒
35、性试验亚慢性毒性试验 年龄：年龄：大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g数量：数量：小动物小动物20 大动物大动物6性别：性别：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性试验慢性毒性试验年龄：年龄：大鼠大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初断乳初断乳数量：数量：小动物小动物40 大动物大动物8性别：性别：雌雄各半雌雄各半12/7/202238（二）实验动物染毒期限：（二）实验动物染毒期限：工业毒理学工业毒理学 36个月个月食品毒理学食品毒理学 6个月个月1年年环境毒理学环境毒理学 6个月个月1年年致癌试验致癌试验 接近或等于动物的预期寿命接近或等于动物的预期寿命二、亚慢性和慢性毒性试
36、验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计12/7/202239二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计（二）实验动物染毒期限（二）实验动物染毒期限12/7/202240 经消化道经消化道经呼吸道经呼吸道经皮肤经皮肤二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计（三）实验动物染毒方式（三）实验动物染毒方式12/7/202241亚慢性毒性的剂量选择亚慢性毒性的剂量选择 阴性对照组阴性对照组 低剂量组低剂量组 中剂量组中剂量组 高剂量组高剂量组 急性毒性的阈剂量急性毒性的阈剂量 1/201/5 LD50 组距：组距：310倍，最低倍，最低不小于不小于2倍倍慢性毒性的剂量选择慢性毒
37、性的剂量选择 阴性对照组阴性对照组 低剂量组低剂量组 中剂量组中剂量组 高剂量组高剂量组 亚慢性阈剂量或其亚慢性阈剂量或其1/51/2 1/10 LD50 组距：组距：25倍，最低不小于倍，最低不小于2倍倍二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计（四）试验分组和剂量设计（四）试验分组和剂量设计12/7/202242（五）观察指标（五）观察指标二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计12/7/2022431.一般综合性观察指标：一般综合性观察指标：外观体征、行为活动、体重、食物利用率外观体征、行为活动、体重、食物利用率2.一般化验指标：一般化验指标：3.系统尸解和
38、病理学检查：系统尸解和病理学检查：（1）脏器湿重、脏器系数（脏器湿重、脏器系数（脏脏/体比值体比值）（如肝如肝/体比，即体比，即(全肝湿重全肝湿重/体重体重)100100）（2）病理学检查病理学检查4.特异性指标：特异性指标：二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计（五）观察指标（五）观察指标12/7/202244二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计12/7/202245四、局部毒作用四、局部毒作用1.皮肤原发性刺激试验皮肤原发性刺激试验2.皮肤致敏反应试验皮肤致敏反应试验3.光致敏反应光致敏反应4.光刺激试验光刺激试验5.眼刺激试验眼刺激试验6.其他粘膜刺激试验其他粘膜刺激试验7.替代（体外）试验替代（体外）试验
