1、Agilent1200高效液相色谱仪操作规程Agilent1200高效液相色谱仪操作规程一、Agilent1200化学工作站开机顺序(LAN卡联接) 1、将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等 2、打开计算机，进入Bootp；3、打开主机各模块电源（不分先后），等待Bootp接收,等待各模块就绪后,再双击工作站图标,进入化学工作站；4、调出一个分析方法，检查各参数的设置；5、旋开泵上的排气阀，将工作站中的泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%；6、在工作站中打开泵，排出管线中的气体数分钟；7、依此切换到B、C、D溶剂分别排气；8、将工作站
2、中的泵流量设到1ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；9、关闭排气阀，检查柱前压力；10、待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况；二、数据采集方法编辑1 由运行控制进入样品信息，设定操作者姓名，样品数据文件名等。2自动进样器参数设定:1）选择合适的进样方式, “Standard Injection”-只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”-可以输入进样体积和洗瓶位置，“UnRegistered”-此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Use injectorprogram”-可以点击“Edit ”
3、键进行进样程序编辑。2)单击确定进入下一画面。3 泵参数设定：（四元泵）1）在流量（Flow）处输入流量,如1.5ml/min，在溶剂 B处输入70.0,(A=100-B-C-D) ,也可插入一行时间列表（Timetable） ,编辑梯度。在最大压力极限处（Pressure LimitsMax）输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。2）单击确定进入下一画面。4 柱温箱参数设定:1）在柱温下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击更多键,选中与左侧一致，使柱温箱的温度左右一致。2）单击确定进入下一画面。5 DAD检测器参数设定:1）在波长下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在峰宽 (响应时间
4、)下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如0.1min(2s)。2）在时间列表中可以插入一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。3）点击确定进入下一画面。6 单击方法菜单，选中保存方法，输入一方法名，如“test”，单击确定。7、运行序列：新建序列，在序列参数中输入样品信息，在序列表中输入样品位置，方法等，运行该序列，等仪器就绪，基线平稳，从方法菜单中选择运行方法，进样。三、数据处理操作步骤1 由主菜单上的视图进入数据分析，到数据处理界面；2 由主菜单上的文件进入调用信号，调出要分析的数据文件色谱图；3 由主菜单上的图形进入信号选项，调整谱图坐标:1)点自定义量程，在时
5、间范围中输入横坐标(时间）(例如0到10)；2)在响应范围:中输入纵坐标(响应值）(例如-50到800)；3)在量程框中，调到全部使用相同量程；4)点击确定退出。4 由主菜单上的积分进入积分事件，设置、修改积分参数；1)在斜率灵敏度后，输入斜率值；2)在峰宽后中，输入最小峰宽值；3)在最小峰面积后，输入最小峰面积值；4)在最小峰高后，输入最小峰高值；5)点击左上方带钩的图标，确认；5 由主菜单上的报告进入设定报告，设置报告参数：1)在定量结果栏中，选择计算（面积百分比，外标法，内标法等）；2)在目标栏，选打印机打印，或屏幕打印；3)点击确定退出。6 由主菜单上的报告进入打印报告，打印报告；四、
6、关机1 关机前，用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量0.51ml/min，再用100%有机溶剂冲0.5小时，然后关泵，（适于反相色谱柱）。正相色谱柱用适当的溶剂冲洗2 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down关）。3关闭Agilent 1200各模块电源开关。五、Agilent 1200 高效液相色谱仪维护保养：1 氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯；2 开机时，打开排气阀，100%水，泵流量5ml/min，若此时显示压力 10bar，则应更换排气阀内玻璃料。3流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。4流动相使用前必须进行脱气处理，可用超声波振荡10- 15min。5配制90%水+10%异丙醇，以每分23滴的速度虹吸排出，进行seal-wash，溶剂不能干涸。6当使用缓冲溶液时，要用水冲洗手动进样器进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。7色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（乙睛/甲醇适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。3 / 3
