1、第十六章弯曲菌属 与螺杆菌属第一节 弯曲菌属是一类呈逗点状或是一类呈逗点状或s 形的形的G-菌，广泛分布菌，广泛分布于动物界，其中有些可引起动物与人类的于动物界，其中有些可引起动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病。对人腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病。对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等，其中空肠弯曲菌是腹泻的常见病曲菌等，其中空肠弯曲菌是腹泻的常见病原菌。原菌。该菌借助于鞭毛和外膜蛋白与空肠上皮细胞该菌借助于鞭毛和外膜蛋白与空肠上皮细胞结合，侵入生长繁殖，产生肠毒素、细胞毒结合，侵入生长繁殖，产生肠毒素、细胞毒素和内毒素等物质，引起肠炎和肠道
2、外感染。素和内毒素等物质，引起肠炎和肠道外感染。腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现，腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现，转为粘液脓血样便，甚至血便。有发热腹痛、转为粘液脓血样便，甚至血便。有发热腹痛、恶心不适等症状。可在恶心不适等症状。可在1 1周内消退，周内消退，2020患者患者症状可持续症状可持续1-31-3周。周。微生物特性微生物特性1.形态结构形态结构 G-菌体弯曲呈逗点。无芽孢有鞭菌体弯曲呈逗点。无芽孢有鞭 毛。运动活泼，呈投镖样为其特征。毛。运动活泼，呈投镖样为其特征。2.基因组及抗原成分基因组及抗原成分 基因组大小仅为大肠杆基因组大小仅为大肠杆 菌的菌的35；DNA的的G+C
3、为为30-38mol。按按O抗原不同分为抗原不同分为65个血清型。个血清型。3.培养特征培养特征 为微需氧菌，最佳气体环境通常为微需氧菌，最佳气体环境通常 为含为含5氧气、氧气、10二氧化碳及二氧化碳及85氮气。氮气。4.抵抗力不强，在室温下可迅速死亡。对热抵抗力不强，在室温下可迅速死亡。对热 敏感，标本在敏感，标本在4冰箱可保存冰箱可保存3周。周。微生物检验微生物检验 1.粪便直接镜检，粪便直接镜检，G-呈弧形、呈投镖式运动。呈弧形、呈投镖式运动。2.核酸检测粪便弯曲菌核酸检测粪便弯曲菌flaA基因，体外扩增基因，体外扩增 空肠大肠弯曲菌为空肠大肠弯曲菌为13kb。3.分离培养分离培养 粪便
4、等标本可接种选择平板进行粪便等标本可接种选择平板进行 分离，置微氧环境培养。空肠大肠弯曲生分离，置微氧环境培养。空肠大肠弯曲生 长温度为长温度为43，培养，培养24h可观察为灰白湿润、可观察为灰白湿润、扁平边缘不整的蔓延生长的菌落。扁平边缘不整的蔓延生长的菌落。鉴定要点鉴定要点1.为氧化酶阳性，为氧化酶阳性，G-菌体弯曲或呈菌体弯曲或呈S型。型。2.萘啶酸、头孢噻吩敏感试验：空肠弯曲菌萘啶酸、头孢噻吩敏感试验：空肠弯曲菌 对萘啶酸敏感、噻吩耐药；胎儿弯曲菌对对萘啶酸敏感、噻吩耐药；胎儿弯曲菌对 萘啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。萘啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。3.3.马尿酸盐试验：有助于鉴定空肠弯曲菌空
5、马尿酸盐试验：有助于鉴定空肠弯曲菌空 肠亚种，凡试验阳性、在肠亚种，凡试验阳性、在4242条件下生长，条件下生长，氧化酶阳性且与镜检形态相符者，即可报氧化酶阳性且与镜检形态相符者，即可报 告为空肠弯曲菌空肠亚种。告为空肠弯曲菌空肠亚种。4.4.醋酸吲哚水解试验：空肠弯曲菌为阳性，醋酸吲哚水解试验：空肠弯曲菌为阳性，胎儿弯曲菌为阴性。胎儿弯曲菌为阴性。5.用抗体包被的乳胶颗粒，遇到相应的弯曲菌用抗体包被的乳胶颗粒，遇到相应的弯曲菌时便可出现反应。可用于鉴定空肠大肠弯时便可出现反应。可用于鉴定空肠大肠弯曲菌，具有高度敏感性和特异性。曲菌，具有高度敏感性和特异性。6.DNA探针：探针：DNA-DNA
6、杂交可以用于鉴别大杂交可以用于鉴别大肠弯曲菌与马尿酸水解阴性的空肠弯曲菌、肠弯曲菌与马尿酸水解阴性的空肠弯曲菌、区别空肠弯曲菌和其他的弯曲菌。区别空肠弯曲菌和其他的弯曲菌。第二节第二节 螺杆菌属螺杆菌属 n幽门螺杆菌与萎缩性胃炎、胃、十二指肠溃幽门螺杆菌与萎缩性胃炎、胃、十二指肠溃疡和胃癌等疾病相关。疡和胃癌等疾病相关。nHP感染非常普遍，平均世界人口的感染非常普遍，平均世界人口的50被感被感染。染。三、微生物特性三、微生物特性1.G-,细长弯曲呈螺形。一端或两端有多根带鞘细长弯曲呈螺形。一端或两端有多根带鞘 鞭毛，运动活泼有动力。鞭毛在定居中起锚鞭毛，运动活泼有动力。鞭毛在定居中起锚 住作用
7、。住作用。2.基因组较小，约基因组较小，约167106bp，DNAG+C百百分含量为分含量为37mol，较重要的基因有脲酶基因较重要的基因有脲酶基因 urea、ureB、ureC，细胞毒素相关基因细胞毒素相关基因cagA，空泡毒素基因空泡毒素基因vacA。脲酶基因定位在脲酶基因定位在DNA的的 42kb区段内。区段内。3.HP菌株间具有共同抗原。与空肠弯曲菌菌体菌株间具有共同抗原。与空肠弯曲菌菌体 外膜蛋白无交叉免疫反应，但其鞭毛蛋白具外膜蛋白无交叉免疫反应，但其鞭毛蛋白具 有明显的交叉反应。有明显的交叉反应。3.3.培养特性培养特性1.HP为微需氧菌，在为微需氧菌，在5O2、10C02、85
8、N2的中生长良好。最适温度为的中生长良好。最适温度为 37,25不生长，不生长，42少数生长，少数生长，此与弯曲菌属不同。此与弯曲菌属不同。2.HP对湿度对湿度(85%以上以上)要求较高，营养要要求较高，营养要求较高需含血液才能生长，常用血琼脂求较高需含血液才能生长，常用血琼脂培养基培养基,需经需经72h才长出菌落，故在培养才长出菌落，故在培养基中添加多粘菌素基中添加多粘菌素B(250U/L)、万古霉万古霉素素(6mgL)、两性霉素两性霉素(2mgL)、TMP(5mgL)等以抑制杂菌生长。等以抑制杂菌生长。3.HP的菌落形态为圆形孤立的小菌落，的菌落形态为圆形孤立的小菌落，无色半透明呈露滴状。
9、无色半透明呈露滴状。4.理化性状理化性状nHP生化反应不活跃，不能利用糖类。生化反应不活跃，不能利用糖类。nHP具有大量高活力的胞外脲酶，故脲酶活性具有大量高活力的胞外脲酶，故脲酶活性的测定可作为的测定可作为HP的快速诊断方法。的快速诊断方法。n还能产生氧化酶、触酶、碱性磷酸酶、还能产生氧化酶、触酶、碱性磷酸酶、-谷谷氨酰转肽酶、亮氨酸胺肽酶和氨酰转肽酶、亮氨酸胺肽酶和DNA酶等。酶等。四、微生物检验四、微生物检验 1.分离培养分离培养 宜用选择培养基，需新鲜配制，宜用选择培养基，需新鲜配制，倾注平皿后应密封保存于一定湿度的容器一倾注平皿后应密封保存于一定湿度的容器一 周内用完。注意将标本的粘
10、膜面在培养基上周内用完。注意将标本的粘膜面在培养基上 反复涂擦接种。反复涂擦接种。2培养在含有培养在含有5O2、10C02、85N2的微的微 需氧和需氧和98以上湿度的环境培养。以上湿度的环境培养。3鉴定鉴定 根据形态和染色性根据形态和染色性,菌落特征；菌落特征；37 生长，生长，43、25不生长；氧化酶和过氧化不生长；氧化酶和过氧化 氢酶均阳性、脲酶强阳性；对萘啶酸耐药、氢酶均阳性、脲酶强阳性；对萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感；在头孢噻吩敏感；在1甘油和甘油和1胆盐中均不胆盐中均不 生长。生长。4.4.快速脲酶试验快速脲酶试验是是种简便实用、快速敏感、较为准确可靠的种简便实用、快速敏感、较为准确可
11、靠的诊断方法。脲酶试剂由尿素、基质、酚红指示诊断方法。脲酶试剂由尿素、基质、酚红指示剂等组成剂等组成,将小块的活组织块放人装有尿素培将小块的活组织块放人装有尿素培养基瓶内，如培养基由黄变为红色为阳性，提养基瓶内，如培养基由黄变为红色为阳性，提示该菌脲酶已将尿素分解。示该菌脲酶已将尿素分解。5.5.抗体检测抗体检测用血清学方法检测患者体内的抗用血清学方法检测患者体内的抗HP抗体抗体(IgG、IgM和和IgA)系最常用的无创伤性诊断系最常用的无创伤性诊断HP感染的感染的方法。方法。目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及酶联目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及酶联免疫吸附试验免疫吸附试验(ELISA)
12、等，而以等，而以ELISA应用最应用最为广泛，现有商品化的试剂盒，可用于检测患为广泛，现有商品化的试剂盒，可用于检测患者血清中者血清中HP的菌体抗体或脲酶抗体。的菌体抗体或脲酶抗体。6.6.1313C C或或1414C C标记尿素呼吸试验标记尿素呼吸试验 病人禁食一夜，进食用病人禁食一夜，进食用13c或或14c标记的尿标记的尿 素，素，HP产生的尿素酶分解脲素释放产生的尿素酶分解脲素释放 CO2，因此可测定病人呼吸中释放带有同位素因此可测定病人呼吸中释放带有同位素 的的CO2量，如量，如CO2含量超过标准，提示有含量超过标准，提示有 HP存在。存在。该方法敏感性与特异性均好。该方法敏感性与特异性均好。
