1、专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用 了解有关培养基的基础知识，进行无了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。菌技术的操作，进行微生物的培养。课题目标：课题目标：掌握掌握培养基的制备培养基的制备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平板划线法平板划线法等基本操作技术，熟练、规范等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。课题重点和难点：课题重点和难点：技能目标：技能目标：1 1、微生物包括五类：、微生物包括五类：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物2 2、特点：、特
2、点：结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数十分微小.通常要用通常要用光学显微镜或电子显微镜光学显微镜或电子显微镜才能看到，才能看到，有的甚至没有细胞结构。且体内一般不含有叶有的甚至没有细胞结构。且体内一般不含有叶绿素绿素.不能进行光合作用。不能进行光合作用。原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、微生物基础知识一、微生物基础知识细菌的外形与大小细菌：细菌：单细胞不分枝的原核微生物单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞细菌细胞微小而透明微小而透明，通常用适当染料，通常用适当染料染色染色后显微镜观察后显微镜观察A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌 常见
3、的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态 有些细菌在一定的条件下，细胞里面有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。当环境适恶劣的环境有很强的抵抗力。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。又可以萌发，形成一个细菌。菌落：菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的，具有一殖时，会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，
4、叫做菌落定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。细菌的菌落特征因种而异细菌的菌落特征因种而异 结构：结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝分支状的菌丝(基内菌丝、气生菌丝基内菌丝、气生菌丝)链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/32/3是是由放线菌产生的由放线菌产生的 应用应用:病病毒毒的的结结构构SARS病毒病毒禽流感病毒禽流感病毒如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉
5、菌青霉青霉真菌真菌二、培养基二、培养基 1 1、概念、概念:培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的营养基质。专供微生物生长繁殖使用的营养基质。(1)(1)根据根据物理性质物理性质分分固体培养基固体培养基用于微生物的分离计数用于微生物的分离计数半固体培养基半固体培养基观察微生物的运动、鉴定菌种观察微生物的运动、鉴定菌种液体培养基液体培养基常用于工业生产常用于工业生产(2)(2)根据根据化学成分化学成分分分合成培养基合成培养基成分明确成分明确,常用于分类、鉴定常用于分类、鉴定天然培养基天然培养基成分不明确成分不明确,常用于工业生产常
6、用于工业生产2.2.培养基的种类培养基的种类固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基液体培养基液体培养基主要用于微生物的主要用于微生物的分离、计数等分离、计数等主要用于观察微生物的运主要用于观察微生物的运动、鉴定菌种等动、鉴定菌种等主要用于工业生产主要用于工业生产需加入凝固剂，需加入凝固剂，如琼脂如琼脂(3)(3)根据根据用途用途分分选择培养基选择培养基在培养基中加入某种化学物质在培养基中加入某种化学物质,以以抑制不需要的微生物的生长抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生促进所需要的微生物的生长物的生长,如加高浓度的食盐如加高浓度的食盐,抑制多种细菌生长抑制多种细菌生长,分离分离到金黄
7、色葡萄球菌到金黄色葡萄球菌鉴别培养基鉴别培养基在培养基中加入某种指示剂或化学在培养基中加入某种指示剂或化学药品药品,用以鉴别不同种类的微生物用以鉴别不同种类的微生物,如伊红和美蓝如伊红和美蓝,与大肠杆菌的代谢产物结合与大肠杆菌的代谢产物结合,使菌落呈深紫色使菌落呈深紫色,并带有金属光泽并带有金属光泽,可以用来鉴别可以用来鉴别大肠杆菌大肠杆菌选择培养基选择培养基 加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌 无氮源培养基无氮源培养基 分离固氮菌分离固氮菌 无碳源培养基无碳源培
8、养基 分离自养型微生物分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞4 4、培养基的营养构成：、培养基的营养构成：一般都含有一般都含有水、碳源、氮源和无机盐水、碳源、氮源和无机盐等等营养物质，营养物质，另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊特殊营养物质，例如：生长因子营养物质，例如：生长因子(即细菌生长必需，即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗渗透压透压等的
9、要求。等的要求。3 3、不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方、不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 (参考教材附录内容参考教材附录内容)概念概念来源来源作用作用碳碳源源凡是能为微凡是能为微生物提供生物提供生生长繁殖长繁殖所需所需碳元素的营碳元素的营养物质养物质无机碳源无机碳源 COCO2 2 NaHCO NaHCO3 3等等有机碳源有机碳源 糖类糖类 脂肪酸脂肪酸 花生粉饼花生粉饼 石油石油 等等构成细胞构成细胞物质和一些物质和一些代谢产物代谢产物异养微生异养微生物的主要能物的主要能源源(1)(1)微生物的碳源微生物的碳源 自养型和异养型微生物分别能利用自养型和异养型微生物分别能利用哪
10、类碳源物质？哪类碳源物质？思考思考概念概念来源来源作用作用氮氮源源无机氮源无机氮源 N N2 2、NHNH4 4+、NONO3 3-、NHNH3 3等等有机氮源有机氮源 尿素、牛肉尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨膏、蛋白胨、氨基酸基酸 等等凡是能够凡是能够为微生物为微生物提供所需提供所需氮元素的氮元素的营养物质营养物质主要用于合成主要用于合成蛋白质、核酸蛋白质、核酸及含及含N N的代谢的代谢产物产物(2)(2)微生物的氮源微生物的氮源注：对于异养微生物来说，含注：对于异养微生物来说，含C C、H H、O O、N N的化合物既的化合物既是碳源，又是氮源。是碳源，又是氮源。概念：概念：成分：成分：作用：作
11、用：为什么不可缺少？为什么不可缺少？常见的生长因子：常见的生长因子：微生物生长不可缺少的微量有机物微生物生长不可缺少的微量有机物有机物有机物酶和核酸的组成成分酶和核酸的组成成分缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等(3)(3)生长因子生长因子三、无菌技术三、无菌技术1 1、无菌技术的概念、无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中，在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，倒平板、平板划线操作，还是
12、平板稀释涂布法还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到，其操作中的每一步都需要做到“无菌无菌”，即，即防止杂菌污染防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。地培养微生物。（）（）消毒定义：消毒定义：利用较为温和的利用较为温和的化学或物理化学或物理方法，杀死物体表方法，杀死物体表面或内部的部份面或内部的部份微生物（不包括芽孢和孢子微生物（不包括芽孢和孢子)。2 2、消毒与灭菌的概念及两者的区别、消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以强烈的化学剂或物理方法消灭体内外以强烈的化学剂或物理方法消灭体内
13、外所有所有微微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。是最重要的技术。煮沸消毒法煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min。巴氏消毒法巴氏消毒法:70-75:70-75下煮下煮30min30min或或8080下煮下煮15min15min化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用75%75%酒精等进行皮肤消毒酒精等进行皮肤消毒;氯气氯气消毒水源，或喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等液。消毒水源，或喷洒石炭酸或
14、煤酚皂溶液等液。紫外线消毒紫外线消毒:利用紫外线照射利用紫外线照射30min30min。(1)(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法灼烧灭菌灼烧灭菌：各种：各种金属用具金属用具可直接在酒精灯火焰的可直接在酒精灯火焰的充充分燃烧层灼分燃烧层灼烧，可迅速彻底地灭菌。烧，可迅速彻底地灭菌。干热灭菌干热灭菌：用干热灭菌箱在：用干热灭菌箱在160-170160-170下加热下加热1-2h,1-2h,用于用于能耐高温的、需要保持干燥的物品能耐高温的、需要保持干燥的物品。高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌：100kPa100kPa、121121下维持下维持15-30min.
15、15-30min.(2)(2)灭菌的方法：灭菌的方法：1 1、计算、计算2 2、称量、称量3 3、溶化、溶化4 4、灭菌、灭菌5 5、倒平板、倒平板（二二）纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌（一一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1 1、平板划线法、平板划线法2 2、稀释涂布平板法。、稀释涂布平板法。（一一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方(计算计算)物质物质牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl琼脂琼脂水水重量重量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至100mL100mL2.2.称量称量
16、 按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。迅速，称后及时盖上瓶盖。蛋白胨是一种外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特蛋白胨是一种外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。它可以作为微生物培养基的主要原料，在抗生殊气息。它可以作为微生物培养基的主要原料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大；不同的生物体需要特定的氨基酸领域中的用量均很大；不同的生物体需要特
17、定的氨基酸和多肽，因此存在着各种蛋白胨，一般来说，用于蛋白和多肽，因此存在着各种蛋白胨，一般来说，用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（酪蛋白、肉类）和植物蛋胨生产的蛋白包括动物蛋白（酪蛋白、肉类）和植物蛋白（豆类）等两种。白（豆类）等两种。牛肉膏牛肉膏 牛肉浸膏牛肉浸膏成分：是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、成分：是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多
18、肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。该产品广泛应用于生物制药发酵及各种培养基的制备。该产品广泛应用于生物制药发酵及各种培养基的制备。当中它起的主要作用是补充蛋白胨以及其它氮源的营养不当中它起的主要作用是补充蛋白胨以及其它氮源的营养不足。一般的用量为足。一般的用量为0.3%0.5%。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的的细菌基础培养基细菌基础培养基，有时，有时又称为普通培养基又称为普通培养基，由于这，由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的种培养基中含
19、有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨、基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨、NaCl和琼脂。和琼脂。其中其中牛肉膏牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，维生素，蛋白胨蛋白胨主要提供氮源和维生素，而主要提供氮源和维生素，而NaCl提供提供无机盐。无机盐。由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其稀碱将其pH调至调至中性或微碱性中性或微碱性(7.0-7.2)，以利于细菌，以利于细菌的生长繁殖。的生长繁殖。3.
20、3.溶化：溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至至100mL100mL。4.4.灭菌：灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（3 35 5套，用几层报套，用几层报纸包好
21、）一起放到高压锅内灭菌。纸包好）一起放到高压锅内灭菌。5.5.倒平板：倒平板：待培养基冷却待培养基冷却到到5050左右时倒平板（如教材左右时倒平板（如教材1717图示）。图示）。牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 倒平板操作的讨论倒平板操作的讨论 (课本课本P17)1.1.培养基灭菌后要冷却到培养基灭菌后要冷却到5050O OC C时倒平板。用时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？什么办法来估计培养基的温度？用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。即可开始倒平板。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通
22、过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？既可以使培养基表面的水分更好地挥发，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上空气中的微生物可能在皿盖
23、与皿底之间的培养基上滋生，因此滋生，因此最好不要用最好不要用这个平板培养微生物。这个平板培养微生物。（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌微生物接种方法常见的有微生物接种方法常见的有平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法。1.1.平板划线法平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面（操作如教将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面（操作如教材材1818页图示）。页图示）。在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称眼可见的
24、子细胞群体称菌落菌落。1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种接种环上残留的菌种,使下一次划线时，接种环上的菌种使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加，
25、从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后仍然要灼烧接种环，能及时杀死接种环上划线结束后仍然要灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。平板划线法的讨论平板划线法的讨论 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开
26、始划线？是从上一次划线的末端开始划线？能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌
27、落。稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。作和涂布平板操作。系列稀释操作系列稀释操作101102103104105106(1)(1)将分别盛有将分别盛有9mL9mL水的试管灭菌并编号。水的试管灭菌并编号。(2)(2)用移液管吸取用移液管吸取1mL1mL培养的菌液，注入第二支试管中，培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。(3)(3)从从10101 1倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1mL1mL稀释液，注入第三支稀释液，注入第三支试管中，重复步骤试管中，重复步骤2
28、 2，直至到第六支试管。，直至到第六支试管。涂布平板操作涂布平板操作(1)(1)将涂布器浸在盛有将涂布器浸在盛有7070的酒精的烧杯中。的酒精的烧杯中。(2)(2)取少量菌液取少量菌液(不超不超0.1mL),0.1mL),滴加到培养基表面滴加到培养基表面.(3)(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却却8 810s10s。(4)(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布平板操作讨论涂布平板操作讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释
29、的无菌操作要求，想一想，第划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 2步应如何步应如何进行无菌操作？进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。管要在酒精灯火焰周围；等等。将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均放到放到37370 0C C的恒温箱中，培养的恒温箱中，培养121224h24h后进行观察并后进行观察并记录结果。记录结果。1.1.未接种的培养基表面是否有菌落
30、生长？如果有菌未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？落生长，说明了什么？未接种的培养基在恒温箱中保温未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落生长，后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。2.2.在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似？菌落？它们的大小、形状、颜色相似？如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、颜色相似的菌落。形状、颜色相似的菌落。3.3.培养培养1
31、2h12h和和24h24h后，观察到的实验结果相同吗？如后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？果不同，请分析产生差异的原因？培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。4.4.如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。其可能的原因。无菌操作未达到要求：无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；可能是接种
32、时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。也可能是在培养的过程中受到了污染。1.1.试管低温临时保存试管低温临时保存 将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，培养成菌落将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，培养成菌落后，置于后，置于4 4OC C的冰箱中保存（每隔的冰箱中保存（每隔3 36 6个月要重新接种培个月要重新接种培养后再保存）。养后再保存）。2.2.甘油管长期保存甘油管长期保存 在在3mL3mL的甘油瓶中加入的甘油瓶中加入1mL1mL的甘油，高压灭菌。将的甘油，高压灭菌。将1mL1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于2020OC C
33、的的冷冻箱中保存。冷冻箱中保存。本课题知识小结本课题知识小结:课后练习课后练习 1.提示：可以从提示：可以从微生物生长需要哪些条件微生物生长需要哪些条件的角度的角度来思考。例如，微生物的生长需要水、空气、适宜来思考。例如，微生物的生长需要水、空气、适宜的温度，食品保存可以通过保持干燥、真空的条件，的温度，食品保存可以通过保持干燥、真空的条件，以及冷藏等方法来阻止微生物的生长。以及冷藏等方法来阻止微生物的生长。2.提示：可以从这三种培养技术的提示：可以从这三种培养技术的原理、操作步原理、操作步骤骤等方面分别进行总结归纳。例如，这三种培养技等方面分别进行总结归纳。例如，这三种培养技术都需要为培养物提供充足的营养，但无土栽培技术都需要为培养物提供充足的营养，但无土栽培技术的操作并不需要保证无菌的条件，而其他两种技术的操作并不需要保证无菌的条件，而其他两种技术都要求严格的无菌条件。术都要求严格的无菌条件。
