1、重大动物疫病采样重大动物疫病采样监测技术监测技术中牟县动物疫病预防控制中心一、畜禽血液采集技术一、畜禽血液采集技术v（一）、血液采集的要求：v1、所有采血用具均应事先消毒、干燥处理；v2、采血部位要进行剪毛、清拭并按常规进行消毒。v3、怀疑传染病时，采血过程要防止到处流散，检后的残余血液及所用器皿要进行消毒处理。v4、需抗凝的要加入抗凝剂。v5、需分离血清的血液，试管要静置、斜放，便于血清晰出。v6、注意安全。二、各种畜禽采样方法及部位二、各种畜禽采样方法及部位v（一）、牛:多采用颈静脉采血、尾静脉采血。v1、颈静脉采血一般在颈静脉沟的上1/3和中1/3交界处的颈静脉内。v2、尾静脉采血在尾根
2、腹侧中部。牛颈静脉采血牛颈静脉采血牛尾静脉采血（二）、猪：多采用耳静脉采血、前腔静脉采血v1、耳静脉采血（适用于大猪）在耳下缘1/2处。v2、前腔静脉采血，胸浅窝内，即在第一肋骨和胸骨柄结合处前方。猪耳静脉采血猪前腔静脉采血猪前腔静脉采血（三）、家禽：多采用鸡翅内侧静脉采血、鸡心脏采血v1、鸡翅内侧腋静脉，肉眼可见。v2、鸡心脏采血，鸡仰卧保定，鸡头部朝向，拔去胸上部少许羽毛，用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窝，右手持针，自胸骨上方凹窝斜向前下方心脏方向刺入，边刺边抽动活塞，若刺入心脏，便有血液涌入注射器，术毕，局部消毒。v注意：此法采血后，多会引起鸡只死亡，仅适用于淘汰鸡的采血。鸡翅静脉采
3、血鸡翅静脉采血鸡翅静脉采血鸡心脏采血三、畜禽病料采集技术三、畜禽病料采集技术v（一）、样品采集的原则（一）、样品采集的原则v1、适时采样。根据检测要求及检测对象和检验项目的不同，选择适当的采样时机十分重要。样品是有时间要求的，应严格按规定时间采样，有临床症状需要作病原分离的，样品必须在病初的发热期或症状典型时采样，病死的动物，应立即采样。v2、合理采样。根据诊断检测的要求，须严格按照规定采集各种足够数量的样品外，不同疫病的需检样品各异，应按可能的疫病侧重采样。对未能确定为何种疫病的，应全面采样。v3、典型采样。选取未经药物治疗、症状最典型或病变最明显的样品，如有并发症，还应兼顾采样。v4、无菌
4、采样。供病原学及血清学检验的样品，必须无菌操作采样，采样用具、容器均须无菌处理，尸体剖检需采集样品的，先采样后检查，以免人为污染样品。v5、适量采样。采集样品的数量要满足诊断检测的需要，并留有余地，以备必要时复检使用。v6、样品处理。采集的样品应一种样品一个容器，立即密封，根据样品的性状检验要求的不同，作暂时的冷藏、冷冻或其它处理。v7、安全采样。既要保护采样人员，以要防止病原外泄，还要防止样品受到污染。v8、样品包装。主要是密闭，防止样品损坏、污染和外泄等意外发生。v9、迅速送检。应尽快送实验室进行检测，延误送检时间，会影响到检测质量和结果的可靠性。四、组织样品的采集四、组织样品的采集v组织
5、样品一般由扑杀动物或病死动物解剖采集。从尸体采样时，先剥去动物胸腹部皮肤，以无菌器械将腹腔打开，根据检验目的和生前疫病的初步诊断，无菌采集不同的组织。v1、病毒检验样品。作病毒检验的组织，必须以无菌技术采集，组织应分别放入灭菌的容器内并立即密封，贴上标签，放入冷藏容器立即送实验室。如果时间较长，可作冻结状态运送。v2、细菌检验样品。供细菌检验的组织样品，应新鲜并以无菌技术采集。如遇尸体已经腐败，某些疫病的致病菌仍可采集于长骨或肋骨，从骨髓中分离细菌。采集的所有组织分别放入灭菌的容器内并立即密封，贴上标签，放入冷藏容器立即送实验室。猪解剖采样五、粪便样品的采集五、粪便样品的采集v1、病毒检验样品
6、。分离病毒的粪便必须新鲜。少量采集时，以灭菌的棉拭子从直肠深处或泄殖腔粘膜上蘸取粪便，并立即投入灭菌的试管内密封，或在试管内加入少量PH7.4的保护液再密封。贴上标签冷藏送实验室。v2、细菌检验样品。作细菌检验的粪便，最好在动物使用抗菌药物之前，从直肠或泄殖腔粘膜上采集，采样方法与供病毒检验的相同。可投入无菌缓冲盐水管内，贴上标签冷藏送实验室。v3、寄生虫检验样品。粪便样品应选取新排出的或直接从直肠内采得，以保持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态，一般寄生虫检验的粪便用量较多。采得的粪便以冷藏不冻结状态送实验室。粪便采集用品粪便采集用品粪便采集用品六、畜禽疫病的样品采集v（一）、口蹄疫样品的采集（
7、一）、口蹄疫样品的采集v口蹄疫病毒在病畜的水疱皮内及其淋巴液中口蹄疫病毒在病畜的水疱皮内及其淋巴液中含毒量最高。在水疱发展过程中，病毒进入含毒量最高。在水疱发展过程中，病毒进入血流，分布到全身各种组织和体液。在发热血流，分布到全身各种组织和体液。在发热期血液内的病毒含量最高，退热后在奶、尿、期血液内的病毒含量最高，退热后在奶、尿、口涎、泪、粪便等都含有一定量的病毒。口涎、泪、粪便等都含有一定量的病毒。v1、组织样品v（1）、样品的选择：用于病毒分离、鉴定的样品以发病动物未破裂的水泡皮和水泡液为最好。对临床健康但怀疑带毒的动物可在扑杀后采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品作为检测材料。v（2）、样品
8、的采集和保存：样品采集部位可用清水清洗(切忌使用酒精、碘酒等消毒剂消毒、擦拭)，剪取病畜的新鲜水泡皮35克放入灭菌小瓶中，加适量50甘油磷酸盐缓冲液(pH7.4)，加盖密封；也可采用无菌器具采集水泡液至少1毫升，装入灭菌小瓶中(可加适量抗菌素)，加盖密封。尽快冷冻保存。v（3）、在无法采集水泡皮和水泡液时，可采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品35克装入洁净小瓶内，加盖密封尽快冷冻保存。样品的包装瓶上均要贴上标签，写明采样地点，动物种类，编号，时间等。2、牛、羊(OP液)样品采集v（1）、样品采集：被检动物在采样前禁食(可饮水)12小时，以免胃内容物反流污染OP液。采样探杯在使用前经02柠檬酸或2
9、氢氧化钠浸泡5分钟，再用洁净水冲洗。每采完一头动物，探杯要重复进行消毒并充分清洗。采样时动物站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部1015cm处，轻轻来回移动23次，然后将探杯拉出。v（2）、样品的保存：将采集到的810mLOP液倒入25 mL以上的灭菌玻璃容器中，容器中应事先加有810mL磷酸缓冲液(0.04molL、pH74)，密封后充分摇匀后尽快冷冻保存，用于病原检测，做出追溯性诊断。3、血清样品采集v怀疑曾有疫情发生的畜群，错过组织样品采集时机时，可无菌操作采集动物血液，每头不少于10mL。无菌分离血清装入灭菌小瓶中，加盖密封后冷藏保存，通过检测抗体，做出追溯性诊断。猪口蹄疫样品采集羊
10、(OP液)样品采集牛(OP液)样品采集牛(OP液)样品采集（二）、禽流感的样品采集（二）、禽流感的样品采集v1、至少从5只濒死禽采集样品。样品包括：泄殖腔拭子和气管拭子(置于缓冲液中)各5个；气管和肺的混样5个，肠管及内容物的混样5个；肝、脾、肾和脑等组织样品各5个。v2、分别采集至少10个病鸡的血样。采集10只病禽的血样，使用一次性采血器，心脏或翅静脉采血，每只禽采血样2ml3ml，经离心或自然析出血清后，将血清移到指形管中。封好口，贴好标签。不同禽只的血样不能混合。（三）、猪瘟样品的采集v猪瘟病毒复制的主要部位是扁桃体，然后经淋巴管进入淋巴结，继续增殖，随即到达外周血液，从这时起病毒在脾、骨髓、内脏淋巴结和小肠的淋巴结组织繁殖到高滴度。v样品：全血、骨髓、淋巴结、扁桃体、肾脏、脾脏（四）、猪链球菌样品采集（四）、猪链球菌样品采集v致病性链球菌经呼吸道或其它途径（受损的皮肤和粘膜）进入机体后，首先在入侵处繁殖，很快进入淋巴管和淋巴结。继之冲破淋巴屏障，沿淋巴系统扩散到血液中，引起菌血症，最后导致各个实质器官严重病变。v样品：生前：抗凝全血 死后：肝脏、脾脏（五）、新城疫样品采集v新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分泌物和排泄物，以脑、脾和肺含毒量最高，骨髓含毒时间最长。v样品：眼分泌物、泄殖腔拭子、脾脏、气管粘膜、脑等。
