1、Jian Wang(王健)Johns Hopkins University广州医学院前言前言(Introduction)我国40岁以上人群COPD总患病率高达8.2%，大部分患者最终经慢性低氧性肺动脉高压（chronic hypoxic pulmonary hypertension,CHPH）而发展成为慢性肺源性心脏病。两个环节:肺血管急性低氧性收缩反应和慢性低氧性肺血管结构重建是CHPH发生的主要机制。前言前言(Introduction)急性低氧导致包括大鼠、猪、狗、绵羊、雪貂、牛等多种动物肺动脉的强烈收缩，慢性低氧引起包括人类、大鼠及绵羊肺动脉的结构重建。细胞内Ca2+浓度（Ca2+i）在
2、引起肌细胞的收缩和增殖的复杂机制中起至关重要的作用。VDCCROCCCa2+Ca2+Ca2+SOCCIP3RCa2+Ca2+ATPCa2+ATPCa2+Na+DAGOAGCPA TGIP3Ca2+STIMSOCE前言前言(Introduction)Store operated calcium channel(SOCC)主要由经典型瞬时受体电位（TRPC）蛋白家族成员组成,TRPC家族包括TRPC-1至TRPC-7。SOCE和TRPC蛋白在肺动脉平滑肌Ca2+i调节中发挥重要作用。前言前言 急性低氧性肺动脉收缩时Ca2+i的增加部分是由于SOCE 通过由TRPC组成的SOCC而造成。慢性低氧大鼠
3、肺动脉平滑肌Ca2+i和SOCE增加，TRPC蛋白参与慢性低氧诱导的肺动脉平滑肌Ca2+i升高。CHPH急性低氧急性低氧SOCECaCa2+2+i i血管收缩血管收缩？PA肺循环外周阻力肺循环外周阻力TRPCCa2+内流内流CaCa2+2+i i血管重塑血管重塑慢性低氧慢性低氧？PA？研究目的研究目的(Aims)以大鼠远端肺动脉平滑肌、远端以大鼠远端肺动脉平滑肌、远端PASMCs及及CHPH大鼠模型为研究对象，深入探讨大鼠模型为研究对象，深入探讨性低氧对大鼠远性低氧对大鼠远PASMC Ca2+i的影响及的影响及机制。机制。1急性低氧对急性低氧对大鼠远端肺动脉平滑肌大鼠远端肺动脉平滑肌细胞内钙浓
4、度的影响细胞内钙浓度的影响 Effect of acute hypoxia on calcium singling in pulmonary arterial smooth muscle cells 方法方法(Methods)酶消化法原代培养大鼠远端酶消化法原代培养大鼠远端PASMCs 形态学、免疫学及功能鉴定形态学、免疫学及功能鉴定PASMCs 细胞内钙浓度检测系统观测急性低氧细胞内钙浓度检测系统观测急性低氧(4%O2)对大鼠远端对大鼠远端PASMC Ca2+i的影响的影响Phase contrast microscopy of distal PASMCs cultured for 3-6
5、days.Cells showed spindle-shaped morphology.Smooth muscle specific a a-actin antibody identified a a-actin(shown in red)in 95%cultured cells.The nuclear marker YO-PRO-1 is shown in green.ImmunocytochemistryRat Distal PASMCsMorphology高钾高钾KRBS溶液对大鼠远端溶液对大鼠远端PASMC Ca2+i的影的影响及响及5M硝苯地平的干预作用硝苯地平的干预作用-50050
6、1001502000510152025Time(min)Ca 2+i(nM)controlKCLKCL+Nifed050100150200250Ca 2+i(nM)controlKCLKCL+NifedAB-500501001502000510152025Time(min)Ca 2+i(nM)controlKCLKCL+Nifed050100150200250Ca 2+i(nM)controlKCLKCL+NifedAB-500501001502000510152025Time(min)Ca 2+i(nM)controlKCLKCL+Nifed-500501001502000510152025
7、Time(min)Ca 2+i(nM)controlKCLKCL+NifedcontrolKCLKCL+Nifed050100150200250Ca 2+i(nM)controlKCLKCL+Nifed050100150200250Ca 2+i(nM)controlKCLKCL+NifedcontrolKCLKCL+NifedABA：时间曲线，：时间曲线，B：峰值。：峰值。control组组n=5,细胞数细胞数=138；KCL组组n=6，细胞数，细胞数=171；KCL+Nifed组组n=5，细胞数细胞数=145。：。：P0.01 vs control；：P0.01 vs KCL。急性低氧对大鼠
8、远端急性低氧对大鼠远端PASMCPASMCCa2+i的影响的影响 4%O216%O2-200204060800102030timeCa 2+i(nM)A0204060801004%O216%O2Ca 2+i(nM)B4%O216%O2-200204060800102030timeCa 2+i(nM)4%O216%O24%O216%O24%O216%O2-20020406080-200204060800102030timeCa 2+i(nM)A0204060801004%O216%O2Ca 2+i(nM)BA0204060801004%O216%O2Ca 2+i(nM)0204060801004
9、%O216%O2Ca 2+i(nM)BA：时间曲线，：时间曲线，B：峰值。：峰值。4O2组组n=8，细胞数，细胞数=166；16O2组组n=6，细胞数，细胞数=133，：，：P0.001。小结小结 1(Summary 1)原代培养原代培养PASMCsPASMCs是研究低氧造成肺动脉病理生理及病理是研究低氧造成肺动脉病理生理及病理改变的首要前提。改变的首要前提。在低氧及各种血管活性物质刺激下，肺动脉发生的血管在低氧及各种血管活性物质刺激下，肺动脉发生的血管收缩反应和结构重建主要定位于肺内远端肺动脉收缩反应和结构重建主要定位于肺内远端肺动脉(肺内肺内4 4级分支以下的肺动脉级分支以下的肺动脉)。培
10、养细胞呈长梭形，表现典型的血管平滑肌细胞生长特培养细胞呈长梭形，表现典型的血管平滑肌细胞生长特点，即点，即“峰谷峰谷”状生长。状生长。60mM高钾溶液使培养的高钾溶液使培养的PASMCCa2+i增高，增高，5M硝苯硝苯地平能完全阻断此反应，说明培养的地平能完全阻断此反应，说明培养的PASMC表达具有完表达具有完好功能的好功能的VDCC通道。通道。小结小结 2 CaCa2+2+是重要的第二信使，调节细胞的许多生理过程，也是重要的第二信使，调节细胞的许多生理过程，也包括肺血管平滑肌的急性收缩反应和慢性增殖过程。包括肺血管平滑肌的急性收缩反应和慢性增殖过程。无论外部各种因素调控肺血管平滑肌细胞收缩和
11、增殖无论外部各种因素调控肺血管平滑肌细胞收缩和增殖的机制如何复杂，最后都归结于各种因素对于肺血管的机制如何复杂，最后都归结于各种因素对于肺血管平滑肌细胞平滑肌细胞CaCa2+2+i i的影响。的影响。小结小结 3 急性低氧能使大鼠、羊、猫、人等肺动脉平滑肌细胞的急性低氧能使大鼠、羊、猫、人等肺动脉平滑肌细胞的CaCa2+2+i i升高。升高。我们发现：急性低氧也能使大鼠远端我们发现：急性低氧也能使大鼠远端PASMC CaPASMC Ca2+2+i i升高升高，提示急性低氧可能通过升高，提示急性低氧可能通过升高CaCa2+2+i i参与肺动脉平滑肌参与肺动脉平滑肌的急性低氧性收缩反应。的急性低氧
12、性收缩反应。小结小结急性低氧急性低氧Ca2+i二二.急性低氧对大鼠远端急性低氧对大鼠远端肺脉平滑肺脉平滑肌细胞内钙浓度肌细胞内钙浓度影响的机制影响的机制方法方法 PASMCPA正常正常SOCE的检测的检测急性低氧对急性低氧对SOCE的影响的影响TRPC表达表达硝苯地平对急性低氧硝苯地平对急性低氧诱导诱导PASMCCa2+i升高的干预升高的干预恢复细胞外钙恢复细胞外钙 锰荧光焠灭锰荧光焠灭 SOCC拮抗剂干预拮抗剂干预荧光定量荧光定量PCR Western-blot Ca2+i检测系统检测系统5M硝苯地平对急性低氧诱导大鼠远端硝苯地平对急性低氧诱导大鼠远端PASMC Ca2+i升高的影响升高的影
13、响 A A：时间曲线，：时间曲线，B B：峰值。：峰值。4 4O O2 2组组n=7n=7，细胞数，细胞数=146=146；4 4O O2 2+Nifed+Nifed组组n=6n=6，细胞数，细胞数=128=128，：，：P P0.001 0.001 0204060801004%O24%O2+NifedCa 2+i(nM)AB-200204060800102030time(min)Ca 2+i(nM)4%O24%O2+Nifed0204060801004%O24%O2+NifedCa 2+i(nM)AB0204060801004%O24%O2+NifedCa 2+i(nM)0204060801
14、000204060801004%O24%O2+NifedCa 2+i(nM)AB-200204060800102030time(min)Ca 2+i(nM)4%O24%O2+Nifed-200204060800102030time(min)Ca 2+i(nM)-200204060800102030time(min)Ca 2+i(nM)4%O24%O2+Nifed4%O24%O2+Nifed4%O24%O2+Nifed结果结果(Results)大鼠远端肺动脉平滑肌组织及培养的大鼠远端肺动脉平滑肌组织及培养的PASMCs TRPC的的 mRNA表达的表达的PCR结果结果 大鼠远端肺动脉平滑肌组织及
15、培养的大鼠远端肺动脉平滑肌组织及培养的PASMCPASMC的的TRPC1TRPC1、TRPC4TRPC4和和TRPC6TRPC6的的WesternWestern结果结果 恢复细胞外钙法检测大鼠远端恢复细胞外钙法检测大鼠远端PASMCs SOCE A：时间曲线，：时间曲线，B：峰值。：峰值。Nifed+CPA组组n=8，细胞数，细胞数=239；Nifed 组组n=6，细胞数，细胞数=168，：，：P0.001 SOCE锰荧光焠灭法检测大鼠远端锰荧光焠灭法检测大鼠远端PASMCs SOCE A：时间曲线，：时间曲线，B：峰值。：峰值。+CPA组组n=7，细胞数，细胞数=177；-CPA组组n=5，
16、细胞数，细胞数=137，：，：P0.001。恢复细胞外钙法观测恢复细胞外钙法观测SKF-96365和和NiCl2分别对大鼠远端分别对大鼠远端PASMCs SOCE的影响的影响 锰荧光焠灭法观测锰荧光焠灭法观测SKF-96365和和NiCl2分别对大鼠远端分别对大鼠远端PASMCs SOCE的影响的影响 SKF,Ni2+and La3+对高钾对高钾KRBS溶液诱溶液诱导大鼠远端导大鼠远端PASMCCa2+i升高的影响升高的影响 急性低氧对大鼠远端急性低氧对大鼠远端PASMC SOCE的影响的影响 不存在不存在CPA的情况下，的情况下，急性低氧对急性低氧对大鼠大鼠远端远端PASMC锰荧光焠灭的影响
17、锰荧光焠灭的影响 A：时间曲线，：时间曲线，B：峰值。：峰值。16O2（no Mn2+）组）组n=5，细胞数，细胞数=141；16O2组组n=5，细胞数，细胞数=114，与与16O2（no Mn2+）组比较）组比较P0.4；4O2组组n=5，细胞数，细胞数=136，与，与16O2组比较组比较P0.001。607080901001100510F/F0at 360 nM(%)4%O216%O216%O2(no Mn2+)Time(min)Nifed+0 Ca2+Mn2+(200 M)0-10-20-30-4016%O216%O24%O2Mn2+F/F0at 360 nM(%)AB607080901
18、001100510F/F0at 360 nM(%)4%O216%O216%O2(no Mn2+)4%O216%O216%O2(no Mn2+)Time(min)Nifed+0 Ca2+Nifed+0 Ca2+Mn2+(200 M)Mn2+(200 M)0-10-20-30-4016%O216%O24%O2Mn2+0-10-20-30-4016%O216%O24%O2Mn2+F/F0at 360 nM(%)AB存在存在CPA的情况下，的情况下，急性低氧对急性低氧对大鼠远大鼠远端端PASMC锰荧光焠灭的影响锰荧光焠灭的影响 A A：时间曲线，：时间曲线，B B：峰值。：峰值。1616O O2 2组
19、组n=5n=5，细胞数，细胞数=119=119；4 4O O2 2组组n=5n=5，细胞数，细胞数=112=112，：，：P P0.001 0.001-30-40-50-60-7016%O24%O2F/F0at 360 nM(%)B405060708090100110051016%O24%O2F/F0at 360 nM(%)Mn2+(200 M)Nifed+CPA+0 Ca2+A-30-40-50-60-7016%O24%O2-30-40-50-60-7016%O24%O2F/F0at 360 nM(%)B405060708090100110051016%O24%O216%O24%O2F/F0
20、at 360 nM(%)Mn2+(200 M)Mn2+(200 M)Nifed+CPA+0 Ca2+ASKF-96365和和NiCl2分别对急性低氧诱导的大鼠远端分别对急性低氧诱导的大鼠远端 PASMCs SOCE的影响的影响 急性低氧使大鼠远端急性低氧使大鼠远端PASMCCa2+i升高，而升高，而VDCC拮拮抗剂硝苯地平只能部分抑制急性低氧引起的抗剂硝苯地平只能部分抑制急性低氧引起的PASMCCa2+i升高升高,提示急性低氧通过激活大鼠远端提示急性低氧通过激活大鼠远端PASMCPASMC的的VDCCVDCC和另外的非和另外的非VDCCVDCC依赖的通道导致依赖的通道导致CaCa2+2+内流内
21、流，进而引起，进而引起CaCa2+2+i i升高。升高。SOCE在调解细胞内钙平衡发挥重要作用在调解细胞内钙平衡发挥重要作用,广泛存在于广泛存在于星形胶质细胞、气道平滑肌细胞、心肌细胞、主动脉平星形胶质细胞、气道平滑肌细胞、心肌细胞、主动脉平滑肌细胞、肺动脉平滑肌细胞及肺动脉内皮细胞等。滑肌细胞、肺动脉平滑肌细胞及肺动脉内皮细胞等。小结小结1 我们运用恢复细胞外钙法和锰荧光焠灭法我们运用恢复细胞外钙法和锰荧光焠灭法,发现发现CPACPA能使能使PASMCsPASMCs中的中的 CaCa2+2+i i迅速显著升高，锰荧光焠灭增强，且能迅速显著升高，锰荧光焠灭增强，且能被被SOCCSOCC拮抗剂显
22、著抑制，表明大鼠远端拮抗剂显著抑制，表明大鼠远端PASMCPASMC存在存在SOCESOCE。TRPCTRPC蛋白参与组成蛋白参与组成SOCCSOCC，大鼠远端肺静脉平滑肌主要表达，大鼠远端肺静脉平滑肌主要表达TRPC-1TRPC-1、TRPC-4TRPC-4和和TRPC-6TRPC-6，且尤其以，且尤其以TRPC-1TRPC-1和和TRPC-6TRPC-6的蛋的蛋白表达最强。白表达最强。小结小结2 用含有用含有CPACPA和硝苯地平的无钙溶液孵育和硝苯地平的无钙溶液孵育PASMCsPASMCs，急性低氧，急性低氧不仅能显著增加由恢复细胞外钙所引起的不仅能显著增加由恢复细胞外钙所引起的CaCa
23、2+2+i i升高，而升高，而且能显著增加锰荧光焠灭。且能显著增加锰荧光焠灭。以上两种反应均能被以上两种反应均能被SOCCSOCC拮抗剂阻断。拮抗剂阻断。急性低氧通过增强由急性低氧通过增强由SOCCSOCC介导的介导的SOCESOCE，进而引起，进而引起PASMCPASMC的的CaCa2+2+i i升高。升高。小结小结3 用不含用不含CPACPA但含硝苯地平的无钙溶液孵育但含硝苯地平的无钙溶液孵育PASMCsPASMCs，常氧时，常氧时，锰荧光焠灭与，锰荧光焠灭与细胞的荧光自发衰减量没有差异，细胞的荧光自发衰减量没有差异，而在急而在急性低氧时，锰荧光焠灭显著增加，且此反应能被性低氧时，锰荧光焠
24、灭显著增加，且此反应能被SOCCSOCC拮抗拮抗剂显著抑制，表明急性低氧能够诱发剂显著抑制，表明急性低氧能够诱发SOCESOCE。急性低氧时用含有急性低氧时用含有CPACPA和硝苯地平的无钙溶液孵育和硝苯地平的无钙溶液孵育PASMCPASMC，锰荧光焠灭显著增加，且能被锰荧光焠灭显著增加，且能被SOCCSOCC拮抗剂显著抑制，表明拮抗剂显著抑制，表明急性低氧能够放大由急性低氧能够放大由CPACPA诱导的诱导的SOCESOCE。急性低氧的这些作用可能由于低氧加速了急性低氧的这些作用可能由于低氧加速了CaCa2+2+从肌浆网清从肌浆网清空，也可能是由于低氧增强了与肌浆网钙耗竭信号耦联的空，也可能是
25、由于低氧增强了与肌浆网钙耗竭信号耦联的SOCCSOCC的活性。的活性。小结小结4小结小结TRPC-1TRPC-4TRPC-6SOCE急性低氧急性低氧Ca2+i SOCE 三三.慢性低氧对大鼠远端慢性低氧对大鼠远端肺动脉平滑肺动脉平滑肌细胞内钙浓度肌细胞内钙浓度的影响的影响方法方法 常压持续低氧（常压持续低氧（10%O10%O2 2）2121天的方法建立天的方法建立CHPHCHPH大鼠模型大鼠模型，观测，观测MPAPMPAP、RVSPRVSP、RV/(LV+S)RV/(LV+S)及肺血管形态学改变。及肺血管形态学改变。分离正常大鼠和分离正常大鼠和CHPHCHPH大鼠的远端大鼠的远端PASMCsP
26、ASMCs，细胞内钙浓度，细胞内钙浓度检测系统检测正常大鼠和检测系统检测正常大鼠和CHPHCHPH大鼠大鼠PASMCsPASMCs Ca Ca2+2+i i。结果结果n=6，*:P0.01MPAP（mmHg）PVSP（mmHg）RV/(LV+S)正常组正常组10.80.6325.31.020.270.01低氧组低氧组26.50.84*54.61.87*0.560.04*慢性持续低氧对大鼠慢性持续低氧对大鼠MPAP、RVSP及及RV/(LV+S)的影响的影响慢性低氧对大鼠肺内血管结构重建的影响慢性低氧对大鼠肺内血管结构重建的影响 A:低氧组，低氧组，B:常氧组常氧组 A B 慢性低氧对大鼠远端慢
27、性低氧对大鼠远端PASMCCa2+i的影响的影响 常氧组常氧组n=5，细胞数，细胞数=112，低氧组，低氧组n=5，细胞数，细胞数=104，：，：P0.001 050100150200NormoxiaHypoxiaBasic Ca2+i(nM)050100150200NormoxiaHypoxiaBasic Ca2+i(nM)讨论讨论 本实验以本实验以10%O10%O2 2饲养大鼠饲养大鼠3 3周，低氧大鼠周，低氧大鼠MPAPMPAPRVSPRVSP及及RV/(LV+S)RV/(LV+S)较正常大鼠明显增高，肺内血管较正常大鼠明显增高，肺内血管较正常大鼠明显增厚，提示慢性低氧通过直接或较正常大
28、鼠明显增厚，提示慢性低氧通过直接或间接作用导致肺血管重构，肺动脉压升高，右心间接作用导致肺血管重构，肺动脉压升高，右心室肥大。常压持续低氧能很好复制室肥大。常压持续低氧能很好复制CHPHCHPH模型。模型。慢性低氧能使大鼠远端慢性低氧能使大鼠远端PASMCsPASMCs中中 CaCa2+2+i i的升高，的升高，提示慢性低氧诱导的提示慢性低氧诱导的CaCa2+2+i i升高参与慢性肺血管升高参与慢性肺血管结构重建。结构重建。小结小结慢性低氧慢性低氧Ca2+iCHPH四四.慢性低氧对大鼠远端慢性低氧对大鼠远端肺动脉平滑肺动脉平滑肌细胞内钙浓度肌细胞内钙浓度影响的机制影响的机制方法方法10%O2或
29、常氧或常氧3周周PA PASMCTRPC表达表达荧光定量荧光定量PCR Western-blot CPA诱导诱导OAG诱导诱导恢复细胞外钙恢复细胞外钙 锰荧光焠灭锰荧光焠灭 Ca2+i检测系统检测系统结果结果TRPC gene&protein expression bp600400300300200-actinTRPC1TRPC6NCHNCH0.20.40.60.8RNA levelTRPC/-actin0MTRPC1 TRPC6N CHN CH600400300TRPC4NCHM300200TRPC4N CH124208124101KDa52TRPC1NCH0.20.40.60.8Prote
30、in levelTRPC/-actina0TRPC1N CH 116519851TRPC4NCH 10165a-actin52TRPC6NCH TRPC4TRPC6N CH1.0N CH慢慢性低氧对性低氧对CPA诱导的大鼠诱导的大鼠远端远端PASMC Ca2+i变化的影响变化的影响 406080Mn (200 M)2+5100F/F at 360 nm(%)0 Normoxia+CPA Chronic hypoxia+CPA10015Time(min)02040 0300200400100 Ca (nM)2+iCPA+Nifed0 Ca2+1030-10050Time(min)Normoxia
31、Chronic hypoxiaAB慢慢性低氧对性低氧对CPACPA诱导的大鼠诱导的大鼠远端远端PASMCPASMC锰荧光焠灭的影响锰荧光焠灭的影响 Normoxia+0 CPA Chronic hypoxia+0 CPA CH+0 CPA50 M SKF+CH+0 CPA500 M Ni+CH+0 CPA2+F/F at 360 nm(%)0708090100110510015Mn(200 M)2+F/F at 360 nm(%)0708090100110Mn(200 M)2+Time(min)510015ABBasal Mn2+quenching(Ca2+entry)in PASMCs 讨论
32、讨论 慢性低氧能上调肺动脉平滑肌慢性低氧能上调肺动脉平滑肌TRPC1,TRPC6TRPC1,TRPC6的的mRNAmRNA水平和水平和蛋白质水平的表达，但对蛋白质水平的表达，但对TTRPC4TTRPC4的表达水平无影响。的表达水平无影响。CHPHCHPH大鼠远端肺动脉平滑肌大鼠远端肺动脉平滑肌TRPC1,-6TRPC1,-6表达上调，提示表达上调，提示TRPC1,-6TRPC1,-6可能在慢性低氧诱导的大鼠远端肺动脉平滑肌可能在慢性低氧诱导的大鼠远端肺动脉平滑肌CaCa2+2+i i的改变中扮演重要角色。的改变中扮演重要角色。恢复细胞外钙和锰荧光焠灭实验证实：慢性低氧对大鼠远恢复细胞外钙和锰荧
33、光焠灭实验证实：慢性低氧对大鼠远端端PASMCsPASMCs的的SOCESOCE并无影响并无影响 ，可能原因是慢性低氧对编码，可能原因是慢性低氧对编码SOCCSOCC通道的基因（通道的基因（TRPC4TRPC4）的表达没有影响。）的表达没有影响。讨论讨论 TRPC1-6TRPC1-6主要参与组成主要参与组成SOCC,ROCCSOCC,ROCC，ROCCROCC被被DAGDAG或或OAGOAG激活激活后导致细胞外后导致细胞外CaCa2+2+内流。内流。恢复细胞外钙和锰荧光焠灭实验证实：恢复细胞外钙和锰荧光焠灭实验证实：CHPHCHPH大鼠远端大鼠远端PASMCsPASMCs由低氧诱导的由低氧诱导
34、的CaCa2+2+内流和锰荧光焠灭较常氧组增强内流和锰荧光焠灭较常氧组增强，提示慢性低氧时经由，提示慢性低氧时经由PASMCPASMC的的SOCC,ROCCSOCC,ROCC的的CaCa2+2+内流增内流增加，导致加，导致CaCa2+2+i i升高。升高。慢性低氧时大鼠远端慢性低氧时大鼠远端PASMCPASMC的的CaCa2+2+i i升高主要是由于慢性升高主要是由于慢性低氧时低氧时TRPC1,-6TRPC1,-6蛋白表达上调、主要由蛋白表达上调、主要由TRPC1,-6TRPC1,-6蛋白组蛋白组成的成的SOCC and ROCCSOCC and ROCC通道增加，进而导致由通道增加，进而导致
35、由CaCa2+2+内流增加内流增加。小结小结慢性低氧慢性低氧Ca2+i Ca2+内流内流TRPC1,-6结论结论1、急性和慢性低氧都能使大鼠远端肺动脉平滑肌细胞内钙、急性和慢性低氧都能使大鼠远端肺动脉平滑肌细胞内钙浓度升高。浓度升高。2、大鼠远端肺动脉平滑肌主要表达、大鼠远端肺动脉平滑肌主要表达TRPC-1、TRPC-4和和TRPC-6，尤以，尤以TRPC-1和和TRPC-6为主。为主。3、急性低氧不仅自身能够诱发大鼠远端肺动脉平滑肌细胞、急性低氧不仅自身能够诱发大鼠远端肺动脉平滑肌细胞的的SOCE，而且能够放大，而且能够放大SOCE，从而引起细胞内钙浓度，从而引起细胞内钙浓度升高。升高。4、慢性低氧能上调大鼠远端肺动脉平滑肌、慢性低氧能上调大鼠远端肺动脉平滑肌TRPC1，-6的表的表达，使主要由由达，使主要由由TRPC1蛋白组成的蛋白组成的SOCC增加增加,TRPC6蛋蛋白组成的白组成的ROCC增加，导致增加，导致Ca2+内流增加，从而引起细胞内流增加，从而引起细胞内钙浓度升高。内钙浓度升高。致谢致谢 Prof.Sylvester and Prof.Shimoda,Prof.Semenza(Johns Hopkins University)钟南山教授钟南山教授,冉丕鑫教授冉丕鑫教授(广州医学院广州医学院)
