1、药物制剂微生物检验药物制剂微生物检验目录目录l1、微生物检验分类l2、药品微生物限度检测的基本条件l3、非灭菌制剂的微生物限度检查l4、灭菌制剂的无菌检查法一、微生物检验分类一、微生物检验分类内容内容无菌检查无菌检查微生物限度检查微生物限度检查微生物总数检查微生物总数检查控制菌检查控制菌检查细菌数检查细菌数检查霉菌和酵母菌检查霉菌和酵母菌检查大肠埃希菌大肠埃希菌大肠菌群大肠菌群沙门菌沙门菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌梭菌梭菌白色念珠菌白色念珠菌非全检，检查种类与非全检，检查种类与剂型、给药途径、原剂型、给药途径、原料来源等有关。料来源等有关。无菌检查无菌检查l凡直接进入
2、人体血液循环系统、肌肉、皮下组织或接触创伤、溃疡部位而发生作用的制品或要求无菌的材料、灭菌器具都要进行无菌检查。注射用制剂：注射剂、输液、注射粉针等；眼用制剂：滴眼剂、眼用膜剂、凝胶剂、软膏剂等；植入型制剂：植入片等；创面用制剂：溃疡、烧伤及外伤用溶剂、软膏剂及气雾剂等手术用制剂、止血海绵、骨蜡等二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件检查环境和人员要求环境要求:无菌室内进行。背景洁净度C级下的局部A级(洁净操作台），单向流空气。操作人员：卫生、着装符合要求。操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。二、药品微
3、生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件方方法法 由于某些供试品具有抗菌活性，在建由于某些供试品具有抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。进行验证。二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件取取样样量量1 1.检测用量检测用量所有剂型所有剂型2 2个个最小包装最小包装大蜜丸大蜜丸4 4丸丸膜剂膜剂4 4片片2 2.检测量检测量半半/固体制剂：固体制剂：10g1
4、0g液体制剂：液体制剂：10ml10ml膜剂：膜剂：100cm100cm二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件检查菌培养基培养温度培养时间细菌数营养琼脂30353 days真菌数玫瑰红钠琼脂23285 days酵母菌数酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂23285 days控制菌细菌：3035真菌：2328培培养养条条件件二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件供试品供试品检出控制菌或其它致病菌时检出控制菌或其它致病菌时，按一次检，按一次检出结果为准，出结果为准，不再复试。不再复试。供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任
5、何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以中随机抽样，独立复试两次，以3 3次结果的平均次结果的平均值报告菌数。值报告菌数。供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。的规定，判供试品不符合规定。结结果果判判断断第三节第三节 药品微生物限度检测方法药品微生物限度检测方法微生物检验基本流程微生物检验基本流程
6、l1、领取并配制培养基l2、擦拭工作台及墙壁l3、开启紫外灯灭菌1hl4、进行微生物实验l5、实验完成后再次擦拭工作台二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查l1、平皿法数据数据处理处理混合平板混合平板的制备的制备细 菌、真细 菌、真菌的培养菌的培养检查结果、检查结果、观察与计数观察与计数供试液供试液的制备的制备书写检验书写检验记录单记录单二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查1.1.平皿法平皿法1010-2-21010-2-21010-2-21010-2-21010-3-31010-3-31010-3-31010-3-3倒置培养倒置培养3d3d营养琼
7、脂营养琼脂培养基培养基30353035玫 瑰 红 钠玫 瑰 红 钠琼 脂 培 养琼 脂 培 养基基倒置培养倒置培养5d5d23282328 对照对照对照对照对照对照对照对照1.0ml1.0ml9.0ml9.0ml 稀释液稀释液10g/10g/ml ml 供试品供试品 9.0ml9.0ml1010-2-21010-1-11.0ml1.0ml 9.0ml9.0ml1010-3-31.0ml1.0ml1010-1-11010-1-11010-1-11010-1-11010倍递增稀释法倍递增稀释法二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查10g10g或或10ml10ml 供试品供试品
8、 10101 1供试液供试液取相当于取相当于1g1g或或1ml1ml供试液用滤膜过滤、供试液用滤膜过滤、冲洗冲洗取下滤膜，菌面朝取下滤膜，菌面朝上放培养基上培养上放培养基上培养结果观察结果观察 与计数与计数数据数据处理处理书 写 检 验书 写 检 验记录单记录单2.2.薄膜过滤法薄膜过滤法封闭式薄膜过滤器封闭式薄膜过滤器传统开放式薄膜过滤器传统开放式薄膜过滤器二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.3.操作注意事项操作注意事项1.1.尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。一个菌落，否则将会导致重大的
9、技术误差。2.2.为防止细菌增殖及产生菌苔，制为防止细菌增殖及产生菌苔，制成供试液后，应尽快稀释，注皿。成供试液后，应尽快稀释，注皿。一般稀释后应在一般稀释后应在1 1小时内操作完毕。小时内操作完毕。二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.3.操作注意事项操作注意事项3.3.使用吸量管时，应小心沿管壁加入，不使用吸量管时，应小心沿管壁加入，不用触及管内溶液，以防吸管尖端外侧黏附用触及管内溶液，以防吸管尖端外侧黏附的溶液混入其中。的溶液混入其中。4.4.注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落往使平板计
10、数结果受影响，如低稀释时菌落少。而高释释度时菌落数反而增大。遇此情少。而高释释度时菌落数反而增大。遇此情况应重复检验，以确定是防腐剂影响还是操况应重复检验，以确定是防腐剂影响还是操作技术误差。作技术误差。二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.3.操作注意事项操作注意事项5.5.为检查和控制灭菌效果，应做空白对照，为检查和控制灭菌效果，应做空白对照，以检验所使用的物品是否彻底灭菌及检验过以检验所使用的物品是否彻底灭菌及检验过程是否无菌操作。程是否无菌操作。6.6.为便于区别药品中的颗粒与菌落，可在为便于区别药品中的颗粒与菌落，可在每每100mL 100mL 营养琼脂中加
11、入营养琼脂中加入1mL0.51mL0.5的的TTC TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而药品的颗粒颜色无变化。而药品的颗粒颜色无变化。二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查4.4.菌落计数及报告方法菌落计数及报告方法 宜选取细菌、酵母菌平均菌落数在宜选取细菌、酵母菌平均菌落数在30-30030-300之间、霉菌之间、霉菌平均菌落数小于平均菌落数小于100 cfu100 cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。有效数字）的依据。（1 1）当仅有）当仅有1 1个稀释级的菌落数符合上述
12、规定，以该级的个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数;当有当有2 2个或个或2 2个以上稀释个以上稀释级的菌落数符合上述规定，以最高的平均菌落数乘以稀释倍级的菌落数符合上述规定，以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告之。数的值报告之。（2 2）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1 1时，以时，以1 1乘以最低乘以最低稀释倍数的值报告菌数。稀释倍数的值报告菌数。二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌
13、数检查例次各稀释级（供试液1ml/皿）平均菌落数（cfu）报告方式(CFU/g,ml，10cm2）原液10-110-210-316482640242064864003不可计4206464000400.50 100500 1006000 107000 14.4.菌落计数及报告方法菌落计数及报告方法细菌总数平均菌落数细菌总数平均菌落数稀释倍数稀释倍数二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查l当有两个相邻稀释级的菌落数在当有两个相邻稀释级的菌落数在30-300之间之间比值比值2 2时，则以时，则以2 2个稀释级的平均值报告。比值个稀释级的平均值报告。比值2 2时，则以低时，则以低
14、稀释级的平板菌落数乘以稀释倍数报告。稀释级的平板菌落数乘以稀释倍数报告。编号编号各稀释度菌落数各稀释度菌落数比值比值 菌落数菌落数报告数报告数1 101 1021 10322760295461.6377503800022890271602.22710027000高稀释级的平板菌落数高稀释级的平板菌落数*稀释倍数稀释倍数比值比值=低稀释级的平板菌落数低稀释级的平板菌落数*稀释倍数稀释倍数细菌总数检查表细菌总数检查表l培养温度：30-35l培养基名称：营养琼脂培养基（批号：14040901）菌菌 落落 数数（cfu)稀释度10-110-2培养时间（h)244872244872平皿号123平均菌落数
15、特殊药品微生物限度检验特殊药品微生物限度检验 品品 种种检测项检测项聚维酮碘溶液聚维酮碘溶液氧氟沙星滴耳氧氟沙星滴耳液液盐酸利多卡因盐酸利多卡因胶浆胶浆脑得生袋泡茶脑得生袋泡茶细菌数20cfu/ml20cfu/ml200cfu/g200cfu/g霉菌与酵母菌数20cfu/ml2cfu/ml20cfu/g20cfu/g其它金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠球菌不得检出/ml金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌不得检出/ml大肠埃希菌不得检出/ml大肠埃希菌不得检出/ml大肠菌群20 cfu/g三、控制菌检查检查项目三、控制菌检查检查项目（1 1）阴性对照阴性对照试验：取稀释液试验：取稀释液10ml1
16、0ml按相应按相应供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。（2 2）阳性对照阳性对照试验：供试品试验：供试品+10100CFU+10100CFU 阳阳性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。（3 3）供试品供试品控制菌检查：依相应的检查方控制菌检查：依相应的检查方法进行。法进行。三、控制菌检查检查流程三、控制菌检查检查流程供试品供试品增菌培养增菌培养分离培养分离培养纯培养纯培养染色镜检染色镜检生化反应试验生化反应试验报告结果报告结果三、控制菌检查检查流程三、控制菌检查检查流程1.1.增菌培增菌培养目的养目的使被检药物中的使被检药物中的
17、被检菌增殖，避被检菌增殖，避免出现漏检。免出现漏检。三、控制菌检查检查流程三、控制菌检查检查流程2.2.分离培分离培养目的养目的经增殖培养后经增殖培养后,被检菌大被检菌大量繁殖，同时其他一些量繁殖，同时其他一些杂菌也出现增殖。因此杂菌也出现增殖。因此分离培养能使目的菌从分离培养能使目的菌从混合菌中分离出来。混合菌中分离出来。三、控制菌检查检查流程三、控制菌检查检查流程3.3.纯培养纯培养目的目的只是大量增殖被检菌，只是大量增殖被检菌，用于后面的进一步检验。用于后面的进一步检验。三、控制菌检查检查流程三、控制菌检查检查流程4.4.染色镜染色镜检目的检目的初步鉴定，观察细菌的初步鉴定，观察细菌的形
18、态大小。形态大小。三、控制菌检查检查流程三、控制菌检查检查流程5.5.生化试生化试验目的验目的最终的鉴定依据，最终的鉴定依据，结合染色镜检得出结合染色镜检得出实验结果，填写检实验结果，填写检验报告。验报告。三、控制菌检查大肠埃希菌检查三、控制菌检查大肠埃希菌检查大肠埃希菌大肠埃希菌 俗称大肠杆菌，属肠杆俗称大肠杆菌，属肠杆菌科埃希菌属，革兰阴性杆菌科埃希菌属，革兰阴性杆菌，兼性厌氧菌，能发酵多菌，兼性厌氧菌，能发酵多种糖产酸产气。种糖产酸产气。三、控制菌检查大肠埃希菌检查三、控制菌检查大肠埃希菌检查大肠埃希菌检查意义大肠埃希菌检查意义 大肠埃希菌为条件致病菌，当人体免疫力低下或大肠埃希菌为条件
19、致病菌，当人体免疫力低下或是侵入肠外组织、器官，可引起肠外感染，乃至败是侵入肠外组织、器官，可引起肠外感染，乃至败血症。也可随人和动物的粪便排出体外，污染环境，血症。也可随人和动物的粪便排出体外，污染环境，一旦食品、药品、水等物品中检出该菌，说明已受一旦食品、药品、水等物品中检出该菌，说明已受粪便污染，可能存在其他肠道致病菌和寄生虫卵，粪便污染，可能存在其他肠道致病菌和寄生虫卵，人们饮用或服用它们则可能引起消化道传染病。人们饮用或服用它们则可能引起消化道传染病。三、控制菌检查大肠埃希菌检查三、控制菌检查大肠埃希菌检查书写检验书写检验记录单记录单双阳或双阴性双阳或双阴性增增菌菌培培养养供试供试液
20、的液的制备制备检查检查结果结果判断判断配培配培养基养基和稀和稀释液释液靛基质试验靛基质试验荧光检查荧光检查一阴一阴一阳一阳分分离离纯纯化化最终结最终结果判断果判断大肠埃希菌检查流程图大肠埃希菌检查流程图胆盐乳糖胆盐乳糖M M蓝白萤光蓝白萤光玫瑰红色液面玫瑰红色液面EMBEMB琼脂琼脂/麦康麦康凯琼脂平板凯琼脂平板菌落特征菌落特征革兰染色、镜检革兰染色、镜检 生化试验生化试验:乳糖发酵乳糖发酵试验、试验、IMViCIMViC试验试验乳糖胆盐培养基乳糖胆盐培养基伊红美蓝伊红美蓝琼脂培养基琼脂培养基靛基质试验靛基质试验气泡，气泡，培养基培养基呈黄色呈黄色紫黑色紫黑色金属光金属光泽泽玫瑰红玫瑰红色液面
21、色液面大肠埃希菌大肠埃希菌产气杆菌产气杆菌 I M Vi C I M Vi C试验试验 大肠埃希菌大肠埃希菌 +(+(或或-）+-+-产气杆菌产气杆菌 -+-+吲哚（靛基质）甲基红二乙酰枸橼酸盐利用三、控制菌检查大肠埃希菌检查三、控制菌检查大肠埃希菌检查大肠埃希菌检查结果报告大肠埃希菌检查结果报告检出大肠检出大肠埃希菌埃希菌MUGMUG阳性，靛基质阳性阳性，靛基质阳性MUGMUG阳性，靛基质阴性，阳性，靛基质阴性，IMViCIMViC为，为，G G-MUGMUG阴性，靛基质阳性，阴性，靛基质阳性，IMViCIMViC为，为，G G-MUG阳性:紫外光下管内培养物呈现蓝白色荧光三、控制菌检查大肠
22、菌群检查三、控制菌检查大肠菌群检查大肠菌群检查意义大肠菌群检查意义 大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，随粪便排出体外后可直接污染药品，若产随粪便排出体外后可直接污染药品，若产品中检出该菌群，表明该产品受到粪便污品中检出该菌群，表明该产品受到粪便污染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，以染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，以此作为粪便指示菌比大肠埃希菌更具广泛此作为粪便指示菌比大肠埃希菌更具广泛卫生学意义。卫生学意义。三、控制菌检查大肠菌群检查三、控制菌检查大肠菌群检查产酸：黄色产酸：黄色产气：气泡产气：气泡产酸产气产酸产气书写检验书写检验记录单记录单不产酸不产气不产
23、酸不产气增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备配培配培养基养基和稀和稀释液释液检查检查结果结果判断判断30-3530-3518-24h18-24h分离培养分离培养乳糖发酵乳糖发酵验证试验验证试验最终结最终结果判断果判断30-3530-3524-48h24-48h特特征征菌菌落落36361 1 1824h1824h胆盐乳糖胆盐乳糖M M产酸：黄色产酸：黄色产气：气泡产气：气泡紫黑色紫黑色/桃桃红色红色大肠菌群检查流程图大肠菌群检查流程图EMBEMB琼脂琼脂/麦康麦康凯琼脂平板凯琼脂平板三、控制菌检查大肠菌群检查三、控制菌检查大肠菌群检查大肠菌群检查结果报告大肠菌群大肠菌群检查结果报告大肠菌群M
24、PNMPN表表 根据发酵乳糖产酸产气，平板上有根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。品中检出粪大肠菌群。各供试品量的检出结果最可能的大肠菌群数N（个/g或ml）1.0g或1.0ml0.1g或0.1ml0.01g或0.01ml+102+-10N 102+-1N10-1三、控制菌检查铜绿假单胞菌检查三、控制菌检查铜绿假单胞菌检查铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌属于假铜绿假单胞菌属于假单胞菌属，为革兰氏阴性单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能
25、产杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在硝酸盐，在424211条条件下能生长。件下能生长。三、控制菌检查铜绿假单胞菌检查三、控制菌检查铜绿假单胞菌检查铜绿假单胞菌检查意义铜绿假单胞菌检查意义 铜绿假单胞菌在特殊情铜绿假单胞菌在特殊情况下可引起皮肤化脓感染、况下可引起皮肤化脓感染、泌尿道感染、中耳炎等。外泌尿道感染、中耳炎等。外伤及烧伤患者感染后最易引伤及烧伤患者感染后最易引起化脓，并引起败血症。为起化脓，并引起败血症。为保证消费者安全，化妆品中保证消费者安全，化妆品中不得检出铜绿假单胞菌。不得检出铜绿假单胞菌。三
26、、控制菌检查铜绿假单胞菌检查三、控制菌检查铜绿假单胞菌检查最终结最终结果判断果判断增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备书写检验书写检验记录单记录单分分离离纯纯化化无菌落或无特征菌落无菌落或无特征菌落配培配培养基养基和稀和稀释液释液革兰染色、镜检革兰染色、镜检 氧化酶试验氧化酶试验 绿脓菌素试验绿脓菌素试验生化试验生化试验 硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 4242生长试验生长试验 明胶液化试验明胶液化试验铜绿假单胞菌检查流程图铜绿假单胞菌检查流程图胆盐乳糖培养基胆盐乳糖培养基十六烷三甲基十六烷三甲基溴化铵琼脂溴化铵琼脂30-3530-351824h1824h30-3530-351824h182
27、4h特征菌落特征菌落灰白色、扁平、灰白色、扁平、周围有水溶性周围有水溶性蓝绿色素蓝绿色素十六烷三甲基溴化铵平板十六烷三甲基溴化铵平板胆盐乳糖培养基胆盐乳糖培养基黄绿色黄绿色菌膜菌膜灰白色灰白色湿润湿润氧化酶试验氧化酶试验粉红粉红/紫红色紫红色绿脓菌素试验绿脓菌素试验盐酸层呈粉紫色盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色氯仿层呈蓝绿色硝酸盐还原产气试验硝酸盐还原产气试验N2明胶液化明胶液化试验试验明胶培养基（高层）明胶培养基（高层）明胶液化明胶液化三、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查三、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌为革兰氏金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，
28、无阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。血浆凝固酶阳性。三、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查三、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查革兰染色、镜检革兰染色、镜检 生化试验生化试验:血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验最终结最终结果判断果判断增增菌菌培培养养供试供试品的品的处理处理书写检验书写检验记录单记录单分分离离纯纯化化无菌落或无特征菌落无菌落或无特征菌落配培配培养基养基和稀和稀释液释液30-3530-3530-3530-35营养肉汤培养基营养肉汤培养基或亚碲酸钠肉汤或亚碲酸钠肉汤18-24h18-24h卵黄氯化钠或甘卵黄氯化钠或甘露醇氯化钠琼脂露醇氯
29、化钠琼脂24-72h24-72h特征菌落特征菌落金黄色、边缘金黄色、边缘有浑浊带有浑浊带金黄色葡萄球菌检查流程图金黄色葡萄球菌检查流程图卵黄氯化钠琼脂卵黄氯化钠琼脂金黄色，有金黄色，有乳浊圈乳浊圈甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验血浆凝块血浆凝块液态血浆液态血浆三、控制菌检查白色念珠菌检查三、控制菌检查白色念珠菌检查白色念珠球菌检查意义白色念珠球菌检查意义 白色念珠菌可侵犯人体白色念珠菌可侵犯人体许多部位，可引起：许多部位，可引起：1.1.皮肤皮肤念珠菌病，念珠菌病，2.2.粘膜念珠菌病，粘膜念珠菌病，以鹅口疮、口角炎最多见，以鹅口疮、口角炎最多见，3.3.内脏及中枢神经
30、念珠菌病，内脏及中枢神经念珠菌病，偶尔也可发生败血症。偶尔也可发生败血症。三、控制菌检查白色念珠菌检查三、控制菌检查白色念珠菌检查有特征菌落有特征菌落念珠菌念珠菌显色培显色培养基养基最终结最终结果判断果判断革兰染色、革兰染色、镜检镜检芽管试验芽管试验增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备书写检验书写检验记录单记录单分分离离纯纯化化配培配培养基养基和稀和稀释液释液无菌落或无特征菌落无菌落或无特征菌落有特征菌落有特征菌落1%1%聚山梨聚山梨酯酯80-80-玉米玉米培养基培养基小结小结l对于外用药品，不得检出铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌及白色念珠球菌；l对于口服药品，不得检出大肠埃希菌；l对于原药
31、材，控制大肠菌群数量。第四节、无菌检查方法第四节、无菌检查方法第四节、无菌检查方法第四节、无菌检查方法l阳性对照试验阳性对照试验=阳性对照菌液阳性对照菌液+供试品供试品金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（无抑菌作用或抗（无抑菌作用或抗G+G+菌）菌）大肠埃希菌大肠埃希菌（抗（抗G-G-菌为主的供试品）菌为主的供试品）生孢梭菌生孢梭菌（抗厌氧菌的供试品）（抗厌氧菌的供试品）白色念珠菌白色念珠菌（抗真菌的供试品）（抗真菌的供试品）阳性对阳性对照菌选照菌选用原则用原则l阴性对照试验：以无菌检查所用稀释剂做阴性对照，不得长菌一、直接接种法一、直接接种法 接种量 培养基项目好氧、厌氧菌培养真菌培养硫乙醇酸盐流
32、体培养基改良马丁培养基供试品：每种培养基各若干支（与检查数量有关）若干ml（与装量有关）若干ml（与装量有关）阳性对照：供试品阳性对照菌菌液若干ml（供试品）+1.0ml（菌液）或：若干ml(供试品)+1.0ml（菌液）阴性对照若干ml稀释液若干ml稀释液培养温度30352328培养时间14天（阳性对照4872小时）二、薄膜过滤法二、薄膜过滤法50ml硫乙醇酸盐硫乙醇酸盐流体培养基流体培养基50ml改良马改良马丁培养基丁培养基阳性对照阳性对照303514天天232814天天三、结果判断三、结果判断阴性对照管应澄清无阴性对照管应澄清无菌生长菌生长 阳性对照管细菌应生阳性对照管细菌应生长良好长良好 供试品管均澄清，供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供证无菌生长，判供试品符合规定。试品符合规定。供试品管中任何一供试品管中任何一管显浑浊并确证有管显浑浊并确证有菌生长，判供试品菌生长，判供试品不符合规定。不符合规定。
