1、骨髓检验主要内容n骨髓细胞学检查 细胞形态学 细胞化学染色 免疫表型分析 染色体分析 基因诊断n骨髓病理学检查 组织结构 免疫组织化学染色骨髓检查流程4.分析分析1.判断适应证判断适应证2.标本制备标本制备3.镜检镜检1.骨髓检查适应证n造血系统疾病n某些血液病及其相关疾病n某些寄生虫感染性疾病n恶性肿瘤骨髓转移n某些类脂质沉积病n待查 贫血原因待查 发热原因待查 淋巴结肿大原因待查 肝脾肿大原因待查 骨痛原因待查唯一的禁忌证：唯一的禁忌证：严重的凝血因子缺陷严重的凝血因子缺陷2.标本制备n取材部位：髂后、髂前上棘、胸骨、棘突、病灶部位n采集、涂片n染色：瑞氏（Wright）染色或瑞-姬（Gi
2、emsa）混合染色骨髓穿刺和活检针骨髓穿刺和活检针骨髓穿刺部位骨髓穿刺部位Bone Marrow Aspirate3.镜检n低倍镜 制片质量 增生程度（5级）巨核细胞计数 异常细胞筛查 选择油镜检查区域n油镜 有无造血岛 细胞形态观察 有核细胞分类计数 计算粒红比值 有无异常细胞及寄生虫4.分析n要结合外周血象来分析n对疑难细胞或不典型标本的处理 借助其他方法：化学染色、免疫表型分析 两个阶段间的细胞，计入下一阶段 换部位重抽或定期复查n形成骨髓象检查报告 描写细胞形态与数量，作出肯定性诊断、支持性诊断、排除性诊断或形态学描写。n注意事项 骨髓片应制作良好，才能进行形态学观察正常骨髓象n有核细
3、胞增生有核细胞增生活跃n粒红比值为24：1，平均3：1n各系细胞各系细胞比例、形态、染色大致正常n巨核细胞735个/1.5x3cm2，多为产板型n可见少量单核细胞、浆细胞、骨髓基质细胞、组织嗜碱细胞、成骨细胞、破骨细胞等n核分裂细胞约为0.1%骨髓有核细胞增生程度增生程度增生程度 RBC:有核细胞有核细胞 有核细胞有核细胞/LP常见原因常见原因极度活跃1：1200白血病明显活跃10：1100白血病，增生性贫血活跃20：150 正常，某些贫血减低50：120 某些低增生性贫血极度减低300：110 重型再障各系细胞n粒系细胞：原粒、早幼粒、中性幼粒、中性杆状核、中性分叶核、嗜酸性、嗜碱性粒细胞n
4、红系细胞：原红、早幼红、中幼红、晚幼红n淋巴细胞：成熟、原淋、幼淋n巨核系细胞：原始、幼稚、颗粒型、产板型n少量单核细胞、浆细胞、骨髓基质细胞（成纤维细胞、内皮细胞、脂肪细胞、巨噬细胞等）、组织嗜碱细胞、成骨细胞、破骨细胞细胞化学染色（cytochemical stain)n髓过氧化物酶（POX）染色n酯酶（esterase）染色n中性粒细胞碱性磷酸酶（ALP）染色n糖原（PAS）染色n铁染色一些名词缩写介绍nAML：急性髓系白血病 AML-md：微分化型（AML-M0）AML-wom：未成熟型（AML-M1）AML-wm：成熟型（AML-M2）AMML：急性粒-单核细胞白血病（AML-M4）
5、AMoL：急性原单核细胞和单核细胞白血病（AML-M5）AEL：急性红白血病（AML-M6）AMegL：急性巨核细胞白血病（AML-M7）一些名词缩写介绍nALL：急性淋巴细胞白血病nAPL：急性早幼粒细胞白血病nCML：慢性髓性白血病nCLL：慢性淋巴细胞白血病nAA：再生障碍性贫血nPNH：阵发性睡眠性血红蛋白尿nMDS：骨髓增生异常综合征nIDA：缺铁性贫血nRARS：难治性贫血伴环形铁粒幼细胞增多POX染色n正常细胞染色反应（-+）存在于髓系细胞胞质中，愈成熟反应愈强，原粒C（-）。原单C（-），幼单C和单核C（）。淋巴、巨核、幼红细胞（-）n临床意义 AML-md（-）AML-wom
6、（-）AML-wm（+）AMML（+）AMoL（-/）AMegL（-）ALL（-）酯酶染色n三种酯酶 特异性酯酶(SE)非特异性酯酶(NSE)单核细胞酯酶(ME)n用于鉴别诊断AML亚型酯酶染色（正常细胞反应）细胞类型SENSEME原始细胞-/+-/-早幼粒+/+-/+-中性粒+/+-/-原单-/+/+/+幼单、单-/+淋巴-/-/有核红-/-巨核、PLT-+酯酶染色（临床意义）AML类型SENSEMEwom+-/-wm+-/+（NaF抑制-）-AMoL-/+/+（NaF抑制+）+/+（NaF抑制+）AMML20%+20%+20%+ALP染色n正常中性粒细胞染色反应（-+）10%40%（+）积
7、分751n临床意义 鉴别感染性疾病的类型（细菌感染时酶活性增强）鉴别鉴别CML和类白和类白 鉴别AA和PNH 鉴别真性红细胞增多症和继发性红细胞增多症PAS染色n正常细胞染色反应 粒系细胞：中幼粒以下阶段（+）；巨核系和PLT:（+）淋巴、单核:（）幼红C、RBC:（-）n临床意义 ALL、淋巴瘤细胞白血病：（+，粗颗粒或块状）；AML-wom：（-）；AMML：（+,弥漫,细颗粒）CLL：（+，粗颗粒）幼红细胞克隆增生：（+，粗颗粒或块状）；幼红细胞良性增生：（-）铁染色n正常染色反应（-+）细胞外铁：+铁粒幼细胞：19%44%，无环形铁粒幼细胞n临床意义 鉴别IDA与非IDA 诊断铁粒幼细
8、胞性贫血 诊断MDS-RARS几种常见AL的细胞化学染色结果ALLAML-wmAMMLPOX-+-+SE-+-+NSE-+NSE+NaF不被NaF抑制能被NaF抑制ALP增加减少正常或增加PAS+，粗颗粒或块状-或+，弥漫性淡红色-或+，弥漫性淡红色或细颗粒状细胞免疫表型（immunophenotypes）分析n标本：血液、骨髓、淋巴结穿刺液、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液n临床意义 急性白血病和淋巴瘤的分型诊断与疗效、预后判断 成熟淋巴细胞肿瘤的分类诊断 淋巴细胞免疫表型分析判断免疫功能 造血干细胞计数n方法 流式细胞仪：目前的首选方法 免疫组织化学法：用于病理切片 免疫荧光显微镜法：现已少用N
9、ormal marrow showing CD45 versus side scatter,which identifies major cell populations as indicated ALL与AML细胞免疫表型特点CD19CD7CD33CD13HLA-DRTdTB-ALL+-+/-T-ALL-+-/+AML-/+-骨髓病理学检查n反映骨髓组织结构及间质成分 较全面地衡量造血细胞增生程度，以及造血组织、脂肪组织和纤维组织的容积比例；“干抽”时能反映造血情况及纤维组织增生程度，如骨髓纤维化、髓样化生；协助某些血液病的诊断，如MDS、毛白、淋巴瘤累及骨髓；较早期预测疾病的预后，反映白血
10、病治疗效果；观察重要的骨髓组织学变化，如铁储备、炎性肉芽肿、转移瘤、骨小梁变化、血管栓塞、骨髓坏死、淀粉样变。Bone Marrow Biopsy骨髓病理学检查n正常骨髓的组织形态学 造血组织 骨质 间质骨髓病理学检查n常见血液病的骨髓病理学诊断 骨髓纤维化（MF）细胞期 胶元形成期 硬化期 骨髓增生异常综合征（MDS）基质改变：网状纤维增生 增生程度：少数增生低下 三系造血细胞的定位紊乱与形态异常：ALIP现象 巨核细胞多聚集于静脉窦窦壁外，形态表现为单个或多个圆核、淋巴样小巨核或微巨核细胞Gomori染色（+）以上染色体分析n检测内容：包括染色体数目和结构分析n标本：抗凝血、骨髓、淋巴结穿
11、刺液、活检标本、胸腹水、羊水染色体分析临床意义n恶性血液病的诊断与分型n监测恶性血液病等缓解、预后及复发n监测遗传性疾病与血液病发生 Down syndrome与髓系白血病n监测造血干细胞移植后的嵌合状态A.t(9;22)(q34;q11.2),CML.B.t(8;21)(q22;q22),AML-M2.C.inv(16)(p13.1q22),AMMoL-M4Eo.D.t(15;17)(q22;q1221.1),APL.E.t(9;11)(p22;q23),AMoL-M5.F.del(5)(q13q33),t-AML.基因诊断n检测内容：融合基因、突变基因、免疫球蛋白或T细胞受体基因重排n标本：抗凝血、骨髓液、淋巴结穿刺液临床意义PML-RARABCR-ABLAML1-ETOCBFB-MYH11JAK2 V617FAPLCMLAML-wmAMMLMPN白血病的白血病的MICM分型分型Morphology细胞形态学细胞形态学Immunology免疫学免疫学Cytogenetics 细胞遗传学细胞遗传学Molecular 分子生物学分子生物学
