1、显微鉴别显微鉴别方法方法1 内容提要内容提要显微鉴定的简介显微制片方法的分类显微制片方法2植物显微鉴定的简介植物显微鉴定的简介(Microscopical Identification)v植物显微鉴定是植物鉴定的重要手段之一。它通过植物组织、细胞、细胞后含物等特征进行微观分析，达到鉴别真、伪、优、劣的目的。v植物显微鉴别不但适用于中药材（饮片），也适用于中成药制品。这一检测方法先后被中国药典、香港中药材标准、日本药局方、印度草药典、美国药典等采用。3中国药典中国药典附录附录 显微鉴别法显微鉴别法 显微鉴别法系指用显微镜对药材（饮片）显微鉴别法系指用显微镜对药材（饮片）切片、粉末、解离组织或表面
2、制片及含药材切片、粉末、解离组织或表面制片及含药材粉末的制剂中药材的组织、细胞或内含物等粉末的制剂中药材的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择具有特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择具有代表性的供试品，根据各种鉴别项的规定制代表性的供试品，根据各种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。4显微鉴别方法分类显微鉴别方法分类 1 根据不同剂型适当处理后制片，分为：v药材（饮片）显微制片：横切片或纵切片制片、粉末制片、表面制片、解离组织制片、花粉粒与孢子制片、磨片制片。v含饮片粉末的制剂显微制片：按粉末制片法制片v细胞壁性质鉴别：木质化细
3、胞壁、木栓化或角质化细胞壁、纤维素细胞壁。v细胞内含物性质鉴别：淀粉粒、菊糖、草酸钙结晶 2 根据切片方法，分为：徒手切片、冷冻切片、半薄切片（0.5-2.0微米）、超薄切片（50-70nm)。52 2 仪器与材料仪器与材料2.12.1 仪器仪器 v生物光学显微镜（应配有目镜测微尺和载物生物光学显微镜（应配有目镜测微尺和载物台测微尺）、滑走切片机或徒手圆筒生物切台测微尺）、滑走切片机或徒手圆筒生物切片器、小型粉碎机、镜台测微尺、离心机、片器、小型粉碎机、镜台测微尺、离心机、医用超声仪。医用超声仪。62.22.2 用具用具v放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊放大镜、刀片、解剖刀、镊子
4、（包括粗镊及眼科弯镊与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。载玻片与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。载玻片、盖玻片、吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量、盖玻片、吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量苯酚，潮气润湿药材样品用）、培养皿或小烧杯（放苯酚，潮气润湿药材样品用）、培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒（粗与细）、乳钵、量筒、毛笔（从刀上刷取切璃棒（粗与细）、乳钵、量筒、毛笔（从刀上刷取切片用）、铅笔（片用）、铅笔（
5、HBHB、4H4H、6H6H绘图用）、带盖搪瓷盘（绘图用）、带盖搪瓷盘（装切片标本用）、纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。装切片标本用）、纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。789 粉末制片粉末制片101 1 药材粉碎药材粉碎 选取完整的药材或待鉴定部位，粉碎，过选取完整的药材或待鉴定部位，粉碎，过中国药典中国药典4 4号筛备用。号筛备用。11 斯氏液装片斯氏液装片 斯氏液斯氏液由醋酸由醋酸甘油甘油水（水（111111）组成，主要用于观）组成，主要用于观察淀粉粒及一些遇水合氯醛试液易溶解的成分。如多糖类察淀粉粒及一些遇水合氯醛试液易溶解的成分。如多糖类成分、树脂类成分等。成分、树脂类成分等。水合氯醛液装
6、片水合氯醛液装片 水合氯醛试液能渗透组织，使皱缩的细胞膨胀；并能溶解水合氯醛试液能渗透组织，使皱缩的细胞膨胀；并能溶解淀粉粒、蛋白质、树脂、挥发油和叶绿素等，使细胞组织淀粉粒、蛋白质、树脂、挥发油和叶绿素等，使细胞组织变得透明而清晰。变得透明而清晰。2 2 粉末特殊处理制片方法粉末特殊处理制片方法121314含多量淀粉的药材粉末含多量淀粉的药材粉末 大量淀粉粒的存在会大量淀粉粒的存在会影响观察、描绘及摄影等效果。取一部分粉末于影响观察、描绘及摄影等效果。取一部分粉末于试管中加水煮沸，使淀粉粒糊化而溶解，放置或试管中加水煮沸，使淀粉粒糊化而溶解，放置或用离心机使所需细胞、组织下沉管底，用长吸管用
7、离心机使所需细胞、组织下沉管底，用长吸管将沉淀物吸出供制片观察。将沉淀物吸出供制片观察。3 3 粉末特殊处理制片方法粉末特殊处理制片方法含多量油类的药材粉末含多量油类的药材粉末 进行脱脂以除去大部进行脱脂以除去大部分油脂，取少许粉末于小烧杯中，加氯仿少许搅分油脂，取少许粉末于小烧杯中，加氯仿少许搅拌浸渍，过滤，在滤纸上再加少许氯仿洗涤粉末拌浸渍，过滤，在滤纸上再加少许氯仿洗涤粉末即可。也可直接将粉末置载玻片进行。即可。也可直接将粉末置载玻片进行。15含纤维较多的粉末含纤维较多的粉末 细胞彼此不分离，则可以用细胞彼此不分离，则可以用5%5%氢氧化钾溶液浸渍若干小时或在水浴上加热浸渍，氢氧化钾溶液
8、浸渍若干小时或在水浴上加热浸渍，使组织分解后再行制片观察。使组织分解后再行制片观察。颜色很深的药材粉末颜色很深的药材粉末 进行脱色处理，取粉末少许进行脱色处理，取粉末少许置小烧杯中或载玻片上，加少许置小烧杯中或载玻片上，加少许3%3%的过氧化氢溶液的过氧化氢溶液（双氧水）浸渍数分钟，待粉末颜色变浅时，除去（双氧水）浸渍数分钟，待粉末颜色变浅时，除去多余液体，加新煮沸的冷蒸馏水，以除去粉末中的多余液体，加新煮沸的冷蒸馏水，以除去粉末中的大量气泡即可，然后再行制片观察。大量气泡即可，然后再行制片观察。16水泛丸：全球面取样，将丸药从中心剖开，从水泛丸：全球面取样，将丸药从中心剖开，从1/21/2球
9、球面上刮取。面上刮取。大蜜丸：将丸药从中心剖开，从大蜜丸：将丸药从中心剖开，从1/21/2或或1/41/4球面上刮球面上刮取；也可从内部挑取适量粉末。取；也可从内部挑取适量粉末。4 4 中成药粉末制片中成药粉末制片散剂、颗粒剂、胶囊：挑取部分粉末；散剂、颗粒剂、胶囊：挑取部分粉末；包衣丸、片：剥除糖衣或包衣，取适量丸或片心磨碎包衣丸、片：剥除糖衣或包衣，取适量丸或片心磨碎后，取粉末装片。后，取粉末装片。175 5 粉末制片注意事项粉末制片注意事项装片用的液体如易挥发，应装片后立即观察。用水装片也较易装片用的液体如易挥发，应装片后立即观察。用水装片也较易蒸发而干涸，通常滴加少许甘油可延长保存时间
10、。蒸发而干涸，通常滴加少许甘油可延长保存时间。粉末加液体搅拌及加盖玻片时容易产生气泡。如用水或甘油装粉末加液体搅拌及加盖玻片时容易产生气泡。如用水或甘油装 片时，可先加少量乙醇使其润湿，可避免或减少气泡的形成，片时，可先加少量乙醇使其润湿，可避免或减少气泡的形成，或反复将盖玻片沿一侧轻抬，亦可使多数气泡逸出。搅拌时产或反复将盖玻片沿一侧轻抬，亦可使多数气泡逸出。搅拌时产 生的气泡可随时用针将其移出。生的气泡可随时用针将其移出。18粉末药材制片时，每片取用量宜少不宜多，为使观察全面可多粉末药材制片时，每片取用量宜少不宜多，为使观察全面可多做些制片。如取量多，显微特征单一轮廓不清，反而费用时，做些
11、制片。如取量多，显微特征单一轮廓不清，反而费用时，不易得出准确强论。中成药制剂的粉末检查，因在多味药材粉不易得出准确强论。中成药制剂的粉末检查，因在多味药材粉末中寻找某一味药的某一显微特征，有时较难查见，可以取粉末中寻找某一味药的某一显微特征，有时较难查见，可以取粉末量多些，置试管或小烧杯中，加入水合氯醛试液，加热透化。末量多些，置试管或小烧杯中，加入水合氯醛试液，加热透化。透化好后再用吸管吸出，滴在载玻片上，加盖玻片，即可观察。透化好后再用吸管吸出，滴在载玻片上，加盖玻片，即可观察。需用水合氯醛试液透化时，应注意掌握操作方法。装片后用手需用水合氯醛试液透化时，应注意掌握操作方法。装片后用手
12、执其一端，保持水平置小火焰上约执其一端，保持水平置小火焰上约1 12cm2cm处加热，并缓缓左右处加热，并缓缓左右 移动使之微沸，见气泡免同时离开火焰，待气泡停止逸出再放移动使之微沸，见气泡免同时离开火焰，待气泡停止逸出再放 在小火上，并随时补充蒸发的试液，如此反复操作，直至粉末在小火上，并随时补充蒸发的试液，如此反复操作，直至粉末 呈透明装为止，放凉后滴加甘油镜检呈透明装为止，放凉后滴加甘油镜检196 6 目镜测微尺l 先将目镜测微尺用载台测微尺标化，计算出每一小格的先将目镜测微尺用载台测微尺标化，计算出每一小格的m m 数，应用时将测得物的小格数，乘以每一小格的数，应用时将测得物的小格数，
13、乘以每一小格的m m数，即得数，即得 所欲测定物的大小。所欲测定物的大小。l 观察细胞和后含物时，常需要测量其直径、长短观察细胞和后含物时，常需要测量其直径、长短(以以m m 计计)，作为鉴定依据之一，作为鉴定依据之一，测量可用目镜测微尺进行。测量可用目镜测微尺进行。20 目镜测微尺每1小格的长度为3010um773.8m 216.1 6.1 目镜测微尺注意事项注意事项测量时，如大小与规定有差异时，允许有少量略高于或低于规测量时，如大小与规定有差异时，允许有少量略高于或低于规定的数值。每次测量记下数据，并分析数据最小量值、最大量定的数值。每次测量记下数据，并分析数据最小量值、最大量值和多见值（
14、值和多见值（mm）。）。目镜测微尺所代表的长度值随不同目镜与物镜配合而异因此在目镜测微尺所代表的长度值随不同目镜与物镜配合而异因此在 实验前，应将专用的目镜测微尺，在所用显微镜不同倍数的目实验前，应将专用的目镜测微尺，在所用显微镜不同倍数的目 镜与物镜组合后，进行测量其长度值，全部测定后记载于实验镜与物镜组合后，进行测量其长度值，全部测定后记载于实验 记录本或将数值表贴在显微镜子座上，备用。记录本或将数值表贴在显微镜子座上，备用。测量通常是在高倍镜下进行，因目镜量尺的每一小格的长度测量通常是在高倍镜下进行，因目镜量尺的每一小格的长度 值较小，结果较为准确。每次测量记下数据，并分析数据最值较小，
15、结果较为准确。每次测量记下数据，并分析数据最小量值、最大量值和多见值（小量值、最大量值和多见值（mm）。）。227 7 显微鉴别法注意事项显微鉴别法注意事项 l 显微鉴别实验时，应先观察淀粉粒、菊糖等，再观察其他显微显微鉴别实验时，应先观察淀粉粒、菊糖等，再观察其他显微 特征。所以，一般先以甘油醋酸试液装片观察，然后以水合氯特征。所以，一般先以甘油醋酸试液装片观察，然后以水合氯醛试液装片观察，最后加热透化或滴加其他试液进行观察。每醛试液装片观察，最后加热透化或滴加其他试液进行观察。每步骤观察结果均应作记录。步骤观察结果均应作记录。粉碎用具用完后必须处理干净，干燥后才能使用于另一种药粉碎用具用完
16、后必须处理干净，干燥后才能使用于另一种药 材。材。所用盖玻片和载玻片应绝对干净。新片要用洗液浸泡或用肥皂所用盖玻片和载玻片应绝对干净。新片要用洗液浸泡或用肥皂水煮半小时取出，先用流水冲洗后，再用蒸馏水冲洗水煮半小时取出，先用流水冲洗后，再用蒸馏水冲洗1 12 2次后，次后，置于置于70%70%90%90%乙醇中，备用。乙醇中，备用。237 7 显微鉴别法注意事项显微鉴别法注意事项 鉴别成方制剂前，应了解处方组成和制法，分析处方鉴别成方制剂前，应了解处方组成和制法，分析处方 中各种饮片的主要鉴别特征及用量的多少。进行显微中各种饮片的主要鉴别特征及用量的多少。进行显微 鉴别时，应观察鉴别时，应观察
17、3 35 5张装片，使特征不致遗漏张装片，使特征不致遗漏 l 可借助偏光装置寻找和观察，尤其是淀粉粒、结可借助偏光装置寻找和观察，尤其是淀粉粒、结 晶，纤维、石细胞、导管等显微特征。晶，纤维、石细胞、导管等显微特征。248 8 记录记录 粉末显微鉴别时，先记录原粉末的色泽、气味。然后边观察、粉末显微鉴别时，先记录原粉末的色泽、气味。然后边观察、边记录。注意观察的全面性。观察每张粉末片时，应自上左至边记录。注意观察的全面性。观察每张粉末片时，应自上左至 下右，呈下右，呈“之之”字形扫描，逐渐移动装片，全面观察目的物，字形扫描，逐渐移动装片，全面观察目的物，描描 述其特征，测量其长度，并注意统计最
18、小量值、多见量值、最述其特征，测量其长度，并注意统计最小量值、多见量值、最 大量值。一一记录。大量值。一一记录。组织特征的记录，应以从外至内的次序进行，对有鉴别意义的组织特征的记录，应以从外至内的次序进行，对有鉴别意义的 特征需详细地描述；一般应绘制简图。必要时，应利用显微描绘特征需详细地描述；一般应绘制简图。必要时，应利用显微描绘 器或显微摄影装置绘制详图或提供显微照片，并注明放大倍数，器或显微摄影装置绘制详图或提供显微照片，并注明放大倍数，或加比例尺。或加比例尺。258 8 记录记录 应注意标准规定以外的异常显微特征的记录，并根据药材和饮应注意标准规定以外的异常显微特征的记录，并根据药材和
19、饮 片的基原、成方制剂的处方和制法综合分析，必要时可采用对片的基原、成方制剂的处方和制法综合分析，必要时可采用对 照药材或已经鉴定品种的药材为对照进行判断。照药材或已经鉴定品种的药材为对照进行判断。通常以先多数后少数的顺序描述特征，并标明通常以先多数后少数的顺序描述特征，并标明“多见多见”、“少少见见”、“偶见偶见”。注意着重描述有鉴别意义的组织、细胞和内含物。注意着重描述有鉴别意义的组织、细胞和内含物，对于各类药材和饮片均具有的一些基本组织，如叶类药材和饮对于各类药材和饮片均具有的一些基本组织，如叶类药材和饮 片有栅栏细胞、海绵组织、细小导管等可不作重点描述。片有栅栏细胞、海绵组织、细小导管等可不作重点描述。26谢谢大家！谢谢大家！27
