1、食品分析-食品中有害物质的检测第十三章 食品中有害物质的检测第一节第一节 概论概论第二节第二节 食品中有害物质常用的检测方法食品中有害物质常用的检测方法第三节第三节 食品中农药残留及其检测食品中农药残留及其检测（第四节（第四节 食品中兽药残留及其检测）食品中兽药残留及其检测）第五节第五节 食品中霉菌毒素及其检测食品中霉菌毒素及其检测（第六节（第六节 食品中天然毒素及其检测）食品中天然毒素及其检测）（第七节（第七节 食品中源于包装材料的有害物质及其检测）食品中源于包装材料的有害物质及其检测）（第八节（第八节 食品加工过程中形成的有害物质及其检测）食品加工过程中形成的有害物质及其检测）（第九节（第
2、九节 食品中其他有害物质及其检测）食品中其他有害物质及其检测）沈阳销毁5200斤农药残留超标芹菜 重重 点点 有机氯、有机磷农药的理化性质。有机氯、有机磷农药的理化性质。两种农药测定预处理方法。两种农药测定预处理方法。两种农药测定的主要方法。两种农药测定的主要方法。黄曲霉毒素的测定方法。黄曲霉毒素的测定方法。第一节 概论一、有害物质与有一、有害物质与有毒毒物质的概念物质的概念l 在自然界中在自然界中,当某物质或含有该物质的物料被当某物质或含有该物质的物料被按其原来的用途正常使用时按其原来的用途正常使用时,若因该物质而导若因该物质而导致人体生理机能、自然环境或生态平衡遭受破致人体生理机能、自然环
3、境或生态平衡遭受破坏时坏时,则称该物质为有害物质。则称该物质为有害物质。l 有毒物质有毒物质:一般的定义为凡是以小剂量进入机一般的定义为凡是以小剂量进入机体体,通过化学或物理化学作用能够导致健康受通过化学或物理化学作用能够导致健康受损的物质。损的物质。l 有毒物质是相对的有毒物质是相对的 剂量决定剂量决定二、食品中有害物质分三大类：生物性有害物质生物性有害物质,如黄曲霉、口蹄疫致病菌等；如黄曲霉、口蹄疫致病菌等；化学性有害物质化学性有害物质,如如DDTDDT、氯丙醇、河豚毒素、重、氯丙醇、河豚毒素、重金属、放射性元素等；金属、放射性元素等；物理性有害物质物理性有害物质,如金属屑、石子、动物排泄
4、物如金属屑、石子、动物排泄物等。等。三、食品危害的潜在来源：内源性危害：食品中天然存在的有毒有害成分，如河豚毒内源性危害：食品中天然存在的有毒有害成分，如河豚毒素、苦杏仁苷等；存在于食品中的生理作用成分，如蛋白素、苦杏仁苷等；存在于食品中的生理作用成分，如蛋白酶抑制剂；食物中的营养不平衡。酶抑制剂；食物中的营养不平衡。外源性危害：食品中的微生物污染，如经口传染的病菌、外源性危害：食品中的微生物污染，如经口传染的病菌、细菌毒素、霉菌毒素；人为掺假，有意加入的食品添加剂，细菌毒素、霉菌毒素；人为掺假，有意加入的食品添加剂，如亚硝酸盐；意外或偶然进入食品的化学物质，如残留农如亚硝酸盐；意外或偶然进入
5、食品的化学物质，如残留农药、重金属、多氯联苯。药、重金属、多氯联苯。诱发性危害：在食品加工、储藏过程中诱发食品内或生物诱发性危害：在食品加工、储藏过程中诱发食品内或生物体内生成有害物质，如油脂氧化产生过氧化物、亚硝酸盐体内生成有害物质，如油脂氧化产生过氧化物、亚硝酸盐与胺反应生成亚硝基化合物。与胺反应生成亚硝基化合物。农药、农药、兽药使兽药使用不当用不当食品中有害物质的主要来源加工、贮加工、贮藏、运输藏、运输污染污染特定食特定食品加工品加工工艺工艺包装材料包装材料环境污染环境污染食品食品原料原料固有固有毒素毒素四、加强食品中有害物质检测的必要性 食品中有毒有害元素主要有铅、镉、汞、砷等；食品中
6、有毒有害元素主要有铅、镉、汞、砷等；主要来源是工业主要来源是工业“三废三废”、化学农药、食品加工、化学农药、食品加工辅料等方面的污染；辅料等方面的污染；有害元素污染食品后，随食品进入体内，会危害有害元素污染食品后，随食品进入体内，会危害人体健康，甚至致人终身残废或死亡；人体健康，甚至致人终身残废或死亡；检测食品中有害元素的意义：检测食品中有害元素的意义：可以分析食品中有害元素的种类及含量；可以分析食品中有害元素的种类及含量；可以防止有害元素危害人体健康；可以防止有害元素危害人体健康；可以为加强食品生产和卫生管理提供依据。可以为加强食品生产和卫生管理提供依据。第二节 食品中有害物质常用的检测方法
7、 酶联免疫酶联免疫质谱法质谱法ICPGCHPLC食品安全性评价程序（毒理学）试验的初步工作试验的初步工作急性毒性试验急性毒性试验遗传毒性试验遗传毒性试验慢性毒性试验慢性毒性试验艾姆斯试验 补体结合试验 一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素是否发生溶血反应作指示的一种高灵敏度的抗原与抗体结合反应杀虫剂、杀菌剂、杀虫剂、杀菌剂、除草剂、杀螨剂、除草剂、杀螨剂、植物生长调节剂、植物生长调节剂、杀鼠药杀鼠药 农药残留是指农药施用后，残存在生物体、农药残留是指农药施用后，残存在生物体、农副产品和环境中的农副产品和环境中的微量农药原体、有毒代谢产微量农药原体、有毒代谢产物、降解物和杂质的总称物、降解物和
8、杂质的总称。残留的数量叫残留量。残留的数量叫残留量。第三节 食品中农药残留及其检测农药残留是目前影响我国农药残留是目前影响我国食品和农产品安全的主要食品和农产品安全的主要因素，已经给我国农产品因素，已经给我国农产品销售、出口和消费者的身销售、出口和消费者的身体健康带来了严重影响。体健康带来了严重影响。食品中农药残留的危害对人体危害：通过食物和水的摄入、空气吸入和对人体危害：通过食物和水的摄入、空气吸入和皮肤接触等途径对人体造成多方面的危害，如急、皮肤接触等途径对人体造成多方面的危害，如急、慢性中毒和致癌、致畸、致突变作用等；慢性中毒和致癌、致畸、致突变作用等；对环境危害：污染环境，破坏生态平衡
9、。对环境危害：污染环境，破坏生态平衡。污染食品：使一些食品残留少量农药。污染食品：使一些食品残留少量农药。食品中农药残留的来源 施用农药对农作物的直接污染施用农药对农作物的直接污染 农作物从污染的环境中吸收农药农作物从污染的环境中吸收农药 通过食物链、生物富集污染食品通过食物链、生物富集污染食品 其他来源的污染：事故性污染其他来源的污染：事故性污染农药进入人体的方式土壤、水土壤、水、空气、空气家禽、畜家禽、畜植物、饲料植物、饲料水生动、植物水生动、植物肉、蛋、乳肉、蛋、乳人人容易吸收农药的蔬菜容易吸收农药的蔬菜对农药吸收率较低的对农药吸收率较低的 有机氯杀虫剂 有机磷杀虫剂 拟除虫菊杀虫剂 氨
10、基甲酸酯杀虫剂一、几种常用农药概况1.有机氯农药（Organochlorine pesticides,OCPs）主要有六六六粉主要有六六六粉(六氯环己烷六氯环己烷)、DDT(DDT(二氯二苯三氯乙烷二氯二苯三氯乙烷)毒性特点：毒性特点：难分解、半衰期难分解、半衰期1010年以上，高残留；年以上，高残留；污染食品严重，脂溶性强，蓄积于脂肪和脂肪高的组织；污染食品严重，脂溶性强，蓄积于脂肪和脂肪高的组织；中等毒性，致癌、致畸作用。中等毒性，致癌、致畸作用。性质：性质：不溶于水，易溶于脂肪、丙酮、乙醇、石油醚、环己烷不溶于水，易溶于脂肪、丙酮、乙醇、石油醚、环己烷；对光、热、酸稳定，对碱不稳定。对光
11、、热、酸稳定，对碱不稳定。有多种异构体有多种异构体较强杀虫作用较强杀虫作用 是含有是含有CPCP键或键或COPCOP、CSPCSP、CNPCNP键的有机化合键的有机化合物物，应用广。应用广。（1 1）分类：分类：l 高毒有机磷高毒有机磷 （早期发展，现已被禁止使用）（早期发展，现已被禁止使用）如对硫磷（如对硫磷（16051605）、内吸磷（）、内吸磷（10591059）、甲胺磷（）、甲胺磷（39113911）等；）等；l 中等毒有机磷中等毒有机磷 如乐果、杀螟松、倍硫磷等；如乐果、杀螟松、倍硫磷等；l 低毒有机磷低毒有机磷 如敌百虫、马拉硫磷、双硫磷等。如敌百虫、马拉硫磷、双硫磷等。2.有机磷
12、农药有机磷农药（OPPs）（2 2）特点）特点l化学性质不稳定，易分解，污染食品后残留时间化学性质不稳定，易分解，污染食品后残留时间短，在生物体不易蓄积。短，在生物体不易蓄积。l在加工处理过程（碾磨、洗涤、去皮、烹调）中在加工处理过程（碾磨、洗涤、去皮、烹调）中可减少。可减少。l以急性毒性为主，表现出神经中毒症状。长时间以急性毒性为主，表现出神经中毒症状。长时间接触对肝脏功能有损。接触对肝脏功能有损。过量或施用时期不当或使用高毒农药过量或施用时期不当或使用高毒农药 是造成有机磷农药污染食品的主要原因是造成有机磷农药污染食品的主要原因是一种高效、低毒、低残留的农药。是一种高效、低毒、低残留的农药
13、。通式：通式：常见的有：甲萘威、呋喃丹、速灭威等。常见的有：甲萘威、呋喃丹、速灭威等。CONHCH3O甲萘威甲萘威3.3.氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类 是模拟天然除虫菊酯化学结构而合成的农药。常是模拟天然除虫菊酯化学结构而合成的农药。常用的有氯菊酯、溴菊酯、氯氰菊酯、甲醚菊酯。用的有氯菊酯、溴菊酯、氯氰菊酯、甲醚菊酯。特点：特点：l 高效、低毒、低残留，在环境中的降解以光解为高效、低毒、低残留，在环境中的降解以光解为主；主；l 对胆碱酯酶无抑制作用；对胆碱酯酶无抑制作用；l 亲脂性强，可溶于多种有机溶剂，在水中的溶解亲脂性强，可溶于多种有机溶剂，在水中的溶解度小度小,在酸性条件下稳定，在碱性条件下
14、易分解。在酸性条件下稳定，在碱性条件下易分解。4.4.拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类食品中农药残留分析检测技术1.1.薄层色谱法（薄层色谱法（TLCTLC）2.2.气相色谱法（气相色谱法（GCGC）占）占70%70%3.3.气相色谱气相色谱-质谱法（质谱法（GC-MSGC-MS）4.4.液相色谱法（液相色谱法（HPLCHPLC）5.5.液相色谱液相色谱-质谱法（质谱法（LC-MSLC-MS）6.6.超临界流体色谱（超临界流体色谱（SFCSFC）7.7.毛细管电泳（毛细管电泳（CECE）8.8.免疫分析（免疫分析（IAIA）二、农药的测定方法1、食品中有机氯农药残留量的测定 食品中有机氯农药的测定采用
15、气相色谱法或薄层色谱法；食品中有机氯农药的测定采用气相色谱法或薄层色谱法；最为常用的气相色谱电子捕获检测器最为常用的气相色谱电子捕获检测器(GC-ECD)(GC-ECD)，具有灵敏，具有灵敏度高、分离效果好、定量准确等优点。度高、分离效果好、定量准确等优点。有机氯农药的测定标准：有机氯农药的测定标准：GB/T5009.146-2003 GB/T5009.146-2003 植物性食品植物性食品 中有机氯和拟除虫菊酯农药多种中有机氯和拟除虫菊酯农药多种 残留的测定；残留的测定；GB/T5009.162-2003 GB/T5009.162-2003 动物性食品动物性食品 中有机氯和拟除虫菊酯农药多种
16、中有机氯和拟除虫菊酯农药多种 残留的测定；残留的测定；（1）动物性食品中有机氯农药残留量的测定 原理原理 样品处理后，用气相色谱法测定。在一定温度下，载气携带气化样品处理后，用气相色谱法测定。在一定温度下，载气携带气化后的样品，通过色谱柱，被逐一分离，随即通过电子捕获器，以后的样品，通过色谱柱，被逐一分离，随即通过电子捕获器，以保留时间定性，外标法定量。保留时间定性，外标法定量。20种有机氯种有机氯、拟除虫菊酯农药多组分色谱图拟除虫菊酯农药多组分色谱图1.BHC 2.BHC 3.BHC 4.五氯硝基五氯硝基苯苯 5.BHC 6.七氯七氯 7.艾氏剂艾氏剂 8.除螨酯除螨酯 9.环环氧七氯氧七氯
17、 10.杀螨酯杀螨酯 11.狄氏剂狄氏剂 12.p,p-DDE 13.p,p-DDD 14.o,p-DDT 15.p,p-DDT 16.胺胺菊酯菊酯 17.氯菊酯氯菊酯 18.氯氰菊酯氯氰菊酯 19.氰戊菊酯氰戊菊酯 20.溴氰菊酯溴氰菊酯表 我国主要食品中DDT和BHC残留限量标准表 WHO建议的DDT和BHC在某些食品中允许残留量标准 试剂试剂丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、环乙烷、正乙烷，重蒸丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、环乙烷、正乙烷，重蒸石油醚，沸程石油醚，沸程30306060，分析纯重蒸；，分析纯重蒸；氯化钠、无水硫酸钠；氯化钠、无水硫酸钠；凝胶，凝胶，Bil-beads S-XBil-be
18、ads S-X3 3,200,200400400目；目；农药标准品；农药标准品；标准溶液配制；标准溶液配制；仪器仪器气相色谱仪电子捕获检测器气相色谱仪电子捕获检测器旋转蒸发仪旋转蒸发仪凝胶净化柱凝胶净化柱 30302.5cm2.5cm玻璃层析柱玻璃层析柱玻璃层析柱玻璃层析柱 操作要点操作要点提取与分配提取与分配净化净化 将样品浓缩液过凝胶柱，用乙酸乙酯环乙烷将样品浓缩液过凝胶柱，用乙酸乙酯环乙烷(1+1)(1+1)溶液溶液洗脱，弃去洗脱，弃去0 035ml35ml流分，收集流分，收集35 35 70ml70ml流分，旋转蒸流分，旋转蒸发至约发至约1ml1ml，再经凝胶柱净化收集，再经凝胶柱净化
19、收集35 35 70ml70ml流分，蒸发流分，蒸发浓缩，用氮气吹除溶剂以石油醚定容至浓缩，用氮气吹除溶剂以石油醚定容至1ml1ml。测定测定 气相色谱条件：气相色谱条件：色谱柱：涂以色谱柱：涂以OV-101,0.25OV-101,0.25m,30mm,30m0.32mm,0.32mm,石英弹性毛细管柱石英弹性毛细管柱柱温：程序升温柱温：程序升温进样口温度：进样口温度：270270检测器：检测器：电子捕获检测器电子捕获检测器(ECD)(ECD)，300300载气流速：氮气载气流速：氮气(N(N2 2)：1ml/min1ml/min；尾吹：；尾吹：50ml/min50ml/min 程序升温 色谱
20、分析 分别量取1l混合标准溶液及样品净化液注入气相色谱仪，以混合标准溶液及样品净化液注入气相色谱仪，以保留时间定性，以样品和标准峰高或峰面积比较定量。保留时间定性，以样品和标准峰高或峰面积比较定量。结果计算结果计算60,1min170235280,10min40/min2/min40/min10001000121VmVmX式中式中 X样品中各农药的含量样品中各农药的含量(mg/Kg)m1 被测样液中各农药的含量被测样液中各农药的含量(ng)m 样品质量样品质量(g)V1 样液进样体积样液进样体积(L)V2 样液最后定容体积样液最后定容体积(mL)（2）植物性食品中有机氯农药残留量的测定 原理原
21、理（1 1）试剂试剂石油醚石油醚(沸程沸程303060)60)，苯，丙酮，乙酸乙酯，重蒸，苯，丙酮，乙酸乙酯，重蒸弗罗里硅土，弗罗里硅土，620 620灼烧灼烧4h4h后备用，用前后备用，用前140140烘烘2h2h，趁热，趁热加加5 5水灭活，层析用；水灭活，层析用；无水硫酸钠无水硫酸钠农药标准品与标准溶液的配制。农药标准品与标准溶液的配制。仪器仪器气相色谱仪电子捕获检测器气相色谱仪电子捕获检测器电动振荡器、组织捣碎机、旋转蒸发仪电动振荡器、组织捣碎机、旋转蒸发仪布氏漏斗布氏漏斗(直径直径80mm)80mm)、抽滤瓶、抽滤瓶(200mL)(200mL)250mL250mL分液漏斗、分液漏斗、
22、100mL 100mL具塞三角瓶具塞三角瓶层析柱层析柱 样品制备样品制备粮食样品粉碎过粮食样品粉碎过2020目筛备用；目筛备用；蔬菜样品除去非可食部分备用。蔬菜样品除去非可食部分备用。操作方法操作方法提取提取净化净化 准确吸取样品准确吸取样品2mL,2mL,加入以淋洗过的无水硫酸钠加入以淋洗过的无水硫酸钠+弗罗里硅土层析柱中，弗罗里硅土层析柱中，用用100mL100mL石油醚石油醚+乙酸乙酯乙酸乙酯(95+5)(95+5)洗脱，收集洗脱液用旋转蒸发仪浓缩洗脱，收集洗脱液用旋转蒸发仪浓缩近干，用少量石油醚多次溶解残渣于刻度离心瓶中，最终定容至近干，用少量石油醚多次溶解残渣于刻度离心瓶中，最终定容
23、至1.0mL1.0mL，备测。，备测。测定测定 色谱条件色谱条件涂以涂以OV-101,15mOV-101,15m0.25mm,0.25mm,石英弹性毛细管柱石英弹性毛细管柱气体流速：氮气气体流速：氮气(N(N2 2)40ml/min)40ml/min；尾吹：；尾吹：60ml/min60ml/min；分流比；分流比1 1：5050温度：柱温自温度：柱温自180 180 升至升至230 230 保持保持30min30min；检；检测器及进样温度为测器及进样温度为250 250。色谱分析色谱分析分别吸取分别吸取1l1l样液和混合标准溶液注入气相色谱样液和混合标准溶液注入气相色谱仪，以保留时间定性，以
24、样品和标准峰高或峰面仪，以保留时间定性，以样品和标准峰高或峰面积比较定量积比较定量。计算结果计算结果有机氯和拟除虫菊酯标准色谱图有机氯和拟除虫菊酯标准色谱图1.BHC 2.BHC 3.BHC 4.BHC 5.七氯七氯 6.艾氏剂艾氏剂 7.p,p-DDE 8.o,p-DDT 9.p,p-DDD 10.p,p-DDT 11.三氟氯氰菊酯三氟氯氰菊酯 12.二氯苯醚二氯苯醚菊酯菊酯13.氰戊菊酯氰戊菊酯14.溴氰菊酯溴氰菊酯KXmVHVEhsisii122 2、食品中有机磷农药残留量测定食品中有机磷农药残留量测定 食品中有机磷农药的测定采用气相色谱法；食品中有机磷农药的测定采用气相色谱法；食品中有
25、机磷农药的测定标准：食品中有机磷农药的测定标准：GB/T5009.20-2003 GB/T5009.20-2003 食品中有机磷农药残留量的测定；食品中有机磷农药残留量的测定；GB/T5009.161-2003 GB/T5009.161-2003 动物性食品中有机磷农药多组分动物性食品中有机磷农药多组分残留量的测定残留量的测定GB/T5009.145-2003 GB/T5009.145-2003 植物性食品中有机磷和氨基甲酸植物性食品中有机磷和氨基甲酸酯多组分的测定酯多组分的测定表 有机磷农药比较表（1）动物性食品中有机磷农药残留量测定 原理：原理：样品经提取净化后，用气相色谱法分离测定，火焰
26、光度检测器检样品经提取净化后，用气相色谱法分离测定，火焰光度检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。测，以保留时间定性，外标法定量。试剂：试剂：丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、环乙烷，均重蒸丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、环乙烷，均重蒸氯化钠、无水硫酸钠氯化钠、无水硫酸钠凝胶凝胶 Bio-Beads S-XBio-Beads S-X3 3，200200400400目；目；有机磷农药标准品及标准溶液配制有机磷农药标准品及标准溶液配制 仪器仪器气相色谱仪火焰光度检测器气相色谱仪火焰光度检测器旋转蒸发仪旋转蒸发仪凝胶净化柱凝胶净化柱 操作方法操作方法样品提取制备，同有机氯农药测定；样品提取制备，同有机氯农药测定
27、；净化，同有机氯农药测定；净化，同有机氯农药测定；测定测定 色谱条件色谱条件色谱柱：涂色谱柱：涂SE-54 0.25SE-54 0.25m,30mm,30m0.32mm(0.32mm(内径内径)石英弹性毛细石英弹性毛细管柱管柱柱温：程序升温柱温：程序升温检测器：火焰光度检测器检测器：火焰光度检测器(FPD-P)(FPD-P)进样口温度：进样口温度：270270气体流程：氮气气体流程：氮气(N(N2 2载气载气)1 ml/min)1 ml/min；尾吹：；尾吹：50 ml/min50 ml/min；氢气，；氢气，50 ml/min50 ml/min；空气；空气500 ml/min500 ml/m
28、in。60,1min11023526540/min5/min40/min 色谱分析色谱分析分别吸取分别吸取1l1l样液和混合标准溶液注入气相色谱仪，样液和混合标准溶液注入气相色谱仪，以保留时间定性，以样品和标准峰高或峰面积比较定以保留时间定性，以样品和标准峰高或峰面积比较定量量。结果计算结果计算13中有机磷农药色谱图中有机磷农药色谱图1.甲胺磷甲胺磷 2.敌敌畏敌敌畏 3.乙酰甲胺磷乙酰甲胺磷 4.久效磷久效磷5.乐果乐果 6.乙拌磷乙拌磷 7.甲基对硫磷甲基对硫磷 8.杀螟硫磷杀螟硫磷9.甲基嘧啶磷甲基嘧啶磷 10.马拉硫磷马拉硫磷 11.倍硫磷倍硫磷 12.对硫磷对硫磷 13.乙硫磷乙硫磷
29、10001000121VmVmX式中式中 X样品中各农药含量样品中各农药含量(mg/Kg)m1被测样品中各农药的含量被测样品中各农药的含量(ng);m样品质量样品质量(g)V1样液进样体积样液进样体积(L)；V2 样液最后定容体积样液最后定容体积(mL)（2）植物性食品中有机磷和氨基甲酸酯农药残留 原理：原理：样品中有机磷和氨基甲酸酯农药有机溶剂提取，液液分配、微型柱净样品中有机磷和氨基甲酸酯农药有机溶剂提取，液液分配、微型柱净化除去干扰物质，用氮磷检测器化除去干扰物质，用氮磷检测器(FID)(FID)检测，以保留时间定性，外标法检测，以保留时间定性，外标法定量。定量。试剂试剂丙酮、二氯甲烷、
30、乙酸乙酯、甲醇、正己烷，重蒸丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、正己烷，重蒸磷酸、氯化钠、无水硫酸钠、氯化铵磷酸、氯化钠、无水硫酸钠、氯化铵硅胶，硅胶，60608080目目130130烘烘2h2h，以，以5%5%水失活；水失活；助滤剂，助滤剂，celite545;celite545;凝结剂，凝结剂，5g5g氯化铵氯化铵+10mL+10mL磷酸磷酸+100mL+100mL水，用前稀释水，用前稀释5 5倍；倍；农药标准品及标准溶液的配制农药标准品及标准溶液的配制 仪器仪器组织捣碎机、离心机、超声波清洗器、旋转蒸发器组织捣碎机、离心机、超声波清洗器、旋转蒸发器气相色谱仪火焰光度检测器气相色谱仪火焰光度检
31、测器 操作方法操作方法提取提取净化净化 将凝结液和助滤剂加入提取样品的分液漏斗中，轻摇静置将凝结液和助滤剂加入提取样品的分液漏斗中，轻摇静置5min5min用布氏漏斗用布氏漏斗抽滤，然后用二氯甲烷提取经无水硫酸钠漏斗过滤后抽滤，然后用二氯甲烷提取经无水硫酸钠漏斗过滤后3535旋转蒸发仪浓缩旋转蒸发仪浓缩至少量，氮吹仪吹干加入少量正己烷过硅胶柱，依次用至少量，氮吹仪吹干加入少量正己烷过硅胶柱，依次用4mL4mL正己烷正己烷+丙酮丙酮(7+3)(7+3)、4mL4mL乙酸乙酯、乙酸乙酯、8mL8mL丙酮丙酮+乙酸乙酯乙酸乙酯(1+1)(1+1)、4mL4mL丙酮丙酮+甲醇甲醇(1+1)(1+1)洗
32、洗柱，收集洗脱液用旋转蒸发仪柱，收集洗脱液用旋转蒸发仪4545浓缩近干，用二氯甲烷定容至浓缩近干，用二氯甲烷定容至1mL1mL。测定测定 气相色谱条件气相色谱条件色谱柱：色谱柱：BP5BP5或或OV-101 25mOV-101 25m0.32mm(0.32mm(内径内径)石英弹性毛石英弹性毛细管柱细管柱气体流速：氮气气体流速：氮气(N(N2 2载气载气)50ml/min)50ml/min；尾吹；尾吹(氮气氮气)：50 50 ml/minml/min；氢气；氢气:0.5Kg/cm:0.5Kg/cm2 2；空气；空气:0.3Kg/cm:0.3Kg/cm2 2 。温度：柱温采用程序升温方式温度：柱温
33、采用程序升温方式检测器：氮磷检测器检测器：氮磷检测器(FTD)(FTD)色谱分析：量色谱分析：量取取11 L L样液和混合标准溶液注入气相样液和混合标准溶液注入气相色谱仪，以保留时间定性，以样品和标准峰高或峰色谱仪，以保留时间定性，以样品和标准峰高或峰面积比较定量。面积比较定量。14018519523550/min恒温2min2/min10/min进样口温度235恒温1min 结果计算结果计算fmhEhsisiiX1000色谱图色谱图2.062甲胺磷甲胺磷 2.3.775乙酰甲胺磷乙酰甲胺磷 3.4.097敌百虫敌百虫4.5.058叶掸散叶掸散 5.6.163仲丁威仲丁威 6.6.5甲基内吸磷
34、甲基内吸磷7.7.688甲拌磷甲拌磷 8.7.797久效磷久效磷 9.8.41乐果乐果10.8.575甲基对硫磷甲基对硫磷 11.12.288马拉氧磷马拉氧磷12.12.745毒杀稗毒杀稗 13.13.367西维因西维因 14.14.18虫螨磷虫螨磷15.14.353倍硫磷倍硫磷 16.14.827马拉硫磷马拉硫磷17.15.027对硫磷对硫磷 18.18.28 杀扑磷杀扑磷1.19.19.412乙硫磷乙硫磷 20.21.293克线磷克线磷3、食品中氨基甲酸酯类农药残留量的测定 氨基甲酸酯类农药的理化性质氨基甲酸酯类农药的理化性质氨基甲酸酯类农药是氨基甲酸的衍生物，杀虫力强，作用迅速，氨基甲酸
35、酯类农药是氨基甲酸的衍生物，杀虫力强，作用迅速，对虫体有较强的选择性，对人畜毒性较低并易分解失效，在体内对虫体有较强的选择性，对人畜毒性较低并易分解失效，在体内无蓄积中毒作用；无蓄积中毒作用；常见的有西维因常见的有西维因(甲萘威甲萘威)、呋喃丹、涕灭威、残杀威、速灭威、呋喃丹、涕灭威、残杀威、速灭威、害扑威、灭杀威、异丙威害扑威、灭杀威、异丙威(叶蝉散叶蝉散)、抗蚜威、灭草、灭草猛等；、抗蚜威、灭草、灭草猛等；目前目前WHOWHO和我国仅对西维因的残留量有规定。各类食品中的最高残和我国仅对西维因的残留量有规定。各类食品中的最高残留量留量(mg/Kg):(mg/Kg):稻米和小麦稻米和小麦5.0
36、5.0；全麦粉和根茎类全麦粉和根茎类2.02.0；家禽和蛋类家禽和蛋类(去壳去壳)0.5)0.5；马铃薯和白面粉马铃薯和白面粉0.20.2；畜禽肉畜禽肉0.20.2；奶制品奶制品0.10.1。（1）动物性食品中氨基甲酸酯类农药残留量测定 原理原理样品提取处理净化微孔滤膜过滤后进样，用反相高效液相色谱分离，紫外样品提取处理净化微孔滤膜过滤后进样，用反相高效液相色谱分离，紫外检测器检测，色谱峰保留时间定性外标法定量检测器检测，色谱峰保留时间定性外标法定量 试剂试剂甲醇、丙酮、乙酸乙酯、环己烷，均重蒸；甲醇、丙酮、乙酸乙酯、环己烷，均重蒸；氯化钠、无水硫酸钠；重蒸蒸馏水；氯化钠、无水硫酸钠；重蒸蒸馏
37、水；凝胶，凝胶，Bio-Beads S-XBio-Beads S-X3 3，200200400400目；目；氨基甲酸酯类农药标准品与标准溶液氨基甲酸酯类农药标准品与标准溶液 仪器仪器高效液相色谱高效液相色谱(HPLC)(HPLC)紫外检测器紫外检测器旋转蒸发仪旋转蒸发仪凝胶净化柱凝胶净化柱高效液相色谱紫外检测器高效液相色谱紫外检测器 操作方法操作方法样品提取净化制备，同动物性食品中有机磷农药样品提取净化制备，同动物性食品中有机磷农药处理方法；处理方法；高效液相色谱测定高效液相色谱测定 色谱条件：色谱条件：色谱柱：色谱柱：Altima CAltima C1818 4.6mm 4.6mm25cm;
38、25cm;流动相：甲醇流动相：甲醇+水水(60+40)(60+40)；流速：；流速：0.5mL/min;0.5mL/min;柱温：柱温：30;30;紫外检测波长：紫外检测波长：210nm210nm。测定：将仪器调至最佳状态，分别将测定：将仪器调至最佳状态，分别将5 5L L混合标准溶液混合标准溶液及样品净化液注入色谱仪中，及样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性，以样品以保留时间定性，以样品和标准峰高或峰面积比较定量。和标准峰高或峰面积比较定量。氨基甲酸酯农药氨基甲酸酯农药HPLC标准色谱图标准色谱图1.涕灭威涕灭威 2.速灭威速灭威3.呋喃丹呋喃丹 4.西维因西维因5.异丙威异丙威4、食品中
39、拟除虫菊酯农药残留量的测定 拟除虫菊酯农药的理化性质 除虫菊酯是菊科植物除虫菊成分，对昆虫具有高效速杀作用 拟除虫菊酯农药就是仿天然除虫菊酯化学合成的杀虫剂，具有高效、广谱、低毒、低残留的特点，对水生动物毒性较大 常见的溴氰菊酯(敌杀死)、氯氰菊酯、氯菊酯、中西杀灭菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、二氯苯醚菊酯等；第十三届国际食品中兽药残留法典委员会规定：溴氰菊酯在动物源食品中的MRL(mg/Kg)为牛羊鸡肌肉0.03，肝肾0.05，脂肪0.5，牛奶和鸡蛋0.03；我国农业部规定：氰戊菊酯在牛羊猪肌肉、脂肪1.0，副产品0.02，牛奶0.01 氟氯苯氰菊酯在牛肌肉、肾0.01，肝0.02，奶0.03，
40、脂肪0.15。测定方法参照GB/T 5009.162和GB/T 5009.1462003食品中有机氯农药残留量测定食品中有机氯农药残留量测定GB/T 5009.19GB/T 5009.19GC-ECDGC-ECD法法l 配标准混合使用液配标准混合使用液l 样品提取（用丙酮、己烷、乙醚、石油醚等）与净化样品提取（用丙酮、己烷、乙醚、石油醚等）与净化（用（用H2SO4H2SO4磺化）、浓缩（磺化）、浓缩（KD KD减压浓缩）、减压浓缩）、GCGC检测、检测、ECDECD检测器。检测器。l 色谱柱用硬质玻璃柱，若用不锈钢柱，易引起农药分解。色谱柱用硬质玻璃柱，若用不锈钢柱，易引起农药分解。采样液体样
41、品时，应用玻璃瓶，不能用塑料瓶。采样液体样品时，应用玻璃瓶，不能用塑料瓶。l 检测器的温度不应低于检测器的温度不应低于250250，否则，检测器很难平衡。，否则，检测器很难平衡。l 注意尾吹气流量及分流比。注意尾吹气流量及分流比。TLC TLC法法食品中有机磷农药残留量的测定食品中有机磷农药残留量的测定 GB/T 5009.20-2003 GB/T 5009.20-2003 原理：原理：果蔬中有果蔬中有机磷残留机磷残留提取提取有机溶剂有机溶剂净化净化气化气化注入注入GCGC 浓缩浓缩色谱柱中色谱柱中分离分离FPDFPD检测检测记录色谱峰记录色谱峰比较样品和标比较样品和标准品的色谱峰准品的色谱峰
42、外标定量（外标定量（多用峰高）多用峰高）果蔬果蔬搅碎搅碎足量的无水硫足量的无水硫酸钠酸钠30100g30100g取样取样10g10g振摇振摇0.5h0.5h脱色脱色70ml70ml二氯二氯甲烷甲烷脱水脱水定容至定容至2ml2ml过滤过滤35ml35ml滤液滤液室温通风室温通风挥挥至近至近干干移入移入5ml5ml具具塞刻度试管塞刻度试管0.20.80.20.8g g 活性活性炭炭二氯甲烷多二氯甲烷多次研洗残渣次研洗残渣样品处理样品处理不同种类样品，处理方法有所不同。不同种类样品，处理方法有所不同。色谱条件色谱条件1 1色谱柱：色谱柱：玻璃柱，内径玻璃柱，内径3mm3mm，长，长1.5m1.5m2
43、.0m2.0m。担体：担体：6060目目8080目美国目美国Chromosorb W AW DMCSChromosorb W AW DMCS（酸洗二甲基二氯硅烷化白（酸洗二甲基二氯硅烷化白色担体）色担体）（1 1）分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷的色谱柱）分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷的色谱柱2.52.5SESE3030（甲基硅橡胶，极弱极性）和（甲基硅橡胶，极弱极性）和3 3QFQF1 1（三氟丙基甲基（三氟丙基甲基聚硅氧烷，中等极性）混合固定液聚硅氧烷，中等极性）混合固定液1.51.5OVOV1717和和2 2QFQF1 1混合固定液混合固定液（2 2）分离测定甲拌磷、稻瘟净
44、、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷的色谱）分离测定甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷的色谱柱柱3 3PEGAPEGA（聚乙二醇己二酸酯，较强极性聚乙二醇己二酸酯，较强极性）和）和5 5QFQF1 1混合固定液混合固定液2 2NPGANPGA（己二酸新戊二醇聚酯，中等极性己二酸新戊二醇聚酯，中等极性）和和3 3QFQF1 1混合固定液混合固定液2 2气流速度：气流速度：载气为氮气载气为氮气80mL/min80mL/min；空气；空气50mL/min50mL/min；氢气；氢气180mL/min180mL/min（根据仪器选择各自的最佳比例条件）。（根据仪器选择各自的最佳比例条件）。3 3温度：温度
45、：进样口进样口220220；检测器；检测器240240；柱温；柱温180180，但测定敌敌畏，但测定敌敌畏（其稳定性差）为（其稳定性差）为130130。测定测定：将有机磷农药标准使用液将有机磷农药标准使用液2L2L5L5L分别注入气相分别注入气相色谱仪中，可测得不同浓度有机磷标准溶液的峰高，分色谱仪中，可测得不同浓度有机磷标准溶液的峰高，分别绘制有机磷农药标准曲线。同时取试样溶液别绘制有机磷农药标准曲线。同时取试样溶液2L2L5L5L注入气相色谱仪中，测得峰高，从标准曲线图中查注入气相色谱仪中，测得峰高，从标准曲线图中查出相应的含量。出相应的含量。二氯甲烷作提取剂二氯甲烷作提取剂毒性较毒性较小
46、小较便较便宜宜说明：国际上多用说明：国际上多用乙腈乙腈作为有机磷作为有机磷农药的提取剂及分配净化试剂，农药的提取剂及分配净化试剂，但其毒性较大，且较贵。但其毒性较大，且较贵。方法一方法一 速测卡法（纸片法）速测卡法（纸片法）实验原理：实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色红色）水解为乙酸与）水解为乙酸与靛酚（靛酚（蓝色蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类此可判断出样品中是否有高剂量
47、有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。农药的存在。蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测农药残留量的快速检测 GB/T 5009.199-2003实验试剂：实验试剂：1 1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片（速测卡）；、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片（速测卡）；2 2、pH 7.5 pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g15.0g磷酸氢二钠磷酸氢二钠NaNa2 2HPOHPO4 412H12H2 2OO与与1.59g1.59g无水磷酸二氢钾无水磷酸二氢钾KHKH2 2POPO4 4，用，用500 500 mLmL蒸馏水溶解。蒸馏水
48、溶解。实验步骤：实验步骤：1 1、整体测定法、整体测定法（1 1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm1cm左右方形碎片左右方形碎片,取取5g5g放入带盖瓶中，加入放入带盖瓶中，加入10 mL10 mL缓冲溶缓冲溶液，振摇液，振摇5050次，静置次，静置2min2min以上以上.(2)(2)取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置10min10min以上进行预反应，有条件时在以上进行预反应，有条件时在3737恒温装置中放置恒温装置中放置10min10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。预反应
49、后的药片表面必须保持湿润。（3 3）将速测卡对折，用手捏）将速测卡对折，用手捏3min3min或用恒温装置恒温或用恒温装置恒温3min3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。使红色药片与白色药片叠合发生反应。注意：注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。2 2、表面测定法（粗筛法）、表面测定法（粗筛法）（1 1）擦去蔬菜表面泥土，滴）擦去蔬菜表面泥土，滴2 23 3滴缓冲液在蔬菜表面，滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。（2 2）取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。）取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白
50、色药片上。（3 3）放置）放置10 min10 min以上进行预反应，有条件时在以上进行预反应，有条件时在37 37 恒温恒温装置中放置装置中放置10 min10 min。预反应。预反应10 min10 min，预反应后的药片表面，预反应后的药片表面必须保持湿润。必须保持湿润。（4 4）将速测卡对折，用手捏）将速测卡对折，用手捏3min3min或用恒温装置恒温或用恒温装置恒温3min3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。使红色药片与白色药片叠合发生反应。注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。结果判断：结果判断：结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农
