1、u定义:定义:基因工程的主要目的是通过优良性状相关基因的重组,获得具有高度应用价值的新物质(品系),为此必须从现有生物群体中,根据需要分离出可用于克隆的相关基因,这样的基因通常称之为目的基因,目的基因主要是结构基因。u目的基因可以是完整的基因(包括转录启动子、基因编码区和转录终止子),也可以是基因的部分片断。u作为一个能转录和翻译的结构基因必须包括转 录启动子、基因编码区和转录终止子。u启动子:是DNA上RNA聚合酶识别、结合和 促进转录的一段核苷酸序列。u基因编码区:包括起译码ATG、开放阅读框和 休止码TAA(TAG、TGA).u终止子:是一个能提供转录停止信息的核苷酸 序列。编码区:编码
2、区:原核生物的基因多数以操作子形式存在,完成同类功能的多个基因聚集在一起,处于同一个启动子的调控之下,下游同具一个终止子。原核生物基因在起译码ATG上游约10bp处,有一个富含嘌呤核苷酸的SD保守序列区保守序列区,一般为AGGA,由此区转录的序列是翻译时核糖体识别、结合mRNA的位置,核糖体由此位置向前移动,寻找起译码AUG.启动子:启动子:原核生物的启动子含35序列保守区序列保守区5TTGACA3提供RNA聚合酶识别的信号;10序列保序列保守区守区5TATAAT3,DNA双链从此解开双链转录。操纵子除了启动子以外,还有一些调控转录的其他因子,如调节因子和操纵因子等.终止子:终止子:原核生物基
3、因转录终止之前有一段回文序列结构回文序列结构,使RNA聚合酶减缓移动或停止RNA的合成。基因编码区:基因编码区:真核生物染色体基因组的基因是单独存在的,并且两个基因之间有很长的间隔序列区(内含子);启动子:启动子:真核生物结构基因的启动子通常包含3个保守序个保守序列区列区:在20至至30序列区有一个序列区有一个TATA框框,DNA双链在此处开始解开;在75序列区有一个序列区有一个CAAT框框,其作用是与RNA聚合酶结合有关;在更上游处有一个GC框框,是某些转录调控因子结合的序列;终止子:终止子:高等真核生物结构基因休止码序列下游有一保守的AATAAA序列提供转录产物的释放信号;真核生物染色图基
4、因组的结构基因不具有SD序列区,核糖体与转录的mRNA的结合靠mRNA 5端添加的“帽”结构;质粒基因组病毒(噬菌体)基因组线粒体基因叶绿体基因组Two Libraries:cDNA Library vs Genomic LibrarymRNAcDNAReverse transcriptionChromosomal DNARestriction digestionGenes in expressionTotal GeneComplete geneGene fragmentsSmallerLibraryLarger LibraryVector:Plasmid or phageVector:PlasmidJuang RH(2019)BCbasics