1、湘潭职业技术学院检验教研室邓阳勇 第一节第一节 免疫学诊断免疫学诊断一、抗原抗体的检测二、淋巴细胞的检测l原理原理：Ag与相应与相应Ab在体内与体外可发生特在体内与体外可发生特异性结合异性结合l检测原则检测原则：1.已知已知Ag检测未知检测未知Ab 2.已知已知Ab检测未知检测未知Agv标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。v根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。采取不同标本。v应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。加入拮抗剂。
2、v尽可能采集病变明显部位的材料。尽可能采集病变明显部位的材料。v标本必须新鲜，采集后尽快送检。标本必须新鲜，采集后尽快送检。v送检过程中要采取适当的保存方式。送检过程中要采取适当的保存方式。标本采集与送检原则标本采集与送检原则致病菌的检验程序致病菌的检验程序标本标本生化试验生化试验 血清学试验血清学试验 动物试验药敏试验直接涂片检查直接涂片检查分离培养分离培养 分子生物学技术（核酸杂交、PCR）其它(HPLC)人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价
3、（滴度）的升高。感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为的血清进行试验，故称为血清学诊断血清学诊断(serological diagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大升高大于等于于等于4倍倍时方有意
4、义。时方有意义。常用方法：直接凝集试验、乳胶常用方法：直接凝集试验、乳胶 凝集试验、沉凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。抗原抗体反应抗原抗体反应1、抗原抗体的结合与析出2、抗原抗体反应的特点3、抗原抗体反应的影响因素引起抗原抗体结合的作用力引起抗原抗体结合的作用力1、电荷引力（库仑引力）2、电子云引力（Van der Waals力）3、氢键结合力4、疏水作用力抗原抗体结合物析出的原因抗原抗体结合物析出的原因析出+电解质+抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的特点1、特异性2、适合比例性3、可逆性网格学说网格学说（lattice theory）抗体
5、过剩抗原过剩抗体抗体比例合适可逆性可逆性K（亲和常数）=Ag+AbAg Ab 抗原抗体反应的影响因素抗原抗体反应的影响因素1、电解质2、酸碱度（pH值6-8）3、温度（37-42。C）抗原或抗体的检测方法抗原或抗体的检测方法类型类型 抗原抗原 抗体抗体 辅助物辅助物 敏感度（敏感度（g抗体氮）抗体氮）凝集反应凝集反应 颗粒性颗粒性 凝集素凝集素 0.01沉淀反应沉淀反应 可溶性可溶性 沉淀素沉淀素 5-10补体溶血反应补体溶血反应 红细胞红细胞 溶血素溶血素 补体补体 0.001-0.3 G-细菌细菌 溶菌素溶菌素 补体补体 （同上）（同上）补体结合反应补体结合反应 固定补体抗体固定补体抗体
6、补体补体 SRBC 溶血素溶血素 0.1 中和反应中和反应 外毒素外毒素 抗毒素抗毒素 靶细胞靶细胞 0.01 病毒病毒 中和抗体中和抗体 靶细胞靶细胞 （同上）（同上）直接凝集反应直接凝集反应 玻片法：玻片法：ABO血型鉴定血型鉴定试管法：肥达试验试管法：肥达试验颗粒性抗原抗体（凝集素）正向间接凝集反应正向间接凝集反应如：类风湿因子的检测如：类风湿因子的检测可溶性抗原载体颗粒抗体（凝集素）反向间接凝集反应反向间接凝集反应抗体可溶性抗原载体颗粒间接凝集抑制反应间接凝集抑制反应如妊娠诊断试验检测如妊娠诊断试验检测HCG凝集凝集抑制待检样品待检样品液相内沉淀反应液相内沉淀反应絮状沉淀反应环状沉淀反
7、应如法医学血迹鉴定+抗血清抗原抗原抗体凝胶内沉淀反应凝胶内沉淀反应免疫扩散技术免疫扩散技术免疫电泳技术免疫电泳技术单向扩散试验单向扩散试验双向扩散试验双向扩散试验火箭电泳火箭电泳对流电泳对流电泳免疫电泳免疫电泳主要的免疫标记物主要的免疫标记物类别类别 标记物标记物 用途用途荧光素荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定放射性核素放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I酶酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定 标
8、记免疫技术的分类标记免疫技术的分类一、按测定用途分类：一、按测定用途分类：1、免疫组化技术2、免疫测定技术二、按标记物分类二、按标记物分类：1、酶免疫技术酶免疫技术2、荧光免疫技术、荧光免疫技术3、放射免疫技术、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术直接法间接法补体法双标记法结合相游离相ELISA间接法间接法夹心法夹心法竞争法竞争法二、免疫细胞检测技术免疫细胞检测技术1、细胞表面标志检测2、细胞功能检测3、细胞因子检测常用的免疫细胞表面标志检测技术常用的免疫细胞表面标志检测技术一、免疫标记检测一、免疫标记检测1、荧光抗体法、荧光抗体法2、酶免疫检测法、酶免疫检测法3、免疫金银染色法、免疫金
9、银染色法二、补体依赖的细胞毒试验（二、补体依赖的细胞毒试验（CDC）三、三、E花环形成试验花环形成试验SmIg的荧光抗体检测法的荧光抗体检测法SmIg的酶免疫检测法的酶免疫检测法补体依赖的细胞毒试验补体依赖的细胞毒试验（CDC）染料补体E-花环花环T细胞B细胞花环形成细胞绵羊红细胞一、转化、增殖试验一、转化、增殖试验1、淋巴细胞转化试验、淋巴细胞转化试验2、混合淋巴细胞培养、混合淋巴细胞培养二、细胞毒检测二、细胞毒检测1、T细胞介导的细胞毒试验细胞介导的细胞毒试验2、NK活性测定活性测定3、ADCC作用测定作用测定常用的免疫细胞功能检测技术常用的免疫细胞功能检测技术放射性测定3H-TdR丝裂原
10、（抗原）刺激淋淋巴巴细细胞胞转转化化试试验验原原理理示示意意放射性测定细细胞胞毒毒试试验验原原理理示示意意靶细胞效应细胞分离上清可检测的细胞因子可检测的细胞因子白细胞介素（Interleukin）IL-1、IL-2、IL-18干扰素（Interferon）IFN-、IFN-、IFN-肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor）TNF-、TNF-集落刺激因子（Colony-stimulating factor）M-CSF、G-CSF转化生长因子（Transforming growth factor）TGF-趋化因子（Chemokine）IL-8、GROs、MCP-1生长因子（Gro
11、wth factor）EGF、FGF、IGF、PDGF细胞因子检测的特点细胞因子检测的特点1、免疫原性较弱2、样品含量低3、样品具有时效性4、生物效应特异性差细胞因子检测的方法细胞因子检测的方法1、免疫标记技术检测、免疫标记技术检测抗原性测定抗原性测定2、细胞生物学方法检测、细胞生物学方法检测生物活性测定生物活性测定3、分子生物学技术检测、分子生物学技术检测mRNA表达测定表达测定特异性免疫获得方式：特异性免疫获得方式：自然免疫、人工免疫自然免疫、人工免疫l自然被动免疫自然被动免疫：如胎儿从母体获得：如胎儿从母体获得IgG 婴儿从母体获得婴儿从母体获得IgMl自然自动免疫自然自动免疫：感染病原
12、体后获得免疫力：感染病原体后获得免疫力l人工自动免疫人工自动免疫:接种类毒素、疫苗等接种类毒素、疫苗等l人工被动免疫人工被动免疫：注射抗毒素、丙种球蛋白等：注射抗毒素、丙种球蛋白等第二节第二节 免疫预防免疫预防 思考题思考题：l1.1.你知道注射你知道注射“乙肝疫苗、卡介苗、白白破三乙肝疫苗、卡介苗、白白破三联疫苗联疫苗”的目的是什么？机制？属于何种免疫？的目的是什么？机制？属于何种免疫？l2.2.你知道注射你知道注射“丙球、胎盘球蛋白、抗毒素、丙球、胎盘球蛋白、抗毒素、IL-2IL-2、IFN”IFN”的目的是什么？机制？属于何种的目的是什么？机制？属于何种免疫？免疫？l3.3.注射疫苗和注
13、射丙球等制剂获得免疫力的方注射疫苗和注射丙球等制剂获得免疫力的方式各有什么特点？式各有什么特点？l4 4请你举一个实例说明何时使用疫苗、何时请你举一个实例说明何时使用疫苗、何时使用丙球等制剂？理由及注意事项使用丙球等制剂？理由及注意事项。l定义定义：根据特异性免疫应答的原理，采用人工方：根据特异性免疫应答的原理，采用人工方法将法将Ag/Ab制成各种制剂，制成各种制剂，接种于人体接种于人体，使其，使其产生产生/获得特异性免疫力获得特异性免疫力，达到预防某些疾病的目的。，达到预防某些疾病的目的。l分类：分类：1、人工、人工主动主动免疫免疫 用疫苗或类毒素等抗原接种机体，使之产生特异用疫苗或类毒素等
14、抗原接种机体，使之产生特异免疫，从而预防感染的措施。免疫，从而预防感染的措施。2、人工、人工被动被动免疫免疫 用抗体或细胞因子等制剂，使之获得特异免疫，用抗体或细胞因子等制剂，使之获得特异免疫，以治疗或紧急预以治疗或紧急预 防感染的措施。防感染的措施。定义定义：人工主动免疫将疫苗人工主动免疫将疫苗(vaccine)或类毒素接或类毒素接种于人体，使机体产生获得性免疫力的一种于人体，使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。种防治微生物感染的措施，主要用于预防。l灭活疫苗（死疫苗）灭活疫苗（死疫苗）：选用免疫原性强的细菌，经人：选用免疫原性强的细菌，经人工大量培养后，用理化方
15、法杀死而成。工大量培养后，用理化方法杀死而成。l减毒活疫苗减毒活疫苗：用减毒或无毒力的活病原体制成。：用减毒或无毒力的活病原体制成。l类毒素类毒素：细菌外毒素经：细菌外毒素经0.3%-0.4%甲醛液作用甲醛液作用3-4周后，周后，毒性消失但仍保持免疫原性。毒性消失但仍保持免疫原性。l亚单位疫苗亚单位疫苗：根据细菌抗原分析，查明不同致病菌的：根据细菌抗原分析，查明不同致病菌的主要保护性免疫原存在的组分，然后将之制成的疫苗。主要保护性免疫原存在的组分，然后将之制成的疫苗。lDNA重组疫苗重组疫苗：通过：通过DNA重组技术制备所需的疫苗。重组技术制备所需的疫苗。l核酸疫苗核酸疫苗：或称：或称DNA疫
16、苗、基因疫苗，是将能编码引疫苗、基因疫苗，是将能编码引起保护性免疫应答的病原体免疫原基因片段和质粒载起保护性免疫应答的病原体免疫原基因片段和质粒载体直接注射入宿主体以表达目的免疫原，进而诱导出体直接注射入宿主体以表达目的免疫原，进而诱导出体液和细胞免疫的新型疫苗。体液和细胞免疫的新型疫苗。l治疗性疫苗治疗性疫苗种类种类死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗制剂性状制剂性状杀死病原体杀死病原体毒力减弱（无毒）毒力减弱（无毒）的活病原体的活病原体接种次数及量接种次数及量2-3次，用量大次，用量大（间隔（间隔7-10天）天）1次，用量小次，用量小稳定性稳定性稳定，易保存稳定，易保存稳定性差，不易稳定性差，不易保存
17、保存副作用副作用无毒力回复突变无毒力回复突变有毒力回复突变有毒力回复突变 2、类毒素、类毒素（接种（接种2次，吸收缓慢，间隔次，吸收缓慢，间隔4-6周）周）外毒素外毒素 0.3-0.4%甲醛甲醛 类毒素类毒素 如：百如：百-白白-破精致吸附类毒素破精致吸附类毒素 3、新型疫苗新型疫苗 1）亚单位疫苗亚单位疫苗：提取有效免疫原成分。：提取有效免疫原成分。(减少不良反应，排除致癌的可能性）减少不良反应，排除致癌的可能性）如如HA、NA，HBSAg 2）合成肽疫苗合成肽疫苗：人工合成抗原肽。：人工合成抗原肽。（无需培养微生物，可大量生产，无致（无需培养微生物，可大量生产，无致 癌、返祖的危险性）癌、
18、返祖的危险性）3）基因工程疫苗基因工程疫苗图示：编码免疫原基因图示：编码免疫原基因载体载体体内体内 酵母菌、大肠杆菌（体外培养）酵母菌、大肠杆菌（体外培养）如：如：重组抗原疫苗、重组载体疫苗、重组抗原疫苗、重组载体疫苗、DNA疫苗、疫苗、转基因植物疫苗转基因植物疫苗 等等1.接种对象：接种对象：凡免疫力差、与病原体接触机会多、凡免疫力差、与病原体接触机会多、疾病危害大、流行地区易感者。疾病危害大、流行地区易感者。2.接种剂量、次数和间隔时间接种剂量、次数和间隔时间（计划免疫程序表）（计划免疫程序表）3.接种途径：接种途径：皮内、皮下、吸入、口服皮内、皮下、吸入、口服4.接种后反应：接种后反应：
19、24h内局部红肿、疼痛、淋巴结大；内局部红肿、疼痛、淋巴结大；全身发热、头痛、恶心，数天恢复。全身发热、头痛、恶心，数天恢复。5.禁忌症禁忌症：高热、急性传染病、严重心血管病、自：高热、急性传染病、严重心血管病、自身免疫病、免疫缺陷病。身免疫病、免疫缺陷病。人工被动免疫定义人工被动免疫定义：注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。但这些免刻获得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生的，故维持时间短。疫物质不是病人自己产生的，故维持时间
20、短。主要用于治疗或紧急预防。主要用于治疗或紧急预防。人工被动免疫生物制品：人工被动免疫生物制品：抗毒素抗毒素(antitoxin)：外外/类毒素类毒素马马Ab丙种球蛋白丙种球蛋白：正常人血清或健康产妇胎盘中提取：正常人血清或健康产妇胎盘中提取人特异性人特异性Ig：1.含高效价特异性抗体且超敏反应发生率低含高效价特异性抗体且超敏反应发生率低 2.来源恢复期病人，含高效价特异性抗体供来源恢复期病人，含高效价特异性抗体供血者血浆血者血浆 接种疫苗接种疫苗/类毒素的免疫者血浆。类毒素的免疫者血浆。人工被动免疫注意事项人工被动免疫注意事项：1.注意防止超敏反应注意防止超敏反应2.早期和足量早期和足量3.
21、不滥用丙球不滥用丙球4.应用范围：易感人群、患者应用范围：易感人群、患者区别要点区别要点人工主动免疫人工主动免疫人工被动免疫人工被动免疫输入物质输入物质抗原抗原抗体或细胞因子抗体或细胞因子免疫生效时间免疫生效时间慢，慢，2-42-4周周快，立即快，立即免疫维持时间免疫维持时间长，数月长，数月-数年数年短，短，2-32-3周周主要用途主要用途预防预防治疗或紧急预防治疗或紧急预防区别点区别点 概念：概念：根据免疫学原理，应用物理、化学根据免疫学原理，应用物理、化学和生物学的方法增强或抑制机体的免疫机和生物学的方法增强或抑制机体的免疫机能，人为地纠正免疫异常状态，达到治疗能，人为地纠正免疫异常状态，
22、达到治疗的目的的措施。的目的的措施。1、免疫增强疗法免疫增强疗法 免疫抑制疗法免疫抑制疗法 2、特异性免疫治疗特异性免疫治疗 非特异性免疫治疗非特异性免疫治疗 3、主动免疫治疗：主动增强，主动免疫治疗：主动增强，“疫苗疫苗”，直接作，直接作用用 被动免疫治疗：被动增强，抗体、免疫效应被动免疫治疗：被动增强，抗体、免疫效应 细胞、小分子免疫肽，细胞、小分子免疫肽，间接作用，过继免疫间接作用，过继免疫一一 抗体为基础的免疫治疗抗体为基础的免疫治疗二二 抗原为基础的免疫治疗抗原为基础的免疫治疗三三 细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗四四 细胞为基础的免疫治疗细胞为基
23、础的免疫治疗五五 免疫调节剂治疗免疫调节剂治疗六六 免疫重建免疫重建定义：定义：输入特异性免疫效应物质，使机体立即输入特异性免疫效应物质，使机体立即 获得某种特定的免疫力，以达到治疗目的。获得某种特定的免疫力，以达到治疗目的。特点：特点：见效快，维持时间短见效快，维持时间短作用：作用：紧急预防和治疗传染病、抗肿瘤和抗移植紧急预防和治疗传染病、抗肿瘤和抗移植 物排斥反应。物排斥反应。如：破伤风、白喉抗毒素，丙种球蛋白如：破伤风、白喉抗毒素，丙种球蛋白 抗病毒血清、抗淋巴细胞丙种球蛋白抗病毒血清、抗淋巴细胞丙种球蛋白 肿瘤特异性肿瘤特异性McAb（免疫导向疗法）免疫导向疗法）定义：定义：利用抗原性
24、疫苗对机体进行免疫接种，利用抗原性疫苗对机体进行免疫接种，诱导产生特异性免疫应答或免疫耐受，诱导产生特异性免疫应答或免疫耐受，达到治疗目的。达到治疗目的。特点：特点：见效慢，维持时间长见效慢，维持时间长作用：作用：预防传染病、抗肿瘤。预防传染病、抗肿瘤。如：卡介苗、乙肝如：卡介苗、乙肝V多肽疫苗、多肽疫苗、流感流感V亚单位疫苗、肿瘤疫苗亚单位疫苗、肿瘤疫苗定义：定义：采用非特异性免疫调节剂（如细胞因子采用非特异性免疫调节剂（如细胞因子及其拮抗剂）来调节机体免疫功能失衡的状况，及其拮抗剂）来调节机体免疫功能失衡的状况，以达到治疗或辅助治疗的目的。以达到治疗或辅助治疗的目的。BRM：（生物应答调节
25、剂）生物应答调节剂）调节机体免疫功能，抵抗病原微生物或调节机体免疫功能，抵抗病原微生物或 癌细胞的侵袭。癌细胞的侵袭。定义：定义：将自体或同种异体的免疫细胞，经体外将自体或同种异体的免疫细胞，经体外激活诱导增殖后输给患者，使其获得免疫效应激活诱导增殖后输给患者，使其获得免疫效应细胞，在体内发挥作用，达到治疗疾病的作用。细胞，在体内发挥作用，达到治疗疾病的作用。（一）活化的免疫细胞（供者（一）活化的免疫细胞（供者/自身）自身）淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK，Lymphokine activated killercells）肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤浸润淋巴细胞（TIL，Tumor
26、 infiltrating lymphocyte）定义：定义：将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋 巴干细胞，移植给免疫缺陷个体，使后巴干细胞，移植给免疫缺陷个体，使后 者的造血能力、免疫功能全部或部分得者的造血能力、免疫功能全部或部分得 到恢复。到恢复。方法：方法：骨髓移植、脐血干细胞移植骨髓移植、脐血干细胞移植作用：作用：治疗免疫缺陷病、白血病、再障治疗免疫缺陷病、白血病、再障（一）免疫增强剂（一）免疫增强剂肿瘤、免缺肿瘤、免缺1、免疫因子：、免疫因子：细胞因子、免疫核糖核酸、胸腺肽细胞因子、免疫核糖核酸、胸腺肽2、化学药物：化学药物：左旋咪唑左旋咪唑TNK
27、，西咪替丁西咪替丁Ts3、微生物制剂：微生物制剂：BCG、短小棒状杆菌短小棒状杆菌MCK4、多糖类以及中草药：灵芝、香菇等多糖类以及中草药：灵芝、香菇等定义：定义：用人工方法减弱或抑制对机体不利的免用人工方法减弱或抑制对机体不利的免 疫应答，用于移植排斥反应和自免。疫应答，用于移植排斥反应和自免。方法：方法：免疫抑制剂、放射线照射等免疫抑制剂、放射线照射等 免疫抑制剂免疫抑制剂1、细胞毒药物：环磷酰胺（细胞毒药物：环磷酰胺（CTX）、）、硫唑嘌呤硫唑嘌呤2、激素及抗淋巴细胞抗体激素及抗淋巴细胞抗体影响抗原识别、处理、递呈影响抗原识别、处理、递呈3、真菌代谢产物：环孢素真菌代谢产物：环孢素A(CsA)、FK506 影响细胞因子合成影响细胞因子合成4、中药：雷公藤多苷中药：雷公藤多苷l列举常用的抗原抗体检测方法，说明其用途列举常用的抗原抗体检测方法，说明其用途l解释解释E花环实验花环实验、淋巴细胞转化实验淋巴细胞转化实验，说明，说明其其意义意义l解释解释疫苗疫苗、灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫、灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、苗、类毒素类毒素、抗毒素抗毒素的概念的概念l比较死疫苗与活疫苗的区别比较死疫苗与活疫苗的区别l比较人工自动免疫与人工被动免疫的区别比较人工自动免疫与人工被动免疫的区别l列举我国儿童计划免疫疫苗列举我国儿童计划免疫疫苗
