1、人用药品国际注册的人用药品国际注册的药学研究技术要求药学研究技术要求浙江省药品检验所浙江省药品检验所陈镇生陈镇生分析方法的确证试验分析方法的确证试验（Q2A）简介：需要确证的分析方法类型：附件A:术语 a简介简介m内容内容o分析方法确证的参数分析方法确证的参数o术语和定义术语和定义m分析方法确证的目的分析方法确证的目的 证明该方法适合预期目的证明该方法适合预期目的需要确证的分析方法类型需要确证的分析方法类型m鉴别试验鉴别试验m杂质定量试验杂质定量试验m杂质限度试验杂质限度试验m原料或制剂中活性成分以及制剂中选原料或制剂中活性成分以及制剂中选定组分的定量测试定组分的定量测试典型的确证参数典型的确
2、证参数(Characteristics)m准确性准确性(Accuracy)m精密度精密度(Precision)o重复性重复性(Repeatablity)o中间精密度中间精密度(Intermediate Precision)m专属性专属性(Specificity)m检测限度检测限度(Detection limit)m定量限度定量限度(Quantitation limit)m线性线性(Linearity)m范围范围(Range)m耐用性耐用性(Robustness)表：分析方法的类型 定性鉴别 杂质检查 含量分析；溶出 度(含量测定)；项目 定量 限度检测 含量效价 准确度 -+-+精密度 重复性
3、 -+-+中间精密度 -+-+专属性 +检测限度 -+-定量限度 -+-线性 -+-+范围 -+-+注意：-表示通常不需确证的项目；+表示通常需确证的项目；假如测定了重现性（见术语表），中间精密度可不测定；缺乏专属性的分析方法，应由其他分析方法来作补充；有些情况下需要。a下列情况需重新确证下列情况需重新确证m原料药合成方法的改变原料药合成方法的改变m制剂组分的改变制剂组分的改变m分析方法的改变分析方法的改变a术语表术语表 1 1分析方法（分析方法（Ana1ytica1 procedureAna1ytica1 procedure）分析方法指的是进行分析的方式，应详细描述进行每个分析试验所必需的步
4、骤。它包括（但不局限于）：样品、参比物、试剂的制备，仪器的使用，校准曲线的绘制，计算公式的运用等。2 2专属性（专属性（SpecificitySpecificity）专属性是指在一些可能存在的组分如杂质、降解产物、基质等的存在下，对被分析物质的准确可靠的测定。一种分析方法缺乏专属性时，应由其他分析方法作补充。专属性有以下含义：定性鉴别：确保被分析物质符合其特性。纯度检查：确保采用的分析方法可检测出杂质，如有关物质、重金属、溶剂残留量等。含量测定（含量或效价）：可提供样品中被分析物的含量或效价的准确结果。3.3.准确性准确性(AccuracyAccuracy)准确性指的是真实值或认可的参考值与测
5、量值之间相近程度。准确性有时也称真实度。4.4.精密度精密度(PrecisionPrecision)精密度指的是规定条件下对同一匀质样品多次取样进行一系列检测结果的一致程度（离散程度）。精密度可以从三方面考虑：重复性、中间精密度、重现性。精密度检查应使用同一匀质的、可信的样品。如果得不到，可用人工制得的样品或样品溶液进行研究。分析方法的精密度通常以测量法的变异性、标准偏差或变异系数来表达。4.14.1重复性重复性(RepeatabilityRepeatability)重复性是指在同样的操作条件下较短时间间隔的精密度：也称为日内差(Intra-assay precision)。4.24.2中间精
6、密度中间精密度(Intermediate PrecisionIntermediate Precision)中间精密度指的是试验室内部条件改变（如：不同天、不同分析测试者、不同仪器等）情况下的精密度。4.34.3重现性（重现性（ReproducibilityReproducibility）指不同试验室之间的精密度，常用于合作试验研究(collaborative studies)中的方法学的标准化研究。5 5检测限度（检测限度（Detection limitDetection limit）检测限度指的是样品中的被分析物质能够被检测到的最低量，通常无需定量。6 6定量限度（定量限度（Quantita
7、tion Quantitation limitlimit）某种分析方法的定量限度是指具有合适准确性和精密度的条件下，能够定量测定分析组分的最低限量。它是样品中含量低的化合物定量分析的参数，特别适用于杂质和（或）降解产物的测定。7 7线性（线性（LinearityLinearity）分析方法的线性是指所得检测结果与样品中被分析物的浓度（含量）成比例关系的性能。8 8范围（范围（RangeRange）分析方法的范围是指在样品中被分析物的较高浓度(量)和较低浓度(量)之间的区间、已证实区间内具有合适的准确性、精密度、线性。9 9耐用性（耐用性（RobustnessRobustness）分析方法的耐用
8、性是指试验参数适当地发生细小改变时，测量能力保持不受影响，可用于说明正常使用时的可靠性。分析方法的确证：方法学分析方法的确证：方法学（Q2B）1：简介：简介m目的：目的：o对每一种分析方法中参数的确证提供指导和建议对每一种分析方法中参数的确证提供指导和建议o申报中建立数据的表示方式申报中建立数据的表示方式m注意：注意：o整个方法学确证中，必须采用经过完全确认的、整个方法学确证中，必须采用经过完全确认的、纯度已知的参比物质来确证。纯度已知的参比物质来确证。o参比物质的纯度要求与使用目的应一致参比物质的纯度要求与使用目的应一致 2：专属性：专属性m鉴别鉴别o通过与参比物（结构相同）比较得到正结果或
9、负结果通过与参比物（结构相同）比较得到正结果或负结果o通过与被测物结构相似或相关物质比较得不到正结果通过与被测物结构相似或相关物质比较得不到正结果m含量测定和杂质检查含量测定和杂质检查o色谱方法色谱方法 色谱图色谱图(标出每一成分标出每一成分)分离度分离度专属性的标准专属性的标准o非专属性方法非专属性方法 用其他支持性的分析方法来辅助用其他支持性的分析方法来辅助n可得到杂质可得到杂质 用加入法用加入法n得不到杂质得不到杂质 强力破坏后用不同方法比较测定峰的纯度强力破坏后用不同方法比较测定峰的纯度(二级管阵列、质谱二级管阵列、质谱)3：线性：线性 原料药（标准储备液）原料药（标准储备液）至少至少
10、5个个 混匀的制剂组方混匀的制剂组方 浓度系列浓度系列 采集信号采集信号 测定测定 统计（线性关系或函数关系）统计（线性关系或函数关系）4：范围：范围m在尽可能大的浓度范围内均能获得良好的线性、精密度在尽可能大的浓度范围内均能获得良好的线性、精密度和准确性和准确性m最小的规定范围：最小的规定范围：o对原料药或制剂的含量测定对原料药或制剂的含量测定 80120%o对含量均匀度对含量均匀度 70 130%o对溶出度对溶出度 规定值的规定值的20%o对杂质检查对杂质检查 为报告的杂质水平至所订限度的为报告的杂质水平至所订限度的120%o对已知有异常功效或有毒杂质对已知有异常功效或有毒杂质 与其与其“
11、水平水平”相当相当o同法测含量和杂质同法测含量和杂质(且用且用100%标准品标准品)从杂质量到从杂质量到120%5：准确性：准确性m含量测定含量测定原料药原料药o用该方法去测已知纯度的用该方法去测已知纯度的物质物质o将该法与另一成熟方法比将该法与另一成熟方法比较较o在精密度、线性和专属性在精密度、线性和专属性建立后得出建立后得出制剂制剂o用该方法去测按处方量制用该方法去测按处方量制成的混合物（加入已知量成的混合物（加入已知量被测物）被测物）o在制剂中加入已知量主药在制剂中加入已知量主药或与另一成熟方法比较或与另一成熟方法比较o在精密度、线性和专属性在精密度、线性和专属性建立后得出建立后得出m杂
12、质（定量）杂质（定量）o在样品（原料在样品（原料/制剂）中加入已知量的杂质制剂）中加入已知量的杂质o无法得到杂质无法得到杂质/降解物的，与采用其他方法测得的结果比降解物的，与采用其他方法测得的结果比较，可以使用原料的响应值较，可以使用原料的响应值m申报数据申报数据o在规定的线性范围，对在规定的线性范围，对3个浓度测个浓度测9个数据来评价个数据来评价o回收率或平均值与真值的差异及它们的置信区间来评价回收率或平均值与真值的差异及它们的置信区间来评价 6：精密度：精密度 含量测定和杂质的定量测定均应作精密度考察含量测定和杂质的定量测定均应作精密度考察m重复性重复性o在规定范围内测在规定范围内测9次（
13、次（3种浓度种浓度/每种重复每种重复3次）或次）或o在试验浓度在试验浓度100%时测时测6次次m中间精密度中间精密度 确定随机事件确定随机事件(日期、分析者、仪器等日期、分析者、仪器等)对精密度的影响对精密度的影响m重现性重现性 试验室之间试验室之间m申报数据申报数据 均应报标准差、相对标准差和置信区间均应报标准差、相对标准差和置信区间 7：检测限度：检测限度m根据直观评价（用于仪器或非仪器）根据直观评价（用于仪器或非仪器）m根据信噪比（用于有基线噪音的方法）根据信噪比（用于有基线噪音的方法）已知低浓度被测物的信号已知低浓度被测物的信号 3 2 空白样品的信号空白样品的信号 1 1m根据响应值
14、的标准偏差和斜率根据响应值的标准偏差和斜率 检测限度（检测限度（DL）=3.3/s：响应值的标准偏差（通过空白样品测背景响应值或：响应值的标准偏差（通过空白样品测背景响应值或Y轴截距）轴截距）s：校正曲线的斜率（通过被测物的校正曲线求得）校正曲线的斜率（通过被测物的校正曲线求得）=或m申报数据申报数据o检测限度检测限度 o检测限度的测定方法检测限度的测定方法oDL是由直观评价或信噪比得来（报相关的色谱图）是由直观评价或信噪比得来（报相关的色谱图）oDL是由计算或外推法得来的估计值，则应专门对一些已是由计算或外推法得来的估计值，则应专门对一些已知接近或就在限度上的样品进行分析知接近或就在限度上的
15、样品进行分析ACs=1=0.1 DL=0.33 s=1/2=0.3 DL=1.98 8：定量限度：定量限度m直观评价直观评价 在准确度和精密度符合要求的前提下，能测得的最小量在准确度和精密度符合要求的前提下，能测得的最小量m根据信噪比（用于有基线噪音的方法）根据信噪比（用于有基线噪音的方法）已知低浓度被测物的信号已知低浓度被测物的信号 10 空白样品的信号空白样品的信号 1 m根据响应值和斜率的标准偏差根据响应值和斜率的标准偏差 定量限度（定量限度（QL）=10/s=：响应值的标准差（通过一组空白样品的分析或：响应值的标准差（通过一组空白样品的分析或根据校正曲线）根据校正曲线）s：校正曲线的斜
16、率校正曲线的斜率m申报数据申报数据o定量的限度定量的限度 o定量限度的测定方法定量限度的测定方法o分析一些已知接近限度或限度上的样品来证实分析一些已知接近限度或限度上的样品来证实 9：耐用性：耐用性 证实在某些参数由微小的变异后，分析方法仍可靠证实在某些参数由微小的变异后，分析方法仍可靠 典型例子：典型例子：o供试液的稳定性供试液的稳定性o萃取时间萃取时间o在在HPLC中流动相的中流动相的pH值的变化值的变化 流动相组分的变化流动相组分的变化 柱子不同（不同批号和供应商）柱子不同（不同批号和供应商）温度不同温度不同 流速不同流速不同o在在GC中不同柱子（不同批号和供应商）中不同柱子（不同批号和供应商）温度不同温度不同 流速不同流速不同 如分析方法对分析参数变化是敏感的，则如分析方法对分析参数变化是敏感的，则该分析参数就应适当控制或在方法中注明。该分析参数就应适当控制或在方法中注明。Q2Q2：方法学：方法学一九九九年九月一九九九年九月完完Q精密度试验精密度试验m应使用同一均质、可信的样品应使用同一均质、可信的样品m多次取样进行一系列试验多次取样进行一系列试验称量称量溶解溶解(回流提取、超声回流提取、超声)加各种试剂加各种试剂反应温度、时间、光照等时间影响反应温度、时间、光照等时间影响供试液供试液测定测定
