1、兽医原生动物虫学兽医原生动物虫学兽医原生动物学兽医原生动物学l研究寄生于动物体的原生动物及其引起的疾病和防治的一门科学。l原生动物又称原虫，是单细胞动物，能由一个细胞进行和完成生命活动的全部功能。l原生动物寄生于动物的腔道、体液、组织和细胞内，可致病或不致病。原虫的形态和生活史原虫的形态和生活史1 原虫的发现与构造原虫的发现与构造l17世纪世纪列文虎克列文虎克Leeuwenhoek（1632.10.241723.08.26）发明显微镜，并发现兔肝球虫和贾发明显微镜，并发现兔肝球虫和贾第鞭毛虫第鞭毛虫l1888年年巴贝斯氏巴贝斯氏发现罗马尼亚流行的巴贝斯虫病发现罗马尼亚流行的巴贝斯虫病（血红蛋白
2、尿）的病原体（血红蛋白尿）的病原体l1893年年史密斯史密斯证明该虫由蜱传播，后他又和证明该虫由蜱传播，后他又和基尔基尔本本氏发现双芽巴贝斯虫的生活史氏发现双芽巴贝斯虫的生活史l1897年年罗斯罗斯氏证明蚊子为鸟疟原虫的媒介，阐明氏证明蚊子为鸟疟原虫的媒介，阐明了疟原虫的生活史了疟原虫的生活史l全世界已发现全世界已发现45000种原虫，其中一些为寄生原种原虫，其中一些为寄生原虫虫2 Morphologyl大小，形状l1-30 ml细胞核、细胞质、表膜 6 7 8 9 1.结肠小袋虫结肠小袋虫 2.毛滴虫毛滴虫 3.球虫卵囊球虫卵囊4.伊氏锥虫伊氏锥虫 5.微浆体微浆体 6.双芽梨形虫双芽梨形虫
3、7.泰勒梨形虫泰勒梨形虫 8.龚地弓形虫龚地弓形虫 9.利什曼原虫利什曼原虫原虫形态原虫形态内质外质胞核食物泡图图12原虫构造模式图原虫构造模式图3 虫体构造虫体构造l表膜表膜 Pellicle:三层结构的单位膜三层结构的单位膜 由外膜和紧靠其下方的微管或原纤维组成由外膜和紧靠其下方的微管或原纤维组成表膜复合体表膜复合体l使虫体保持一定的形态和完整性使虫体保持一定的形态和完整性l参与虫体的摄食、排泄、感觉、运动参与虫体的摄食、排泄、感觉、运动l有很强的抗原性有很强的抗原性l可以不断更新：如锥虫可以不断更新：如锥虫3 虫体构造虫体构造l胞质胞质 Cytoplasml基质基质 Matrix：蛋白质
4、蛋白质 ectoplasm-外外质：凝胶状，硬度，形状质：凝胶状，硬度，形状 运动、营养、呼吸、摄食、排泄、感觉运动、营养、呼吸、摄食、排泄、感觉 endoplasm-内内质：质：溶胶状，代谢，含有细胞核和相溶胶状，代谢，含有细胞核和相当数量的食物泡、空泡、贮存物质等。当数量的食物泡、空泡、贮存物质等。l细胞器 Organelles Endoplasmic reticulum：内质网 Golgi body：高尔基体 Mitochondria：线粒体 Lysosomes：溶酶体 Kinetoplast:动基体动基体 特化的细胞器，运动细胞器。特化的细胞器，运动细胞器。3 虫体构造虫体构造l运动细
5、胞器运动细胞器是分类的依据是分类的依据鞭毛鞭毛：胞质的丝状延伸部分，鞭毛虫，锥虫：胞质的丝状延伸部分，鞭毛虫，锥虫纤毛纤毛：短而细，纤毛虫：短而细，纤毛虫伪足伪足：外质暂时突出的部分，阿米巴：外质暂时突出的部分，阿米巴波动脊波动脊：孢子虫，依靠波动脊在液体中滑行：孢子虫，依靠波动脊在液体中滑行子孢子、裂殖子和动合子子孢子、裂殖子和动合子l胞核 Nucleus：生存、繁殖生存、繁殖l核膜核膜l根据染色质的多寡和分布情况根据染色质的多寡和分布情况 泡状核泡状核 染色质少，分散染色质少，分散 致密核致密核 染色质多，均匀而致密染色质多，均匀而致密3 虫体构造虫体构造4 Life cycle of p
6、rotozoal 无性生殖无性生殖l二分裂法二分裂法 binary fissionl出芽生殖出芽生殖 budding：胞核先分裂成大小不等但仍相连接的胞核先分裂成大小不等但仍相连接的2个部分，原生质随着核个部分，原生质随着核的分支而向核的周围集中，形成的分支而向核的周围集中，形成2个芽状突起，而后分裂成个芽状突起，而后分裂成2个个新个体。新个体。l裂体生殖裂体生殖 multiple fission 胞核先分裂多次，然后各个核周围的胞质紧缩而形成数个新个胞核先分裂多次，然后各个核周围的胞质紧缩而形成数个新个体。裂殖体，裂殖子体。裂殖体，裂殖子4 Life cycle of protozoal有性
7、生殖有性生殖 接合生殖接合生殖 conjugation 2个形态相同的原虫一时性的结合在一起，互相个形态相同的原虫一时性的结合在一起，互相交换核质，然后分开，各自分裂成新的个体。交换核质，然后分开，各自分裂成新的个体。配子生殖配子生殖 gametogony 裂殖子裂殖子 大配子体、小配子体大配子体、小配子体 配子配子 合子合子 子孢子、孢子囊（孢子生殖：合子子孢子、孢子囊（孢子生殖：合子-孢子体孢子体-子孢子孢子）子）A.一个宿主体内完成一个宿主体内完成B.两个宿主体内完成两个宿主体内完成传播者：媒介传播者：媒介 生物性传播生物性传播 机械性传播机械性传播裂殖生殖裂殖生殖:裂殖体(裂殖子)配子
8、生殖配子生殖:配子母细胞(大配子,小配子)孢子生殖孢子生殖:子孢子4 Life cycle of protozoa孢子化卵囊肌胃饲料和饮水等机械、酶释放子孢子小肠 胰蛋白酶、胆汁子孢子释放得到促进盲肠：上皮细胞 固有层 滋养体(trophozoite)4.1 艾美耳属艾美耳属裂殖生殖（schizogony）裂殖体（schizont）第一世代裂殖子（merozoite）宿主细胞破坏（第2.53天）子孢子进入肠腔上皮细胞 发育为第2代裂殖体、裂殖子宿主细胞破坏 进入肠腔 （第5天）第3代裂殖体大配子 小配子合子卵囊（oocyst）排出体外感染后7天发育为具有感染性的卵囊直接发育型直接发育型 无需中
9、间宿主无需中间宿主 三个阶段三个阶段无性生殖：寄生部位上皮细胞无性生殖：寄生部位上皮细胞 裂殖生殖裂殖生殖有性生殖：配子生殖有性生殖：配子生殖大配子（雌性大配子（雌性）小配子（雄性小配子（雄性）合子合子（上皮细胞）孢子生殖：合子孢子生殖：合子 卵囊卵囊 孢子囊和子孢子（感染性孢子囊和子孢子（感染性卵囊卵囊）内生性发育内生性发育外生性发育外生性发育外界环境外界环境在兔体内在兔体内在外界环境在外界环境1234567 8910111213141516171718192021艾美尔球虫发育史16.无性无性繁殖繁殖717.有有性繁殖性繁殖1720.发发育成侵袭育成侵袭性卵囊性卵囊21.孢子体孢子体游出游
10、出5 原生动物的分类原生动物的分类动物界动物界原生原生 动物门动物门lSarcomastigophora 肉足鞭毛亚门肉足鞭毛亚门 锥虫科、锥虫属锥虫科、锥虫属Trypanosoma evansilApicomplexa 顶器亚门顶器亚门 Sporozoa 孢子虫纲孢子虫纲 Piroplasmea 梨形虫目：巴贝斯虫科梨形虫目：巴贝斯虫科 泰勒虫科泰勒虫科 Eucoccidia 真球虫目：真球虫目：艾美耳科艾美耳科球虫球虫 隐孢子虫科隐孢子虫科 隐孢子虫隐孢子虫 肉孢子虫科肉孢子虫科弓形虫属弓形虫属 住肉孢子虫属住肉孢子虫属lCiliophora纤毛虫亚门纤毛虫亚门 结肠小袋纤毛虫结肠小袋纤毛
11、虫Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii 弓形虫弓形虫Toxoplasma gondiilIts genus name,toxoplasma,is derived from the Greek toxon,meaning arc or crescent shape.lIts species name,gondii,is derived from its discovery host,hamster-like rodent known as the gundi（栉趾鼠）.lObligate intracellular parasite发现历史发现历史 lNicol
12、le and Manceaux(1908)北非梳趾鼠体内北非梳趾鼠体内lSplendore（1908）巴西实验室家兔体内）巴西实验室家兔体内lWolf and Cowen（1937）人体内）人体内lDubey（1970）发现生活史）发现生活史l于恩庶（于恩庶（1955）首次发现兔和猫弓形虫）首次发现兔和猫弓形虫l1977年上海发现猪的无名高热病年上海发现猪的无名高热病Classificationl Protozoa,Apicomplexa 顶复亚门l Sporozoasida 孢子虫纲l Eucoccidiorida 真球虫目l Toxoplasmatinae 弓形虫亚科l Toxoplasm
13、a 弓形虫属l Toxoplasma gondii 刚地弓形虫 lHosts:Definitive hosts:Members of the cat family(Felidae)Intermediate hosts:all warm blooded animalsLife Cycle终末宿主有性繁殖中间宿主无性繁殖Morphologyl速殖子：Tachyzoite l缓殖子：Bradyzoite l卵囊/孢子：oocyst(Sporozoite)l配子体：Gametocyte:macrogamete,microgameteTachyzoites in lymph tissueTachyzoi
14、tes:fast replicating,responsible for acute toxoplasmosis.Size:2-4m X 4-7 mTachyzoites in ascites速殖子超微结构速殖子超微结构电镜下虫体表膜分两层；核位于虫体后半部，核仁位置不定，核前沿有高尔基体；前端有类锥体及极环，膜下微管起于极环，通常有22条；棒状体8-10条；线粒体1至数个。lIntracellular tachyzoites of Toxoplasma gondii.lParazitohporous vacuole:home for parasites replication,can con
15、tain 64 parasites.Bradyzoites:slow replicating,encaged in tissue cysts,formed during chronic infection.Mainly found in the brain and muscle tissues.组织包囊：组织包囊：tissue cyst,直径直径5 50 m，can contain 1000 bradyzoites Tissue cystsIn cat intestinal epitheliuma-c:merozoited-f:schizontMicro-gametesIn cat intes
16、tinal epitheliumThe oocyst contains two sporocysts,each of which contain four sporozoites.Only cats will produce Toxoplasma oocysts;approximate diameter=10 m.感染不同阶段虫体，在猫体内的潜隐期也不同，摄入包囊后一般感染不同阶段虫体，在猫体内的潜隐期也不同，摄入包囊后一般310天即有天即有卵囊排出，而感染孢子化卵囊则需要卵囊排出，而感染孢子化卵囊则需要18天以上；猫食入速殖子后也能产生卵天以上；猫食入速殖子后也能产生卵囊，但潜隐期的变化范围
17、较大囊，但潜隐期的变化范围较大(一般一般13天以上才排出卵囊天以上才排出卵囊)。卵囊在适宜的环境条件下，经卵囊在适宜的环境条件下，经15天发育为具有感染性的孢子化卵囊。天发育为具有感染性的孢子化卵囊。Unsporulated oocystSporulated oocyst60%40-60%20-40%10-20%驴、骆驼驴、骆驼水牛、水牛、黄牛、牦牛黄牛、牦牛 但以水牛带虫最为严重但以水牛带虫最为严重 实验动物实验动物 小白鼠小白鼠大白鼠、猫大白鼠、猫家兔、豚鼠家兔、豚鼠 野生动物：地鼠等野生动物：地鼠等 传染来源：传染来源：带虫动物：水牛可带带虫动物：水牛可带2-3年，骆驼年，骆驼5年年3.
18、途径途径：机械传播：机械传播 虻类：虻类：5科科80多种多种 蝇类：蝇类：4属属6种种4.发病季节发病季节 a.与昆虫一致与昆虫一致 5-10月份月份 b.冬季冬季 1-3月份月份 体质差、带虫动物发病体质差、带虫动物发病5.动物年龄动物年龄：青年：青年幼年幼年6.地理分布地理分布 亚洲、非洲亚洲、非洲 我国：南方及西北我国：南方及西北 华北、东北很少华北、东北很少EpidemiologyPathogenesis虫体繁殖虫体繁殖 肝脏肝脏 低血糖低血糖 乳酸增加乳酸增加 CNS 体温增高、机能障碍体温增高、机能障碍 毒素毒素 网状内皮网状内皮S 红细胞溶解红细胞溶解 贫血黄疸贫血黄疸 心肌心肌
19、 心肌能障碍心肌能障碍 抗原脱落抗原脱落 免疫复合物免疫复合物 水肿坏死水肿坏死 Clinical signsA.马属动物马属动物 带呈急性经过带呈急性经过(1)Latent periods 47d T400C 间歇热，稽留间歇热，稽留数日，经短时间歇，再行发作。数日，经短时间歇，再行发作。(2)发热期间，发热期间，R频数，频数，P，尿量少，尿色深黄，粘，尿量少，尿色深黄，粘稠，间歇期间，症状缓解。稠，间歇期间，症状缓解。(3)反复数次发作后，体表水肿，结膜、眼脸黄染，反复数次发作后，体表水肿，结膜、眼脸黄染，精神沉郁、消瘦。精神沉郁、消瘦。(4)血液学变化：血液学变化：RC急剧急剧最低最低2
20、00万左右，万左右，Hb减少减少至至30%，血沉加快。，血沉加快。B.牛牛 多呈慢性经过多呈慢性经过(1)Latent periods 6-12d，不定期的间歇热，最，不定期的间歇热，最高可达高可达410C，间歇，间歇2d至数月不等。至数月不等。(2)病牛消瘦、体表干枯、皮肤龟裂、结痂；病牛消瘦、体表干枯、皮肤龟裂、结痂；(3)精神沉郁，四肢无力，走路摇晃精神沉郁，四肢无力，走路摇晃(4)妊娠牛流产、死胎；所产犊牛有因胎盘感染而妊娠牛流产、死胎；所产犊牛有因胎盘感染而于生后死亡。于生后死亡。(5)RC至至300万左右，万左右，Hb50%(6)急性型多发于春耕和夏收期间的肥壮牛及寒冬急性型多发于
21、春耕和夏收期间的肥壮牛及寒冬季节，机体抵抗力下降时。季节，机体抵抗力下降时。Clinical signsl犬：犬：急性、致死性，常见症状急性、致死性，常见症状 间歇热、头部、间歇热、头部、腿和腹壁水肿，类似狂犬病的神经症状。腿和腹壁水肿，类似狂犬病的神经症状。l猪：无症状或温和型症状猪：无症状或温和型症状l山羊：慢性过程山羊：慢性过程l鹿：慢性过程，水肿、贫血、消瘦、神经症状鹿：慢性过程，水肿、贫血、消瘦、神经症状l骆驼：类似于马，慢性常见骆驼：类似于马，慢性常见 被毛干枯、脱落，眼结膜充血淤血被毛干枯、脱落，眼结膜充血淤血 黏液或脓性分泌物。驼峰萎缩，黏液或脓性分泌物。驼峰萎缩，淋巴结肿大，
22、腹下四肢水肿。淋巴结肿大，腹下四肢水肿。Diagnosis(一一)临床症状临床症状(二二)血液学查虫：多次检查血液学查虫：多次检查 A.涂片检查：薄血膜和涂片用姬姆萨染色涂片检查：薄血膜和涂片用姬姆萨染色 B.集虫检查：红细胞压积管离心技术集虫检查：红细胞压积管离心技术(三三)血清学反应血清学反应 a.对流免疫电泳对流免疫电泳 b.补体结合反应补体结合反应c.McAb-ELISA(四四)动物接种动物接种 小白鼠：易感，但耗时。小白鼠：易感，但耗时。(五五)鉴别诊断鉴别诊断 A.马传贫马传贫 血液学无虫血液学无虫 B.血孢子虫病血孢子虫病 查虫查虫Diagnosis治治 疗疗A萘磺苯酰脲萘磺苯酰
23、脲 俗称拜耳俗称拜耳205，又称那嘎诺尔，又称那嘎诺尔，英国产为安锥波英国产为安锥波 剂量与用法：马、牛剂量与用法：马、牛 12mg/kg 配成配成10%溶液溶液 iVB.甲基硫酸喹嘧胺甲基硫酸喹嘧胺 俗称安锥赛，抗锥灵俗称安锥赛，抗锥灵 我国已生产我国已生产 5 mg/kg 10%溶液溶液 皮下注射皮下注射C.血虫净血虫净 俗称贝尼尔俗称贝尼尔 3.5mg/kg 5%深部深部imD.治疗注意事项：治疗注意事项：(1)药量要足，否则易产生抗药性药量要足，否则易产生抗药性 (2)观察期要长，防止过早使用引起复发观察期要长，防止过早使用引起复发 (3)2种以上药物配合使用疗效好种以上药物配合使用疗
24、效好预防预防 A.药物预防药物预防 1.安锥赛预防盐，一次安锥赛预防盐，一次3-3.5个月个月 2.拜耳拜耳205 治疗，一次治疗，一次1.5-2个月个月 B.消灭媒介消灭媒介 C.隔离病原，严格检疫隔离病原，严格检疫 人畜共患寄生原虫病人畜共患寄生原虫病-隐孢子虫病隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)(Cryptosporidiosis)l病原是病原是真球虫目隐孢子虫属真球虫目隐孢子虫属Cryptosporidium寄寄生于生于人人、牛牛等家畜胃肠道上皮细胞，可引起犊牛等家畜胃肠道上皮细胞，可引起犊牛和羔羊严重腹泻和禽类严重呼吸道症状为特征的和羔羊严重腹泻和禽类严重呼吸道症状为特
25、征的一类寄生一类寄生原虫病原虫病。l隐孢子虫在艾滋病（隐孢子虫在艾滋病（AIDS）病人中的感染率高达）病人中的感染率高达48%。l隐孢子虫是一种世界性分布的严重危害人和动物隐孢子虫是一种世界性分布的严重危害人和动物健康的人兽共患寄生虫病。健康的人兽共患寄生虫病。隐孢子虫隐孢子虫-儿童杀手儿童杀手Pathogen CryptosporidiumlC.parvum：微小：微小lC.andersoni：安氏：安氏lC.muris：小鼠：小鼠lC.meleagridis：火鸡：火鸡lC.bailayi：贝氏：贝氏lC.suis：猪猪隐孢子虫有多个种隐孢子虫有多个种种名主要宿主卵囊长度（m）卵囊宽度（m
26、）卵囊长/宽C.muris（鼠隐孢子虫）啮齿、哺乳类动物8.09.2（8.4）5.86.4（6.2）1.251.59（1.35）C.parvum（微小隐孢子虫）哺乳动物4.85.6（5.2）4.24.8（4.6）1.041.33（1.16）C.wrairi（魏氏隐孢子虫）豚鼠4.85.6（5.4）4.05.0（4.6）1.041.33（1.17）C.felis（猫隐孢子虫）猫3.25.1（4.6）3.04.0（4.0）1.15C.andersoni（安氏隐孢子虫）反刍动物6.08.1（7.4）5.06.5（5.5）1.071.50（1.35）C.canis（犬隐孢子虫）犬4.85.6（4.95
27、）4.34.9（4.7）1.05C.hominis（人隐孢子虫）人类4.45.9（5.2）4.45.4（4.86）1.01.09（1.07）C.suis（猪隐孢子虫）猪4.485.1（4.6）4.175.（4.2）1.01.1（1.09）C.bovis（牛隐孢子虫）牛4.765.35（4.9）4.174.76（4.6）1.06C.fayeri（费氏隐孢子虫）有袋类动物4.55.1（4.9）3.85.0（4.3）1.02-1.18（1.14）C.meleagridis（火鸡隐孢子虫）火鸡，人类4.56.0（5.2）4.25.3（4.6）1.001.33（1.13）C.baileyi（贝氏隐孢子虫
28、）鸡，火鸡6.07.5（6.6）4.85.7（5.0）1.051.79（1.33）C.galli（鸡隐孢子虫）雀类，鸡8.08.5（8.25）6.26.4（6.3）1.251.37（1.30）C.serpentis（蛇隐孢子虫）蛇类，蜥蜴5.66.6（6.2）4.85.6（5.3）1.041.33（1.16）C.varanii(C.saurophilum,蜥蜴蛇隐虫）蜥蜴，蛇类4.45.6（5.0）4.25.2（5.7）1.041.12（1.09）C.molnari（摩氏隐孢子虫）海鱼3.235.45（4.7）3.025.04（4.4）1.001.71（1.05）C.scophthalmi（菱
29、鲆隐孢子虫）比目鱼3.75.03（4.44）3.034.69(3.91)1.051.34（1.14）From Xiao,2004卵囊呈圆形或椭圆形，囊卵囊呈圆形或椭圆形，囊壁光滑，其上有裂缝。壁光滑，其上有裂缝。无微孔、极粒和孢子囊。无微孔、极粒和孢子囊。每个卵囊内含有每个卵囊内含有4个裸露的个裸露的香蕉形子孢子和香蕉形子孢子和1个残体，个残体，残体由残体由1个折光体和一些颗个折光体和一些颗粒组成。粒组成。虫体寄生于宿主粘膜上皮细胞表面微绒毛刷状缘内带虫空泡中，带虫空泡带虫空泡来源于宿主上皮细胞的微绒毛，直接与宿主细胞的胞浆膜相连。虫体与宿主细胞相融合，融合区的电子密度较高，位于基部的虫体表膜
30、反复折叠形成板层状的外观，此为营养器营养器。奶牛隐孢子虫镜检结果奶牛隐孢子虫镜检结果分离纯化的分离纯化的微小微小隐孢子虫卵囊隐孢子虫卵囊4040 分离纯化的分离纯化的安氏安氏隐孢子虫卵囊隐孢子虫卵囊40 Environmental stage(oocysts 卵囊):4-5 mInvasive stages(sporozoites 子孢子&merozoites 裂殖子):1 x 4-5 mLife cycle脱囊脱囊 excystation裂殖生殖裂殖生殖 schizogony merogony配子生殖配子生殖 gametogony受精受精 fertilization卵囊形成卵囊形成 oocy
31、st formation孢子生殖孢子生殖 sporogony隐孢子虫生活史隐孢子虫生活史-能在一个宿主中完成能在一个宿主中完成薄壁型卵囊：自体感染薄壁型卵囊：自体感染厚壁型卵囊：排出体外厚壁型卵囊：排出体外EpidemiologylSusceptible host：儿童、免疫抑制病人、牛、羊、：儿童、免疫抑制病人、牛、羊、马、犬、猫，马、犬、猫，150多种哺乳动物和人；多种哺乳动物和人；30多种鸟类、多种鸟类、淡水鱼和海鱼，淡水鱼和海鱼，57种爬行动物。种爬行动物。l不具有不具有 很明显的宿主特异性。很明显的宿主特异性。lRoute of transmission：peroral infect
32、ion，也可经，也可经空气传播。空气传播。lInfective source：oocyst 对外界有很强的抵抗力，对外界有很强的抵抗力，50%以上的氨水和以上的氨水和30%以上的福尔马林作用以上的福尔马林作用30分钟才分钟才能杀死卵囊。能杀死卵囊。lPrevalence：全球性分布，犊牛感染率高达：全球性分布，犊牛感染率高达80%；人；人隐孢子虫病在隐孢子虫病在60多个国家都有报道。欧美多个国家都有报道。欧美1-3%，亚洲，亚洲5%，非洲，非洲10%。奶牛感染的季节性奶牛感染的季节性在在112月中隐孢子虫卵囊检测的阳性率月中隐孢子虫卵囊检测的阳性率 24%8.3%奶牛感染的日龄差别奶牛感染的日
33、龄差别17.28%7.5%猪感染的日龄差异猪感染的日龄差异不同日龄猪的感染率不同日龄猪的感染率 日龄Days%不同月份猪隐孢子虫感染率 猪感染的季节性差异猪感染的季节性差异月份上海奶牛隐孢子虫虫种的初步鉴定上海奶牛隐孢子虫虫种的初步鉴定虫体虫体 形态形态与已公布与已公布序列的比序列的比对结果对结果小鼠接小鼠接种种 RFLP RFLP 结果结果A A与与微小隐微小隐孢子虫孢子虫99.2%99.2%可扩增可扩增虫卵虫卵(310)(310)不能被限制不能被限制性内切酶性内切酶EcoT14 EcoT14 切开切开 B B与与安氏隐安氏隐孢子虫同孢子虫同源性达源性达98.4%98.4%不可扩不可扩增增能
34、被限制性能被限制性内切酶内切酶EcoT14 EcoT14 切开切开 Pathogenesis改变寄居的改变寄居的宿主细胞活动宿主细胞活动从肠管吸从肠管吸收营养物质收营养物质损伤肠道损伤肠道微绒毛数量减少微绒毛数量减少体积变小体积变小成熟的肠细胞脱落成熟的肠细胞脱落双糖酶活性降低双糖酶活性降低乳糖和其他糖乳糖和其他糖进入大肠降解进入大肠降解促进细菌过度生长促进细菌过度生长形成挥发性脂肪酸形成挥发性脂肪酸改变渗透压改变渗透压或在肠腔积累不吸或在肠腔积累不吸收的高渗营养物质收的高渗营养物质腹泻腹泻Clinical signsl牛肠型隐孢子虫病牛肠型隐孢子虫病：犊牛腹泻：犊牛腹泻diarrheadia
35、rrhea伴随昏伴随昏睡、食欲不振睡、食欲不振inappetenceinappetence、发热发热feverfever、脱水、脱水dehydrationdehydration；继发轮状病毒和冠状病毒感染。继发轮状病毒和冠状病毒感染。l牛胃型隐孢子虫病牛胃型隐孢子虫病：皱胃处、青年牛或成年牛：皱胃处、青年牛或成年牛产奶下降，血浆胃蛋白酶原浓度升高，消瘦，产奶下降，血浆胃蛋白酶原浓度升高，消瘦，无腹泻症状。无腹泻症状。Clinical signsl禽类隐孢子虫病禽类隐孢子虫病：l感染鸡、鸭、火鸡、鹌鹑等感染鸡、鸭、火鸡、鹌鹑等l精神沉郁、嗜睡、厌食、体重减轻、咳嗽、打喷嚏、精神沉郁、嗜睡、厌食、
36、体重减轻、咳嗽、打喷嚏、咯咯叫及呼吸困难等。咯咯叫及呼吸困难等。Diagnosisl生前诊断：粪便集卵法，油镜下观察生前诊断：粪便集卵法，油镜下观察 l死后诊断：刮肠粘膜涂片，姬姆萨染色或齐尼死后诊断：刮肠粘膜涂片，姬姆萨染色或齐尼氏染色氏染色lImmunologic and molecular biologic techniques IFT、ELISA，、，、PCRl动物接种动物接种l齐一尼氏法齐一尼氏法：涂片、干燥、火焰固定，用稀释：涂片、干燥、火焰固定，用稀释石炭酸复红液染色石炭酸复红液染色10分钟，水洗，再用分钟，水洗，再用0.5的醋酸处理，不超过的醋酸处理，不超过30秒钟，充分水洗，
37、用秒钟，充分水洗，用1美兰轻度复染美兰轻度复染20秒钟，水洗、干燥、镜检。秒钟，水洗、干燥、镜检。l绿色背景上红色的虫体绿色背景上红色的虫体DiagnosisNested PCR-RFLPNested PCR-RFLP建立建立根据根据GenBankGenBank上公布的隐孢子虫上公布的隐孢子虫18S 18S rRNArRNA基因进行引物设计基因进行引物设计隐孢子虫卵囊的消化和基因组隐孢子虫卵囊的消化和基因组DNADNA提取提取PCR产物产物DNA片段的纯化、克隆、重组质粒的鉴定片段的纯化、克隆、重组质粒的鉴定 测序及序列分析测序及序列分析 Nested-PCR 敏感性敏感性、特异性实验、特异性
38、实验 RFLP酶切酶切 安氏隐孢子实时荧光定量安氏隐孢子实时荧光定量PCRPCR检测方法检测方法lTaqMan探针法引物：探针法引物：F：5-attacgtccctgccctttg-3，R：5-ttgttacgacttctccttcctct-3，l安氏隐孢子虫特异性安氏隐孢子虫特异性TaqMan探针探针 （5-(FAM)cagtagcaaatacatagcaagggaagtttc(TAMRA)-3。特异性特异性 TaqManTaqMan探针法：牛源安氏隐孢子虫探针法：牛源安氏隐孢子虫（C.andersoniC.andersoni）能够扩增出曲线，）能够扩增出曲线，C.parvumC.parvu
39、m、鸡贝氏隐孢子虫、弓形虫、新孢子虫和大肠杆鸡贝氏隐孢子虫、弓形虫、新孢子虫和大肠杆菌均无扩增曲线菌均无扩增曲线。标准曲线标准曲线 CtCt值与质粒标准品的值与质粒标准品的5 51 110106 6拷贝拷贝/l l 范围内呈现良好的线性关范围内呈现良好的线性关系敏感性试验发现，此技术可以检测到系敏感性试验发现，此技术可以检测到5 5个拷贝的质粒稀释品个拷贝的质粒稀释品 1.安氏隐孢子虫 2.微小隐孢子虫3.鸡贝氏隐孢子虫4.弓形虫E5.新孢子虫6.大肠杆菌Treatmentl隐孢子虫的治疗尚无理想药物隐孢子虫的治疗尚无理想药物l加强卫生和提高免疫力加强卫生和提高免疫力 Preventionl综
40、合性预防措施：减少或预防卵囊的传播综合性预防措施：减少或预防卵囊的传播l64.2C 5 min，72.4 C 1 minl巴斯德消毒器：巴斯德消毒器：71C 5/10/15 sl水溶性或气体氨、过氧化氢消除卵囊感染性水溶性或气体氨、过氧化氢消除卵囊感染性l臭氧臭氧 ozone：水中的卵囊：水中的卵囊l免疫抑制病人应避免与任何湖水、溪水接触，不免疫抑制病人应避免与任何湖水、溪水接触，不与幼龄动物接触。与幼龄动物接触。l迁移动物到清洁环境，注意粪便的有效处理和环迁移动物到清洁环境，注意粪便的有效处理和环境卫生措施。境卫生措施。l病原是病原是球虫目新孢子虫属球虫目新孢子虫属的的犬新孢子虫犬新孢子虫（
41、Neospora canium），寄生于犬、羊），寄生于犬、羊、牛牛、马等家畜体内中枢神经系统马等家畜体内中枢神经系统central nervous system、肌肉、肌肉muscle、肝、肝liver、脑、脑brain及其及其它内脏组织，可引起致死性原虫病，并可致它内脏组织，可引起致死性原虫病，并可致孕畜流产或死胎，新生儿四肢运动障碍和神孕畜流产或死胎，新生儿四肢运动障碍和神经系统疾病。经系统疾病。Pathogen lNeospora canium l速殖子速殖子呈卵圆形，新月形或小球形，依分裂阶段呈卵圆形，新月形或小球形，依分裂阶段而不同。大小为：而不同。大小为：3-7m1-5m 寄生于
42、神经细胞、巨噬细胞、肌细胞、肝细胞，寄生于神经细胞、巨噬细胞、肌细胞、肝细胞，肾小管上皮细胞等肾小管上皮细胞等l典型细胞器均与弓形虫速殖子相同：典型细胞器均与弓形虫速殖子相同：3层质膜，层质膜，22根膜下微管，根膜下微管，2个顶环，个顶环，1个类锥体，个类锥体，1个极环，个极环，150个微线体，个微线体，8-12个前棒状体和个前棒状体和4-6个后棒状体，个后棒状体，1个高尔基复合体，个高尔基复合体，1-3个线粒体，内质网，核及个线粒体，内质网，核及核仁。核仁。2023-1-7137致密颗粒棒状体微线体新孢子虫速殖子新孢子虫缓殖子棒状体致密颗粒(引自 Speer C A,1999)顶环质膜透射电
43、镜照片透射电镜照片牛外周血白细胞接种Vero细胞1h内观察虫体培养102天时观察分离的虫体在显微镜下的观察 Pathogen l组织包囊呈圆形或卵圆形，直径 107m，仅，仅见于中枢神经系统。见于中枢神经系统。l囊壁光滑，厚约囊壁光滑，厚约4m，呈分支状类小管结构。，呈分支状类小管结构。l慢殖子细长，慢殖子细长，6-8m x 1-1.8 m,其内细胞器其内细胞器与速殖子基本一样，仅棒状体数量少，支链淀与速殖子基本一样，仅棒状体数量少，支链淀粉颗粒更多。粉颗粒更多。新孢子虫小鼠脑涂片新孢子虫小鼠脑涂片流产胎牛脑组织包囊流产胎牛脑组织包囊 Pathogen l卵囊卵囊在犬科动物肠道中形成在犬科动物
44、肠道中形成l卵囊直径卵囊直径10-11m，孢子化时间，孢子化时间24h.l孢子化卵囊内含孢子化卵囊内含2个孢子囊，每个孢子囊内含个孢子囊，每个孢子囊内含4个子孢子，形态与弓形虫卵囊相似。个子孢子，形态与弓形虫卵囊相似。Life cyclel在终末宿主体内有速殖子、在终末宿主体内有速殖子、组织包囊、卵囊；犬既是组织包囊、卵囊；犬既是中间宿主又是终末宿主。中间宿主又是终末宿主。l虫体在中间宿主组织内有速殖子和囊性病原体（组织虫体在中间宿主组织内有速殖子和囊性病原体（组织包囊）两种形式。包囊）两种形式。l中间宿主体内速殖子寄生于细胞内，通过内出芽生殖中间宿主体内速殖子寄生于细胞内，通过内出芽生殖方式
45、繁殖。方式繁殖。l感染神经细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、血管内细胞、感染神经细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、血管内细胞、肌细胞、肾小管上皮细胞、肝细胞和其它体细胞。肌细胞、肾小管上皮细胞、肝细胞和其它体细胞。l组织包囊主要见于中间宿主的中枢神经系统，囊壁厚组织包囊主要见于中间宿主的中枢神经系统，囊壁厚度达度达4 4m。l薄壁组织包囊（薄壁组织包囊（0.3-1.00.3-1.0m）见于自然感染犬新孢子）见于自然感染犬新孢子虫的牛和犬的肌肉。虫的牛和犬的肌肉。Epidemiologyl终末宿主：犬和狐狸终末宿主：犬和狐狸l中间宿主：牛、绵羊、山羊、马、鹿中间宿主：牛、绵羊、山羊、马、鹿l传播途径：经乳、
46、经口、垂直传播传播途径：经乳、经口、垂直传播l食用胎膜可能是犬感染的途径食用胎膜可能是犬感染的途径l世界性分布，对牛的危害严重，是牛流产的主世界性分布，对牛的危害严重，是牛流产的主要原因。牛血清抗体要原因。牛血清抗体80%阳性阳性l牛体内垂直传播牛体内垂直传播 Pathogenesisl垂直传播，导致流产或胎儿运动障碍和神经系垂直传播，导致流产或胎儿运动障碍和神经系统疾病统疾病Clinical signsl病犬厌食症，吞咽困难，四肢乏力，运动失调，病犬厌食症，吞咽困难，四肢乏力，运动失调，视觉反应降低；神经症状根据虫体寄生部位而不视觉反应降低；神经症状根据虫体寄生部位而不同，后肢比前肢更严重，
47、时常呈强直状态；死胎同，后肢比前肢更严重，时常呈强直状态；死胎或产出弱犬。或产出弱犬。l牛流产，牛流产，5-65-6个月妊娠期多发，春末秋初多发。个月妊娠期多发，春末秋初多发。l犊牛（犊牛（220度度 热带和亚热带全年都可发生该病热带和亚热带全年都可发生该病 山东：山东：6-11月份月份 福建和广州：福建和广州：4-10月份，月份，4-6月多发。月多发。l鸡年龄与感染率成正比，与发病率成反比鸡年龄与感染率成正比，与发病率成反比病理变化病理变化胸肌出血点全身性出血，肝脾肿大，白冠全身性出血，肝脾肿大，白冠皮下出血，肌肉尤其是胸肌、皮下出血，肌肉尤其是胸肌、腿肌、心肌有大小不等的腿肌、心肌有大小不
48、等的 出血点出血点内脏大出血内脏大出血-肾、肺肾、肺胸、腿、心肌，肝肺上有灰白色胸、腿、心肌，肝肺上有灰白色 或稍带黄色、针尖至粟米大与或稍带黄色、针尖至粟米大与 周围组织有周围组织有 明显分界的明显分界的 小结节。里面小结节。里面 含裂殖体含裂殖体症症 状状l潜伏期潜伏期6-10天天l微血管内皮细胞受损微血管内皮细胞受损 机体广泛性出血。机体广泛性出血。l雏鸡和仔鸡症状明显，发病率和死亡率高。雏鸡和仔鸡症状明显，发病率和死亡率高。l发病率高，精神沉郁，食欲不振，平衡失调，衰发病率高，精神沉郁，食欲不振，平衡失调，衰弱，喜扎堆。弱，喜扎堆。l严重程度取决于易感禽类身体上吸血蚋或蠓的数严重程度取
49、决于易感禽类身体上吸血蚋或蠓的数量或虫血症的严重程度。量或虫血症的严重程度。l死后剖检可见肝、脾肿大死后剖检可见肝、脾肿大。诊断诊断l镜检姬姆萨染色或瑞氏染色的血片。由于细镜检姬姆萨染色或瑞氏染色的血片。由于细胞内寄生期胞内寄生期(配子生殖期配子生殖期)虫体的寄主，红细虫体的寄主，红细胞或白细胞显得肥大，并且发生变形。胞或白细胞显得肥大，并且发生变形。l或者挑取病鸡心脏或肠系膜上的白色结节，或者挑取病鸡心脏或肠系膜上的白色结节，显微镜下见到卡氏住白细胞虫裂殖体。显微镜下见到卡氏住白细胞虫裂殖体。lPCR治疗治疗l一般情况下，治疗效果很差。常用药物：一般情况下，治疗效果很差。常用药物：磺胺间甲氧
50、嘧啶，磺胺二甲氧嘧啶等药拌磺胺间甲氧嘧啶，磺胺二甲氧嘧啶等药拌料。料。l火鸡可用氯羟吡啶，饲料内添加火鸡可用氯羟吡啶，饲料内添加1.251.252.5mg/kg2.5mg/kg；鸡可用乙胺嘧啶；鸡可用乙胺嘧啶(饲料内加饲料内加lmglmg/kg)/kg)、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶(饲料内加饲料内加l0mg/kg)l0mg/kg)或磺胺喹噁啉或磺胺喹噁啉(饲料内加饲料内加50mg/kg)50mg/kg)。预防预防l预防可采取措施防止生物媒介预防可采取措施防止生物媒介蚋和蠓吸蚋和蠓吸食禽类的血液食禽类的血液(禽舍设置纱窗纱门，用化学禽舍设置纱窗纱门，用化学药物喷雾控制昆虫药物喷雾控制昆虫)。
